本發(fā)明涉及4,5-二取代咪唑類化合物、其藥物組合物及其制備方法和用途，該類化合物可作為黃嘌呤氧化酶(Xanthineoxidase,XO)抑制劑，用于治療由尿酸結(jié)晶在關(guān)節(jié)處的沉積導(dǎo)致的痛風(fēng)及其并發(fā)癥。本發(fā)明還涉及所述化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽及包含其的藥物組合物，以及所述化合物在制備XO抑制劑中的用途，和制備用于治療痛風(fēng)及其并發(fā)癥等相關(guān)疾病的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：痛風(fēng)癥(Gout)是僅次于糖尿病之后的第二大代謝疾病，是由體內(nèi)嘌呤代謝紊亂導(dǎo)致尿酸生成過(guò)多，尿酸鹽的結(jié)晶在體內(nèi)沉積引起組織損傷的臨床綜合征，主要表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作性關(guān)節(jié)紅、腫、熱、痛與功能障礙，甚至?xí)?dǎo)致關(guān)節(jié)畸形、腎石病及尿酸性腎病。流行病學(xué)資料顯示，隨著人們生活水平的提高和生活節(jié)奏的加快，痛風(fēng)的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈逐年上升趨勢(shì)。目前我國(guó)痛風(fēng)的發(fā)病率已高于世界平均水平，這種疾病己被聯(lián)合國(guó)列為21世紀(jì)二十大頑癥之一。痛風(fēng)可以導(dǎo)致諸多并發(fā)癥，歐美地區(qū)以合并缺血性心臟病最多，其次是腦血管疾病、尿毒癥、惡性腫瘤等。但在亞洲地區(qū)，日本卻以尿毒癥為首，其次才是缺血性心臟病、惡性腫瘤及腦血管疾病。無(wú)論是何種并發(fā)癥，這些研究統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)都值得我們重視。因此開(kāi)發(fā)高效的抗痛風(fēng)藥物具有很重要的研究?jī)r(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義。截至目前，只有兩種黃嘌呤氧化酶抑制劑(XOI)被FDA批準(zhǔn)作為抗通風(fēng)藥物。其中之一為由GlaxoSmithkine公司于1967年上市的別嘌呤醇，其IC50值為4.2μM。別嘌呤醇是次黃嘌呤的類似物，是黃嘌呤氧化酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，主要用于腎功能不全的病人。雖然己經(jīng)使用了半個(gè)世紀(jì)，但其具有如發(fā)熱、過(guò)敏性皮疹、腹痛、腹瀉、白細(xì)胞及血小板減少，甚而有肝功能損害等無(wú)法忽視的不良反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)別嘌呤醇的代謝產(chǎn)物奧昔嘌呤也具有抑制黃嘌呤氧化酶的活性，但別嘌呤醇的毒副作用也是由于其代謝產(chǎn)物奧西嘌呤所致。由于此類藥物可以從根本上減少尿酸的生成，起到治療痛風(fēng)的作用，因此人們很重視這類藥物的開(kāi)發(fā)。隨著對(duì)黃嘌呤氧化酶靶點(diǎn)研究的深入，以及計(jì)算機(jī)輔助分析的不斷開(kāi)發(fā)，人們將黃嘌呤氧化酶的晶體結(jié)構(gòu)完全解析，這為研究此類藥物奠定了必要的基礎(chǔ)。帝人(Teijin)公司于2009年開(kāi)發(fā)上市的非布索坦(Febuxostat,TMX-67,TEI-6720)是一種新結(jié)構(gòu)的XOI，具有極好的治療痛風(fēng)效果。但其引起肝功能異常、頭痛等副作用是無(wú)法被忽視的，因此研究開(kāi)發(fā)新型低毒高效的非嘌呤類XOI具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明人進(jìn)行了廣泛而深入的研究，最終完成了本發(fā)明。本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種4,5-二取代咪唑類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明另一方面的目的是提供本發(fā)明所述的4,5-二取代咪唑類化合物的制備方法。本發(fā)明又一方面的目的是提供一種藥物組合物，其包含本發(fā)明所述的4,5-二取代咪唑類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。所述藥物組合物用于制備抑制XO活性的藥物(XO抑制劑)，用于制備治療高尿酸血癥、痛風(fēng)，尤其是由尿酸結(jié)晶在關(guān)節(jié)處的沉積導(dǎo)致的痛風(fēng)及其并發(fā)癥的藥物。本發(fā)明又一方面的目的是提供本發(fā)明所述的4,5-二取代咪唑類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者包含其的藥物組合物在制備用于抑制XO活性的藥物中的用途，在制備治療高尿酸血癥，痛風(fēng)，尤其是由尿酸結(jié)晶在關(guān)節(jié)處的沉積導(dǎo)致的痛風(fēng)及其并發(fā)癥的藥物中的用途。本發(fā)明又一方面的目的是提供抑制XO活性的方法，治療高尿酸血癥、痛風(fēng)，尤其是由尿酸結(jié)晶在關(guān)節(jié)處的沉積導(dǎo)致的痛風(fēng)及其并發(fā)癥的方法，所述方法包括給具有需要的對(duì)象服用有效量的上述化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者服用包含上述化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：本發(fā)明一方面提供一種4,5-二取代咪唑類化合物、或藥學(xué)上可接受的鹽，其具有如下通式I所示的結(jié)構(gòu)：在通式I中，R1選自羥基和-NR6R7；R2和R3各自獨(dú)立地選自氫、鹵素、腈基(-CN)、硝基(-NO2)、羥基、氨基(-NH2)、取代或未取代的C1-C6直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的C1-C6直鏈或支鏈烷氧基、取代或未取代的3至7元非芳香性碳環(huán)或雜環(huán)基、取代或未取代的5至7元雜芳基和取代或未 取代的C6-C10芳基，其中，所述取代基可以各自獨(dú)立地選自鹵素、腈基(-CN)、硝基(-NO2)、羥基、氨基(-NH2)、C1-C6直鏈或支鏈烷基以及C1-C6直鏈或支鏈烷氧基；優(yōu)選地，R2和R3各自獨(dú)立地選自氫、鹵素、-CN、-NO2、羥基、氨基、C1-C6直鏈或支鏈烷氧基、C1-C6直鏈或支鏈烷基或者取代或未取代的含有1-2個(gè)N原子的4元至7元非芳香性雜環(huán)基；其中，所述取代基為C1-C4直鏈或支鏈烷基；進(jìn)一步優(yōu)選地，R2和R3各自獨(dú)立地選自氫、鹵素、-CN、-NO2、C1-C6直鏈或支鏈烷氧基或者取代或未取代的環(huán)上含有1個(gè)N原子的5元至6元飽和雜環(huán)基；其中，所述取代基為甲基或乙基；最優(yōu)選地，R2和R3各自獨(dú)立地選自氫、鹵素、-CN、-NO2、甲氧基、異丁氧基、哌啶-1-基、4-甲基哌啶-1-基；或者R2與R3彼此相鄰并與其相連接的苯環(huán)上的碳共同形成3至7元非芳香性碳環(huán)或雜環(huán)，優(yōu)選形成環(huán)上含有一個(gè)氮原子的3至7元非芳香性雜環(huán)，優(yōu)選地，R2與R3相互連接并與其相鄰的苯環(huán)共同形成吲哚(苯并吡咯)基；R4和R5各自獨(dú)立地選自氫和C1-C6直鏈或支鏈烷基；優(yōu)選地，R4和R5各自獨(dú)立地選自氫和C1-C4直鏈或支鏈烷基；最優(yōu)選地，R4和R5各自獨(dú)立地選自氫、甲基或者丙基，R6和R7各自獨(dú)立地選自氫、氨基、C3至C7環(huán)烷基、羥基和C1-C6直鏈或支鏈烷基，優(yōu)選各自獨(dú)立地選自氫、氨基、C3至C5環(huán)烷基、羥基、C1-C4直鏈或支鏈烷基。