降低 體重?fù)p失速率并提尚存活率提供治療益處。
[0133] 實施例6 :化合物A的組合物通過口服途徑和腹膜內(nèi)途徑給藥的療效比較
[0134] 與上面在實施例5中給出的類似操作，在用TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠中通過腹膜內(nèi) 途徑和口服途徑給予化合物A的藥物組合物，每天兩次。經(jīng)治療的動物都分析了提高的疾 病活性指數(shù)和更健康的結(jié)腸（肉眼檢查分值）。結(jié)果總結(jié)在圖6a和6b中。
[0135] 觀察：在圖6a和6b中給出數(shù)據(jù)顯示化合物A的口服給藥與IP給藥相比表現(xiàn)出更 好的療效，即時在較低劑量。
[0136] 實施例7 :化合物A的藥物組合物在DSS (葡聚糖硫酸鈉）誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型中的 效果
[0137] 將溶解于飲用水中的5% DSS(Mff 36000-50000)提供給雌性BALB/c小鼠11天 (Gunther et al, The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 1999 ； Vol. 292, No. I ;22-30)，然后是無 DSS時期至第14天。將包含化合物A的藥物組合物在第5 天到第14天通過口服途徑（PO)以化合物A的1和2. 5mg/kg每日兩次的劑量，以10ml/kg 的用藥體積給予這些動物。安慰劑組給予不含化合物A的類似組合物。也將安慰劑（不含 化合物A的組合物）給予健康動物，其僅給予飲用水并代表安慰劑（水）。在治療10天的動 物（從第5天到第14天）中建立治療相關(guān)的體重?fù)p失衰減、提高的疾病活動性指數(shù)（DAI， 合成分?jǐn)?shù)從0到最大12,考慮體重?fù)p失、糞便的一致性，以及糞便中存在或不存在潛血）和 結(jié)腸組織病理學(xué)（分?jǐn)?shù)），來檢查化合物A的效果。每天監(jiān)測體重，每隔一天捕獲DAI，而在 研究完成后，在福爾馬林固定的結(jié)腸組織中進行結(jié)腸損傷的組織病理學(xué)評價，類似于實施 例5。結(jié)果在圖2a-2c(*p〈0. 05對比安慰劑（5% DSS))、和圖4中給出。
[0138] 觀察：圖2和圖4的這些結(jié)果表明，化合物A的組合物在患病動物中通過降低體重 損失速率、提高疾病活動性指數(shù)、衰減結(jié)腸損傷程度并保持組織結(jié)構(gòu)提供治療益處。
[0139] 實施例8 :化合物A在DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型中的組織分布
[0140] 將溶解于飲用水中的5% DSS(Mff 36000-50000)提供給雌性BALB/c小鼠7天。將 包含化合物A的藥物組合物從第5天起每日兩次以化合物Almg/kg的劑量口服給予和以化 合物A 0. 25mg/kg的劑量腹膜內(nèi)給予這些動物，以lOml/kg的用藥體積。
[0141] 在給予組合物的第7天給予第一劑量后6小時，將動物殺死；利用冷磷酸緩沖鹽水 通過心臟進行全身灌注，然后收集感興趣組織，其被進一步用PBS緩沖液清洗用于除去任 何殘留的GI內(nèi)容物。利用LC-MS/MS方法評估化合物A的血漿和組織水平。結(jié)果總結(jié)在圖 3中。
[0142] 觀察：數(shù)據(jù)清楚地顯示，通過口服和腹膜內(nèi)給藥途徑的劑量的四倍差異，發(fā)現(xiàn)在經(jīng) 口服給予的感興趣的組織中化合物A的平均暴露是腹膜內(nèi)給藥的6到21倍。
[0143] 實施例9 :化合物A在糞便中的排泄
[0144] 在整個9天的研究期間，將溶解于飲用水中的5% DSS(MW36000-50000)提供給雌 性BALB/c小鼠。在第5天以化合物A lmg/kg的劑量，以10ml/kg的用藥體積口服單次給 予包含化合物A的藥物組合物。糞便在給予組合物后收集96小時。對于化合物A的水平， 利用LC-MS/MS方法分析收集的糞便。結(jié)果總結(jié)在表3中。
[0145] 表 3
[0147] 觀察：表3中的上述結(jié)果顯示，當(dāng)口服給予患病動物根據(jù)本發(fā)明的組合物時，從糞 便中回收超過50 %的化合物A。
[0148] 實施例10 :HSP 70在結(jié)腸中的表達
[0149] 在DSS結(jié)腸炎模型中檢查口服給予化合物A的藥物組合物對HSP70表達的影響。
[0150] 將溶解于飲用水中的5% DSS(Mff 36000-50000)提供給雌性BALB/c小鼠5天。在 第5天給予這些動物化合物A的單劑量。將包含化合物A的藥物組合物以2. 5mg/kg的劑 量，以lOml/kg的用藥體積通過口服途徑（PO)給予。安慰劑組給予不含化合物A的類似組 合物。給藥后6小時時，將動物處死并處理結(jié)腸用于整個組織提取制備。在SDS-PAGE上分 離蛋白，然后是免疫印跡，采用HSP70抗體。結(jié)果在圖2d中呈現(xiàn)。
[0151] 觀察：觀察到與相應(yīng)安慰劑（不含化合物A的組合物）相比，口服給予化合物A的 藥物組合物引起在結(jié)腸中顯著誘導(dǎo)HSP70。
[0152] 實施例11 :炎癥標(biāo)記物在結(jié)腸中的表達
[0153] 在DSS結(jié)腸炎模型中評價口服化合物A的藥物組合物對白介素（interleukin) (IL)-10、TNF-α，和干擾素（INF)-ymRNA表達的影響。
