酸新霉素的重量 比為1 : (0.5-1);當(dāng)藥物活性成分B為新魚腥草素鈉時，所述利福昔明與新魚腥草素鈉的 重量比為1 : (0.1-0. 2);當(dāng)藥物活性成分B為硫酸新霉素和新魚腥草素鈉的組合時，所述 利福昔明、硫酸新霉素和新魚腥草素鈉的重量比為1 : (1-3) : 0.4。
[0020] 所述利福昔明、新魚腥草素鈉均經(jīng)過超微粉碎處理。所述利福昔明、新魚腥草素鈉 的顆粒粒徑均為：90%顆粒粒徑在10 μ m以下，且不得有粒徑大于25 μ m顆粒。
[0021] 所述高分子阻滯劑選自聚乙烯醇、聚維酮K30、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥 乙纖維素、羧甲基纖維素鈉、卡波姆、透明質(zhì)酸、黃原膠、殼聚糖、羧甲基殼聚糖、海藻酸鈉、 磷脂等中的任意一種或多種。
[0022] 所述抑菌劑選自對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥 基苯甲酸丁酯、三氯叔丁醇、苯酚、苯甲醇、苯乙醇、醋酸洗必泰、苯扎溴銨、苯扎氯銨、苯甲 酸鈉、山梨酸鉀、硫柳汞、度米芬、硼酸、硝酸苯汞、桉葉油、麝香草酚、山梨酸鉀等中的任意 一種或多種。
[0023] 所述pH調(diào)節(jié)劑選自氫氧化鈉、氨水、碳酸鈉、碳酸氫鈉、酒石酸或其鈉鹽、乳酸、醋 酸或其鈉鹽、枸櫞酸或其鈉鹽、硼酸或其鈉鹽、磷酸鹽緩沖液等中的任意一種或多種。
[0024] 本發(fā)明所述含利福昔明的乳房注入用原位凝膠的制備方法，包括以下步驟：
[0025] (a)、按照處方量稱取各組分；(b)、取處方量的抑菌劑，用占處方量60-97%的注 射用水溶解，再將處方量的溫敏性凝膠基質(zhì)和高分子阻滯劑撒在液面上，在溫度〇-i〇°c下 冷藏直至得到無團塊、分散均勻的溶液A ;(b)將處方量的以分散形式存在的藥物活性成分 和處方量的以包合物形式存在的藥物活性成分加入到溶液A中，攪拌致分散均勻，采用pH 調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH為5. 5~7. 5,加入余量的注射用水，即得含利福昔明的乳房注入用原位凝 膠。
[0026] 優(yōu)選的，步驟（2)中，取處方量的抑菌劑，用占處方量85-97%的注射用水溶解，再 將處方量的溫敏性凝膠基質(zhì)和高分子阻滯劑撒在液面上，在溫度4°C下冷藏直至得到無團 塊、分散均勻的溶液A。
[0027] 本發(fā)明中，以分散形式存在的藥物活性成分是指在含利福昔明的乳房注入用原位 凝膠以分散形式存的藥物活性成分；以包合物形式存在的藥物活性成分是指在含利福昔明 的乳房注入用原位凝膠將以環(huán)糊精包合物形式存的藥物活性成分。
[0028] 本發(fā)明的有益效果：
[0029] (1)本發(fā)明含利福昔明或系列含利福昔明的組合物乳房注入用原位凝膠，以水為 溶媒，不含任何有機溶媒，生物相容性好，刺激性小，安全性高，更適于乳房注入使用；以溫 敏型原位凝膠為載體，使其在儲存條件下以液體狀態(tài)存在，注入乳房后，受乳房內(nèi)溫度刺激 在32 °C~37 °C、4~15秒內(nèi)完全形成柔軟、潤滑的藥物貯庫凝膠，給藥方便，黏附性強，且藥 物活性成分少部分直接分散在凝膠基質(zhì)中，大部分制備成緩釋的包合物后分散在基質(zhì)中， 一方面起到雙重緩釋效果，另一方面意外發(fā)現(xiàn)包合物能增強凝膠強度，減緩凝膠溶蝕，持效 時間更長，緩釋效果顯著，體外釋藥時間長達48d，可以在整個干乳期內(nèi)有效治療和防控奶 