優(yōu)選地，所述4,5-二取代咪唑類化合物具有如下通式之一所示的結(jié)構(gòu)：其中，R1、R2、R3、R4、R5和R6的定義與通式I中相同。在本發(fā)明中，除非另有具體說(shuō)明外，對(duì)于取代基的含義做出如下定義：所述鹵素原子指的是F、Cl、Br或I。所述C1-C6直鏈或支鏈烷基指的是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，其具體的實(shí)例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基，1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、異戊基、1-乙基丙基、新戊基、正己基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、異己基、1,1-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、已基等；術(shù)語(yǔ)“C1-C4直鏈或支鏈烷基”具有類似的含義。所述C1-C6直鏈或支鏈烷氧基指的是具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，其具體的實(shí)例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、異戊氧基、新戊氧基、正己氧基、異己氧基、3-甲基戊氧基等，術(shù)語(yǔ)“C1-C4直鏈或支鏈烷氧基”具有類似的含義。所述C3-C7環(huán)烷基指的是環(huán)上具有3至7個(gè)碳原子的脂肪族碳環(huán)基，其具體的實(shí)例包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基等。所述C6-C10芳基指的是環(huán)上具有6至10個(gè)碳原子的芳香性碳環(huán)基，其具體的實(shí)例包括苯基、萘基等。所述3至7元非芳香性碳環(huán)指的是在環(huán)上具有3至7個(gè)原子的不具有芳香性的碳環(huán)，例如上述的C3-C7環(huán)烷基，以及C3-C7環(huán)烯基等。所述3至7元非芳香性雜環(huán)基指的是在環(huán)上具有3至7個(gè)原子且包含至少一個(gè)選自N、O、S中的雜原子的不具有芳香性的環(huán)基，例如環(huán)氧乙烷基、氮雜環(huán)丙烷基、氮雜環(huán)丁烷基、氮雜環(huán)戊烷基、哌啶基、高哌啶基等。所述環(huán)上含有1個(gè)N原子的5元至6元飽和雜環(huán)基指的是氮雜環(huán)戊烷基或哌啶基。所述5至7元雜芳基指的是在環(huán)上具有5至7個(gè)原子且包含至少一個(gè)選自N、O、S中的雜原子的芳香性環(huán)基，例如噻吩基、噻唑基、吡唑基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基等。所述藥學(xué)上可接受的鹽，例如可以是堿金屬鹽(例如，鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銫鹽等)；堿土金屬鹽(例如鈣鹽、鎂鹽、鍶鹽等)等；銨鹽；與有機(jī)堿所成的鹽，例如與三(低級(jí))烷基胺(例如三甲胺、三乙胺、N-乙基二異丙胺等)、吡啶、喹啉、哌啶、咪唑、甲基吡啶、二甲氨基吡啶、二甲基苯胺、N-(低級(jí))烷基嗎啉(例如N-甲基嗎啉等)、1,5-二氮雜雙環(huán)[4.3.0]壬烯-5(DBN)、1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳烯-7(DBU)、1,4-二氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷(DABCO)等所成的鹽；無(wú)機(jī)酸鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、碳酸鹽等；有機(jī)酸鹽，例如甲酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、馬來(lái)酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、檸檬酸鹽、枸櫞酸鹽、酒石酸鹽、碳酸鹽、苦味酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、谷氨酸鹽、雙羥萘酸鹽等。本發(fā)明的化合物在實(shí)踐中可以是具有相同或類似活性的其藥學(xué)上可接受的溶劑合物和異構(gòu)體的形式，所述溶劑合物例如可以是水合物、乙醇合物等，優(yōu)選的溶劑合物為水合物。所述異構(gòu)體包括幾何異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體等。最優(yōu)選地，所述通式I所示4,5-二取代咪唑類化合物選自下述化合物：本發(fā)明另一方面提供一種上述通式I所示4,5-二取代咪唑類化合物的制備方法，該方法為以下反應(yīng)路線之一：反應(yīng)路線一：其中，R8為C1-C6烷基、芐基或?qū)籽趸S基、苯基或六氟苯基；R1為-NR6R7，以及R4為C1-C6直鏈或支鏈烷基，R2、R3、R5、R6、R7的定義與前述定義相同。步驟a)：在溶劑中以咪唑4,5-二羧酸為原料與氯代試劑經(jīng)過(guò)酰氯化反應(yīng)得到化合物II；步驟b)：在溶劑中化合物II與R8-OH經(jīng)過(guò)酯化反應(yīng)得到化合物III；步驟c)：在溶劑中將化合物III與經(jīng)過(guò)氨解得到化合物IV；步驟d)：在水解催化劑的存在下，化合物IV經(jīng)過(guò)水解后得到化合物V；步驟e)：化合物V經(jīng)過(guò)烷基化反應(yīng)得到化合物VI；步驟f)：化合物VI與胺經(jīng)過(guò)酰胺化反應(yīng)得到通式I所示的化合物；反應(yīng)路線二：其中，R4為C1-C6直鏈或支鏈烷基，其它取代基的定義與前述定義相同；步驟a)與前述步驟a)相同；步驟h)：在溶劑中，化合物II與經(jīng)過(guò)胺解反應(yīng)得到化合物VII；步驟i)：在水解催化劑的存在下，化合物VII經(jīng)過(guò)水解反應(yīng)得到化合物VIII；或者步驟j)：在溶劑中，化合物VII與HNR6R7經(jīng)過(guò)氨解反應(yīng)得到化合物VIII；步驟k)：化合物VIII與烷基鹵代烴發(fā)生烷基化反應(yīng)得到通式I所示的化合物。