專利名稱：鉑配合物、其制備和治療應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的用于醫(yī)療實踐中治療腫瘤疾病含氧化數(shù)(Ⅱ)的鉑配合物。本發(fā)明還公開了該配合物作為藥物的應(yīng)用和包含該鉑配合物作為活性物質(zhì)的藥物組合物。
背景技術(shù)：
本世紀七十年代末人們將作為有效的細胞抑制劑的鉑配合物引入醫(yī)療實踐中。此類型配合物的第一代藥物是順鉑(順-二氨合二氯鉑(Ⅱ)配合物)。上述配合物的進一步發(fā)展過程中，合成和試驗了十種鉑配合物；其中，卡鉑(順-二氨合-/1,1-環(huán)丁烷二羧酸鹽/鉑(Ⅱ)配合物)成為治療腫瘤的一種最重要物質(zhì)。而且已有報道，其中一個氨合配體已被烷基胺基團代替的不對稱的鉑配合物(USP4,329,299)。
目前，仍在尋找較已知鉑配合物具有更強的抗腫瘤功效和更低的副作用的鉑配合物。
現(xiàn)在，本發(fā)明已研究出某些新的較現(xiàn)有技術(shù)的鉑配合物具有更強的抗腫瘤功效且與已知的配合物相比副作用較低的鉑配合物。這些新配合物代表了本發(fā)明的基礎(chǔ)。
發(fā)明概述本發(fā)明第一方面提供了一種具有通式(Ⅰ)、含氧化數(shù)Ⅱ的鉑配合物 其中X 代表鹵原子，和A 代表含10-14個碳原子的初級三環(huán)胺，其可以被一個或兩個含1-4個碳原子的烷基在三環(huán)核上取代或不取代，和本發(fā)明還提供了一種含β或γ環(huán)糊精的上述鉑配合物的包合配合物，此環(huán)糊精可被含1-6個碳原子的羥烷基取代或不取代。
本發(fā)明尤其優(yōu)選的鉑配合物是式(Ⅰ)中的A代表金剛氨基(adamantylamino group)、X如上述定義的鉑配合物。另外，本發(fā)明另一個有優(yōu)勢的鉑配合物是其中A代表3,5-二甲基金剛氨基(3,5-dimethyladamantylamino group)、X如上述定義的式(Ⅰ)配合物。
本發(fā)明另一方面提供了制備式(Ⅰ)鉑配合物的方法，其特征在于將在極性有機溶劑或水中的氨合三鹵素鉑酸鹽(Ⅱ)的堿金屬鹽溶液與含10-14個碳原子的三環(huán)胺在0-100℃的溫度內(nèi)反應(yīng)，其中三環(huán)核上的碳原子可被含1-4個碳原子的一個或兩個烷基取代或不取代。
本發(fā)明還提供了一種制備含β或γ環(huán)糊精的式Ⅰ鉑配合物的包合配合物的方法，該環(huán)糊精可被含1-6個碳原子的羥烷基取代或不取代，此方法的特征在于將有機溶劑中的式(Ⅰ)鉑配合物溶液與β或γ環(huán)糊精的水溶液混合，該環(huán)糊精可被含1-6個碳原子的羥烷基取代或不取代，然后蒸發(fā)所得到溶液中的溶劑。
本發(fā)明還有一方面是提供了用作一種藥劑的上述式(Ⅰ)鉑配合物或其含β或γ環(huán)糊精的包合配合物。
另外本發(fā)明提供了一種治療腫瘤疾病的藥物組合物，其特征在于它包含至少一種作為活性物質(zhì)的上述式(Ⅰ)鉑配合物或其含β或γ環(huán)糊精的包合配合物，和至少一種藥學(xué)賦形劑。
還有，式(Ⅰ)的鉑配合物也可進一步用作生產(chǎn)口服用的含氧化數(shù)Ⅳ的類似取代的鉑配合物的起始物質(zhì)。
本發(fā)明的鉑配合物是新的化合物，因為直至現(xiàn)在這些化合物既沒有在現(xiàn)有技術(shù)的任何文獻中特別公開出來、也沒有對它們的特性進行過表征、更沒有公開其制備方法。這些化合物作為活性物質(zhì)用于治療腫瘤疾病的用途也是新的并有創(chuàng)造性的，因為從現(xiàn)有技術(shù)中無法顯而易見地推斷出二價鉑配合物中初級三環(huán)胺配體的存在可導(dǎo)致本發(fā)明新化合物的抗腫瘤活性有實質(zhì)性的增強。
