本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)化單端孢霉烯的醇脫氫酶(trichothecene-transformingalcoholdehydrogenase)的用途，用于轉(zhuǎn)化單端孢霉烯類化合物的方法和轉(zhuǎn)化單端孢霉烯的添加劑。單端孢霉烯類化合物代表頻繁出現(xiàn)的一類真菌毒素，其中尤其包括脫氧瓜蔞鐮菌醇(don，cas號51481-10-8)，t-2毒素(cas號21259-20-1)，ht-2毒素(cas號26934-87-2)，瓜萎鐮菌醇(cas號23282-20-4)，fuseranon-x(cas號23255-69-8)，藨鐮刀菌烯三醇，15-乙酰氧基藨鐮刀菌烯醇(cas號2623-22-5)，4,15-二乙酰氧基藨鐮刀菌烯醇(cas號2270-40-8)，木霉菌醇(cas號2198-93-8)，疣孢菌素a(cas號3148-09-2)，疣孢菌素j(cas號4643-58-7)，異木霉菌素(cas號91423-90-4)，羥基異木霉菌素(cas號344781-02-8)，calonectrin(cas號38818-51-8)，t-2四醇(cas號34114-99-3)，脫乙?；虑宴犳呔?cas號74833-39-9)，新茄鐮孢菌醇(cas號36519-25-2)，乙?；虑宴犳呔?cas號65041-92-1)，sporotrichiol(cas號101401-89-2)，trichotriol(cas號109890-37-1)，接骨木鐮菌素(cas號90044-33-0)，和大鐮刀孢菌素(cas號18374-83-9)。單端孢霉烯類化合物，特別是don，也被稱為嘔吐毒素，可通過多種鐮刀菌屬真菌(fusariumfungi)，尤其是禾谷鐮刀菌(f.graminearum)和大刀鐮刀菌(f.culmorum)產(chǎn)生。這些真菌侵襲的作物如玉米，各類谷物，如小麥、燕麥或大麥，而真菌侵襲通常在收獲前發(fā)生，并且真菌生長或真菌毒素的形成也可以發(fā)生在收獲之前，或在貯存不當?shù)那闆r下，發(fā)生在收獲之后。糧食及農(nóng)業(yè)組織(fao)估計，全球25％的農(nóng)產(chǎn)品被真菌毒素污染，這導(dǎo)致巨大的經(jīng)濟損失。在由i.rodrigues和k.naehrer,toxins,2012,4,663-675進行的較新的世界范圍性研究中，從2009年1月至2011年12月的時段內(nèi)，對總共23781個樣品進行了分析，其中81％的測試對至少一種真菌毒素呈陽性且59％的測試對單端孢霉烯類化合物，特別是don呈陽性。單端孢霉烯類化合物，特別是don可以高達100％的頻繁性在所有世界區(qū)域中發(fā)現(xiàn)，以及在所有測試的谷物和飼料類，如玉米、大豆粉、小麥、小麥麩、ddgs(具有可溶物的蒸餾器干燥的谷類)中發(fā)現(xiàn)，和在經(jīng)制備的飼料混合物中發(fā)現(xiàn)。除了基礎(chǔ)的、未加工的食材，單端孢霉烯類化合物的證據(jù)還發(fā)現(xiàn)于經(jīng)加工的食物，如面粉、早餐谷物、面食制品(pastaproduct)、面包、糕點，和基于小麥的兒童和嬰兒食品。單端孢霉烯類化合物具有以下結(jié)構(gòu)式：其中不同的取代殘基r1至r5隨著單端孢霉烯的類型而不同。已知的事實是，除了環(huán)氧基，在單端孢霉烯類化合物的c-3原子上完整的α-羥基參與負責它們的毒性作用。在c-3原子上具有羥基的單端孢霉烯類型包括脫氧瓜蔞鐮菌醇、t-2毒素、ht-2毒素、瓜萎鐮菌醇、fuseranon-x、15-乙酰氧基藨鐮刀菌烯醇、4,15二乙酰氧基藨鐮刀菌烯醇、木霉菌醇、t-2四醇、脫乙?；虑宴犳呔肌⒁阴；虑宴犳呔?、sporotrichiol、trichotriol、接骨木鐮菌素和大鐮刀孢菌素。脫氧瓜蔞鐮菌醇(don)具有在c-8原子上的特征性羰基并具有以下結(jié)構(gòu)式：和iupac名稱(3α,7α)-3,7,15三羥基-12,13-環(huán)氧單端孢霉-9-烯-8-酮。在自然界中，也存在于在c-3原子上具有羥基的幾個有毒don亞型。這些的實例是乙?；痙on(例如15酰基don)，糖基化don，磺酸don(例如dons-1，dons-2)，或硫酸don(硫酸don15)。這些don亞型也屬于在c-3原子上具有羥基基團或取代的羥基基團的單端孢霉烯類型。由于don的毒性作用，食品和飼料主管部門已經(jīng)規(guī)定限制或最高水平。因此，歐盟調(diào)節(jié)了食物中的don含量(ec號1881/2006，ec號1126/2007)，并已推薦飼料最高水平(2006/576/ec)。在美國，fda已經(jīng)公布最高水平。由在人類或動物中攝取真菌毒素引起的疾病被稱為真菌中毒。在單端孢霉烯類化合物或單端孢霉烯類型的情況下，這些疾病也被稱為“單端孢霉烯中毒”，更具體地為“在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯類化合物引起的中毒”，或者甚至更具體地為“don真菌中毒”。眾所周知的事實是，單端孢霉烯類化合物對動物和人類的毒性作用基于若干因素。這些因素包括蛋白質(zhì)生物合成的抑制，5-羥色胺和多巴胺受體可能的相互作用，以及促炎細胞因子的上調(diào)(efsa雜志(journal)2004，73，1-41)。此外，don真菌中毒引起生物標志物的變化，如通過以下診斷的：血液中的iga濃度的增加，肝臟中的socs3濃度的增加，或血漿中igfals水平的減少(pestka等人，2004，toxicol.lett.153，61-73)，以及在腸內(nèi)緊密連接蛋白(claudin)濃度的減少(pinton等，2009,tox.appl.pharmacol.237,41-48)。例如，在豬中單端孢霉烯中毒通過以下表現(xiàn)：減少的飼料攝取，降低的生長，嘔吐和腹瀉的發(fā)生，以及在腸內(nèi)的免疫功能障礙和受損養(yǎng)分吸收。在家禽的情況下，單端孢霉烯中毒引起，尤其是飼料攝取的劣化，較少體重增加，腹瀉的發(fā)病率，和蛋殼重量的減少。在反芻動物的情況下，對降低的飼料攝取和較少的奶產(chǎn)量進行了描述。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，單端孢霉烯中毒引起，尤其是魚(如鮭魚，鯰魚，或鱒魚)和蝦的飼料攝取和增長率的惡化(binder等人，guidetomykotoxins；isbn978-0-9573721-0-8)。毒性作用也已在狗和貓中描述(efsa雜志(journal)2004，73，1-41)。在人類中，單端孢霉烯中毒可引起，尤其是惡心，嘔吐，腹瀉，腹痛，頭痛，或發(fā)熱(sobrova等人，interdisc.toxicol.2010,3(3),94-99)。用于減少食品或飼料的單端孢霉烯或don污染的首要戰(zhàn)略是，例如，通過符合“良好農(nóng)業(yè)規(guī)范(goodagriculturalpractice)”規(guī)定，限制真菌侵襲。