在步驟a)至步驟k)中的反應(yīng)條件為能夠發(fā)生反應(yīng)的常規(guī)條件，其通常為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知。優(yōu)選地，所述反應(yīng)條件為：在步驟a)中，所述酰氯化反應(yīng)在0℃到室溫下進(jìn)行，所述氯代試劑為二氯亞砜、草酰氯或者三氯氧磷；所述溶劑為二氯甲烷、四氫呋喃、苯或者甲苯；在步驟b)中，所述酯化反應(yīng)在0℃到室溫下進(jìn)行，所述溶劑為二氯甲烷或四氫呋喃；在步驟c)中，所述氨解反應(yīng)在室溫到100℃條件下進(jìn)行，所述溶劑為二氯甲烷、四氫呋喃、乙腈、二氧六環(huán)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、苯或者甲苯；在步驟d)中，所述水解反應(yīng)在室溫到100℃條件下進(jìn)行，所述水解催化劑為氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氯化氫溶液或硫酸溶液；在步驟e)中，所述烷基化反應(yīng)是在0℃到室溫下進(jìn)行，所述溶劑為二氯甲烷、四氫呋喃或DMF；在步驟f)中，所述酰胺化反應(yīng)是在0℃到室溫下進(jìn)行，所述溶劑為二氯甲烷、四氫呋喃或DMF；在步驟h)中，所述酰胺化反應(yīng)在0℃到室溫下進(jìn)行，所述溶劑為二氯甲烷、四氫呋喃、乙腈、二氧六環(huán)、N-甲基甲酰胺、苯或者甲苯；在步驟i)中，所述水解催化劑為氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氯化氫溶液或者硫酸溶液；在步驟j)中，所述氨解反應(yīng)在室溫到160℃條件下進(jìn)行，所述溶劑為二氯甲烷、四氫呋喃、乙腈、二氧六環(huán)、N-甲基甲酰胺、苯、甲苯或者N-甲基吡咯烷酮；在步驟k)中，所述的烷基化反應(yīng)是在0℃到室溫下進(jìn)行，所述溶劑為二氯甲烷、四氫呋喃或DMF。本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其包含通式I所示化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽。優(yōu)選地，所述藥物組合物還可以進(jìn)一步包含輔料，所述輔料可以為例如著色劑、防腐劑、香料、香味劑、甜味劑等。本發(fā)明還提供通式I所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于制備治療高尿酸血癥，痛風(fēng)，尤其是由尿酸結(jié)晶在關(guān)節(jié)處的沉積導(dǎo)致的痛風(fēng)及其并發(fā)癥的藥物。本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其用于制備治療高尿酸血癥，痛風(fēng)，尤其是由尿酸結(jié)晶在關(guān)節(jié)處的沉積導(dǎo)致的痛風(fēng)及其并發(fā)癥的藥物，其中，所述藥物組合物包含通式I所示化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽。優(yōu)選地，所述藥物組合物還可以進(jìn)一步包含輔料，所述輔料例如可以為著色劑、防腐劑、香料、香味劑、甜味劑等。本發(fā)明另一方面還提供通式I所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽及其藥物組合物在制備藥物中的用途，在制備用于抑制XO活性的藥物(XO抑制劑)中的用途，在制備治療高尿酸血癥、痛風(fēng)的藥物中的用途，尤其是在制備治療由尿酸結(jié)晶在關(guān)節(jié)處的沉積導(dǎo)致的痛風(fēng)及其并發(fā)癥的藥物中的用途，所述并發(fā)癥為例如合并缺血性心臟病，腦血管疾病、尿毒癥或惡性腫瘤。本發(fā)明又一方面還提供通式I所示化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽及其藥物組合物在抑制XO活性中的用途，以及在治療高尿酸血癥，痛風(fēng)，尤其是由尿酸結(jié)晶在關(guān)節(jié)處的沉積導(dǎo)致的痛風(fēng)及其并發(fā)癥中的用途。本發(fā)明又一方面還提供一種抑制XO活性的方法，以及治療高尿酸血癥，痛風(fēng)，尤其是由尿酸結(jié)晶在關(guān)節(jié)處的沉積導(dǎo)致的痛風(fēng)及其并發(fā)癥的方法，其中，所述方法包含向具有該需要的對(duì)象施用通式I所示化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽，或其藥物組合物。本發(fā)明有如下有益效果：通過(guò)對(duì)激酶活性篩選，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)：上述通式I表示的化合物中，本發(fā)明化合物的XO抑制活性在100nM以下，最好的化合物達(dá)到5.5nM；ATP競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)顯示上述通式I表示的化合物為混合型抑制劑。因此，通式I表示的化合物是有效的XO抑制劑。附圖說(shuō)明圖為化合物S6的米-門二氏方程式的雙倒數(shù)曲線圖(lineweaver～BurkPlot)。具體實(shí)施方式下面結(jié)合制備實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但不試圖限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。質(zhì)譜EI-MS使用FinniganMAT-95型質(zhì)譜儀，ESI-MS使用FinniganLCQDeca型質(zhì)譜儀測(cè)定。質(zhì)譜EI-MS采用高分辨質(zhì)譜由FinniganMAT儀器測(cè)定。1H-NMR光譜數(shù)據(jù)測(cè)量使用VarianMercury-300MHz或者VarianMercury-400MHz核磁共振儀，以四甲基硅烷(tetramethylsilane，TMS)為內(nèi)標(biāo)。所有溶劑均為分析純?cè)噭┐蟛糠謥?lái)自于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，其他試劑一般均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司、百靈威、韶遠(yuǎn)、Acros、畢得等試劑公司，除非特別提及，這些試劑都未經(jīng)處理直接使用。無(wú)水溶劑純化參照PurificationoflaboratoryChemicals,D.D.PerrinandW.L.F.Armarego,PergamonPress:Oxford,1980。除說(shuō)明外，所有反應(yīng)都通過(guò)薄層色譜法跟蹤監(jiān)測(cè)。使用的薄層層析硅膠板型號(hào)為HSGF254，來(lái)自山東青島海洋化工廠。