專利名稱：一種丹參素衍生物及其制備方法和在藥學(xué)上的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬藥物合成領(lǐng)域，涉及丹參素衍生物的合成方法及在藥學(xué)上的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
中藥在我國(guó)歷史悠久，已有幾千年的歷史，其主要優(yōu)點(diǎn)為毒副作用小，但由于中藥有效成分的合成困難、復(fù)合制劑質(zhì)量的不穩(wěn)定和中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不易控制等方面原因，很大程度上限制了中藥的發(fā)展，因此中藥有效成分單體的制備以及以天然活性成份為先導(dǎo)化合物的合成和半合成化學(xué)藥物及成鹽衍生物，即中藥現(xiàn)代化，已成為現(xiàn)代中藥研究的主要方向。丹參素(化學(xué)名D-(+)-β-3，4-二羥基苯基乳酸)是中藥丹參中的一種主要有效成分，以丹參素為主要成分的多種中藥復(fù)合制劑如復(fù)方丹參注射液、復(fù)方丹參滴丸等已廣泛應(yīng)用于臨床。目前丹參素的來(lái)源主要是從中藥丹參中提取，現(xiàn)有技術(shù)公開(kāi)了消旋丹參素的化學(xué)合成方法，如薛芬等上海第一醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1983，10(2)，133-136.)以3，4-二羥基苯甲醛為原料，與N-乙酰甘氨酸縮合后水解再經(jīng)過(guò)Clemmensen還原的方法，合成獲得了丹參素的外消旋體。但是，由于丹參素結(jié)構(gòu)中有兩個(gè)極易被氧化的酚羥基，不宜利用直接拆分的方法對(duì)丹參素外消旋體進(jìn)行手性拆分來(lái)獲得天然的右旋丹參素。因此尋找新的丹參素的衍生物及其合成方法成為本領(lǐng)域研究人員的關(guān)注熱點(diǎn)。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新結(jié)構(gòu)的丹參素衍生物及其制備方法。
本發(fā)明的另一目的是提供所述的丹參素衍生物對(duì)缺血心肌的保護(hù)藥用用途。
本發(fā)明采用丹參素類(lèi)似物與硝基結(jié)合，獲得結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的丹參素衍生物。
本發(fā)明提供的丹參素衍生物具有下述I和II的結(jié)構(gòu)
其中R是低級(jí)烴基如甲基、乙基、丙基、異丙基、芐基等，低級(jí)?；绫；⒈郊柞；?。
上述化合物通過(guò)如下反應(yīng)流程制備合成
R可以是低級(jí)烴基如甲基、乙基、丙基、異丙基、芐基等，低級(jí)酰基如丙?；⒈郊柞；取?br> 上述步驟1R為亞甲基時(shí)，原料為3-(3，4-亞甲基二氧代苯基)-2-羥基丙酸，和乙酸、無(wú)水乙酐室溫下反應(yīng)，2-OH生成乙酰氧基，硝基位于苯環(huán)第6位上，得到化合物2-乙酰氧基-3-(6-硝基-3，4-亞甲基二氧代苯基)丙酸(1)。
步驟2R為亞甲基時(shí)，原料為3-(3，4-亞甲基二氧代苯基)-2-羥基丙酸，緩慢滴加入濃硫酸、濃硝酸混合酸中反應(yīng)，硝基位于苯環(huán)第6位上，得到化合物2-羥基-3-(6-硝基-3，4-亞甲基二氧代苯基)丙酸(2)。
本發(fā)明合成的化合物進(jìn)行了藥理活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，經(jīng)體外及體內(nèi)藥理實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，可降低心肌細(xì)胞LDH漏出率，升高細(xì)胞內(nèi)SOD活性，降低細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA的產(chǎn)生，對(duì)原代培養(yǎng)的缺血心肌細(xì)胞及急性和慢性心肌梗死均具有保護(hù)作用，并具有一定的抗HIV活性。。本化合物可作為原創(chuàng)性的抗心肌缺血類(lèi)藥物的創(chuàng)新藥物的先導(dǎo)化合物進(jìn)一步制備治療缺血性心臟病的藥物和抗HIV活性的藥物。



圖1是丹參素衍生物對(duì)缺氧心肌細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)漏出率的影響， 其中，各用藥組濃度分別為0.01umol/l、0.1umol/l、1umol/l，*與模型組比較，P＜0.05。
圖2是丹參素衍生物對(duì)缺氧心肌細(xì)胞內(nèi)超氧化物岐化酶(SOD)活性的影響， 其中，用藥組濃度為1umol/l，*與模型組比較，P＜0.05。