這包括，使用不含寄生蟲和真菌的種子，或作物殘體(cropresidues)的深耕式(ploughing-in)。此外，可以通過正確使用殺真菌劑，減少在該領(lǐng)域的真菌生長。收獲后，應(yīng)將作物貯存在低于15％的殘留濕度和在低溫下，以防止真菌生長。同樣地，應(yīng)在任何進一步的處理之前除去由真菌侵染污染的農(nóng)作物。盡管存在這份名單的措施，i.rodriges和k.naehrer報告(2012年)，即使在具有最高的農(nóng)業(yè)標準的地區(qū)，如usa和中歐，don污染2009至2011測試的所有玉米樣品的79％或72％。減少食品或飼料中真菌毒素污染的其他選項均為其吸附(adsorption)或轉(zhuǎn)化。對于吸附，必要的是，在很寬的ph值范圍內(nèi)真菌毒素對吸附劑的結(jié)合是強的和特異性的，并且它在整個消化過程中在胃腸區(qū)域保持穩(wěn)定。盡管某些非生物吸附劑例如活性炭，硅酸鹽或酯，或例如考來烯胺的合成聚合物能有效地用于黃曲霉毒素(aflatoxins)，但是將所述吸附劑用于其它真菌毒素，特別是用于單端孢霉烯類化合物是無效的。生物吸附劑如酵母或酵母提取物也描述于文獻中，但具有類似于非生物吸附劑的限制。吸附劑的很大缺點是它們可能非特異性結(jié)合對于營養(yǎng)而言可以是必需的其它分子。同樣地，通過物理和化學(xué)處理的單端孢霉烯的轉(zhuǎn)化，特別是解毒是有限的，因為don是非常穩(wěn)定的，甚至在高達350℃的熱處理保持穩(wěn)定。don可能的微生物轉(zhuǎn)化在ep-b1042449中描述，根據(jù)前述文獻，微生物bbsh797(dsm11798)用于don的解毒。此處解毒是基于don的c-12和c-13原子上的環(huán)氧化物環(huán)的打開。us2012/0263827a描述，通過具有國際加拿大登錄號040408-1的微生物，將don生物轉(zhuǎn)化為3-epi-don。然而，對于許多技術(shù)飼料或食品加工，微生物或吸附劑的混合物是不可能的，或者沒有法律允許的，所以其中單端孢霉烯類化合物如don或don亞型的轉(zhuǎn)化或排毒是不可能的。單端孢霉烯類化合物例如don和don亞型迅速吸收進入人體或動物體的胃腸道，這就是為什么快速和有針對性的解毒是重要的的原因。jp-a2003/159079首先描述了seqidno.1的醇脫氫酶用于生產(chǎn)2-酮古洛糖酸。wo2009/133464描述了，尤其是在烘烤業(yè)中，通過在食品和飼料中用于氧化淀粉的seqidno.1的酶氧化糖類的方法，以減慢面包的老化過程(ageingprocesses)。此處，醇脫氫酶用于碳水化合物的羥基的氧化。在德沃斯氏菌屬的種(devosiasp.)微生物的基因組測序的過程中對具有seqid編號2和3的醇脫氫酶進行了鑒定，并且以識別號gi：737041022和gi：630002266在網(wǎng)上儲存于生物技術(shù)信息國家中心(ncbi)的服務(wù)器。具有seqid編號2和3的醇脫氫酶的更精確的表征在該工作過程中沒有給出。因為單端孢霉烯類化合物的各種毒性作用和其發(fā)生頻度，因此需要可用于單端孢霉烯類化合物的特異性的、安全的、和允許的轉(zhuǎn)化(特別是解毒)的物質(zhì)或多組物質(zhì)樣酶(groupsofsubstanceslikeenzyme)。本發(fā)明的目的在于，使用特定的醇脫氫酶和其變體，采用所述醇脫氫酶和其變體，可能將至少一種在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯轉(zhuǎn)化為毒性較低的產(chǎn)物。為了解決上述任務(wù)，已經(jīng)令人驚訝地證實，將含有金屬離子和醌輔因子的seqidno.1的醇脫氫酶，或除此之外的顯示出至少80％，優(yōu)選86％，特別優(yōu)選至少89％的序列同一性的功能變體和至少一種氧化還原輔因子用于轉(zhuǎn)化在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的至少一種單端孢霉烯，可以特異性地和可靠地轉(zhuǎn)化在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯類化合物如don，t-2毒素，或瓜萎鐮菌醇。轉(zhuǎn)化理解為發(fā)生于當毒素的結(jié)構(gòu)變化時，其中所述毒素優(yōu)選變換成無毒或低毒性的代謝物，即轉(zhuǎn)化。在目前的情況下，結(jié)構(gòu)變化發(fā)生于，特別是于在c-3原子顯示出羥基的單端孢霉烯的c-3原子，其原因在于c-3羥基基團催化轉(zhuǎn)化為酮基。令人驚奇的是，根據(jù)本發(fā)明使用醇脫氫酶，在最多樣化的化學(xué)和生物環(huán)境中(例如在緩沖液，飼料醪液(feedmash)，唾液或含飼料胃液或含有飼料的腸內(nèi)容物中)產(chǎn)生在c-3原子上呈現(xiàn)出羥基的單端孢霉烯類化合物特別是don的轉(zhuǎn)化。這是非凡的，因為在酶活性的各環(huán)境中，重要的參數(shù)，如ph值，蛋白酶濃度，離子強度，或物質(zhì)基質(zhì)是非常不同的。其結(jié)果是，從將水加入到食品和飼料，至其口服攝取以及在口腔和胃腸道中，可以保證酶的活性。令人驚奇的是，對于某些環(huán)境，可以省略外部加入氧化還原因子；這尤其適用于飼料的混合物，唾液和胃液。seqidno.1的醇脫氫酶是醌輔因子依賴性醇脫氫酶。為了產(chǎn)生活性全酶或活性醇脫氫酶，在金屬離子(優(yōu)選鈣離子(ca2+))的存在下，醌輔因子(優(yōu)選吡咯并喹啉醌(pcc))可以結(jié)合到酶。因此，活化的醇脫氫酶包含醌輔因子和金屬離子，其中酶與醌輔因子的摩爾比為1：1。此外，醇脫氫酶的催化活性還需要氧化還原輔因子，其中除了活化醇脫氫酶，以合成產(chǎn)生的氧化還原因子的形式使用所述氧化還原輔因子，或也可以使用還存在于食品或飼料中和動物或人的分泌物中的氧化還原因子。例如，在人或動物的口腔和胃腸道中，在提供，處理，或消化食物或飼料的過程中，可以形成這些天然的氧化還原輔因子，并且如果需要，可以從食物或飼料中提取這些天然的氧化還原輔因子。包含這樣的天然氧化還原輔因子的人或動物的分泌物的實例是消化分泌物如唾液，胃液，腸液，胰液，膽汁，或瘤胃液(rumenfluid)。表述“多肽變體”或“變體”是指，相比于seqidno.1，至少有氨基酸取代的功能性多肽，其中所述酶的功能被保留。轉(zhuǎn)化，特別是在單端孢霉烯類化合物的c-3原子的羥基氧化成酮基，被理解為酶功能。此外，“多肽變體”也可具有氨基酸插入或缺失，特別是相對于seqidno.1多肽序列的c或n末端延長或縮短的序列。