苯丁酸聯(lián)合三唑類抗真菌藥物的應(yīng)用及其產(chǎn)品的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及苯下酸聯(lián)合=挫類抗真菌藥物的應(yīng)用及其產(chǎn) 品。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著獲得性免疫缺陷綜合征患者的增多W及廣譜抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，器官移植 技術(shù)和導(dǎo)管技術(shù)等醫(yī)療技術(shù)的開展，侵襲性真菌感染的發(fā)病率和病死率也在逐年上升，侵 襲性念珠菌的發(fā)病率和致死率到達(dá)40%，在醫(yī)院獲得性血流感染中占據(jù)第四位。其中，白色 念珠菌(Candida a化icans，CA)是臨床真菌感染中常見的分離菌，通常用挫類抗真菌藥氣 康挫氣康挫（FluconazoIe,FLC)、伏立康挫（Voriconazole，VRC)、伊曲康挫（Itraconazole， ITC)治療。FLC作為安全、有效、價(jià)廉的挫類抗真菌藥物，臨床應(yīng)用非常廣泛，使得真菌的耐 藥率不斷增加，真菌感染的治療越來越困難。新藥研究與聯(lián)合用藥研究均是解決真菌耐藥 的途徑。其中，聯(lián)合用藥其前期投入少、效果顯著，受到國內(nèi)外的關(guān)注。聯(lián)合用藥研究包括兩 種抗真菌藥聯(lián)合及非抗真菌藥與抗真菌藥聯(lián)合，由于抗真菌藥物品種有限，新的抗真菌作 用價(jià)格昂貴且副作用明顯，使得非抗真菌藥物與抗真菌藥物的聯(lián)合應(yīng)用研究備受關(guān)注。因 此，選擇非抗真菌藥物與化C的聯(lián)用成為近年來研究的熱點(diǎn)。
[0003] 組蛋白去乙酷化酶抑制劑具有多種藥理作用，其研究目前備受關(guān)注。組蛋白去乙 酷化酶抑制劑按照其結(jié)構(gòu)分為四類:脂肪酸，如丙戊酸，臨床用作抗癒痛藥物;氧目虧酸鹽，曲 古抑菌素A;環(huán)膚，如天然產(chǎn)物縮酪酸膚FK-228、制曬菌素和環(huán)氧朽酸;苯酷胺類，如MS-275、 MGCD0103。各類組蛋白去乙酷化酶抑制劑來源不同，結(jié)構(gòu)相差較大，藥理作用不同。其中，曲 古抑菌素A來源于鏈霉菌屬的抗生素，是一種有效的、非競爭性可逆的組蛋白去乙酷化酶抑 制劑，用于抗腫瘤研究；制曬菌素是鑲刀菌代謝產(chǎn)物，屬環(huán)四膚類分子，具有廣譜抗頂復(fù)亞 口原蟲和廣譜抗腫瘤作用；下酸鋼廣泛用于畜禽飼料添加劑。Smith,W丄.，and Edlind, T.D.2002.Histone deacetylase inhibitors enhance Candida albicans sensitivity to azoles and related antifungals:correlation with reduction in CDR and ERG upregulation.Antimicrob Agents Qiemother 46(11) :3532-3539.,公開了組蛋白去乙酷 化酶抑制劑（曲古抑菌素A、制曬菌素與下酸鋼)與挫類聯(lián)用(氣康挫、伊曲康挫和咪康挫)合 用，可增強(qiáng)抗敏感白色念珠菌的作用。
[0004] 苯下酸(Pheny化Utyric acid,PBA)的鋼鹽苯下酸鋼，是一種I和IIa組蛋白去乙酷 化酶抑制劑，屬于含有苯環(huán)的脂肪酸鹽，已被FDA批準(zhǔn)用于治療所有新生兒酶缺乏（出生后 28d內(nèi)表現(xiàn)為完全酶缺乏的）、有高血氨性腦病家族史的遲發(fā)性酶缺乏（出生的第一個(gè)月后 表現(xiàn)為部分酶缺乏）的患者。可輔助治療因氨基甲酯憐酸合成酶(CPS)、鳥氨酸氨甲酯基轉(zhuǎn) 移酶(OTC)或精氨基班巧酸合成酶(AS)缺乏而致的慢性尿素循環(huán)素亂導(dǎo)致的高氨血癥。關(guān) 于其抗腫瘤研究是現(xiàn)在研究的熱點(diǎn)，腦腫瘤研究處于II期臨床試驗(yàn)中，苯下酸鋼還被用于 探索在卵巢癌，膜島素抵抗，囊性纖維化及楓糖漿尿病治療中的作用。