圖3是丹參素衍生物對(duì)缺氧心肌細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量的影響， 其中，用藥組濃度為1umol/l，*與模型組比較，P＜0.05。

具體實(shí)施例方式 通過(guò)下述各實(shí)施例將有助于進(jìn)一步理解本發(fā)明，但并不限制本發(fā)明的內(nèi)容。
本發(fā)明的制備方法可以進(jìn)一步用代表性的化合物制備過(guò)程體現(xiàn)如下 實(shí)施例1 按下述反應(yīng)流程，制備2-乙酰氧基-3-(6-硝基-3，4-亞甲基二氧代苯基)丙酸(1)
取原料3，4-甲叉氧基苯基乳酸0.5g，2.4mmol溶于6mL乙酸和1.5mL乙酐的混合液中，置冰浴中，濃硝酸1滴、乙酸21滴、乙酐21滴配成混合液，緩慢滴入反應(yīng)液中，冰水浴中反應(yīng)4小時(shí)，用石油醚/乙酸乙酯/乙酸(V/V/V)＝15∶15∶3為展開(kāi)劑，TLC紫外燈下顯示原料(Rf＝0.5)，反應(yīng)液中主產(chǎn)物點(diǎn)(Rf＝0.5)，浸磷鉬酸后原料能烤出褐色，兩個(gè)產(chǎn)物點(diǎn)烤出淡黃色，停止反應(yīng)，加入15mL水，用乙酸乙酯萃取，萃取液用水洗3次，無(wú)水硫酸鎂干燥，拌粗硅膠，柱層析分離純化，洗脫劑依次為石油醚/乙酸乙酯/乙酸(V/V/V)＝60∶20∶1，60∶30∶1，40∶40∶1，得到黃色固體200mg，為本化合物(1)，收率28％。HMBC顯示硝基應(yīng)位于苯環(huán)的6-位，mp 129℃。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.06(s，3H，2-OCOCH3)，3.29-3.34(m，1H，3-H)，3.65-3.70(m，1H，3-H)，5.33-5.36(m，1H，2-H)，6.12(s，2H，3’，4’-OCH2O)，6.79(s，1H，2’-H)，7.51(s，1H，5’-H).13C NMR(100MHz，CD3OD)δ20.464，34.592，103.031，106.011，111.467，127.295，143.625，147.367，151.528，170.152，174.191.MS(EI)m/z(％)297(M+，10.84)，249(9.24)，237(9.02)，191(100.00)，177(21.39)，164(53.79)，148(22.82)，136(43.39).HRMS calcd mass for C12H11NO8 297.0485，found 297.0474。
實(shí)施例2制備2-羥基-3-(6-硝基-3，4-亞甲基二氧代苯基)丙酸(2) 濃硝酸1mL和濃硫酸1.4mL配成混合酸溶液，置于冰水浴中，原料3，4-甲叉氧基苯基乳酸0.2g，0.95mmol溶于1mL丙酮，攪拌下緩慢滴加入混合酸中，滴加過(guò)程中冒黃煙，冰水浴中攪拌反應(yīng)10分鐘，以石油醚/乙酸乙酯/乙酸(V/V/V)＝10∶10∶2為展開(kāi)劑，TLC顯示紫外燈下原料(Rf＝0.7)，反應(yīng)液中有兩個(gè)產(chǎn)物點(diǎn)(Rf＝0.5，0.3)，停止反應(yīng)，將反應(yīng)液倒入20mL水中，乙酸乙酯萃取，萃取液干燥，過(guò)濾干燥劑，拌粗硅膠，柱層析分離純化，洗脫劑依次為石油醚/乙酸乙酯/乙酸(V/V/V)＝60∶20∶1，60∶30∶1，得到對(duì)應(yīng)于實(shí)施例1的產(chǎn)物點(diǎn)的固體(2)0.1g，收率41％，為化合物(2)，mp 168-170℃。1H NMR(400MHz，acetone-d6)δ3.09-3.15(m，1H，3-H)，3.50-3.55(m，1H，3-H)，4.43-4.46(m，1H，2-H)，6.21(s，2H，3’，4’-OCH2O)，7.02(s，1H，2’-H)，7.48(s，1H，5’-H).MS(EI)m/z(％)255(M+，40.91)，220(11.83)，180(100.00)，177(45.19)，164(42.48)，161(33.53)，149(60.53)，135(19.63)，121(41.19).HRMS calcd mass for C10H9NO7 255.0379，found 255.0376. 當(dāng)R低級(jí)烴基為甲基、乙基、丙基、異丙基或芐基時(shí)，低級(jí)?；鶠楸；虮郊柞；鶗r(shí)，可采用上述反應(yīng)流程合成制得相應(yīng)的產(chǎn)物。