另一方面，本發(fā)明將通過具體實施的實施例進行更詳細的描述。應(yīng)該認識到這些實施例是對發(fā)明目的的舉例說明，決不是限制由本專利的權(quán)利要求確切定義的本發(fā)明范圍。
發(fā)明的詳細說明實施例1順-(1-金剛胺)-氨合-二氯鉑(Ⅱ)配合物(以下稱作“LA-9”)的合成過濾在84ml水中的19.55g(54.6mmol)氨合三氯鉑酸鉀(Ⅱ)溶液，在濾液中加入84ml水和45.4g(273-4mmol)碘化鉀的混合物。在氮氣壓下，在該混合物中加入8.27g(54.6mmol)1-金剛胺。在排除空氣和光照條件下于室溫攪拌所得到的混合物22小時。在氮氣下濾除所得到的沉淀、并用不含溶解氣體的水洗滌。在真空干燥器中干燥后，得到含3.09％氯和33.03％碘的中間體。將此中間體懸浮在170ml水中、并在懸浮液中加入17.75g(104.5mmol)硝酸銀(中間體中鹵化物含量理論值的90％)。在排除空氣和光照條件下于室溫攪拌70小時后，過濾未溶解的部分，用少量的水洗滌。在濾液中緩慢加入濃鹽酸(19ml,205mol)并將該混合物在室溫和排除空氣和避光的條件下攪拌20小時。濾出固體粗產(chǎn)品，隨后用0.1M鹽酸、乙醇和乙醚洗滌。在真空爐中干燥后，得到16.46g粗制品(68％，基于氨合三氯鉑酸鉀)。
將粗制品(16.36g,37.7mmol)溶解在200ml二甲基甲酰胺中，過濾所得到的溶液，在冷卻條件下，將600ml 0.1M鹽酸加入濾液中。濾除所得到的固體沉淀，隨后用0.1M鹽酸、乙醇和乙醚洗滌，并在真空干燥器中干燥后。得到14.70g所需產(chǎn)品(理論值的89.8％，基于初始粗制品)。
通過1R和1H NMR光譜分析確定所得產(chǎn)品的特性。通過X線結(jié)構(gòu)分析在精制單晶上測試所得到的鉑配合物的晶體和分子結(jié)構(gòu)，由此確認光譜法的結(jié)果。并通過高性能液相色譜確定所得產(chǎn)品的純度。
產(chǎn)品C10H20Cl2N2Pt的元素分析C(％)H(％) N(％) Cl(％)實測值27.754.556.3716.25計算值27.664.646.4516.33實施例2順-(1-氨基-3,5-二甲基金剛烷)-氨合-二氯鉑(Ⅱ)配合物(以下稱作“LA-13”)的合成在室溫和氮氣壓下，將1-氨基-3,5-二甲基金剛烷(8.06ml,42mmol)在攪拌下加入13.95g(39mmol)新近過濾的氨合三氯鉑酸鉀(Ⅱ)溶液中。在避免空氣和光照條件下于50℃攪拌所得到的混合物15小時。冷卻至室溫后，在氮氣過濾層下過濾所得到的固體沉淀、并用正己烷洗滌。通過經(jīng)漏斗的篩濾氣流干燥濾餅、并將干燥的粗制品溶解在120ml二甲基甲酰胺中。將濾液與360ml 0.1M鹽酸混合。濾除所得到的沉淀并用0.1M鹽酸和乙醚洗滌。在真空爐中干燥后，得到6.25g所需產(chǎn)品(理論產(chǎn)率的34.6％，基于起始的氨合三氯鉑酸鉀(Ⅱ))。
通過1R光譜分析確定所得產(chǎn)品的特性，并通過高性能液相色譜確定其純度。
產(chǎn)品C12H24Cl2N2Pt的元素分析C(％)H(％) N(％) Cl(％)實測值31.595.375.9815.53計算值31.185.236.0615.34實施例3含羥丙基-β-環(huán)糊精的化合物L(fēng)A-9的包合配合物(以下叫做“LA-9的包合藥”)的合成將化合物L(fēng)A-9溶解在二甲基甲酰胺中得到最終濃度為25g/l的溶液。在所得溶液中加入羥丙基-β-環(huán)糊精、其量應(yīng)使LA-9/環(huán)糊精的摩爾比為1∶3。在室溫下向該LA-9溶液中在攪拌下加入10mM pH7.3的Hepes的緩沖水相，直至二甲基甲酰胺與水相的最終體積比為1∶10。即使第一次加入水相后未溶解的環(huán)糊精仍快速溶解。最后，通過低壓升華干燥法從包合配合物的溶液中除去二甲基甲酰胺和水。