如果酶促反應(yīng)機制保持不變，則“基本上保持”酶功能，也就是說，在相同的位置氧化單端孢霉烯，并且在seqidno.1的原始的、親本多肽的基礎(chǔ)上，變體的酶活性為至少10％，優(yōu)選至少50％，更優(yōu)選至少90％，尤其是>100％。命名“序列同一性”指的是序列同一性百分比。對于氨基酸序列和核苷酸序列，序列同一性可以在視覺上確定，但優(yōu)選由計算機程序來計算。seqidno.1的氨基酸序列被定義為參考序列。序列比較也在序列段內(nèi)進行，在這種情況下，段被理解為參考序列的連續(xù)序列。肽序列的序列段的長度通常為3至200，優(yōu)選15至65，最優(yōu)選30至50個氨基酸。存在可用于確定同源性并且正在不斷進一步被具體化的銷售或免費的許多生物信息學(xué)程序。這方面的實例有：gcg威斯康辛bestfit程序包(gcgwisconsinbestfitpackage)(devereux等，1984)，blast(altschul等人，1990)或blast2(tatusova和madden1999)。因為對這些算法的不同的設(shè)置選項，采用這些算法有可能針對相同的輸入序列得到不同的結(jié)果。因此，搜索算法和相關(guān)聯(lián)的設(shè)置必須被定義。在目前的情況下，ncbiblast(基本局部比對搜索工具((basiclocalalignmentsearchtool)))程序，特別是采用用于多肽的blastp(其可獲自“生物技術(shù)信息國家中心(nationalcenterforbiotechnologyinformation)”的主頁(ncbi，http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/))用于計算序列同一性。通過這種方式，有可能根據(jù)altschul等人，1997(nucleicacidsres.，25：3389-3402)的算法，比較彼此的兩個或更多個序列。在此處，使用了2014年8月12日的程序版本。基本設(shè)置被用作程序設(shè)置，特別是用于氨基酸比較：“最大靶序列”＝100；“預(yù)期的閾值”＝10；“字長”＝3；“矩陣(matrix)”＝blosom62；“缺口成本(gapcosts)”＝“存在：11；延伸：1”；“計算調(diào)整”＝“有條件的成分得分矩陣調(diào)整”。通過使用根據(jù)本發(fā)明的含有金屬離子和醌輔因子的醇脫氫酶或其功能變體，可以轉(zhuǎn)化至少20％，優(yōu)選至少50％，特別至少90％的在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的至少一種單端孢霉烯，特別是don，其中充分的是，使含有金屬離子和醌輔因子的醇脫氫酶或其功能變體接觸在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的至少一種單端孢霉烯至少一分鐘，優(yōu)選至少5分鐘，特別是至少60分鐘。根據(jù)本發(fā)明的進一步的實施方案，使用選自seqidno.2至4組成的組的功能變體的氨基酸序列。采用具有seqidno.1的醇脫氫酶的至少86％序列同一性的這些功能變體，可能轉(zhuǎn)化在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯類化合物，特別是don，其具有一致良好的效果。根據(jù)本發(fā)明的進一步的實施方案，使用選自pcc，ttc，tpc，ltc和ctc組成的組，優(yōu)選pcc的醌輔因子。通過在醇脫氫酶中使用醌輔因子之一吡咯并喹啉醌(pcc，cas號72909-34-3)，色氨酸色氨酰醌(ttq，cas號134645-25-3)，topaquinone(tpc，cas號64192-68-3)，賴氨酸酪氨酰醌(ltq，cas號178989-72-5)或半胱氨酸色氨酰醌(ctc，cas號400616-72-0)，可能將在c-3呈現(xiàn)羥基原子的單端孢霉烯類化合物(例如don)轉(zhuǎn)化為從毒理學(xué)的角度來看是無毒或無害的衍生物。通過經(jīng)由選自li+、na+、k+、mg2+、ca2+、zn2+、zn3+、mn2+、mn3+、fe2+、fe3+、cu2+、cu3+、co2+與co3+組成的組的金屬離子中的至少一個，優(yōu)選ca2+和mg2+的結(jié)合，實現(xiàn)特別快并完全的醌輔因子與醇脫氫酶的結(jié)合。也通過使用選自甲基硫酸吩嗪(phenazinemethosulphate)基團(pms)，pms衍生物，六氰高鐵(iii)酸鉀，六氰高鐵(iii)酸鈉，細胞色素c，輔酶q1，輔酶q10，亞甲藍和n,n,n’,n’-四甲基-對苯二胺(tmpd)組成的組的至少一種氧化還原輔因子，優(yōu)選甲基硫酸吩嗪(pms，cas號：299-11-6)，輔酶q1和輔酶q10，可能只在濕氣的存在下進行所述單端孢霉烯類化合物的完全和快速轉(zhuǎn)化，以確保例如在生產(chǎn)飼料的過程中和在用于動物之前的任何情況下，將飼料組分中含有的單端孢霉烯類化合物轉(zhuǎn)化為無毒的衍生物。pms衍生物的實例是：1-羥基吩嗪，2-(五異戊二烯基氧基)二氫吩嗪，5,10-二氫-9-二甲基烯丙基吩嗪-1-羧酸，5,10-二氫吩嗪-1-羧酸，甲基硫酸5-甲基吩嗪鎓，6-乙酰吩嗪-1-羧酸，benthophoenin，氯法齊明，二氫橋亞甲基吩嗪(dihydromethanophenazine)，esmeraldicacid，esmeraldinb，和泉吩嗪(izumiphenazine)a-c，詹納斯綠(janusgreen)b陽離子，橋亞甲基吩嗪(methanophenazine)pelagiomicina，吩嗪，吩嗪-1,6-二羧酸，吩嗪-1-甲酰胺，吩嗪-1-羧酸，酚藏花紅(phenosafranine)，綠膿素(pyocyanin)，山芬霉素(saphenamycin)或saphenic酸(saphenicacid)甲酯。由于在食品和飼料(特別是用于豬，禽，牛，馬，魚，水產(chǎn)養(yǎng)殖以及家畜的飼料)中和在用于生產(chǎn)或加工食品和飼料的基于植物的原料中在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯類化合物的轉(zhuǎn)化，有可能通過根據(jù)本發(fā)明的用途，防止對動物和人類的健康的傷害。此外，本發(fā)明的目的在于提供，能夠?qū)味随呙瓜╊惢衔?尤其是在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯類化合物)安全、可靠地轉(zhuǎn)化為毒性較低的產(chǎn)物的方法，而不管其中存在單端孢霉烯類化合物的農(nóng)產(chǎn)品是否已被處理或未被處理。為了解決這個課題，根據(jù)本發(fā)明的用于單端孢霉烯類化合物的酶促轉(zhuǎn)化的方法本質(zhì)特征在于，將在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的至少一種單端孢霉烯與含有金屬離子和醌輔因子的seqidno.1的醇脫氫酶接觸，或另外與具有至少80％，優(yōu)選至少86％，尤其優(yōu)選至少89％的序列同一性的功能變體接觸，與至少一種氧化還原輔因子和水接觸，并在必要時與至少一種賦形劑接觸。