專利名稱：拉唑化合物的合成的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本公開涉及生物催化劑以及使用所述生物催化劑的方法。2.對序列表、表格或計算機(jī)程序的引用經(jīng)由EFS-Web與說明書同時提交作為ASCII格式文本文件、文件名為CX2_036W01_ST25. txt、創(chuàng)建日期為2010年12月7日、文件大小為955175字節(jié)的序列表。經(jīng)由EFS-Web提交的序列表是說明書的一部分，并在此通過引用整體并入本文。3.背景艾司奧美拉唑(esomeprazole)是指定用于治療消化不良、消化性潰瘍病(PUD)、胃食管反流病(G0RD/GERD)和Zollinger-Ellison綜合征的質(zhì)子泵抑制劑。艾司奧美拉唑是奧美拉唑的S-對映異構(gòu)體，奧美拉唑是S和R異構(gòu)體的外消旋混合物。艾司奧美拉唑(在此還稱為“(S)-5-甲氧基-2-((4-甲氧基-3，5-二甲基吡啶-2-基)甲基亞硫?；?-IH-苯并[d]咪唑”或“化合物(2b)”)具有以下結(jié)構(gòu)
權(quán)利要求
1.一種非天然存在的單加氧酶，所述單加氧酶包括能夠?qū)?-甲氧基-2-((4-甲氧基-3，5-二甲基吡啶-2-基)甲硫基)-IH-苯并[d]咪唑(“化合物(I)”)轉(zhuǎn)化為5-甲氧基-2-((4-甲氧基-3，5-二甲基吡啶-2-基)甲基亞硫?；?-IH-苯并[d]咪唑(“化合物(2)”)的多肽，并且所述多肽氨基酸序列 (a)與SEQID NO :124具有至少80%同一性；并且 (b)與SEQID NO :2相比在以下殘基位置具有兩個或多個殘基差異對應(yīng)于X246的位置；對應(yīng)于X248的位置；對應(yīng)于X326的位置；對應(yīng)于X386的位置；對應(yīng)于X432的位置；對應(yīng)于X433的位置；對應(yīng)于X435的位置；對應(yīng)于X438的位置；和對應(yīng)于X448的位置。
2.如權(quán)利要求I所述的非天然存在的單加氧酶，其中所述多肽能夠以大于SEQID NO2單加氧酶速率的I. 5倍的速率將化合物(I)轉(zhuǎn)化為化合物(2)。
3.如權(quán)利要求I所述的非天然存在的單加氧酶，其中所述多肽能夠以對映異構(gòu)體過量將化合物⑴轉(zhuǎn)化為(S)-5-甲氧基-2-((4-甲氧基-3，5-二甲基吡啶-2-基)甲基亞硫?；?-IH-苯并[d]咪唑(“化合物(2b) ”)。
4.如權(quán)利要求3所述的非天然存在的單加氧酶，其中所述氨基酸序列包括至少包括其中至少在對應(yīng)于X326的位置的殘基是C的氨基酸序列。
5.如權(quán)利要求3所述的非天然存在的單加氧酶，其中所述氨基酸序列包括至少包括其中至少在對應(yīng)于X386的位置的殘基是S的氨基酸序列。
6.如權(quán)利要求3所述的非天然存在的單加氧酶，其中所述氨基酸序列至少包括以下特征 對應(yīng)于X326的位置的殘基是C ； 對應(yīng)于X386的位置的殘基是S ； 對應(yīng)于X432的位置的殘基是A或L。
7.如權(quán)利要求6所述的非天然存在的單加氧酶，其中所述氨基酸序列還包括以下特征的一個或多個 對應(yīng)于X433的位置的殘基是A、L或V ; 對應(yīng)于X435的位置的殘基是S ； 對應(yīng)于X438的位置的殘基是I ; 對應(yīng)于X448的位置的殘基是V或W ;并且 對應(yīng)于X490的位置的殘基是R。
8.如權(quán)利要求3所述的非天然存在的單加氧酶，其中所述多肽能夠以至少90%對映異構(gòu)體過量形成化合物(2b)，并且其中所述氨基酸序列包括以下特征的一個或多個 對應(yīng)于X246的位置的殘基是Y ； 對應(yīng)于X248的位置的殘基是S ； 對應(yīng)于X326的位置的殘基是C ； 對應(yīng)于X386的位置的殘基是S ； 對應(yīng)于X432的位置的殘基是L ； 對應(yīng)于X433的位置的殘基是A ； 對應(yīng)于X435的位置的殘基是S ； 對應(yīng)于X438的位置的殘基是I ;并且對應(yīng)于X448的位置的殘基是V。
9.如權(quán)利要求8所述的非天然存在的單加氧酶，其中所述氨基酸序列還至少包括以下特征 對應(yīng)于X326的位置的殘基是C ； 對應(yīng)于X386的位置的殘基是S ； 對應(yīng)于X438的位置的殘基是I ;并且 對應(yīng)于X448的位置的殘基是V。