常用后處理步驟是先將特定有機(jī)溶劑加入到反應(yīng)體系之中，然后用水稀釋，反復(fù)萃取3次，將合并的有機(jī)相用飽和食鹽水或飽和氯化銨溶液進(jìn)行洗滌，收集有機(jī)相并用無(wú)水Na2SO4干燥，然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去有機(jī)溶劑得到反應(yīng)粗產(chǎn)品，粗產(chǎn)品通過(guò)快速柱層析方法所(使用的正相柱層析硅膠，型號(hào)為：zcx-11，200-300)或者用特定的溶劑進(jìn)行重結(jié)晶或者洗滌得到純品。制備實(shí)施例實(shí)施例14-((3,4-二氯苯基)氨基甲?；?-1H-咪唑-5-羧酸(S1)5,10-二氧代-5,10-二氫咪唑[1,5-a:1',5'-d]吡嗪-1,6-二酰氯(1)取100mL圓底燒瓶，依次加入1-氫咪唑-4,5-二羧酸(600mg,1eq,3.84mmol)，氯化亞砜(1.81mL,6.5eq,24.98mmol)，超干二甲基甲酰胺(DMF)(0.15mL,0.5eq,1.92mmol)和5mL甲苯，90℃下回流16h。反應(yīng)結(jié)束后，冷卻，用吸管將反應(yīng)液中過(guò)多的甲苯、二氯亞砜及DMF吸出，甲苯洗滌兩次得粗品(化合物1)，不經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步反應(yīng)。5,10-二氧代-5,10-二氫咪唑[1,5-a:1',5'-d]吡嗪-1,6-二羧酸二苯酯(2)將化合物1懸浮于50mL二氯甲烷中，密封反應(yīng)，冰鹽浴下攪拌15min后，加入超干吡啶(1.55mL,5eq,19.17mmol)后緩慢滴加苯酚(360mg,1eq,3.84mmol)的四氫呋喃(THF)溶液，反應(yīng)45min，停止反應(yīng)，過(guò)濾抽干，加大量飽和碳酸氫鈉沖洗，加大量水沖洗，加大量二氯甲烷(DCM)沖洗抽干，得淡黃色固體(化合物2)680mg，產(chǎn)率83％。1HNMR(300Hz,DMSO)δ9.12(s,2H),7.52-7.56(m,4H),7.34-7.40(m,6H)；ESI-MS:429[M+1]+.4-((3,4-二氯苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S1)取10mL小微波管，依次加入化合物2(60mg，0.14mmol，1eq)、3,4-二氯苯胺(30mg，0.28mmol，2eq)、DMF3mL，于100℃下反應(yīng)7h，待其冷卻后，用50mL乙酸乙酯稀釋，分別用30mL飽和氯化銨溶液洗2次、30mL飽和氯化鈉溶液洗1次，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮。二氯甲烷(DCM)/石油醚(PE)重結(jié)晶，所得淡黃色固體(化合物3)不經(jīng)進(jìn)一步純化直接投入下一步反應(yīng)。將上述所得化合物3懸浮于3mL的THF中，再加入3mL2N的氫氧化鈉溶液室溫?cái)嚢璺磻?yīng)18h，待反應(yīng)完全后，加2N的鹽酸中和至pH為2左右，靜置，固體逐漸析出，過(guò)濾，抽干，得白色固體(化合物S1),兩步產(chǎn)率43％。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ11.85–11.40(s,1H),8.28(s,1H),8.13(s,1H),7.76(d,J＝9.8Hz,1H),7.67(d,J＝8.7Hz,1H).ESI-MS:301.4[M+H]+。實(shí)施例24-((4-異丁氧基苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S2)4-異丁氧基苯胺(4)取一25mL圓底燒瓶，依次加入對(duì)羥基苯胺(478mg，4.38mmol，1.2eq)、DMF5mL、四丁基碘化銨(TBAI)(124mg，0.365mmol，0.1eq)、異丁基溴(397μL，3.65mmol，1eq)、N,N-二異丙基乙胺(DIEA)(1.21mL，7.3mmol，2eq)，抽真空再充N2循環(huán)3次，充N2時(shí)間不少于5min，隨后在N2保護(hù)下于60℃下反應(yīng)12h。反應(yīng)完全后，撤走油浴，待其冷卻后，旋干DMF，100mL乙酸乙酯溶解，先后用飽和碳酸鈉溶液洗兩次、飽和食鹽水洗一次，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮。硅膠柱層析(石油醚(PE):乙酸乙酯(EA)＝8：1)進(jìn)一步純化得純白固體(化合物4)563mg，產(chǎn)率78％。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ6.68(d,J＝8.6Hz,2H),6.51(d,J＝8.6Hz,2H),1.84(td,J＝13.3,6.7Hz,1H),1.00–0.88(m,6H).4-((4-異丁氧基苯基)氨基甲?；?-1H-咪唑-5-羧酸(S2)將化合物1懸浮于50mL二氯甲烷中，密封反應(yīng)，冰鹽浴下攪拌15min后，加入超干吡啶(0.8mL,5eq,9.60mmol)后緩慢滴加化合物4(634mg,1eq,3.84mmol)的THF溶液，反應(yīng)45min，停止反應(yīng)，過(guò)濾抽干，加大量飽和碳酸氫鈉沖洗，加大量水沖洗，加大量DCM沖洗抽干，得土黃色固體(化合物5)。取一50mL圓底燒瓶，依次加入化合物576mg，THF3mL，2N的氫氧化鈉溶液3mL，反應(yīng)結(jié)束(4h)后滴加2N的鹽酸中和至pH為2左右，此時(shí)有大量固體析出，靜置待盡可 能多的固體吸出后，過(guò)濾得土黃色固體(化合物S2)。1HNMR(300MHz,DMSO):δ9.52(s,1H),7.62(s,1H),6.92(d,J＝8.6Hz,2H),6.57(d,J＝8.6Hz,2H),3.60(d,J＝7.4Hz,2H),1.79–1.65(m,1H),0.91(d,J＝6.6Hz,6H).實(shí)施例35-((3-氟-4-甲氧基苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-4-羧酸(S3)取10mL小微波管，依次加入(0.213mmol)3-氟-4-甲氧基苯胺和(80mg,0.194mmol)化合物2及3.0mLDMF，微波下于140℃下反應(yīng)2h，冷卻，減壓蒸去大部分DMF。濃縮物加入2N的H2O/THF(v:v＝2:1)皂化完成后加入稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值，即析出白色固體，過(guò)濾干燥得產(chǎn)物(化合物S3)，兩步產(chǎn)率為53％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.22(s,1H),7.73(dd,J＝13.5,2.3Hz,1H),7.54(d,J＝8.3Hz,1H),7.21(t,J＝9.3Hz,1H),3.85(s,3H).ESI-MSm/z:277.98(M-),HR-ESIMSC11H9N3O3(M-):計(jì)算值：278.0582,實(shí)測(cè)值:278.0577.實(shí)施例44-((4-氯-3-氰基苯基)氨基甲?；?