蟛蜞菊內(nèi)酯的制藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及蟛蜞菊內(nèi)酯的制藥用途，尤其是在制備抑制血管新生內(nèi)膜增生藥物及抗動(dòng)脈粥樣硬化藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]冠狀動(dòng)脈旁路移植、心臟支架等手術(shù)因能有效地緩解冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病患者心絞痛、心梗等癥狀并延長(zhǎng)壽命而在世界范圍內(nèi)廣泛應(yīng)用，但手術(shù)過(guò)程不可避免地造成血管內(nèi)皮損傷，血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth musclecell，VSMC)增殖迀移和細(xì)胞外基質(zhì)的堆積導(dǎo)致血管新生內(nèi)膜增生，從而引起隨后的動(dòng)脈粥樣硬化，這個(gè)過(guò)程所致的血管狹窄嚴(yán)重影響遠(yuǎn)期療效。VSMC異常增殖和迀移是導(dǎo)致血管病變的主要原因，直接導(dǎo)致各種手術(shù)后血管新生內(nèi)膜增生和再狹窄的發(fā)生。
[0003]膨蜞菊內(nèi)酯是墨旱蓮(Eel ipta prostrata L.)、金盞膨蜞菊(Wede I iacalendulacea)等植物中存在的一種天然內(nèi)酯類(lèi)化合物，具有多方面的藥理作用，如保肝、抗蛇毒、抗免疫抑制、抗炎等。但蟛蜞菊內(nèi)酯在制備抑制血管新生內(nèi)膜增生藥物方面的用途暫未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供了蟛蜞菊內(nèi)酯的制藥用途，尤其是在制備抑制血管新生內(nèi)膜增生藥物及抗動(dòng)脈粥樣硬化藥物中的用途。
[0005]本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案之一是:
[0006]蟛蜞菊內(nèi)酯在制備抑制血管新生內(nèi)膜增生藥物中的用途。
[0007]一實(shí)施例中:所述抑制血管新生內(nèi)膜增生是指抑制由血小板衍生生長(zhǎng)因子PDGF引起的血管平滑肌細(xì)胞VSMC的增殖。
[0008]一實(shí)施例中:所述抑制由血小板衍生生長(zhǎng)因子TOGF引起的血管平滑肌細(xì)胞VSMC的增殖是指抑制血管平滑肌細(xì)胞VSMC從細(xì)胞周期的G0/G1期到S期的轉(zhuǎn)變。
[0009]一實(shí)施例中:所述抑制血管新生內(nèi)膜增生是指抑制由血小板衍生生長(zhǎng)因子PDGF引起的血管平滑肌細(xì)胞VSMC的迀移。
[0010]—實(shí)施例中:所述抑制血管新生內(nèi)膜增生是指抑制增殖激活抗原PCNA的表達(dá)。
[0011]本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案之二是:
[0012]蟛蜞菊內(nèi)酯在制備防治動(dòng)脈粥樣硬化藥物中的用途。
[0013]—實(shí)施例中:所述防治動(dòng)脈粥樣硬化是指抑制血管新生內(nèi)膜增生。
[0014]一實(shí)施例中:所述抑制血管新生內(nèi)膜增生是指抑制由血小板衍生生長(zhǎng)因子PDGF引起的血管平滑肌細(xì)胞VSMC的增殖和/或迀移。
[0015]本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案之三是:
[00? 6]上述膨蜞菊內(nèi)酯的劑量，為3?60mg/kg。
[0017]上述蟛蜞菊內(nèi)酯包括蟛蜞菊內(nèi)酯單體，蟛蜞菊內(nèi)酯單體的臨床上可接受的鹽，蟛蜞菊內(nèi)酯單體的臨床上可接受的制劑，含有蟛蜞菊內(nèi)酯單體的復(fù)方藥物組合物、其臨床上可接受的鹽及其臨床上可接受的制劑。
[0018]本發(fā)明所指的臨床上可接受的鹽意指能保留蟛蜞菊內(nèi)酯單體或含有蟛蜞菊內(nèi)酯的復(fù)方藥物組合物的性質(zhì)和生物學(xué)有效性的鹽，包括與無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸形成的酸加成鹽；所述無(wú)機(jī)酸例如鹽酸、氫溴酸、硝酸、磷酸、硫酸、高氯酸等;所述有機(jī)酸例如乙酸、抗壞血酸、三氟乙酸、丙酸、羥乙酸、(D)或(L)乳酸、(D)或(L)蘋(píng)果酸、草酸、富馬酸、馬來(lái)酸、甲磺酸、乙磺酸、苯甲酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸、肉桂酸、扁桃酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸、羥乙磺酸和丙二酸等。