10.如權(quán)利要求3-9任一項(xiàng)所述的非天然存在的單加氧酶，其中所述氨基酸序列包括以下特征的一個或多個 對應(yīng)于X3的位置的殘基是T ; 對應(yīng)于X14的位置的殘基是A; 對應(yīng)于X34的位置的殘基是K; 對應(yīng)于X43的位置的殘基是G; 對應(yīng)于X71的位置的殘基是M ; 對應(yīng)于X83的位置的殘基是E; 對應(yīng)于Xlll的位置的殘基是T ; 對應(yīng)于X141的位置的殘基是I或V ; 對應(yīng)于X174的位置的殘基是L或I ; 對應(yīng)于X209的位置的殘基是P ； 對應(yīng)于X240的位置的殘基是F或K ; 對應(yīng)于X246的位置的殘基是E、H、Q、S、R、W或Y ; 對應(yīng)于X248的位置的殘基是C、I、N、V或S ; 對應(yīng)于X277的位置的殘基是L、M或Q ; 對應(yīng)于X278的位置的殘基是G、N或S ; 對應(yīng)于X280的位置的殘基是G或R ; 對應(yīng)于X281的位置的殘基是A或S ; 對應(yīng)于X282的位置的殘基是S ； 對應(yīng)于X288的位置的殘基是I ; 對應(yīng)于X307的位置的殘基是C或R ; 對應(yīng)于X341的位置的殘基是E ； 對應(yīng)于X373的位置的殘基是L ； 對應(yīng)于X377的位置的殘基是G ； 對應(yīng)于X388的位置的殘基是K ； 對應(yīng)于X390的位置的殘基是R或I ; 對應(yīng)于X400的位置的殘基是I ; 對應(yīng)于X415的位置的殘基是A ； 對應(yīng)于X426的位置的殘基是F ； 對應(yīng)于X449的位置的殘基是M、F或L ; 對應(yīng)于X464的位置的殘基是D ；對應(yīng)于X481的位置的殘基是K ； 對應(yīng)于X488的位置的殘基是F、K或L ; 對應(yīng)于X489的位置的殘基是C ； 對應(yīng)于X499的位置的殘基是L ； 對應(yīng)于X505的位置的殘基是W或L ; 對應(yīng)于X516的位置的殘基是V ； 對應(yīng)于X526的位置的殘基是V ； 對應(yīng)于X537的位置的殘基是T ;并且 對應(yīng)于X540的位置的殘基是Q或A。
11.如權(quán)利要求3所述的非天然存在的單加氧酶，其中所述氨基酸序列包括選自由以下組成的組的序列SEQ ID NO :8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、I14、I16、I18、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、210、212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264 和 266。
12.如權(quán)利要求3所述的非天然存在的單加氧酶，其中所述氨基酸序列至少包括以下特征 (a)對應(yīng)于X326的位置的殘基是C;對應(yīng)于X386的位置的殘基是S ;對應(yīng)于X432的位置的殘基是A或L ;對應(yīng)于X433的位置的殘基是A ;對應(yīng)于X435的位置的殘基是S ;并且對應(yīng)于X490的位置的殘基是R ； (b)對應(yīng)于X34的位置的殘基是K;對應(yīng)于X209的位置的殘基是P ;對應(yīng)于X240的位置的殘基是K ;對應(yīng)于X288的位置的殘基是I ;對應(yīng)于X326的位置的殘基是C ;對應(yīng)于X386的位置的殘基是S ;對應(yīng)于X415的位置的殘基是A ;對應(yīng)于X432的位置的殘基是L ;對應(yīng)于X433的位置的殘基是A ;對應(yīng)于X435的位置的殘基是S ;對應(yīng)于X438的位置的殘基是I ;對應(yīng)于X448的位置的殘基是V ;對應(yīng)于X490的位置的殘基是R ;對應(yīng)于X516的位置的殘基是V ;并且對應(yīng)于X537的位置的殘基是T ； (c)對應(yīng)于X14的位置的殘基是A;對應(yīng)于X34的位置的殘基是K ;對應(yīng)于X141的位置的殘基是V ;對應(yīng)于X209的位置的殘基是P ;對應(yīng)于X240的位置的殘基是K ;對應(yīng)于X288的位置的殘基是I ;對應(yīng)于X326的位置的殘基是C ;對應(yīng)于X386的位置的殘基是S ;對應(yīng)于X415的位置的殘基是A ;對應(yīng)于X426的位置的殘基是F ;對應(yīng)于X432的位置的殘基是L ；對應(yīng)于X433的位置的殘基是A ;對應(yīng)于X435的位置的殘基是S ;對應(yīng)于X438的位置的殘基是I ;對應(yīng)于X448的位置的殘基是V ;對應(yīng)于X489的位置的殘基是C ;對應(yīng)于X490的位置的殘基是R ;對應(yīng)于X516的位置的殘基是V ;并且對應(yīng)于X537的位置的殘基是T ； (d)對應(yīng)于X14的位置的殘基是A;對應(yīng)于X34的位置的殘基是K ;對應(yīng)于Xlll的位置的殘基是T ;對應(yīng)于X141的位置的殘基是V ;對應(yīng)于X209的位置的殘基是P ;對應(yīng)于X240的位置的殘基是K ;對應(yīng)于X246的位置的殘基是Y ;對應(yīng)于X288的位置的殘基是I ;對應(yīng)于X307的位置的殘基是R ;對應(yīng)于X326的位置的殘基是C ;對應(yīng)于X386的位置的殘基是S ；對應(yīng)于X388的位置的殘基是K ;對應(yīng)于X415的位置的殘基是A ;對應(yīng)于X426的位置的殘基是F ;對應(yīng)于X432的位置的殘基是L ;對應(yīng)于X433的位置的殘基是A ;對應(yīng)于X435的位置的殘基是S ;對應(yīng)于X438的位置的殘基是I ;對應(yīng)于X448的位置的殘基是V ;對應(yīng)于X481的位置的殘基是K ;對應(yīng)于X489的位置的殘基是C ;對應(yīng)于X490的位置的殘基是R ;對應(yīng)于X505的位置的殘基是L ;對應(yīng)于X516的位置的殘基是V ;并且對應(yīng)于X537的位置的殘基是T ； (e)對應(yīng)于X14的位置的殘基是A ;對應(yīng)于X34的位置的殘基是K ;對應(yīng)于X43的位置的殘基是G ;對應(yīng)于X71的位置的殘基是M ;對應(yīng)于Xl 11的位置的殘基是T ;對應(yīng)于X141的位置的殘基是V ;對應(yīng)于X149的位置的殘基是W ;對應(yīng)于X209的位置的殘基是P ;對應(yīng)于X240的位置的殘基是K ;對應(yīng)于X246的位置的殘基是Y ;對應(yīng)于X248的位置的殘基是V ；對應(yīng)于X277的位置的殘基是M ;對應(yīng)于X288的位置的殘基是I ;對應(yīng)于X307的位置的殘基是R ;對應(yīng)于X326的位置的殘基是C ;對應(yīng)于X386的位置的殘基是S ;對應(yīng)于X388的位置的殘基是K ;對應(yīng)于X390的位置的殘基是I ;對應(yīng)于X415的位置的殘基是A ;對應(yīng)于X426的位置的殘基是F ;對應(yīng)于X432的位置的殘基是L ;對應(yīng)于X433的位置的殘基是A ;對應(yīng)于X435的位置的殘基是S ;對應(yīng)于X438的位置的殘基是I ;對應(yīng)于X448的位置的殘基是V ；對應(yīng)于X481的位置的殘基是K ;對應(yīng)于X489的位置的殘基是C ;對應(yīng)于X490的位置的殘基是R ;對應(yīng)于X499的位置的殘基是L ;對應(yīng)于X505的位置的殘基是L ;對應(yīng)于X516的位置的殘基是V ;對應(yīng)于X526的位置的殘基是V ;對應(yīng)于X537的位置的殘基是T ;并且對應(yīng)于X540的位置的殘基是Q;或者 (g)對應(yīng)于X14的位置的殘基是A ;對應(yīng)于X34的位置的殘基是K ;對應(yīng)于X43的位置的殘基是G ;對應(yīng)于X71的位置的殘基是M ;對應(yīng)于X83的位置的殘基是E ;對應(yīng)于Xlll的位置的殘基是T ;對應(yīng)于X141的位置的殘基是V ;對應(yīng)于X149的位置的殘基是W ;對應(yīng)于X174的位置的殘基是I ;對應(yīng)于X209的位置的殘基是P ;對應(yīng)于X240的位置的殘基是F或K ;對應(yīng)于X246的位置的殘基是Y ;對應(yīng)于X248的位置的殘基是I或V ;對應(yīng)于X277的位置的殘基是M ;對應(yīng)于X288的位置的殘基是I ;對應(yīng)于X307的位置的殘基是C或R ;對應(yīng)于X326的位置的殘基是C ;對應(yīng)于X341的位置的殘基是E ;對應(yīng)于X373的位置的殘基是L ；對應(yīng)于X377的位置的殘基是G ;對應(yīng)于X383的位置的殘基是G ;對應(yīng)于X386的位置的殘基是S ;對應(yīng)于X388的位置的殘基是K ;對應(yīng)于X390的位置的殘基是I ;對應(yīng)于X400的位置的殘基是I ;對應(yīng)于X415的位置的殘基是A ;對應(yīng)于X426的位置的殘基是F ;對應(yīng)于X432的位置的殘基是L ;對應(yīng)于X433的位置的殘基是A ;對應(yīng)于X435的位置的殘基是S ;對應(yīng)于X438的位置的殘基是I ;對應(yīng)于X448的位置的殘基是V ;對應(yīng)于X449的位置的殘基是F ；對應(yīng)于X464的位置的殘基是D ;對應(yīng)于X481的位置的殘基是K ;對應(yīng)于X488的位置的殘基是K ;對應(yīng)于X489的位置的殘基是C ;對應(yīng)于X490的位置的殘基是R ;對應(yīng)于X499的位置的殘基是L ;對應(yīng)于X505的位置的殘基是L ;對應(yīng)于X516的位置的殘基是V ;對應(yīng)于X526的位置的殘基是V ;對應(yīng)于X537的位置的殘基是T ;并且對應(yīng)于X540的位置的殘基是Q。
13.如權(quán)利要求I所述的非天然存在的單加氧酶，其中所述多肽能夠以對映異構(gòu)體過量將化合物(I)轉(zhuǎn)化為(R)-5-甲氧基-2-((4-甲氧基-3，5-二甲基吡啶-2-基)甲基亞硫?；?-IH-苯并[d]咪唑(“化合物(2a)”)，并且其中所述氨基酸序列至少包括以下特征的兩個或多個 對應(yīng)于X432的位置的殘基是A、C、D、H、K、I、S、T或Y ;對應(yīng)于X433的位置的殘基是A、F、G、K或W ; 對應(yīng)于X435的位置的殘基是A或S ;并且 對應(yīng)于X490的位置的殘基是R。
14.如權(quán)利要求13所述的非天然存在的單加氧酶，其中所述多肽氨基酸序列還包括以下特征的一個或多個 對應(yīng)于X277的位置的殘基是V ； 對應(yīng)于X278的位置的殘基是H ； 對應(yīng)于X279的位置的殘基是Y ； 對應(yīng)于X280的位置的殘基是W ； 對應(yīng)于X281的位置的殘基是H ； 對應(yīng)于X326的位置的殘基是A、D、L、S或T ; 對應(yīng)于X329的位置的殘基是N ； 對應(yīng)于X383的位置的殘基是I ; 對應(yīng)于X426的位置的殘基是H或Q ; 對應(yīng)于X451的位置的殘基是R ;并且 對應(yīng)于X489的位置的殘基是P。
15.如權(quán)利要求13所述的非天然存在的單加氧酶，其中所述氨基酸序列包括選自由以下組成的組的序列SEQ ID NO :4、6、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206 和 208。
16.如權(quán)利要求1-15任一項(xiàng)所述的非天然存在的單加氧酶，其中所述氨基酸序列包括以下特征的一個或多個 對應(yīng)于X15的位置的殘基是A; 對應(yīng)于X22的位置的殘基是A; 對應(yīng)于X32的位置的殘基是N; 對應(yīng)于X38的位置的殘基是E; 對應(yīng)于X39的位置的殘基是G; 對應(yīng)于X44的位置的殘基是E; 對應(yīng)于X59的位置的殘基是P; 對應(yīng)于X64的位置的殘基是R; 對應(yīng)于X74的位置的殘基是G; 對應(yīng)于X92的位置的殘基是N; 對應(yīng)于X107的位置的殘基是K ； 對應(yīng)于X114的位置的殘基是R ； 對應(yīng)于X123的位置的殘基是D ； 對應(yīng)于X143的位置的殘基是N或V ; 對應(yīng)于X144的位置的殘基是A ； 對應(yīng)于X146的位置的殘基是T或V ; 對應(yīng)于X149的位置的殘基是F、M、V或W ; 對應(yīng)于X155的位置的殘基是M ；對應(yīng)于X161的位置的殘基是A、V或D ; 對應(yīng)于X176的位置的殘基是D ； 對應(yīng)于X194的位置的殘基是E或S ; 對應(yīng)于X195的位置的殘基是G ； 對應(yīng)于X199的位置的殘基是P ； 對應(yīng)于X201的位置的殘基是N ； 對應(yīng)于X244的位置的殘基是V ； 對應(yīng)于X245的位置的殘基是G ；對應(yīng)于X272的位置的殘基是R ； 對應(yīng)于X312的位置的殘基是Q ； 對應(yīng)于X329的位置的殘基是N ； 對應(yīng)于X330的位置的殘基是S或G ; 對應(yīng)于X354的位置的殘基是A ； 對應(yīng)于X367的位置的殘基是E ； 對應(yīng)于X368的位置的殘基是N或V ; 對應(yīng)于X406的位置的殘基是D ； 對應(yīng)于X408的位置的殘基是A ； 對應(yīng)于X428的位置的殘基是L ； 對應(yīng)于X451的位置的殘基是R ； 對應(yīng)于X454的位置的殘基是I ; 對應(yīng)于X459的位置的殘基是K ； 對應(yīng)于X475的位置的殘基是A ； 對應(yīng)于X480的位置的殘基是N ； 對應(yīng)于X499的位置的殘基是G或R ; 對應(yīng)于X507的位置的殘基是F ； 對應(yīng)于X512的位置的殘基是N ； 對應(yīng)于X532的位置的殘基是P ;并且 對應(yīng)于X541的位置的殘基是G。