[0005] 苯下酸鋼是前體藥物，在體內(nèi)可迅速代謝成苯乙酸鹽，苯乙酸鹽是相對無毒的抗 腫瘤藥物。目前的研究多集中在其作為一種組蛋白去乙酷化抑制劑誘導(dǎo)癌細(xì)胞調(diào)亡、抑制 癌細(xì)胞增殖等方面。另外研究表明，苯下酸(Pheny化Utyric acid,PBA)具有抗革蘭氏陽性 菌和陰性菌作用，對于其是否具有抗真菌作用，尚無報(bào)道。
[0006] 雖然已有研究表明曲古抑菌素A、制曬菌素和下酸鋼可增強(qiáng)抗敏感白色念珠菌的 作用，但由于不同的組蛋白去乙酷化酶抑制劑藥理作用相差較大，且尚無抗真菌耐藥研究 報(bào)道，因此，從上述文獻(xiàn)中不能推斷出苯下酸是否能逆轉(zhuǎn)挫類抗真菌藥對耐藥白色念珠菌 的敏感性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的就是為了克服目前真菌感染和=挫類抗真菌藥物耐藥率增加問題， 提供一種苯下酸聯(lián)合=挫類抗真菌藥物的應(yīng)用及其產(chǎn)品。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0009] 苯下酸聯(lián)合=挫類抗真菌藥物在制備抗真菌產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述產(chǎn)品為藥品。
[0010] 所述應(yīng)用為苯下酸聯(lián)合氣康挫、伊曲康挫或伏立康挫中的兩種或=種在制備抗真 菌產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0011] 優(yōu)選:所述應(yīng)用為苯下酸聯(lián)合氣康挫、伊曲康挫或伏立康挫在制備抗真菌產(chǎn)品中 的應(yīng)用。
[0012] 優(yōu)選:所述真菌為白色念珠菌。
[0013] 優(yōu)選:聯(lián)合應(yīng)用時(shí)苯下酸與氣康挫的最低抑菌濃度為:3化g/ml與化g/ml;
[0014] 聯(lián)合應(yīng)用時(shí)苯下酸與伊曲康挫的最低抑菌濃度為:3化g/ml與0.12化g/ml;
[0015] 聯(lián)合應(yīng)用時(shí)苯下酸與伏立康挫的最低抑菌濃度為：1化g/ml與0.25iig/ml。
[0016] 結(jié)果表明，大于32μg/ml的苯下酸與大于化g/ml的氣康挫聯(lián)合應(yīng)用或者大于32蛇/ ml的苯下酸與大于0.12扣g/ml的伊曲康挫聯(lián)合應(yīng)用或者大于16iig/ml的苯下酸與大于0.25 μg/ml的伏立康挫聯(lián)合應(yīng)用均有強(qiáng)的協(xié)同抗耐藥白色念珠菌作用。
[0017] -種抗真菌產(chǎn)品，W苯下酸聯(lián)合氣康挫、伊曲康挫或伏立康挫為主要活性成分，所 述苯下酸與氣康挫聯(lián)合時(shí)的有效濃度配比為氣康挫：苯下酸= 1:32,所述苯下酸與伊曲康 挫聯(lián)合時(shí)的有效濃度配比為伊曲康挫：苯下酸=1:256，所述苯下酸與伏立康挫聯(lián)合時(shí)的有 效濃度配比為伏立康挫：苯下酸=1:64;苯下酸與氣康挫聯(lián)合時(shí)的最低抑菌濃度為:3化g/ ml與化g/ml，苯下酸與伊曲康挫聯(lián)合時(shí)的最低抑菌濃度為：3化g/ml與0.12化g/ml，苯下酸 與伏立康挫聯(lián)合時(shí)的最低抑菌濃度為16iig/ml與0.25iig/ml。
[0018] 本研究系統(tǒng)評價(jià)了苯下酸與=挫類抗真菌藥物的聯(lián)合抗真菌作用，受試菌株是耐 藥白色念珠菌，測定方法采用微量稀釋法與動(dòng)態(tài)殺菌曲線法，其微量稀釋法測得的結(jié)果W 基于兩種理論即Loewe additivity (LA)理論與BI理論的最低抑菌濃度分?jǐn)?shù)法(FICI)與生 長率差值法（AE)進(jìn)行評價(jià)。由此可見，研究苯下酸聯(lián)合=挫類抗真菌藥物對耐藥白色念珠 菌的作用，不僅具有創(chuàng)新性，且經(jīng)過多種方法的系統(tǒng)評價(jià)，能夠明確二者聯(lián)合在抗真菌耐藥 中的作用，W期發(fā)現(xiàn)對抗耐藥真菌感染的方法與手段，并且PBA是重要的藥物合成中間體， 來源廣泛，價(jià)格低廉，若有抗真菌作用，將具有重要的意義。且苯下酸單用具有抗念珠菌作 用。