-1H-咪唑-5-羧酸(S4)除了使用5-氨基-2-氯苯甲氰代替化合物4以外，以與實(shí)施例2合成化合物S2相同的步驟合成化合物S4，為白色固體21mg,產(chǎn)率為57％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.35(d,J＝2.4Hz,1H),8.29(s,1H),8.06(s,1H),7.80(d,J＝8.9Hz,1H).ESI-MSm/z:277.98(M-),HR-ESIMSC12H6N4O3Cl(M-):計(jì)算值：289.0132,實(shí)測(cè)值:289.0128.實(shí)施例54-((3-氰基-4-甲氧基苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S5)2-甲氧基-5-硝基苯甲氰(6)取100mL圓底燒瓶，依次加入4-氯-3-氰基硝基苯(600mg,1eq，3.29mmol)，DMF5mL，用橡膠塞密封燒瓶，冰水浴下攪拌，抽真空充氮?dú)庋h(huán)3次，攪拌10min后，將甲醇鈉的DMF溶液通過(guò)注射器緩慢注入密封的反應(yīng)瓶中，反應(yīng)1h后，待反應(yīng)完全后，停止反應(yīng)，加入100mL乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨水溶液洗滌1次，飽和氯化鈉水溶液洗 滌1次，水相再次用乙酸乙酯，合并有機(jī)相，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥30min，過(guò)濾，濃縮后硅膠柱層析(PE:EA＝5:1)分離得到440mg產(chǎn)物，為白色結(jié)晶固體(化合物6)，收率75％。1HNMR(400MHz,MeOD)δ8.59(d,J＝2.8Hz,1H),8.51(dd,J＝9.4,2.8Hz,1H),7.38(d,J＝9.4Hz,1H),4.37(q,J＝7.0Hz,3).5-氨基-2-甲氧基苯甲氰(7)取100mL圓底燒瓶，依次加入化合物2-甲氧基-5硝基苯甲氰(1eq，220mg，1.23mmol),甲醇20mL,鈀碳22mg(質(zhì)量的10％)，瓶口接上三通，室溫?cái)嚢?，抽真空再充H2循環(huán)3次，充H2時(shí)間不少于5min，隨后在H2保護(hù)下室溫反應(yīng)30min，點(diǎn)半待反應(yīng)完全后，過(guò)濾鈀碳，濃縮，柱層析(PE:EA＝5:1)分離得到150mg產(chǎn)物，為白色結(jié)晶固體(化合物7)，收率82％。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ8.58–8.56(m,1H),8.53–8.48(m,1H),7.39(d,J＝9.4Hz,1H),4.09–4.08(m,1H).4-((3-氰基-4-甲氧基苯基)氨基甲?；?-1H-咪唑-5-羧酸(S5)除了使用5-氨基-2-甲氧基苯甲氰(化合物7)代替化合物4以外，以與實(shí)施例2合成化合物S2相同的步驟合成化合物S5，為純白色固體45mg，產(chǎn)率56％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ11.50–10.97(m,2H),8.22(s,1H),8.11(d,J＝2.5Hz,1H),8.00(s,1H),7.32(d,J＝9.3Hz,1H),3.94(s,3H).ESI-MSm/z:284.9(M-),HR-ESIMSC11H9N4O4(M-):計(jì)算值：285.0620,實(shí)測(cè)值:285.0624.實(shí)施例64-((3-氰基-4-異丁氧基苯基)氨基甲?；?-1H-咪唑-5-羧酸(S6)異丁醇鈉取25mL圓底燒瓶，依次加入異丁醇(2g,2eq)和1mLDMF，冰鹽浴條件下攪拌10min，取另一25mL圓底燒瓶，加入氫化鈉(1.09g,4eq)、10mLDMF(無(wú)水)溶解氫化鈉，將氫化鈉的DMF溶液緩慢滴入異丁醇的DMF溶液中，冰浴反應(yīng)30min，生成異丁 醇鈉。2-異丁氧基-5-硝基苯甲氰(8)取100mL圓底燒瓶，依次加入3-硝基-6-氯-苯甲氰(834mg,1eq)，5mLDMF(無(wú)水)，用橡膠塞密封燒瓶，冰水浴下攪拌，抽真空充氮?dú)庋h(huán)3次，攪拌10min后，將將上述反應(yīng)得到的異丁醇鈉的DMF溶液通過(guò)注射器緩慢注入密封的反應(yīng)瓶中，待反應(yīng)完全后，停止反應(yīng)，加入100mL乙酸乙酯稀釋，飽和氯化銨水溶液洗滌2次，飽和氯化鈉水溶液洗滌1次，無(wú)水硫酸鈉攪拌干燥30min，過(guò)濾濃縮后柱層析(PE:EA＝15:1)分離得到697mg化合物8，為橘黃色固體，產(chǎn)率65％。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ8.56(d,J＝2.8Hz,1H),8.50–8.45(m,1H),7.35(d,J＝9.4Hz,1H),4.07–4.04(m,2H),2.25–2.11(m,1H),1.13–1.05(m,6).5-氨基-2-異丁氧基苯甲氰(9)取250mL圓底燒瓶，依次加入NiCl.6H2O(2eq，1424mg)、甲醇20mL，將其置于-200C低溫反應(yīng)器中攪拌，攪拌10min后，將化合物8(697mg,1eq)的THF(3mL)溶液緩慢滴入反應(yīng)體系，滴完后，在緩慢加入硼氫化鈉(228mg,2eq)直至反應(yīng)體系變黑，變黑后繼續(xù)反應(yīng)5min，TLC監(jiān)控反應(yīng)，待原料消失后停止反應(yīng)。后處理時(shí)加入100mL乙酸乙酯(EA)和100mL飽和氯化銨水溶液，快速攪拌直至體系中EA層變黃，水層變綠，萃取后再用飽和氯化鈉洗一次，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾濃縮，得化合物9，為淡黃色固體，產(chǎn)率100％。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ6.93(d,J＝2.4Hz,1H),6.91(s,1H),6.89(dd,J＝2.6,0.9Hz,1),3.78–3.75(m,2),2.13–1.98(m,1),1.05–1.02(m,6).4-((3-氰基-4-異丁氧基苯基)氨基甲?；?-1H-咪唑-5-羧酸(S6)除了使用5-氨基-2-異丁氧基苯甲氰(化合物9)代替化合物4以外，以與實(shí)施例2合成化合物S2相同的步驟合成化合物S6，為純白色固體(化合物S6)21mg,產(chǎn)率56％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ11.35–10.94(m,1H),8.20(s,1H),8.10(d,J＝2.6Hz,1H),7.97(s,1H),7.32(d,J＝9.1Hz,1H),3.95(d,J＝6.4Hz,2H),2.07(d,J＝6.6Hz,1H),1.03(d,J＝6.7Hz,6).ESI-MSm/z:327.0(M-),HR-ESIMSC16H15N4O4(M-):計(jì)算值：327.1100,實(shí)測(cè)值:327.1093.實(shí)施例75-((4-氯苯基)氨基甲?；?-1H-咪唑-4-羧酸(S7)除了使用對(duì)氯苯胺代替化合物4以外，以與實(shí)施例2合成化合物S2相同的步驟合成化合物S7，為深灰色固體(化合物S7)28mg，兩步產(chǎn)率38％.1HNMR(300MHz,DMSO)δ12.00–11.47(m,1H),8.26(s,1H),7.85–7.76(m,2H),7.48(dd,J＝6.8,2.1Hz,2H).13CNMR(126MHz,DMSO)δ139.10,137.59,130.15,124.30.ESI-MSm/z:264.0(M-),HR-ESIMSC11H7N3O3(M-)：計(jì)算值：264.0181,實(shí)測(cè)值:264.0176.