我們已經(jīng)在體外腫瘤系上對本發(fā)明化合物的細胞抑制活性進行了測試。選擇了MTT試驗以篩選相關(guān)化合物的作用。該試驗是根據(jù)四唑鹽與活細胞的呼吸線粒體的反應(yīng)而進行的。使所得到的不溶性甲加溶、其數(shù)量取決于微板讀數(shù)器。此方法被作為一種評價藥學(xué)活性化合物的細胞抑制作用的標準方法(Tim,Mosmann，細胞生長和存活的快速比色測定法，用于增殖和細胞毒性測定，《免疫方法雜志》65,(1983),55-63)。抑制常數(shù)(IC 50)表示可抑制50％細胞培養(yǎng)物生長的物質(zhì)濃度。這一常數(shù)已由MTT值(細胞的線粒體活性)與被試驗物質(zhì)的濃度的曲線圖確定。Graph Pad Prism程序用于確定所測定值的抑制常數(shù)、而Blotzman S形彎曲用于作出單個實驗點的曲線圖。所選擇的細胞系是用于對藥理學(xué)上的活性化合物的細胞抑制作用進行常規(guī)篩選的標準細胞系。
實施例4小鼠腫瘤系中的抗腫瘤活性在本實施例中，測試了P815系(肥大細胞瘤)和L1210系(淋巴細胞白血病系)。通過MTT試驗對LA-9的作用與卡鉑進行比較。
對于P-815系，IC50的實驗值為1.1μM，對于L1210系，為1.15μM。相反，卡鉑(游離形式或與環(huán)糊精的配合物形式)具有105μM的IC50值，即其活性約低于LA-9 100倍。
實施例5人腫瘤細胞中的抗腫瘤活性在淋巴母細胞白血病系CEMt中進行了對比實驗。MTT用于評價細胞毒作用。確定了化合物L(fēng)A-9(IC 50=0.36μM)、順鉑(IC 50=1.9μM)、卡鉑(IC 50=30.4μM)和奧沙利鉑(IC 50=4.8μM)的抑制常數(shù)IC 50。
抑制曲線的曲線圖表示過程如

圖1所示。曲線上的點標記如下LA-9=向上三角，卡鉑=向下三角，順鉑=正方形，奧沙利鉑=圓圈。通過標準的分光光度MTT測試法、在形成甲條件下根據(jù)活體細胞的3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物的減少確定細胞的活力。
與卡鉑(IC 50=95μM)相比，眼黑素瘤VUP(Masaryk腫瘤委員會，Brno)對LA-9(IC 50=9μM)的敏感性約高10倍。
實施例6體內(nèi)抗腫瘤活性在患有固體哺乳動物腺瘤MC 2111的動物中對化合物L(fēng)A-9和順鉑的抗腫瘤活性進行了比較，該動物在接種腫瘤細胞后第5天進行了單劑量靜脈內(nèi)用藥。鉑配合物這種特定的給藥方式可用的制劑是可溶性的。
在本實驗中使用了體重為22.9-25.8g的DBA/l雌性小鼠。通過皮下接種0.2ml按1∶1體積比稀釋在等滲葡萄糖溶液中的腫瘤勻漿而使其產(chǎn)生腫瘤。被測試的化合物以應(yīng)用前即刻制備的等滲水溶液形式按0.1-0.4ml/20g體重/每動物給藥，即將相應(yīng)的凍干產(chǎn)品溶解在注射用水中、再根據(jù)特殊需要用等滲氯化鈉溶液稀釋，由下表可見。表抗腫瘤活性化合物物質(zhì)的劑量 n(j) 存活時間的中值 存活(對LTS(mg/kg) (天) 照的％)對照 0 8 26.0 100 0Platidiam 4 8＞76.5 ＞294 42 8 39.5 152 21 8 28.5 110 2LA-9的包合藥物形式24 8 29.0 112 312 8＞106.5 ＞410 46 8＞92.5 ＞356 4n=一組中的動物數(shù)LTS=長期存活數(shù)(存活125天且實驗結(jié)束后被處死的動物數(shù))Platidiam=含活性物質(zhì)順-二氨合-二氯鉑(Ⅱ)配合物的市售藥物(Lachema)與對照組相比，化合物L(fēng)A-9在劑量為12mg/kg時使存活時間增加至410％，從而通過依據(jù)Hajek的非參數(shù)試驗(Fabian V.,Zakladni statistickemetody[統(tǒng)計的基本方法]，NCSAV Prague 1963)評價時、單個存活時間的分布在統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異，顯著性水平α=0.05。半數(shù)動物永久性完全緩解而存活，實驗結(jié)束后被處死沒有出現(xiàn)肉眼可見的腫瘤?？梢詫Υ婊畹姆e極影響(雖然統(tǒng)計學(xué)上不很明顯)認為是所試驗化合物具有抗腫瘤活性和低毒性的充分證據(jù)。