通過使在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯與含有金屬離子和醌輔因子的seqidno.1的醇脫氫酶接觸，以及此外與至少一種氧化還原輔因子和水接觸，有可能將存在于單端孢霉烯類化合物c-3原子的羥基基團氧化為酮，在這種情況下，單端孢霉烯如此被去毒并轉(zhuǎn)化為無毒的或低毒性的化合物。通過持續(xù)使用選自seqidno.2至4組成的組的氨基酸序列的功能變體，而不是seqidno.1的氨基酸序列，可以實現(xiàn)由使用seqidno.1的醇脫氫酶所取得的相同的優(yōu)點，并且可以特別快速、可靠地實現(xiàn)在食品和飼料中包含的單端孢霉烯類化合物的轉(zhuǎn)化，而不管它們的處理狀態(tài)，即，無論它們是否已經(jīng)是經(jīng)加工的農(nóng)產(chǎn)品或不是經(jīng)加工的農(nóng)產(chǎn)品。在5℃至55℃，優(yōu)選10℃至50℃，特別優(yōu)選28℃至45℃之間的溫度，采用根據(jù)本發(fā)明的方法實現(xiàn)，在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯的特別快速和完全轉(zhuǎn)化。因為可以在這樣的寬溫度范圍內(nèi)執(zhí)行根據(jù)本發(fā)明的方法，seqidno.1的醇脫氫酶或其呈現(xiàn)出seqidno.1的至少80％的序列的功能變體可以用于各種不同的應(yīng)用，例如水產(chǎn)養(yǎng)殖或也用于在升高的溫度的技術(shù)工藝。其中單端孢霉烯類化合物在升高的溫度的轉(zhuǎn)化是重要的技術(shù)過程的實例是用于處理飼料的程序，生產(chǎn)面食和其它玉米產(chǎn)品，如玉米粥，爆米花，玉米片，玉米餅或未經(jīng)發(fā)酵的玉米餅(tortillas)，以及強液化過程，糖化過程，或發(fā)酵過程，例如搗碎或發(fā)酵過程，特別是生物乙醇生產(chǎn)。此處重要的是確保通過這些方法生產(chǎn)的食品或飼料中不包含任何有害數(shù)量的在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯類化合物。根據(jù)本發(fā)明方法的進一步實施方案，是以如下方式進行的：使在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的至少一種單端孢霉烯接觸含有金屬離子和醌輔因子的醇脫氫酶或至少其功能變體，氧化還原因子，水，并在必要時的用賦形劑，持續(xù)至少一分鐘，優(yōu)選為至少5分鐘，特別優(yōu)選為至少60分鐘。因為1分鐘至60分鐘以上的接觸時間足以實現(xiàn)將單端孢霉烯類化合物充分轉(zhuǎn)化為無毒或低毒性的衍生物，根據(jù)本發(fā)明的方法可以例如用于處理用于食品或飼料的基本農(nóng)用材料的方法。另一方面，它也可以由農(nóng)夫在飼喂之前立即，例如，通過將水加入飼料并將其在5℃至55℃之間的溫度靜置1分鐘至高達約1小時而施用，這將啟動單端孢霉烯類化合物轉(zhuǎn)化為無毒產(chǎn)物。如果醌輔因子選自pcc，ttc，ptc，ltc和ctc組成的組，優(yōu)選pcc，那么特別快速和完全轉(zhuǎn)化是可能的，因為這對應(yīng)于根據(jù)本發(fā)明的方法的另一個實施例。這樣的醌輔因子允許醇脫氫酶快速和可靠地攻擊單端孢霉烯類化合物c-3原子上的羥基并且將它轉(zhuǎn)化為含有酮基的非毒性衍生物。如果在根據(jù)本發(fā)明的方法中的輔因子是經(jīng)由選自li+、na+、k+、mg2+、ca2+、zn2+、zn3+、mn2+、mn3+、fe2+、fe3+、cu2+、cu3+、co2+與co3+組成的組的金屬離子中的至少一個，優(yōu)選ca2+和mg2+結(jié)合至醇脫氫酶，那么反應(yīng)的進一步完成和特別是反應(yīng)的加速是可能的。以這樣的方式執(zhí)行該方法不僅產(chǎn)生醌輔因子與醇脫氫酶的強結(jié)合，也可以實現(xiàn)單端孢霉烯類化合物的快速和可靠的轉(zhuǎn)化。為了進一步改進單端孢霉烯的轉(zhuǎn)化，特別是為了轉(zhuǎn)化反應(yīng)的完成，繼續(xù)根據(jù)本發(fā)明的方法，從而使用選自pms，pms衍生物，六氰高鐵(iii)酸鉀，六氰高鐵(ⅲ)酸鈉，細胞色素c，輔酶q1，輔酶q10，亞甲藍以及tmpd組成的組，優(yōu)選選自pms，輔酶q1和輔酶q10的氧化還原因子。通過加入這樣的氧化還原輔因子，能夠執(zhí)行在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯類化合物在水性介質(zhì)中的轉(zhuǎn)化，例如，如在被施用給水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的無氧化還原因子的飼料漿液或飼料中，所述氧化還原因子可以例如從必須被添加或必須存在的唾液、胃液或腸液得到，或在被施用給必須已經(jīng)攝取飼料漿或飼料的動物的飼料漿液或飼料中，在這種情況下，可以防止由攝入飼料的動物對單端孢霉烯類化合物的吸收。最后，本發(fā)明的目的是提供單端孢霉烯轉(zhuǎn)化添加劑，采用所述單端孢霉烯轉(zhuǎn)化添加劑，可能在飼料或食品中安全、可靠地將單端孢霉烯類化合物轉(zhuǎn)化為無毒衍生物。為了解決這個課題，根據(jù)本發(fā)明的添加劑的本質(zhì)特征在于，它包含含有金屬離子和醌輔因子的seqidno.1的醇脫氫酶或還包含其呈現(xiàn)出至少80％，優(yōu)選至少86％，尤其優(yōu)選至少89％的序列同一性的功能變體，并在必要時，還包含選自由合成的氧化還原輔因子和至少一種賦形劑組成的組的至少一種附加組分。這樣的添加劑可以在低濃度與常規(guī)飼料混合，例如，約10克到1千克/一噸飼料，并且在這樣的低濃度，允許在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯類化合物轉(zhuǎn)化為非毒性衍生物，以使得例如被飼喂該飼料的動物健康和行為表現(xiàn)能力將改善，因此，不僅失敗率(failurerates)能被減少，而且飼料利用率將得到改善。采用根據(jù)本發(fā)明的添加劑(包含選自seqidno.2至4的seqidno.1的醇脫氫酶的功能變體，而不含seqidno.1的醇脫氫酶)，可實現(xiàn)持續(xù)良好的結(jié)果。