實(shí)施例84-((4-氰基苯基)氨基甲?；?-1H-咪唑-5-羧酸(S8)除了使用對(duì)氰基苯胺代替化合物4以外，以與實(shí)施例2合成化合物S2相同的步驟合成化合物S8。為深灰色固體，兩步產(chǎn)率26％.1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.28(s,1H),7.96(s,2H),7.88(d,J＝8.8Hz,2H).ESI-MSm/z:255.0(M-),HR-ESIMSC7H7N4O3(M-):計(jì)算值：255.0513,實(shí)測(cè)值:255.0518.實(shí)施例94-((3-氰基-4-(哌啶-1-基)苯基)氨基甲?；?-1H-咪唑-5-羧酸(S9)5-硝基-2-(哌啶-1-基)苯甲氰(10)取50mL圓底燒瓶，依次加入2-氯-5-硝基苯甲氰(2g,1eq,10.96mmol),碳酸鉀(4.54g,3eq,32.87mmol)，哌啶(1.63mL,1.5eq,16.43mmol)和DMF5mL，于90℃油浴加熱反應(yīng)3h，待反應(yīng)完全后，撤走油浴。旋干DMF，用100mLEA稀釋，分別用飽和氯化銨、氯化鈉洗滌，水相再次用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相并用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾濃縮，得黃色固體(化合物10)2.528g,產(chǎn)率99％。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ8.41–8.35(m,1H),8.22(ddd,J＝9.4,3.3,1.7Hz,1H),7.16–7.10(m,1H),3.49(d,J＝5.4Hz,4H),1.82–1.69(m,6H).5-氨基-2-(哌啶-1-基)苯甲氰(11)化合物5-硝基-2-(哌啶-1-基)苯甲氰經(jīng)NaBH4還原反應(yīng)30min，后處理得黃色固體(化 合物11)2.0g，產(chǎn)率92％。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ6.99–6.85(m,3H),2.94(dd,J＝7.3,3.0Hz,4H),1.72(dd,J＝9.9,4.9Hz,4H),1.60–1.48(m,2H).4-((3-氰基-4-(哌啶-1-基)苯基)氨基甲?；?-1H-咪唑-5-羧酸(S9)除了使用5-氨基-2-(哌啶-1-基)苯甲氰(化合物11)代替化合物4以外，以與實(shí)施例2合成化合物S2相同的步驟合成化合物S9，為紅色固體45mg,產(chǎn)率60％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ11.29–11.05(m,1H),8.21(s,1H),8.08(d,J＝2.5Hz,1H),7.93(s,1H),7.21(d,J＝9.0Hz,1H),3.10(d,J＝5.2Hz,4H),1.70(s,4H),1.56(s,2H).ESI-MSm/z:338.0(M-),HR-ESIMSC17H16N5O3(M-):計(jì)算值：338.1255,實(shí)測(cè)值:338.1253.實(shí)施例104-((3-氰基-4-(4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基甲?；?-1H-咪唑-5-羧酸(S10)5-氨基-2-(4-甲基哌啶-1-基)苯甲氰(13)除了使用4-甲基哌啶代替哌啶以外，以與合成化合物11相同的步驟合成化合物13，為黃色固體1.95g,兩步產(chǎn)率88％。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ6.99–6.86(m,3H),3.28–3.20(m,2H),2.66(t,J＝11.3Hz,2H),1.73(d,J＝10.3Hz,2H),1.43(d,J＝7.8Hz,2H),0.99(dd,J＝5.9,1.3Hz,3H).4-((3-氰基-4-(4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S10)除了使用5-氨基-2-(4-甲基哌啶-1-基)苯甲氰(化合物13)代替化合物4以外，以與實(shí)施例2合成化合物S2相同的步驟合成化合物S10，為紅色固體56mg,產(chǎn)率69％。1H NMR(300MHz,DMSO)δ11.34–11.06(m,1H),8.22(s,1H),8.08(d,J＝2.3Hz,1H),7.91(s,1H),7.21(d,J＝9.0Hz,1H),3.47(d,J＝11.5Hz,2),2.79(t,J＝11.6Hz,2),1.75(d,J＝12.4Hz,2),1.52(s,1H),1.42–1.24(m,2),0.98(d,J＝6.4Hz,3).ESI-MSm/z:354.0(M+),HR-ESIMSC18H18N4O3(M+):計(jì)算值：354.1560,實(shí)測(cè)值:354.1566.實(shí)施例114-((4-氯-3-甲氧基苯基)氨基甲?；?-1H-咪唑-5-羧酸(S11)除了使用4-氯-3-甲氧基苯胺代替化合物44以外，以與實(shí)施例2合成化合物S2相同的步驟合成化合物S11，為紅色固體38mg,產(chǎn)率48％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.26(s,1H),7.68(s,1H),7.45(s,1H),3.87(s,1H).ESI-MSm/z:293.9(M-),HR-ESIMSC12H9N3O4Cl(M-):計(jì)算值：294.0280,實(shí)測(cè)值:294.0282.實(shí)施例124-((4-氯-3-硝基苯)氨基甲?；?-1H-咪唑-5-羧酸(S12)除了使用4-氯-3-硝基苯胺代替化合物4以外，以與實(shí)施例2合成化合物S2相同的步驟合成化合物S12，為紅色固體35mg,產(chǎn)率44％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.59(s,1H),8.30(s,1H),8.02(s,1H),7.82(d,J＝8.8Hz,2H).ESI-MSm/z:308.9(M-),HR-ESIMSC11H5N4O5Cl(M-):計(jì)算值：309.0031,實(shí)測(cè)值:309.0027.實(shí)施例134-((1H-吲哚-5-基)氨基甲酰胺)-1H-咪唑-5-羧酸(S13)除了使用5-氨基-吲哚代替化合物4以外，以與實(shí)施例2合成化合物S2相同的步驟合成化合物S13，為紅色固體41mg,產(chǎn)率51％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ11.16(s,1H),10.86(s,1H),8.18(s,1H),7.97(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,3H),6.46(s,1H).ESI-MSm/z:269.0(M-),HR-ESIMSC13H9N4O3(M-):計(jì)算值：269.0683,實(shí)測(cè)值:269.0675.