通過評價體重增加的系數(shù)也可證實LA-9的低毒性。服用LA-9伴有體重減少小于10％。對于試驗中的動物，LA-9的最適宜劑量為13-16mg/kg。估計最大可耐受劑量(MDT)值在25mg/kg左右。
權(quán)利要求
1．一種具有通式(Ⅰ)含氧化數(shù)Ⅱ的鉑配合物 其中X 代表鹵原子，和A 代表含10-14個碳原子的初級三環(huán)胺，在其三環(huán)核上可以被一個或兩個含1-4個碳原子的烷基取代或不取代，和該鉑配合物的一種含β或γ環(huán)糊精的包合配合物，此環(huán)糊精可被含1-6個碳原子的羥烷基取代或不取代。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的式(Ⅰ)鉑配合物，其中A代表金剛氨基，X如權(quán)利要求1所定義。
3．根據(jù)權(quán)利要求1的式(Ⅰ)鉑配合物，其中A代表3,5-二甲基金剛氨基，X如權(quán)利要求1所定義。
4．一種制備權(quán)利要求1的式(Ⅰ)鉑配合物的方法，其特征在于將極性有機溶劑或水中的氨合三鹵素鉑酸鹽(Ⅱ)的堿金屬鹽溶液與含10-14個碳原子的三環(huán)胺在0-100℃的溫度下反應(yīng)，在其三環(huán)核上可被含1-4個碳原子的一個或兩個烷基取代或不取代。
5．一種制備權(quán)利要求1的含β或γ環(huán)糊精的式(Ⅰ)鉑配合物的包合配合物的方法，該環(huán)糊精可被含1-6個碳原子的羥烷基取代或不取代，此方法的特征在于將有機溶劑中的式(Ⅰ)鉑配合物溶液與β或γ環(huán)糊精的水溶液混合，該環(huán)糊精可被含1-6個碳原子的羥烷基取代或不取代，然后蒸發(fā)所得到溶液中的溶劑。
6．用作一種藥劑的權(quán)利要求1所述的式(Ⅰ)鉑配合物或其含β或γ環(huán)糊精的包合配合物。
7．一種治療腫瘤疾病的藥物組合物，其特征在于它包含至少一種作為活性物質(zhì)的權(quán)利要求1所述的式(Ⅰ)鉑配合物或其含β或γ環(huán)糊精的包合配合物，和至少一種藥學(xué)賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種式(Ⅰ)鉑配合物,其中X代表鹵原子,A代表含10—14個碳原子的初級三環(huán)胺,在其三環(huán)核上可以被一個或兩個含1—4個碳原子的烷基取代或不取代;而且公開了一種含β或γ環(huán)糊精的上述鉑配合物的包合配合物,此環(huán)糊精可被含1—6個碳原子的羥烷基取代或不取代。本發(fā)明還公開了一種制備式(Ⅰ)鉑配合物的方法,即通過將氨合三鹵素鉑酸鹽(Ⅱ)的堿土金屬鹽在極性有機溶劑或水中的溶液與相應(yīng)的三環(huán)胺在0—100℃的溫度范圍內(nèi)反應(yīng);以及生產(chǎn)上述包合配合物的方法。這兩種公開的配合物可用作治療腫瘤疾病的藥物組合物或這種藥物組合物的一部分。
文檔編號C07F15/00GK1303387SQ99806647
公開日2001年7月11日 申請日期1999年5月24日 優(yōu)先權(quán)日1998年5月27日
發(fā)明者弗蘭特塞克·扎克, 阿道夫·米斯特爾, 安娜·波洛瓦, 米蘭·梅爾卡, 雅羅斯拉夫·圖拉奈克, 達納·扎盧斯卡 申請人:普利瓦-拉徹馬公司