[0019]本發(fā)明所指的臨床上可接受的制劑，包括口服制劑、注射制劑等，所述口服制劑包括但不限于片劑、膠囊劑、口服液、顆粒劑、丸劑、散劑、滴丸劑等。
[0020]本技術(shù)方案與【背景技術(shù)】相比，它具有如下優(yōu)點(diǎn):
[0021]本發(fā)明提供了蟛蜞菊內(nèi)酯在抑制血管新生內(nèi)膜增生中的作用證據(jù)，且這種作用主要是通過(guò)抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和迀移實(shí)現(xiàn)的，為蟛蜞菊內(nèi)酯制備抑制血管新生內(nèi)膜增生藥物及抗動(dòng)脈粥樣硬化藥物提供了研究思路，并有望應(yīng)用于由冠脈成形術(shù)、支架植入術(shù)等手術(shù)及飲食不當(dāng)?shù)榷喾N原因引起的血管新生內(nèi)膜增生和動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防和治療。
【附圖說(shuō)明】
[0022]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
[0023]圖1a為蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)球囊損傷造成的大鼠血管新生內(nèi)膜增生的影響，為血管冷凍切片HE染色示意圖。
[0024]圖1b為蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)球囊損傷造成的大鼠血管新生內(nèi)膜增生的影響，為圖1a的量化圖，即新生內(nèi)膜面積(neointima)與中層平滑肌(media)面積比值的統(tǒng)計(jì)圖。###表示與假手術(shù)組(Sham)相比，模型組(M)p<0.001;***表示與模型組相比，p<0.001。
[0025]圖2a為蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)球囊損傷造成的大鼠血管中增殖激活抗原(PCNA)的影響，為血管的western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。
[0026]圖2b為蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)球囊損傷造成的大鼠血管中增殖激活抗原(PCNA)的影響，為圖2a的量化圖，即PCNA與內(nèi)參GAPDH的灰度比值統(tǒng)計(jì)圖。###表示與假手術(shù)組(Sham)相比，模型組(M)p<0.001;*和#表示與模型組相比，p<0.05以及p<0.01。
[0027]圖3為蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)TOGF誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞數(shù)量變化的影響，###表示與對(duì)照組(c)相比，誘導(dǎo)組(pdgf )p<0.001 ;***表示與模型組相比，p<0.001。
[0028]圖4為蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)TOGF誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞周期變化的影響，其中圖4a為對(duì)照組(c)，圖4b為I3DGF誘導(dǎo)組(I3DGF)，圖4c為WDL保護(hù)組(WDL5)，圖4d為WDL保護(hù)組(WDLlO)，圖4e為WDL保護(hù)組(WDL20)，圖4f為WDL保護(hù)組(WDL40)。
[0029]圖5a為蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)TOGF誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞迀移的影響，為T(mén)OGF加入前(即Oh)，圖中橫線表示空白區(qū)域的寬度。