實(shí)施例144-((3,4-二氯苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-咪唑-5-羧酸(S14)4-((3,4-二氯苯基)氨基甲?；?-1-甲基-1H-咪唑-5-羧酸甲酯(14)取50mL圓底燒瓶，依次加入化合物S1(200mg,1eq,666.45μmol),DMF5mL,用膠塞封好，抽真空再充氬氣循環(huán)3次，充氬氣時(shí)間不少于5min，隨后在氬氣保護(hù)下于冰浴條件下攪拌10min后，緩慢滴加氫化鈉(200mg,3eq,2mmol)的DMF溶液和碘甲烷(83μL,2eq,1.33mmol)的DMF溶液。3天后，待反應(yīng)完全，旋干DMF，加二氯甲烷超聲至瓶壁上所有化合物震蕩下來(lái)，靜置，過(guò)濾，母液旋干，用1mL二氯甲烷溶解，以厚制備硅膠板(洗脫液：二氯甲烷:甲醇＝20:1，v/v)分離得到純白色固體(化合物14)74mg,產(chǎn)率34％.1HNMR(300MHz,CDCl3)δ12.40(s,1H),7.99(dd,J＝2.4,0.9Hz,1H),7.56(s,1H),7.55–7.50(m,1H),7.39(dd,J＝8.7,0.9Hz,1H),7.24(d,J＝1.0Hz,1H),4.07(d,J＝0.5Hz,3H),4.03(d,J＝1.0Hz,3H).4-((3,4-二氯苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-咪唑-5-羧酸(S14)取一50mL圓底燒瓶，依次加入化合物14(74mg，225.5μmol),THF3mL,2N的氫氧化鈉溶液3mL,反應(yīng)2h后，TLC監(jiān)控反應(yīng)完全后，滴加2N的鹽酸溶液中和至pH為2左右，此時(shí)有大量固體析出，靜置，待盡可能多的固體吸出后，過(guò)濾得純白色固體(化合物S14)45mg，三步產(chǎn)率64％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ12.57(s,1H),8.13(s,1H),8.08(s,1H),7.65(d,J＝8.7Hz,1H),7.55(d,J＝8.8Hz,1H),3.86(s,3H).EI-MSm/z:313,HR-EIMSC12H9N3O3Cl2:計(jì)算值：313.0021,實(shí)測(cè)值:313.0025.實(shí)施例15N4-(3,4-二氯苯基)-1H-咪唑-4,5-二酰胺(S15)化合物15除了使用3,4-二氯苯胺代替化合物4以外，以與合成化合物5相同的步驟合成化合物15。N4-(3,4-二氯苯基)-1H-咪唑-4,5-二酰胺(S15)取50mL圓底燒瓶，依次加入化合物15(80mg,1eq,666.45μmol),40％的氨水5mL,于冰水浴下攪拌反應(yīng)2.5h,TLC監(jiān)控反應(yīng)完全后，旋干氨水，加20mL乙酸乙酯超聲震蕩下瓶壁上的化合物，靜置，帶有大量固體析出，過(guò)濾，抽干，分別加1N氫氧化鈉溶液、水、乙酸乙酯沖洗，抽干，得白色固體(化合物S15)52mg，產(chǎn)率61％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ12.37(s,1H),8.04(s,2H),7.56(d,J＝20.4Hz,2H).EI-MSm/z:298.HR-EIMSC11H8N4O2Cl2:計(jì)算值：298.0011,實(shí)測(cè)值:298.0009.實(shí)施例16N-(3,4-二氯苯胺)-5-酰肼-1H-咪唑-4-酰胺(S16)除了使用85％的水合肼替代40％的氨水以外，以與實(shí)施例15合成化合物S15相同的步驟合成化合物S16，為白色固體46mg，產(chǎn)率52％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ10.12(s,1H),8.08(s,1H),7.96(s,1H),7.61(d,J＝19.3Hz,1H),4.80(s,2H).EI-MSm/z:313.HR-EIMSC11H8N4O2Cl2:計(jì)算值：313.0133,實(shí)測(cè)值:313.0131.實(shí)施例17N5-環(huán)丙基-N4-(3,4-二氯苯胺)-1H-咪唑-4,5-二酰胺(S17)除了使用環(huán)丙胺替代40％的氨水以外，以與實(shí)施例15合成化合物S15相同的步驟合成化合物S17，為白色固體53mg,產(chǎn)率55％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ9.22(s,1H),8.15(s,1H),7.84(s,1H),7.64(s,1H),7.54(d,J＝2.3Hz,1H),2.94(s,1H),0.80–0.62(m,4H).ESI-MSm/z:337.0(M-),HR-ESIMSC14H11N4O2Cl2(M-):計(jì)算值：337.0255,實(shí)測(cè)值:337.0259.實(shí)施例18N4-(3,4-二氯苯胺)-N5-羥基1H-咪唑-4,5-二酰胺(S18)除了使用羥胺的鹽酸鹽替代40％的氨水以外，以與實(shí)施例15合成化合物S15相同的步驟合成化合物S18，為白色固體53mg,產(chǎn)率55％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.14(s,1H),7.56(m,3H).ESI-MSm/z:313.0(M-),HR-ESIMSC11H7N4O3Cl2(M-):計(jì)算值：312.9901,實(shí)測(cè)值:312.9895.實(shí)施例19N4-(3,4-二氯苯胺)-N5-甲基-1H-咪唑-4,5-二酰胺(S19)除了使用甲胺的鹽酸鹽替代40％的氨水以外，以與實(shí)施例15合成化合物S15相同的步驟合成化合物S19，為白色固體54mg,產(chǎn)率61％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.13(s,1H),7.97(s,1H),7.69–7.48(m,2H),2.89(d,J＝4.6Hz,3H).ESI-MSm/z:311.1(M-),HR-ESIMSC12H9N4O2Cl2(M-):計(jì)算值：311.0110,實(shí)測(cè)值:311.0103.實(shí)施例20N4-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)-N5-環(huán)丙基-1H-咪唑-4,5-二酰胺(S20)除了用5-氨基-2-異丁氧基苯甲氰替代3,4-二氯苯胺，用環(huán)丙胺替代40％的氨水之外，以與實(shí)施例15合成化合物S15相同的步驟合成化合物S20，為白色固體60mg,產(chǎn)率57％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.14(s,1H),7.84(s,2H),7.29(d,J＝9.2Hz,1H),3.92(d,J＝6.0Hz,2H),2.94(s,1H),2.08(s,1H),1.02(d,J＝6.6Hz,6H),0.75(d,J＝6.7Hz,2H),0.68(d, J＝6.7Hz,2H).ESI-MSm/z:366.1(M-),HR-ESIMSC19H20N5O3(M-):計(jì)算值：366.1562,實(shí)測(cè)值:366.1566.