17.一種多核苷酸，所述多核苷酸編碼權(quán)利要求I至16任一項(xiàng)所述的多肽。
18.如權(quán)利要求17所述的多核苷酸，所述多核苷酸包括選自由以下組成的組的核苷酸序列SEQ ID NO :3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263 和 265。
19.一種表達(dá)載體,所述表達(dá)載體包括權(quán)利要求17所述的多核苷酸。
20.如權(quán)利要求19所述的表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包括控制序列。
21.一種宿主細(xì)胞，包括權(quán)利要求17的多核苷酸或權(quán)利要求19的表達(dá)載體。
22.如權(quán)利要求21所述的宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌(E.coli)。
23.—種將結(jié)構(gòu)式(I)的底物化合物轉(zhuǎn)化為式(II)的產(chǎn)物化合物的方法
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中Ar1是任選取代的苯基或吡啶基。
25.如權(quán)利要求23所述的方法，其中Ar2是任選取代的噻吩基、苯基或吡啶基。
26.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述輔因子是NADPH。
27.如權(quán)利要求23所述的方法，其中式(I)化合物是化合物(I)并且式(II)的產(chǎn)物化合物是化合物(2)，其中化合物(I)以大于SEQ ID NO 2單加氧酶速率的I. 5倍的速率被轉(zhuǎn)化為化合物(2)。
28.如權(quán)利要求23所述的方法，其中式(I)化合物是化合物(I)并且式(II)的產(chǎn)物化合物是化合物(2a)，其中化合物(2a)以對映異構(gòu)體過量形成。
29.如權(quán)利要求28所述的方法，其中所述多肽包括具有在SEQID NO :4、6、160、162、.164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、.202、204、206和208的任何一個中存在的相對于SEQ ID NO 2的一組氨基酸差異的氨基酸序列。
30.如權(quán)利要求28所述的方法，其中所述多肽包括選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO :4、6、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、.190、192、194、196、198、200、202、204、206 和 208。
31.如權(quán)利要求23所述的方法，其中式(I)化合物是化合物(I)并且式(II)的產(chǎn)物化合物是化合物(2b)，其中化合物(2b)以對映異構(gòu)體過量形成。
32.如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述多肽包括具有在SEQID NO :8、10、12、14、16、.18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、.68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、.114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、.152、154、156、158、210、212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、.240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264 和 266 的任何一個中存在的相對于SEQ ID NO :2的一組氨基酸差異的氨基酸序列。