[0019] 本發(fā)明采用耐藥白色念珠菌細(xì)胞進(jìn)行研究，利用棋盤肉湯微量稀釋法，分別評價(jià) 不同聯(lián)合用藥組合的聯(lián)合抗真菌作用。具體內(nèi)容如下：
[0020] A:苯下酸與S挫類抗真菌藥物聯(lián)合抗耐藥CA作用:采用棋盤肉湯微量稀釋法測定 聯(lián)合用藥時(shí)最低有效濃度，WFICI法選擇最佳藥物組合濃度及評價(jià)藥物聯(lián)合用藥的作用。 此外，為更直觀地表現(xiàn)聯(lián)合用藥對耐藥CA作用的程度，將聯(lián)合藥敏測定數(shù)據(jù)用生長百分?jǐn)?shù) 差值模型（AE)進(jìn)行了進(jìn)一步分析。
[0021] B:苯下酸現(xiàn)在越來越多的用于臨床研究，如果能在抗真菌方面發(fā)揮作用，特別是 對耐藥真菌感染的治療，意義重大。本研究表明，苯下酸聯(lián)合應(yīng)用=挫類抗真菌藥物可產(chǎn)生 協(xié)同抗耐藥CA作用，可擴(kuò)大其應(yīng)用范圍，具有良好的應(yīng)用前景。
[0022] 總之，本發(fā)明包含苯下酸與S挫類抗真菌藥物聯(lián)合應(yīng)用產(chǎn)生協(xié)同抗耐藥CA的作 用。上述發(fā)現(xiàn)為臨床聯(lián)合用藥作為治療耐藥真菌感染的方案提供了思路。
[0023] 發(fā)明人從文獻(xiàn)閱讀中發(fā)現(xiàn)，苯下酸具有抗革蘭氏陽性菌和陰性菌的作用，發(fā)明人 通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)苯下酸也具有抗真菌的作用，特別是與=挫類抗真菌藥物聯(lián)用時(shí)具有明 顯的協(xié)同抗真菌作用。苯下酸與S挫類抗真菌藥物聯(lián)合應(yīng)用在體外均具有協(xié)同抗耐藥CA作 用，且效果明顯。低劑量的苯下酸可使氣康挫對耐藥CA的MIC值從51化g/ml W上降至Iiig/ ml，使伊曲康挫對耐藥CA的MIC值從祉g/ml降到0.12扣g/ml，使伏立康挫的MIC值從祉g/ml 降到0.25μg/ml，因此，苯下酸除具有抗革蘭氏陽性菌和陰性菌作用，還能對增強(qiáng)S挫類抗 真菌藥物對真菌細(xì)胞的抗菌作用、使其在抗感染領(lǐng)域有新的用途。
[0024] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有W下優(yōu)點(diǎn)與效果：
[0025] 1.本發(fā)明表明，苯下酸與=挫類抗真菌藥物聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，可W增強(qiáng)=挫類抗真菌 藥物對耐藥CA的抗菌活性，可W產(chǎn)生協(xié)同抗真菌作用，并能夠逆轉(zhuǎn)耐藥CA對氣康挫的耐藥 性，為新藥的開發(fā)及老藥新用提供了研究方向。對化CJTC、VRC共同耐藥的CA(MIC含51化g/ ml )，聯(lián)合用藥可使其最低抑菌濃度明顯降低，32iig/ml的PBA與化g/ml的FLC合用，3化g/ml 的PBA與0.12扣g/ml的ITC合用，及16iig/ml的PBA與0.25iig/ml的VRC聯(lián)合應(yīng)用，均可W殺滅 80 % W上的真菌，濃度再增大，效果更強(qiáng)。
[0026] 2.苯下酸在臨床上的廣泛應(yīng)用，苯下酸對=挫類抗真菌藥物的抗真菌的增效作 用，可擴(kuò)大其應(yīng)用范圍，并且降低化C、ITC、VRC的最低有效抑菌濃度，降低抗真菌藥物的用 藥量，從而降低藥物的不良反應(yīng)的發(fā)生，克服臨床上真菌耐藥問題。
[0027] 3.真菌耐藥機(jī)制及其復(fù)雜，尚有許多機(jī)制仍不是很清楚，如能將苯下酸對=挫類 抗真菌藥物的增敏機(jī)制研究透徹，必定能為克服真菌耐藥問題提供新的思路。
【附圖說明】
[00%]圖1為A E法評價(jià)氣康挫聯(lián)合苯下酸應(yīng)用協(xié)同抗耐藥白色念珠菌作用結(jié)果的=維 圖;FLC:氣康挫，PBA:苯下酸，X軸代表化C的濃度，Y軸代表苯下酸的濃度，Z軸代表的是各個(gè) 藥物組合下的AE值，高于或低于平面（AE = O)的值分別表示協(xié)同或括抗作用，平面周圍的 值表示無關(guān)作用，圖