為了通過根據(jù)本發(fā)明的添加劑基本上完全轉(zhuǎn)化存在于單端孢霉烯類化合物的c-3原子的羥基基團，所述添加劑進一步體現(xiàn)為含有選自pcc，ttc，tpc，ltc，和ctc組成的組的醌輔因子，以及選自li+、na+、k+、mg2+、ca2+、zn2+、zn3+、mn2+、mn3+、fe2+、fe3+、cu2+、cu3+、co2+與co3+組成的組的金屬離子。采用這樣的進一步的實施方案，一方面可能將醌輔因子安全可靠地結(jié)合到醇脫氫酶，并且在另一方面，使用包含這樣的補充劑(supplements)的醇脫氫酶，可以實現(xiàn)在分子的c-3原子呈現(xiàn)羥基基團的單端孢霉烯類化合物例如脫氧瓜蔞鐮菌醇的完全轉(zhuǎn)化。為了在沒有氧化還原輔因子(如那些天然存在于唾液，胃液，或腸液等中的氧化還原輔因子)的存在下進行這樣的反應(yīng)，根據(jù)本發(fā)明的添加劑是進一步體現(xiàn)為除了作為進一步的氧化還原輔因子，合成的氧化還原輔因子另外選自pms，pms衍生物，六氰高鐵(iii)酸鉀，六氰高鐵(iii)酸鈉，細胞色素c，輔酶q1，輔酶q10，亞甲藍，以及tmpd，優(yōu)選pms，輔酶q1和輔酶q10。根據(jù)本發(fā)明的進一步的實施方案，開發(fā)了添加劑，使得賦形劑選自惰性載體，維生素，礦物質(zhì)，植物源性物質(zhì)，酶和用于真菌毒素的解毒的附加組分例如降解真菌毒素的酶類，尤其是黃曲霉毒素氧化酶，麥角胺水解酶，麥角胺酰胺酶，玉米赤霉烯酮酯酶，玉米赤霉烯酮內(nèi)酯酶，玉米赤霉烯酮水解酶，赭曲霉毒素酰胺酶，煙曲霉毒素氨基轉(zhuǎn)移酶，煙曲霉毒素羧基轉(zhuǎn)移酶，氨基多元醇胺氧化酶，脫氧瓜蔞鐮菌醇環(huán)氧化物水解酶，脫氧瓜蔞鐮菌醇脫氫酶，脫氧瓜蔞鐮菌醇氧化酶，單端孢霉烯脫氫酶，單端孢霉烯氧化酶；和轉(zhuǎn)化真菌毒素的微生物如dsm11798；和真菌毒素結(jié)合物質(zhì)如微生物細胞壁或無機材料，如膨潤土或蒙脫石。例如，使用這樣的添加劑，可以確保，任何數(shù)量的可能被包含在飼料或食品中在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯類化合物以及任何附加的真菌毒素如鐮刀菌毒素(fusariumtoxin)，麥角胺，赭曲霉毒素肯定地脫毒到不存在真菌毒素對攝入這種飼料或食品的個體生物體的有害影響的程度。用于本發(fā)明進一步的應(yīng)用是，除了根據(jù)本發(fā)明的至少一種醇脫氫酶，還含有至少一種涉及蛋白質(zhì)分解的酶(例如，如蛋白酶)或涉及淀粉或纖維或脂肪或糖原代謝的酶(如淀粉酶，纖維素酶或葡聚糖酶，以及例如，水解酶，解脂酶，甘露糖苷酶，氧化酶，氧化還原酶，植酸酶(phytases)或木聚糖酶)的添加劑。不言而喻，添加劑當然可以以經(jīng)包封或經(jīng)涂覆的形式存在，在這種情況下，可以使用標準方法，例如那些在wo92/12645中描述的。通過包封或涂層，可以在沒有改性，特別是在沒有任何降解或損壞的情況下將添加劑輸送到它被使用的位置，從而使該多肽僅在外殼溶解后才開始發(fā)揮作用，例如，如在動物的消化道中，這即使是在酸性、蛋白酶豐富和厭氧環(huán)境中，也可以實現(xiàn)在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯類化合物的甚至更有針對性、更快和更完全的破壞。此外，通過包封或涂層，也可以提高添加劑中醇脫氫酶的溫度穩(wěn)定性，在這種情況下，例如，其在飼料造粒過程中的使用得到改進。根據(jù)本發(fā)明的添加劑可在各種各樣的應(yīng)用，如化合物生產(chǎn)中使用，以預(yù)防和/或治療單端孢霉烯真菌中毒，優(yōu)選在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯類化合物引起的真菌中毒，特別是如脫氧瓜蔞鐮菌醇真菌中毒。這樣的真菌中毒對于人類和動物具有的嚴重后果。通過如本發(fā)明這樣使用添加劑，在預(yù)防的情況下，盡管口服攝取單端孢霉烯類化合物(特別是在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯類化合物，特別是脫氧瓜蔞鐮菌醇)，也能夠維持人類和動物健康狀況基本上處于與不采用或采用減少的毒素的口服攝取所得水平相同的水平。在真菌中毒的治療的情況下，能夠減輕這種疾病的癥狀，特別是正?；闻K中socs3濃度或血漿中igfals水平以及在腸內(nèi)的閉合蛋白(claudin)濃度。此外，有可能通過本發(fā)明這種使用，以改善家畜的生產(chǎn)力，特別是飼料利用率和重量增加，并降低死亡率?；趯嵤┓桨负透綀D如下解釋本發(fā)明。在此處：圖1示出針對活化的seqidno.1的醇脫氫酶以及作為比較的檢驗(ctr)的脫氧瓜蔞鐮菌醇的時間順序轉(zhuǎn)化，以及圖2示出采用seqidno.1至4的活化的醇脫氫酶以及作為比較的檢驗(ctr)的don的時間順序轉(zhuǎn)化的表示。實施例1：醇脫氫酶的基因的克隆與純化用于各個宿主細胞的seqid編號1至4的醇脫氫酶的密碼子優(yōu)化的核苷酸序列取自dna2.0并在核酸水平含有在序列5'末端和3'末端的限制性位點，并且在氨基酸水平上還含有c-或n-末端6xhis標簽。在用于大腸桿菌(escherichiacoli)或komagataella酵母(komagataellapastoris)表達的表達載體中通過標準方法整合這些核苷酸序列，并將其轉(zhuǎn)化至大腸桿菌或k.酵母，并表達于大腸桿菌或k.酵母(j.m.cregg,pichiaprotocols，第二版，isbn-10：1588294293，2007；j.sambrook等2012年，分子克隆實驗手冊第4版，冷泉港(molecularcloning,alaboratorymanual4thedition,coldspringharbor))。在大腸桿菌中表達和在k.酵母細胞間表達的情況下從細胞裂解物，或在k.酵母的胞外表達的情況下從培養(yǎng)上清液，通過經(jīng)由鎳瓊脂糖柱的標準方法，通過色譜法選擇性強化具有seqidno.1至4的醇脫氫酶。孵育選擇性強化的洗脫液，并將其在金屬離子和醌輔因子的存在下活化，在這種情況下，“活化”指的是，醇脫氫酶呈現(xiàn)出結(jié)合的金屬離子和醌輔因子兩者。這些活化的醇脫氫酶被用于確定以下實施例3至7中具有seqidno.1至4的醇脫氫酶的酶性質(zhì)。采用bradford試劑(sigma#b6916)通過光度計測定總蛋白質(zhì)濃度，在這種情況下，在595納米的波長，在微板光度計中測定吸收(板讀數(shù)器，百特，協(xié)同ht(biotek,synergyht))?；谛Ｕ€確定蛋白質(zhì)濃度，使用bradford測定法通過測量濃度最多為1500微克/毫升的牛血清白蛋白(bsa，sigma#a4919)溶液確定校正曲線。