33.如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述多肽包括選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO :8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、.50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、.100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、.138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、210、212、214、216、218、220、222、224、.226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、.264 和 266。
34.如權(quán)利要求31所述的方法，其中化合物(2b)以至少90%對映異構(gòu)體過量生成。
35.如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述多肽包括具有在SEQID NO : 10、12、14、16、.18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、.68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、.114、116、118、120、122、124、126，128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、.152、154、156、158、242、244、248、250、254、256、258、262 和 264 的任何一個中存在的相對于SEQ ID NO :2的一組氨基酸差異的氨基酸序列。
36.如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述多肽包括選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO :10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、.52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、.102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126，128、130、132、134、136、138、.140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、242、244、248、250、254、256、258、262 和.264。
37.如權(quán)利要求23所述的方法，其中式(II)化合物是選自以下的奧美拉唑類似物化合物(R)或(S)-蘭索拉唑、(R)或(S)-替那拉唑、(R)或(S)-雷貝拉唑、(R)或(S)-泮托拉唑、(R)或(S)-艾普拉唑、(R)或(S)-來明拉唑、(R)或(S)-沙維拉唑和(R)或(S)-TY-11345，并且式(I)化合物是相應(yīng)的吡美拉唑類似物化合物。
38.如權(quán)利要求23所述的方法，其中式⑴化合物是5-(二氟甲氧基)-2-((3，4-二甲氧基吡啶-2-基)甲硫基)-IH-苯并[d]咪唑，并且式(II)化合物是以對映異構(gòu)體過量生成的(S)-泮托拉唑。
39.如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述多肽包括具有在SEQID NO :70、72、76、78、.80、82、84、86、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、.126、128、130、228、232、244、248、256、258、260、262 或 264 的任何一個中存在的相對于 SEQID NO 2的一組氨基酸差異的氨基酸序列。
40.如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述多肽包括選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO :70、72、76、78、80、82、84、86、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、.112、114、116、118、120、122、126、128、130、228、232、244、248、256、258、260、262 和 264。
41.如權(quán)利要求23所述的方法，其中式(I)化合物是5-甲氧基-2-((4-甲氧基-3，5-二甲基吡啶-2-基)甲硫基)-IH-咪唑并[4，5-b]吡啶，并且式(II)化合物是以對映異構(gòu)體過量生成的(S)-替那拉唑。