實(shí)施例214-((3,4-二氯苯基)氨基甲?；?-2-丙基-1H-咪唑-5-羧酸(S21)2-丙基-1H-咪唑-4,5-二羧酸(17)于50ml的圓底燒瓶中依次加入2-丙基-1H-咪唑-4,5-二羧酸二乙酯(2g,7.78mmol),2N氫氧化鈉(6mL),THF(2mL)升溫到50℃攪拌反應(yīng)4h,反應(yīng)完成后用4N的HCl調(diào)節(jié)pH值到2，攪拌30min后過(guò)濾，乙酸乙酯洗，真空干燥得白色固體(化合物17)1.32g,產(chǎn)率85％。1HNMR(400MHz,DMSO):δ2.80(t,J＝7.5Hz,2H),1.79-1.66(m,2H),0.85(t,J＝7.4Hz,3H).4-((3,4-二氯苯基)氨基甲?；?-2-丙基-1H-咪唑-5-羧酸(S21)除了以3,4-二氯苯胺代替化合物4以及用化合物17代替1-氫咪唑-4,5-二羧酸以外，以與實(shí)施例2合成化合物S2相同的步驟合成化合物S21，為白色固體115mg,產(chǎn)率54％。1HNMR(300MHz,DMSO):δ8.09(s,1H),7.67(s,2H),2.78(s,2H),1.75(s,2H),0.89(s,3H).ESI-MSm/z:340.0(M-).HR-ESIC14H12N3O3Cl2(M-):計(jì)算值：340.0253,實(shí)測(cè)值:340.0256.實(shí)施例224-((4-氯-3-氰基苯基)氨基甲?；?-2-丙基-1H-咪唑-5-羧酸(S22)除了以5-氨基-2氯苯甲氰代替3,4-二氯苯胺以外，以與實(shí)施例21合成化合物S21相同的步驟合成化合物S22，為白色固體118mg,產(chǎn)率55％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.32(s,1H),7.98(s,1H),7.78(d,J＝8.9Hz,1H),2.77(s,2H),1.75(d,J＝6.9Hz,2H),0.90(t,J＝6.3Hz,3H).ESI-MSm/z:331.0(M-).HR-ESIC15H12N4O3Cl(M-):計(jì)算值：331.0600,實(shí)測(cè)值:331.0598.實(shí)施例234-((4-甲氧基-3-氰基苯基)氨基甲?；?-2-丙基-1H-咪唑-5-羧酸(S23)除了以5-氨基-2-甲氧基苯甲氰代替3,4-二氯苯胺以外，以與實(shí)施例21合成化合物S21相同的步驟合成化合物S23，為白色固體120mg,產(chǎn)率57％。1HNMR(300MHz,DMSO):δ8.10(s,1H),7.93(s,1H),7.32(d,J＝7.3Hz,1H),3.94(s,3H),2.75(s,2H),1.74(s,2H),0.91(d,J＝4.9Hz,3H).ESI-MSm/z:327.0(Mk-).HR-ESIC16H15N4O4(M-):計(jì)算值：327.1090,實(shí)測(cè)值:327.1093.實(shí)施例244-((4-異丁氧基-3-氰基苯基)氨基甲?；?-2-丙基-1H-咪唑-5-羧酸(S24)除了以5-氨基-2-異丁氧基苯甲氰代替3,4-二氯苯胺以外，以與實(shí)施例21合成化合物S21相同的步驟合成化合物S24，為白色固體138mg,產(chǎn)率60％。1HNMR(300MHz,DMSO):δ11.35–10.80(m,1H),8.09(d,J＝2.4Hz,1H),8.01–7.87(m,1H),7.31(d,J＝9.2Hz,1H),3.93(d,J＝6.4Hz,2H),2.75(s,2H),2.06(dd,J＝13.2,6.5Hz,1H),1.75(dd,J＝14.9,7.4Hz,2H),1.02(d,J＝6.7Hz,6H),0.90(t,J＝7.4Hz,3H).ESI-MSm/z:370.0(M-).實(shí)施例254-((4-哌啶-3-氰基苯基)氨基甲酰基)-2-丙基-1H-咪唑-5-羧酸(S25)除了以5-氨基-2-哌啶-1-基苯甲氰代替3,4--二氯苯胺以外，以與實(shí)施例21合成化合物S21相同的步驟合成化合物S25，為白色固體119mg,產(chǎn)率47％。1HNMR(300MHz,DMSO):δ8.07(s,1H),7.84(s,1H),7.21(d,J＝8.8Hz,1H),3.10(s,4H),2.76(s,2H),1.69(s,6H),1.56(s,2H),0.90(t,J＝7.5Hz,3H).ESI-MSm/z:380.0(M-).HR-ESIC20H22N5O3(M-):計(jì)算值：380.1730,實(shí)測(cè)值:380.1723.mp:244-246℃.實(shí)施例26本發(fā)明化合物的活性測(cè)試實(shí)驗(yàn)原理與方法:尿酸法：底物黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶(Sigma)的催化下生成尿酸和超氧離子，通過(guò)測(cè)定292nm波長(zhǎng)下光吸收值來(lái)測(cè)定尿酸生成量，從而檢測(cè)黃嘌呤氧化酶的活性。并且固定酶濃度，測(cè)定不同底物濃度下最大反應(yīng)速度以及不同抑制劑濃度最大反應(yīng)速度的影響。統(tǒng)計(jì)方法：Exel軟件計(jì)算雙復(fù)孔數(shù)據(jù)得出抑制率，并以GraphpadPrism5.0擬合出化合物的IC50值，所得結(jié)果示于下表1中。表1化合物對(duì)XO體外抑制活性化合物IC50化合物IC50化合物IC50S1BS9AS17BS2DS10BS18BS3BS11CS19CS4BS12BS20DS5BS13CS21DS6AS14DS22DS7BS15CS23DS8BS16DS24DS25Da被測(cè)化合物抑制XO激酶活性：A:1nM<IC50<10nM；B:10nM<IC50<100nM；C:100nM<IC50<1μM；D:1μM<IC50<100μM；由表1可以看出，本發(fā)明化合物大多數(shù)對(duì)黃嘌呤氧化酶表現(xiàn)出較好的活性，部分化合 物抑制活性達(dá)到nM級(jí)，是一類很有應(yīng)用前景的治療痛風(fēng)的藥物。實(shí)施例27本發(fā)明化合物S6的酶動(dòng)力學(xué)測(cè)試實(shí)驗(yàn)原理與方法:尿酸法:底物黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶(Sigma)的催化下生成尿酸和超氧離子,通過(guò)測(cè)定292nm波長(zhǎng)光吸收值來(lái)測(cè)定尿酸生成量,從而檢測(cè)黃嘌呤氧化酶的活性。固定酶濃度，測(cè)定不同底物濃度下最大反應(yīng)速度以及不同抑制劑濃度對(duì)最大反應(yīng)速度的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:固定酶濃度，測(cè)定出不同底物濃度下的最大反應(yīng)速度；固定酶濃度與底物濃度，測(cè)定不同化合物S6濃度作用下的最大反應(yīng)速度，擬合出lineweaver～BurkPlot(如圖1)，與文獻(xiàn)對(duì)比可發(fā)現(xiàn)，S6表現(xiàn)出混合型抑制劑的酶動(dòng)力學(xué)特征。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3