實施例2：序列同一性的測定使用blast程序(基本局部比對搜索工具)，尤其是blastp，測定相對于具有seqid編號1-4的醇脫氫酶彼此的氨基酸序列的全長的序列同一性百分比，所述blast程序(基本局部比對搜索工具)，尤其是blastp可獲自生物技術(shù)信息國家中心(ncbi；http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)的主頁，并且采用blast程序(基本局部比對搜索工具)，尤其是blastp，能夠根據(jù)altschul等人1997(nucleicacidsres.(1997)25：3389-3402))的算法，比較彼此的兩個或更多個序列?；驹O(shè)置被用作程序設(shè)置，尤其是：“最大目標序列”＝100；“預(yù)期的閾值”＝10；“字長”＝3；“矩陣”＝blosom62；“缺口成本”＝“存在：11；延伸：1”；“計算調(diào)整”＝“有條件的成分得分矩陣調(diào)整”。彼此氨基酸序列的同一性百分比示于表1：表1：seqidno.1seqidno.2seqidno.3seqidno.4seqidno.1100％87％89％86％seqidno.287％100％99％90％seqidno.389％99％100％91％seqidno.486％90％91％100％實施例3：c-3原子呈現(xiàn)出羥基的單端孢霉烯的轉(zhuǎn)化為了確定具有seqid編號1-4的醇脫氫酶是否適于轉(zhuǎn)化在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯類化合物(特別是don，瓜萎鐮菌醇和t-2毒素)，采用c-末端6xhis標簽在大腸桿菌中制備具有seqid編號1-4的醇脫氫酶，如實施例1中所述。當通過使在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯接觸活化的醇脫氫酶(即，包含金屬離子和醌輔因子的醇脫氫酶)降低在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯的量時，存在轉(zhuǎn)化。在每一種情況下，通過在4℃離心收獲具有2.0-2.5的光密度(od600nm)的100毫升大腸桿菌培養(yǎng)物，和將其再懸浮在20ml磷酸鉀緩沖液。通過弗細胞壓碎器(frenchpress)處理以20,000psi將細胞懸浮液裂解3次。細胞裂解物通過離心分離成可溶性和不溶性的部分。將上清液無菌過濾，并通過經(jīng)由鎳瓊脂糖柱的標準方法強化醇脫氫酶。在此之后，通過采用具有十千道爾頓的截止的特定管的透析進行緩沖液交換。所得總蛋白濃度通過bradford測定法測定。在水溶液中通過孵育使醌輔因子和金屬離子結(jié)合于醇脫氫酶。在此處，醌輔因子，如吡咯并喹啉醌(pcc，cas號72909-34-3)，色氨酸色氨酰醌(ttc，cas號134645-25-3)，topaquinone(tpc，cas號64192-68-3)，賴氨酸酪氨酰醌(ltc，cas號178989-72-5)和半胱氨酸色氨酰醌(ctc，cas號400616-72-0)作為水溶液以約二十倍摩爾過量被添加到現(xiàn)有的總蛋白濃度。選自li+、na+、k+、mg2+、ca2+、zn2+、zn3+、mn2+、mn3+、fe2+、fe3+、cu2+、cu3+、co2+與co3+的金屬離子以其鹽的水溶液的形式使用。除非另有說明，醇脫氫酶通常與pcc(sigmaaldrich#d7783)和ca2+一同所用，被活化為5mm的cacl2溶液。以這種方式純化和活化的酶被用于在c-3原子上呈現(xiàn)羥基基團的單端孢霉烯的體外轉(zhuǎn)化測定。除非另有說明，術(shù)語“酶”或“醇脫氫酶”總是理解為是指含有金屬離子和醌輔因子的適當活化的醇脫氫酶。在具有下列成分的水溶液中進行轉(zhuǎn)化測定：100mm的tris-hclph7.5或10％teorellstenhagenph7.5；選自以下的合成的氧化還原輔因子：1mm甲硫酸吩嗪pms(sigmaaldrich#p9625)，1mm亞甲藍(sigma#m9140)，1mm輔酶q10(sigma#c9538)，1mm輔酶q1(sigma#c9538)和20mm六氰高鐵(iii)酸鈉的pfc(ⅲ)(fluka#60300)；通過加入所需量的毒素底物儲備溶液而得到的10ppm至最多100ppm的在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的基團的單端孢霉烯；和10nm至100nm，最大300nm含有金屬離子和醌輔因子的seqidno.1，2，3或4的經(jīng)活化的醇脫氫酶。除非另有陳述，否則通常使用tris-hcl緩沖液，氧化還原輔因子pms，don和seqidno.1的醇脫氫酶。每個轉(zhuǎn)化測定在1.5ml棕色eppendorf反應(yīng)容器中進行。將反應(yīng)混合物在30℃在熱塊(thermoblock)中孵育至多120分鐘，至少40分鐘。0，10，20，30和40分鐘后，在每種情況下取樣0.1毫升，并將樣品與0.1毫升甲醇混合，并儲存在-20℃，或可替代地通過lc-ms/ms或hplc立即分析所述樣品。無菌過濾，含水2000ppm的don溶液用作don底物儲備溶液。為了產(chǎn)生這種溶液，將結(jié)晶形式的don(來自盧氏實驗室(romerlabs)的biopure標準(biopurestandard)，物品編號(art.no.)001050，純度至少98％)稱重并溶解。為了量化在c-3原子上呈現(xiàn)羥基基團的單端孢霉烯和它們轉(zhuǎn)化代謝物，進行高效液相色譜(hplc)分析，其中所述物質(zhì)通過用具有150毫米×4.6毫米的尺寸和5微米(μm)的顆粒尺寸的phenomenexc18gemininx柱經(jīng)由色譜分離。用5mm的醋酸銨濃度的甲醇/水混合物作為洗脫液。uv信號被記錄，并在220納米進行評價。為了借助于lc-ms/ms分析的定量，通過具有150毫米×4.6毫米的尺寸和5微米的顆粒大小的zorbaxeclipsec8柱經(jīng)由色譜分離所述物質(zhì)。用具有5mm的醋酸銨濃度的甲醇/水混合物作為洗脫液。在220納米(nm)的uv信號被記錄下來。電噴霧電離(esi)用作電離源。由“增強模式”的qtrap/lc/ms/ms(三重四極(triplequadrupole)，施用的生物系統(tǒng)(appliedbiosystems))量化在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的單端孢霉烯類化合物。在線性范圍內(nèi)的轉(zhuǎn)化線(＝隨時間的毒素濃度降低)的負斜率被用作醇脫氫酶的活性的標準。為了確定殘余活性，在標準條件(特別是30℃和ph7.5)下測量的、相對于基本活性的不同的參數(shù)的測量活性被應(yīng)用，并且通常表示為百分比。圖1示出don針對seqidno.1的活化醇脫氫酶的按時間順序的轉(zhuǎn)化，并且圖2示出seqid編號2-4(圖1b)的活化的醇脫氫酶。從插圖顯而易見的是，因為don的濃度基于實時(realitytime)減少，發(fā)生的don轉(zhuǎn)化。