42.如權(quán)利要求41所述的方法，其中所述多肽包括具有在SEQID NO :66、102、104、114、122、124、128、232、238、244、260、262 和 264 的任何一個中存在的相對于 SEQ ID NO 2的一組氨基酸差異的氨基酸序列。
43.如權(quán)利要求41所述的方法，其中所述多肽包括選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO :66、102、104、114、122、124、128、232、238、244、260、262 和 264。
44.如權(quán)利要求23所述的方法，其中式(I)化合物是2-((4-(3-甲氧基丙氧基)-3-甲基吡啶-2-基)甲硫基)-IH-苯并[d]咪唑，并且式(II)化合物是以對映異構(gòu)體過量生成的(S)-雷貝拉唑。
45.如權(quán)利要求44所述的方法，其中所述多肽包括具有在SEQID NO :62、76、84、86、124、238、240、250、258、262或264的任何一個中存在的相對于SEQ ID NO 2的一組氨基酸差異的氨基酸序列。
46.如權(quán)利要求44所述的方法，其中所述多肽包括選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO :62、76、84、86、124、238、240、250、258、262 和 264。
47.如權(quán)利要求23所述的方法，其中式(I)化合物是2-((3-甲基-4-(2，2，2-三氟乙氧基)吡啶-2-基)甲硫基)-IH-苯并[d]咪唑，并且式(II)化合物是以對映異構(gòu)體過量生成的(R)-蘭索拉唑。
48.如權(quán)利要求47所述的方法，其中所述多肽包括具有在SEQID NO :6中存在的相對于SEQ ID NO 2的一組氨基酸差異的氨基酸序列。
49.如權(quán)利要求47所述的方法，其中所述多肽包括SEQID NO :6的氨基酸序列。
50.如權(quán)利要求23至49任一項(xiàng)所述的方法，其中所述反應(yīng)條件包括25°C至40°C的溫度。
51.如權(quán)利要求23至49任一項(xiàng)所述的方法，其中所述反應(yīng)條件包括約8.5的pH至約10 的 pH。
52.如權(quán)利要求23至49任一項(xiàng)所述的方法，其中所述反應(yīng)條件包括大于大氣壓的O2分壓。
53.如權(quán)利要求23至49任一項(xiàng)所述的方法，其中所述反應(yīng)條件包括濃度約5mM至約50mM的磷酸鹽。
54.如權(quán)利要求23至49任一項(xiàng)所述的方法，其中所述輔因子是NADPH或NADH，并且所述方法還包括利用輔因子再生系統(tǒng)將從NADH或NADPH生成的NAD+或NADP+分別轉(zhuǎn)化為NADH 或 NADPH。
55.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述輔因子再生系統(tǒng)選自酮還原酶和醇、或葡萄糖脫氫酶和葡萄糖。
56.如權(quán)利要求55所述的方法，其中所述輔因子再生系統(tǒng)是酮還原酶和醇，其中所述醇是仲醇。
57.如權(quán)利要求56所述的方法，其中所述仲醇是異丙醇。
58.如權(quán)利要求23至57任一項(xiàng)所述的方法，所述方法在共溶劑存在下進(jìn)行。
59.如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述共溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇(IPA)、丙酮、甲苯、MeCN、甲基叔丁基醚(MTBE)、N-甲基_2_吡咯烷酮(NMP)、二甲基乙酰胺(DMAc)、二甲基甲酰胺(DMF)、丙二醇、聚乙二醇(PEG)、四甲基脲、N-乙基吡咯烷酮、四乙二醇二甲醚、1，3-二甲 基-3，4，5，6-四氫-2(1H)-嘧啶酮(DMPU)、DMIU、六甲基磷酰胺(HMPA)和二甲亞砜(DMSO)。
全文摘要
本公開涉及用于制備拉唑化合物的非天然存在的單加氧酶多肽、編碼所述多肽的多核苷酸和使用所述多肽的方法。
文檔編號C07K14/00GK102884178SQ201080054980
公開日2013年1月16日 申請日期2010年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月8日
發(fā)明者榮貴·彭, 邁克爾·D·克萊, 史蒂文·J·科利爾, 本杰明·米杰茨, 邁克爾·沃格爾, 張希云, 朱軍, 約瓦娜·納佐爾, 德里克·史密斯, 宋士瑋 申請人:科德克希思公司