實(shí)施例3丹參素衍生物對(duì)缺血心肌保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn) 按常規(guī)方法通過(guò)原代培養(yǎng)新生大鼠心肌細(xì)胞，建立心肌細(xì)胞缺氧模型。實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組不給于藥物干預(yù)，不缺氧缺糖，模型組不給于藥物干預(yù)，缺氧缺糖5h，用藥組分別給予藥物10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L，缺氧缺糖。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，正常對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)LDH為100％，各用藥組與缺氧組細(xì)胞內(nèi)LDH與正常對(duì)照組的差值為L(zhǎng)DH漏出率，與缺氧組比較，本發(fā)明的化合物可降低缺氧心肌細(xì)胞LDH漏出率(圖1)；與缺氧組比較，本發(fā)明的化合物能升高細(xì)胞內(nèi)SOD活性(圖2)，提高細(xì)胞內(nèi)超氧化物岐化酶(SOD)活性；與缺氧組比較，本發(fā)明中化合物能降低細(xì)胞內(nèi)MDA的含量(圖3)，可抑制細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物(MDA)的產(chǎn)生。
實(shí)施例4丹參素衍生物對(duì)急性心肌梗死和慢性心衰的保護(hù)實(shí)驗(yàn) 對(duì)急性心肌梗死的保護(hù)作用成年健康SD大鼠，預(yù)給藥1周，麻醉后開(kāi)胸，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，制備心肌梗死模型，術(shù)后繼續(xù)給藥兩天，處死，取血漿及心肌組織，檢測(cè)血漿中心肌酶如乳酸脫氫酶、肌酸激酶的活性，心肌組織勻漿，分別檢測(cè)梗死面積、炎性因子、抗氧化、抗凋亡等蛋白的基因及蛋白表達(dá)水平； 對(duì)慢性心衰的保護(hù)作用成年健康SD大鼠，制備心肌梗死模型，術(shù)后兩天存活的大鼠，隨機(jī)分組，連續(xù)給藥6周，處死，取血漿及心肌組織，檢測(cè)血漿中心肌酶如乳酸脫氫酶、肌酸激酶的活性，心肌組織勻漿，分別檢測(cè)炎性因子、抗氧化、抗凋亡等蛋白的基因及蛋白表達(dá)水平； 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明化合物能夠減小梗死面積，降低血清中心肌酶活性，并具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等作用，對(duì)急性心肌梗死和慢性心衰有保護(hù)作用。
權(quán)利要求
1、一種丹參素衍生物，其特征是具有下述I和II的結(jié)構(gòu)
其中R是低級(jí)烴基為甲基、乙基、丙基、異丙基或芐基，低級(jí)?；鶠楸；虮郊柞；?。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參素衍生物，其特征在于，當(dāng)R為亞甲基時(shí)，是具有下列結(jié)構(gòu)式的化合物1或2
3、權(quán)利要求2所述的丹參素衍生物的合成方法，其特征在于，按下述反應(yīng)流程，從3，4-甲叉氧基苯基乳酸出發(fā)，與乙酸、無(wú)水乙酐反應(yīng)或與濃硫酸、濃硝酸的混合酸反應(yīng)合成所述化合物1或2
4、權(quán)利要求1的丹參素衍生物在制備治療缺血性心臟病的藥物中的用途。
5、按權(quán)利要求4所述的用途，其中所述的缺血性心臟病是急性心肌梗死。
6、權(quán)利要求1的丹參素衍生物在制備抗HIV活性的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬藥物合成領(lǐng)域，涉及丹參素衍生物。本發(fā)明采用丹參素類(lèi)似物與硝基結(jié)合，獲得如上結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的丹參素衍生物。本發(fā)明化合物通過(guò)培養(yǎng)原代大鼠心肌細(xì)胞，建立心肌細(xì)胞缺氧模型及急性和慢性大鼠心肌梗死模型，體內(nèi)、外藥理實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，所述的化合物具有較好的保護(hù)缺氧心肌的作用并具有一定的抗HIV活性。本化合物可作為原創(chuàng)性的抗心肌缺血類(lèi)藥物的創(chuàng)新藥物的先導(dǎo)化合物進(jìn)一步制備治療缺血性心臟病的藥物和抗HIV活性的藥物。
文檔編號(hào)C07D317/62GK101607954SQ20081003916
公開(kāi)日2009年12月23日 申請(qǐng)日期2008年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月18日
發(fā)明者朱依諄, 洋 王, 董村南 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)