圖1示出在50ppm的don和1mmpms的存在下在100mm的trishclph7.5中采用seqidno.1的醇脫氫酶的don轉(zhuǎn)化。通過lc-ms/ms分析(a)獲得測量結(jié)果和采用seqid編號1-4的醇脫氫酶的don轉(zhuǎn)化示于圖2。通過hplc分析得到測定結(jié)果(b)。ctr是在測試中用作陰性檢查，其包含轉(zhuǎn)化檢測的所有組分，與seqid編號1-4的醇脫氫酶相比。為了比較醌輔因子的效率，在轉(zhuǎn)化測定中，采用醌輔因子pcc，ttc，tpc，ltc，和ctc活化的10nm的seqidno.1的醇脫氫酶，10ppmdon和1mm合成氧化還原因子pms各自在100mmtris-hclph7.5中混合和在30℃孵育。30分鐘后通過lc-ms/ms測定don濃度。結(jié)果示于表2。為了比較氧化還原輔因子的效率，在轉(zhuǎn)化測定中，10nm的活化酶(seqidno.1的醇脫氫酶)，10ppmdon和1mm或20mm將被測試的合成的氧化還原輔因子分別混合在100nmtris-hclph7.5中，并在30℃孵育。在30分鐘后通過lc-ms/ms測定don濃度。結(jié)果示于表2。表2：醌輔因子don[ppm]氧化還原輔因子don[ppm]pcc1.941mmpms1.95ttq2.3220mmpfc(iii)2.11tpq2.411mm輔酶q18.58ltq2.041mm亞甲藍6.88為了測試在活化的酶中的金屬離子對轉(zhuǎn)化的影響，seqidno.1的醇脫氫酶和pcc被活化，但在每一種情況下采用不同的金屬離子，即，mg2+、ca2+、zn2+、mn2+、fe2+和cu2+。轉(zhuǎn)化測定包含分別在100mmtris-hclph7.5中的10nm活化的醇脫氫酶，10ppmdon和1mmpms，并且在30℃孵育。30分鐘后通過lc-ms/ms測定don濃度。結(jié)果示于表3。表3：金屬離子don[ppm]金屬離子don[ppm]mg2+1.90mn2+2.57ca2+1.98fe2+2.17zn2+2.46cu2+2.61類似于上述的don轉(zhuǎn)化測定，用在c-3原子上呈現(xiàn)羥基的其他單端孢霉烯類化合物進行轉(zhuǎn)化測定。在這些測定中，不采用50ppm的don，而使用50ppm的t-2毒素或50ppm的瓜萎鐮菌醇。含有金屬離子和醌輔因子的seqidno.1至4的所有四個醇脫氫酶也能轉(zhuǎn)化t-2毒素和瓜萎鐮菌醇，在這種情況下，一半以上的最初使用的毒素在30分鐘內(nèi)轉(zhuǎn)化。實施例4：活性區(qū)域的測量為了確定seqid編號1-4的醇脫氫酶在不同條件下轉(zhuǎn)化don的能力，seqidno.1醇脫氫酶用作一個實例。制作seqidno.1的醇脫氫酶，并如實施例3中所述用鈣離子和pcc活化所述的醇脫氫。為了確定在10℃至50℃溫度范圍內(nèi)和在3.0到9.0ph范圍內(nèi)的酶的活性，使用10％teorellstenhagen緩沖液代替100mmtris-hclph7.5緩沖液。在具有以下組分的水溶液中進行用于確定不同溫度的活性的轉(zhuǎn)化測定：10％teorellstenhagenph7.5，1mm的合成的氧化還原輔因子pms，50ppm的don，和10nm活化seqidno.1的醇脫氫酶。在具有10℃至50℃溫度梯度的熱循環(huán)儀(eppendorf)中孵育轉(zhuǎn)化測定至多60分鐘。0，10，20，30，40，和60分鐘后，在每種情況下取樣0.05毫升和將所述樣品與0.05毫升甲醇混合以終止反應(yīng)，并貯存在-20℃。將樣品制備用于lc-ms/ms，如實施例3中所述，并通過lc-ms/ms進行分析。針對每個溫度測定don還原過程和計算活性，如在實施例3中所述。30℃的轉(zhuǎn)化線的線性范圍的斜率的用作參考值以計算在其他的溫度的殘余活性。表4顯示以℃計的溫度和以百分比計的相關(guān)的殘余活性。令人驚訝地已經(jīng)表明，seqidno.1的醇脫氫酶在廣泛的溫度范圍內(nèi)具有活性。在10℃，測量到48％的殘余活性，并在約50℃，測量到67％的殘余活性。表4：在具有下列組分的水溶液中進行用于確定4.0～9.0的ph范圍內(nèi)的活性的轉(zhuǎn)化測定：10％teorellstenhagenph4.0至ph10.0，20mm合成的氧化還原輔因子pfc，100ppmdon，和20nm活化的seqidno.1的醇脫氫酶。在30℃在熱循環(huán)儀孵育轉(zhuǎn)化測定最多60分鐘。0，10，20，30，40和60分鐘后，在每種情況下取樣0.05毫升和將所述樣品與0.05毫升甲醇混合以終止反應(yīng)，并貯存在-20℃。如實施例3中所述，將樣品稀釋并通過lc-ms/ms進行分析。在各ph值確定don還原過程和計算活性，如實施例3中所述。在ph7.5的轉(zhuǎn)化線的線性范圍的斜率用作參考值以計算其他的溫度的殘余活性。表5示出ph值和相關(guān)聯(lián)的殘余活性(基于7.5的參考ph值的don降低)。表5：ph殘余活性ph殘余活性4.010％7.0105％5.018％7.5100％6.020％8.069％6.552％9.0105％實施例5：測定溫度穩(wěn)定性30℃至55℃范圍內(nèi)確定seqidno.1的醇脫氫酶的溫度穩(wěn)定性。為了做到這一點，在熱循環(huán)儀(eppendorf)中在特定溫度下將活化醇脫氫酶孵育在100nmtris-hcl緩沖液，ph7.5至多60分鐘。0，5，10，15，20，30，40，和60分鐘后，取醇脫氫酶的等分樣品并在don轉(zhuǎn)化測定中測定活性，如實施例3中所述。轉(zhuǎn)化測定包含以下成分：100mm的tris-hcl，ph7.5，1mm的pms，50ppm的don，10nm活化的seqidno.1的醇脫氫酶。如實施例3中所描述的，孵育反應(yīng)和在0，10，20，30，40和60分鐘后進行取樣，以確定活性。針對每個溫度每個孵化時間來確定don還原過程。計算don轉(zhuǎn)化線的線性范圍的斜率以確定溫度穩(wěn)定性。在t＝0分鐘時的don轉(zhuǎn)化線的各溫度的線性范圍的斜率被用作殘余活性計算的參考值。表6示出了以℃計的溫度，以分鐘計的孵育時間，和以百分比計的相關(guān)聯(lián)的殘余活性。當在30℃和37℃的溫度貯存一小時的時候，seqidno.1的醇脫氫酶是最穩(wěn)定的。與此相比，在存儲一小時后醇脫氫酶在40℃仍然有73％的殘余活性。在45℃存儲30分鐘后測量到50％的殘余活性。令人驚奇的是，在50℃存儲5分鐘后，檢測到84％的殘余活性。表6：實施例6：確定ph穩(wěn)定性在ph4.0至ph10.0的范圍內(nèi)確定活化的seqidno.1的醇脫氫酶的ph穩(wěn)定性。為了做到這一點，在30℃的溫度，將十倍濃度的活化的醇脫氫酶(100nm)儲存在10％teorellstenhagen緩沖液ph4.0至ph10.0中至多120分鐘。