[0030]圖5b為蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)TOGF誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞迀移的影響，為T(mén)OGF加入12h時(shí)，圖中橫線表示空白區(qū)域的寬度。
【具體實(shí)施方式】
[0031]下面通過(guò)實(shí)施例具體說(shuō)明本發(fā)明的內(nèi)容:
[0032]實(shí)施例1蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)球囊損傷造成的大鼠血管新生內(nèi)膜增生以及動(dòng)脈粥樣硬化的抑制作用
[0033]采用球囊損傷造成的大鼠新生內(nèi)膜增生和動(dòng)脈粥樣硬化模型，觀察蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)模型大鼠的損傷側(cè)頸總動(dòng)脈的新生內(nèi)膜增生的影響。
[0034]實(shí)驗(yàn)具體方法步驟如下:
[0035]I)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和試劑
[0036]大鼠40只，雄性、均重240_260g，購(gòu)自廈門(mén)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
[0037]蟛蜞菊內(nèi)酯，購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司。
[0038]2)動(dòng)物處理方法
[0039]大鼠飼養(yǎng)環(huán)境:溫度23± 1°C，濕度:40%-60%，自然光照，自由飲水，自由進(jìn)食。適應(yīng)I周后，隨機(jī)分為5組，每組8只，分別記為假手術(shù)組(記為sham組)、球囊損傷組(記為M組或model組)、蟛蜞菊內(nèi)酯低劑量組(記為WDLl組)、蟛蜞菊內(nèi)酯中劑量組(記為WDL2組)、蟛蜞菊內(nèi)酯高劑量組(記為WDL3組)。
[0040]進(jìn)行球囊損傷手術(shù):動(dòng)物用水合氯醛麻醉后，做正中切口，分離左側(cè)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)和頸外動(dòng)脈，從頸外動(dòng)脈作一切口，插入2F球囊導(dǎo)管大約5cm，充入去離子水?dāng)U張球囊，回拉導(dǎo)管損傷頸總動(dòng)脈，反復(fù)損傷三次。撤去導(dǎo)管，結(jié)扎頸外動(dòng)脈，進(jìn)行頸部皮膚縫合。
[0041 ]球囊損傷后第二天開(kāi)始給藥。按照下述方法給藥:
[0042]假手術(shù)組和球囊損傷組:每日于下午14時(shí)給予飼料前給予生理鹽水，方式:灌胃。
[0043]WDLI組:每日于下午14時(shí)給予飼料前給藥一次，劑量5mg/kg，方式:灌胃。
[0044]WDL2組:每日于下午14時(shí)給予飼料前給藥一次，劑量25mg/kg，方式:灌胃。
[0045]WDL3組:每日于下午14時(shí)給予飼料前給藥一次，劑量50mg/kg，方式:灌胃。
[0046]按照上述方法連續(xù)給藥2周后，所有動(dòng)物生理鹽水灌流，取損傷側(cè)頸總動(dòng)脈，一部分多聚甲醛固定，制作冰凍切片，HE染色；另一部分粉碎、超聲、提取蛋白，進(jìn)行westernblot實(shí)驗(yàn)。
[0047]統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:用數(shù)據(jù)米用GraphpadPrism 5軟件(GraphPad Software Inc ,USA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較用單因素方差分析，當(dāng)方差分析差異有顯著性時(shí)，進(jìn)一步用t檢驗(yàn)作兩兩比較。
[0048]3)結(jié)果與分析
[0049]3.1)蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)血管新生內(nèi)膜增生的影響，結(jié)果如圖1a與圖1b所示，該結(jié)果表明:
[0050]①球囊損傷后，血管新生內(nèi)膜明顯增生，說(shuō)明造模成功。
[0051 ] ②中劑量(WDL2組/WDL 25mg/kg)和高劑量(WDL3組/WDL 50mg/kg)的蟛蜞菊內(nèi)酯治療組與球囊損傷模型組(M/model組)相比，血管新生內(nèi)膜增生明顯減少，均具有顯著性差異，說(shuō)明蟛蜞菊內(nèi)酯對(duì)于