牛乳房炎，實現(xiàn)一個療程給藥一次目的，減少了給藥次數(shù)，節(jié)省人力物力，提高動物順應(yīng)性； (2) 利福昔明與硫酸新霉素、新魚腥草素鈉聯(lián)用，彌補了利福昔明單方抗菌譜局限的缺陷， 且意外發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥產(chǎn)生了協(xié)同作用，大大增強了抗菌作用，又能減少細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生； (3) 利福昔明、硫酸新霉素和新魚腥草素鈉組合，增加了抗炎、鎮(zhèn)痛、促進組織修復(fù)和增強免 疫力的多重功效，對動物乳房炎的防治效果優(yōu)良；(4)本發(fā)明提供的系列乳房注入用原位 凝膠，制備簡單，克服了微球、脂質(zhì)體、膠束等工藝復(fù)雜，工業(yè)化生產(chǎn)困難的缺陷。
【附圖說明】
[0030] 圖1為本發(fā)明含利福昔明的乳房注入用原位凝膠的體外釋放度曲線。
【具體實施方式】
[0031] 下面通過【具體實施方式】對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步說明。
[0032] 實施例1 :體外抑菌試驗
[0033] (1)試驗材料
[0034] 藥品：利福昔明、硫酸新霉素、溶菌酶、新魚腥草素鈉
[0035] 菌株：臨床分離金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和無乳鏈球菌的耐藥株，普通瓊脂培 養(yǎng)基（自制）、普通肉湯培養(yǎng)基（自制）。
[0036] (2)試驗方法
[0037] 以DMS0為溶劑分別制備2%的利福昔明溶液和0. 2%新魚腥草素鈉溶液，以注射 用水為溶劑分別制備2%的硫酸新霉素溶液。
[0038] 將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和鏈球菌懸液接種于瓊脂培養(yǎng)基上，置于37°C培養(yǎng) 箱中培養(yǎng)24-48h，挑取長出的菌落于加有2mL滅菌普通肉湯培養(yǎng)基的試管中，用滅菌的生 理鹽水適當(dāng)稀釋至含菌量為1. 5X108個/mL。無菌操作，用滅菌的棉棒蘸取菌液，在試管內(nèi) 壁的液面上方旋轉(zhuǎn)緊壓，將多余菌液擠去，然后在瓊脂培養(yǎng)基表面均勻涂抹接種3次，每次 旋轉(zhuǎn)平板60度以確保接種菌的分布均勻，（瓊脂培養(yǎng)基使用前先在37°C溫箱中放置lh)， 每管菌液用一個棉棒。室溫放置5min使其稍干燥，在每個平皿中以等距離均勻安置不銹鋼 小管（內(nèi)徑為6. 0mm)。在小管中分別滴注被檢藥物溶液50 μ L(被檢測藥物溶液中藥物活 性成分的濃度如表1所示），將培養(yǎng)基倒置放于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24h，觀察抑菌圈的大 小，并用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈的直徑，每個抑菌圈測量3次，取平均值。正常對照組以生理 鹽水：DMS0(1:1)代替被檢藥物溶液作相同處理。
[0039] 表1體外抑菌試驗結(jié)果（η 土 SD)

[0042] 注：同列數(shù)據(jù)后的不同小寫字母表示差異顯著（P〈0. 05)，相同小寫字母表示差異 不顯著（P>0. 05)