0，60，和120分鐘后，取出醇脫氫酶的等分樣品并測定在轉(zhuǎn)化測定中的活性，如實施例3中所述，在30℃下用下列組分進行：100mm的tris-hcl，ph7.5，1mm的pms，50ppm的don，10nm的活化的seqidno.1醇脫氫酶。0，10，20，30和40分鐘后進行用于確定活性的取樣。每次針對每個ph值測定don還原過程。為了確定穩(wěn)定，在各個時間針對各ph值計算don轉(zhuǎn)化線的線性范圍的斜率。在t＝0分鐘時各ph值的don轉(zhuǎn)化線的線性范圍的斜率被用作下列孵育時間的活性計算的參考值。表7示出ph值，以分鐘計的ph孵育時間，以及以百分比計的相關(guān)聯(lián)的殘余活性。seqidno.1的醇脫氫酶在60分鐘孵育后在ph5.0至ph9.0是穩(wěn)定的。出人意料的是，醇脫氫酶在酸性環(huán)境中(在ph5.0沒有活性損失)和在重堿性環(huán)境(在ph9.0在120分鐘后孵育中沒有活性損失)中呈現(xiàn)出特別良好的穩(wěn)定性。表7：實施例7：復(fù)合基質(zhì)中don的轉(zhuǎn)化為了確定活化的醇脫氫酶也在沒有外部添加合成的氧化還原輔因子的情況下在復(fù)合基質(zhì)中轉(zhuǎn)化單端孢霉烯類化合物的能力，活化的seqidno.1的醇脫氫酶如實施例3中所述制備，和don轉(zhuǎn)化測定在復(fù)合基質(zhì)中進行。在此處，復(fù)合基質(zhì)尤其被定義為牛的瘤胃液，豬空腸的腸內(nèi)容物，豬的胃液，人類和豬的唾液，顆粒仔豬飼料，和與唾液、瘤胃液或腸內(nèi)容物混合的顆粒仔豬飼料。為了緩沖系統(tǒng)的比較，用tris-hcl進行檢查，如實施例3中所述。使用基于玉米、大豆以及大麥的標準飼料作為仔豬飼料。為了確定在瘤胃液中的醇脫氫酶活性(ph為5.9)，在每種情況下將1ml無菌瘤胃液濾液加至100，200，和300nm的活化的seqidno.1的醇脫氫酶和50ppmdon。對照批次在水溶液中進行測試，如實施例3中所描述。測定轉(zhuǎn)化在30℃在熱塊中孵育最多24小時。0，0.5，1.0，5.0和24.0小時后取樣品，在這種情況下，每次采取0.1ml的樣品，反應(yīng)用0.1毫升甲醇停止。將樣品儲存在-20℃，解凍，并用eppendorf臺式離心機以13000rpm離心10分鐘，并用0.2微米的spartan濾器無菌過濾。針對lc-ms/ms，如實施例3中所述稀釋樣品并且通過lc-ms/ms分析分析。don在t＝0h時的濃度用作以下值的參考值(100％)。表8表明在相對t＝0h時的一定時間測量的don濃度的百分比。針對tris-hcl緩沖液的活性，外部加入的合成的氧化還原輔因子的存在是必要的，因為don的轉(zhuǎn)化緩慢地發(fā)生，并且只有在用300nm的濃度的醇脫氫酶24個小時后是可檢測的。令人驚訝的是，已經(jīng)證實，在沒有加入外部合成的氧化還原輔因子的情況下在5.9的ph值的菌瘤胃液濾液中，don得到轉(zhuǎn)化。這清楚地表明，在瘤胃液中有作為天然氧化還原輔因子的物質(zhì)。用300nm的濃度，在5小時孵育后在制劑中只包含42％的初始don量。24小時孵育后，在采用大于200nm的醇脫氫酶濃度的情況下，只可檢測到低量的don。表8：為了確定在不具有大約3的ph值的醪液的豬胃液中，在ph值為約6的豬腸內(nèi)容物中，和在豬和人的唾液中的醇脫氫酶活性，在每種情況下，300nm的活化的醇脫氫酶seqidno.1，約20ppmdon與1ml胃液(無菌過濾)，1ml糊狀腸內(nèi)容物，或1ml唾液混合。作為陰性的檢查，引入僅含有具有20ppmdon的消化液體的測定，并且作為陽性檢查，使用包含所有組分(包括20mm的合成的氧化還原輔因子pfc(ⅲ))的轉(zhuǎn)化測定。0，3.0，5.0，24.0小時后采取樣品，在這種情況下，每次采取0.1ml的樣品，并將該反應(yīng)用0.1毫升甲醇停止。將樣品貯存在20℃，解凍，并用eppendorf臺式離心機以13000rpm離心10分鐘，并無菌過濾(0.2μm斯巴達(spartan)濾器)。針對lc-ms/ms，在洗脫劑中以1:10稀釋樣品(見實施例3)和如實施例3通過lc-ms/ms進行分析。表9示出了在采樣時測定的各don濃度。出人意料的是，在沒有外部添加合成的氧化還原輔因子(不分品種)的情況下，發(fā)生唾液中don的減少。這清楚地表明，人類和豬的唾液分泌物中有適合作為用于采用醇脫氫酶seqidno.1轉(zhuǎn)化don的天然氧化還原輔因子的物質(zhì)。在不含玉米粥(mush)的純胃液中沒有測量到don濃度大幅度減少。只通過添加合成的氧化還原輔因子，使得don濃度在腸內(nèi)容物中減少。表9：為了確定在仔豬飼料中的醇脫氫酶的活性，100毫克仔豬飼料分別與400μl的100mmtris-hcl緩沖液，ph7.5，400μl豬唾液，400μl無菌豬胃液或400μl的豬腸內(nèi)容物混合。這些仔豬飼料懸浮液在4℃下貯存過夜。在此之后，約20ppmdon，和/或300nm的活化的seqidno.1醇脫氫酶，和/或20mm合成的氧化還原輔因子pfc(ⅲ)加入到所有樣品。無醇脫氫酶和無外部合成的氧化還原輔因子的制劑被用作陰性檢查。具有添加的醇脫氫酶的和合成的氧化還原輔因子的制劑被用作陽性檢查。0，3.0，5.0，24.0小時后取樣品。每次使用一份全部樣品。對于樣品，加入500μl的甲醇，隨后是以300rpm在搖床上30分鐘均質(zhì)化。在此之后，將樣品離心15分鐘(eppendorf臺式離心機，13,000rpm)并且將上清液通過0.2μm的spartan濾器用注射器過濾。將上清液貯存于-20℃，解凍，并在洗脫液中以1:10稀釋用于lc-ms/ms，并如實施例3中所述的通過lc-ms/ms進行分析。表10示出了存在于各時刻的樣品中的don濃度。在仔豬飼料緩沖液混合物中，存在可以假設(shè)具有外部加入合成的氧化還原輔因子的作用的物質(zhì)，因為在沒有外部合成的氧化還原輔因子的情況下don濃度持續(xù)減小。這些物質(zhì)來自仔豬飼料，因為如之前所示，在沒有外部合成的氧化還原輔因子的情況下，在緩沖液中無法測量到don轉(zhuǎn)化。在外部合成的氧化還原輔因子的存在下，don在仔豬飼料緩沖混合物中的轉(zhuǎn)化相對地發(fā)生得更快。在仔豬飼料和唾液的混合物中，醇脫氫酶也顯示出獨立于外部合成的氧化還原輔因子的存在的活性；而更快的don的減少發(fā)生在包含外部合成的氧化還原輔因子的轉(zhuǎn)化測定中。令人驚奇的是，在沒有添加外部合成氧化還原輔酶的情況下，seqidno.1的醇脫氫酶在仔豬飼料混合物中也具有活性。一方面，通過將仔豬飼料加入胃液，胃液的ph提高，而在另一方面，可以取代外部合成的氧化還原輔因子的天然存在的氧化還原輔因子從仔豬飼料釋放。只有當外部合成的氧化還原輔因子加入到轉(zhuǎn)化測定中時，確定腸內(nèi)容物中醇脫氫酶的活性。表10：當前第1頁12