[0043] 由表1體外抑菌試驗結(jié)果可見，利福昔明聯(lián)合硫酸新霉素、利福昔明聯(lián)合新魚腥 草素鈉使用對導(dǎo)致奶牛乳房炎的3種主要病原菌的抑菌圈直徑都顯著大于利福昔明、硫酸 新霉素、新魚腥草素鈉單獨使用時的抑菌圈直徑（P〈〇. 05)，同時利福昔明、硫酸新霉素和新 魚腥草素鈉三者聯(lián)合使用的抑菌圈直徑更是顯著大于利福昔明與硫酸新霉素或新魚腥草 素鈉兩者聯(lián)合使用的抑菌圈直徑（P〈〇. 05)，顯示利福昔明和硫酸新霉素、利福昔明和新魚 腥草素鈉、及三者聯(lián)合應(yīng)用對抗奶牛乳房炎的3中主要病原菌呈現(xiàn)協(xié)同作用?；谝志?果差異顯著時選擇抑菌效果優(yōu)的的配比，差異不顯著時優(yōu)選藥物濃度低的配比的原則，因 此不同組合抑菌效果比較顯示：利福昔明與硫酸新霉素組合物較佳配比為（1 : 1);利福昔 明與新魚腥草素鈉較佳配比為（1 : 0.2);利福昔明、硫酸新霉素和新魚腥草素鈉組合物較 佳配比為（0. 5 : 1 : 0. 2)。
[0044] 實施例2 :
[0045] 利福昔明環(huán)糊精包合物
[0046] 處方
[0047] 利福昔明 100g
[0048] 乙基-β _環(huán)糊精190g
[0049] 50% 乙醇水溶液 1800mL。
[0050] 制備方法：(a)、將利福昔明超微粉碎，控制90 %的顆粒粒徑在5 μ m以內(nèi)，且不得 有粒徑大于10 μπι顆粒；(b)、將100g利福昔明和190g乙基-β -環(huán)糊精放入研磨機中，加入 900mL50 %乙醇水溶液，研磨30分鐘；（c)、再加入余下的900mL50 %乙醇水溶液，攪拌4h，噴 霧干燥，過300目篩，即得利福昔明環(huán)糊精包合物，該環(huán)糊精包合物粒度在50 μ m以下，環(huán)糊 精包合物中利福昔明以包合物形式存在。
[0051] 實施例3:
[0052] 利福昔明-硫酸新霉素環(huán)糊精包合物
[0053] 處方
[0054] 利福昔明 l〇〇g 硫酸新霉素 100g 2, 6-二乙基-β-環(huán)糊精 400g
[0055] 50%乙Ιιι?γ 水濟液 4000mL...,
[0056] 制備方法：（a)、將利福昔明超微粉碎，控制90%的顆粒粒徑在5 μπι以內(nèi)，且不 得有粒徑大于1〇μπι顆粒；(b)、將100g利福昔明、100g硫酸新霉素和400g2,6_二乙 基-β -環(huán)糊精放入研磨機中，加入2000mL50%乙醇水溶液，研磨30分鐘；（c)、再加入余下 的2000mL50 %乙醇水溶液，攪拌5h，噴霧干燥，過300目篩，即得利福昔明-硫酸新霉素環(huán) 糊精包合物，該環(huán)糊精包合物粒度在50 μπι以下，環(huán)糊精包合物中利福昔明和硫酸新霉素 以包合物形式存在。
[0057] 實施例4 :
[0058] 利福昔明-新魚腥草素鈉環(huán)糊精包合物
[0059] 處方
[0060] 利福昔明 l〇〇g 新魚腥草素鈉 20g 2, 6-二乙基-β-環(huán)糊精 281g 50%乙咐水濟液 3000mL。
[0061] 制備方法：(a)、分別將利福昔明和新魚腥草素鈉超微粉碎，控制90%的顆粒粒徑 在5 μπι以內(nèi)，且不得有粒徑大于10 μπι顆粒；(b)、將100g利福昔明、20g新魚腥草素鈉 和281g 2, 6-二乙基-β -環(huán)糊精放入研磨機中，加入1500mL50%乙醇水溶液，研磨30分 鐘；（c)、加入余下的1500mL50%乙醇水溶液，攪拌5h，噴霧干燥，過300目篩，即得利福昔 明-硫酸新霉素環(huán)糊精包合物，該環(huán)糊精包合物粒度