[0154] 在第5天到第14天每日兩次給予DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠（按照實施例7所獲 得的）2.5mg/kg包含化合物A的藥物組合物，通過口服途徑（PO)。在第14天將動物殺 死，并處理結(jié)腸用于整個組織提取制備。在ABI 7900HT(應(yīng)用生物系統(tǒng)公司（Applied Biosystems)，福斯特市（Foster)，CA，USA)上，通過定量實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，采用基因特 異性引物和探針（應(yīng)用生物系統(tǒng)公司（Applied Biosystems)，福斯特市，CA，USA)監(jiān)測白 介素（IL)-10、TNF-α，和干擾素（INF)-ymRNA的表達連同18S rRNA的表達。相對于18S rRNA的表達歸一化mRNA表達。安慰劑組給予不含化合物A的類似組合物。結(jié)果，如在圖7 中給出的，表達為相對于安慰劑（不含化合物A的組合物）的誘導(dǎo)倍數(shù)。
[0155] 觀察：觀察到口服給予化合物A的藥物組合物引起促炎性細(xì)胞因子、TNFa和 INFy的表達減少，以及抗炎性細(xì)胞因子IL-10的表達升高。
【主權(quán)項】
1?一種低劑量藥物組合物，包含2. 5mg至60mg量的[(2-羥基-4-氧代-6, 7, 8, 9-四 氫-4H，5H-10-硫雜-1，4a-二氮雜-苯并[a]甘菊環(huán)-3-羰基）-氨基]-醋酸或其藥學(xué)上 可接受的鹽，以及至少一種選自稀釋劑、粘結(jié)劑、崩解劑、PH調(diào)節(jié)劑和潤滑劑的藥學(xué)上可接 受的載體，其中所述組合物能有效地治療炎癥性腸病。2. -種低劑量藥物組合物，包含[(2-羥基-4-氧代-6, 7, 8, 9-四氫-4H，5H-10-硫 雜-1，4a_二氮雜-苯并[a]甘菊環(huán)-3-羰基）-氨基]-醋酸或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及 至少一種選自稀釋劑、粘結(jié)劑、崩解劑、PH調(diào)節(jié)劑和潤滑劑的藥學(xué)上可接受的載體，其中所 述組合物在每天2. 5mg至60mg的劑量范圍內(nèi)用于治療炎癥性腸病是有效的。3. 根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的低劑量藥物組合物，是用于非腸胃外給藥的。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述低劑量藥物組合物，其中所述非胃腸外給藥是口服。 5?使用[(2-羥基-4-氧代-6, 7, 8, 9-四氫-4H，5H-10-硫雜-1，4a-二氮雜-苯并[a] 甘菊環(huán)-3-羰基）_氨基]_醋酸或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制備用于治療哺乳動物中的炎 癥性腸病的低劑量藥物組合物的應(yīng)用。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其中[(2-羥基-4-氧代-6, 7, 8, 9-四氫-4H，5H-10-硫 雜-1，4a_二氮雜-苯并[a]甘菊環(huán)-3-羰基）_氨基]-醋酸或其藥學(xué)上可接受的鹽是在 所述2. 5mg至60mg的范圍內(nèi)。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其中低劑量藥物組合物在每天2. 5mg至60mg的劑量范 圍內(nèi)是有效的。8. 根據(jù)權(quán)利要求5-7所述的應(yīng)用，其中低劑量藥物組合物進一步包含至少一種選自稀 釋劑、粘結(jié)劑、崩解劑、PH調(diào)節(jié)劑劑和潤滑劑的藥學(xué)上可接受的載體。9. 一種治療哺乳動物中的炎癥性腸病的方法，所述方法包括給予含有治療有效量的 [(2-羥基-4-氧代-6, 7, 8, 9-四氫-4H，5H-10-硫雜-1，4a-二氮雜-苯并[a]甘菊環(huán)-3-羰 基）_氨基]-醋酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的低劑量藥物組合物。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中[(2-羥基-4-氧代-6, 7, 8, 9-四 氫-4H，5H-10-硫雜-1，4a-二氮雜-苯并[a]甘菊環(huán)-3-羰基）-氨基]-醋酸或其藥學(xué)上 可接受的鹽是在2. 5mg至60mg的范圍內(nèi)。11. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中低劑量藥物組合物在所述每天2. 5mg至60mg的 劑量范圍內(nèi)是有效的。12. 根據(jù)權(quán)利要求9-11所述的方法，其中低劑量藥物組合物進一步包含至少一種選自 稀釋劑、粘結(jié)劑、崩解劑、PH調(diào)節(jié)劑劑和/或潤滑劑的藥學(xué)上可接受的載體。13. -種藥物組合物，包含[(2-羥基-4-氧代-6, 7, 8, 9-四氫-4H，5H-10-硫 雜-1，4a_二氮雜-苯并[a]甘菊環(huán)-3-羰基）-氨基]-醋酸或其藥學(xué)上可接受的鹽，如在 此參考說明書隨同的實施例所描述的。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種低劑量藥物組合物，優(yōu)選口服組合物，包括治療有效量的范圍在2.5mg至60mg內(nèi)的[(2-羥基-4-氧代-6,7,8,9-四氫-4H,5H-10-硫雜-1,4a-二氮雜-苯并[a]甘菊環(huán)-3-羰基)-氨基]-醋酸(化合物A)。本發(fā)明還涉及一種通過給予所述低劑量藥物組合物在哺乳動物中治療炎癥性腸病的方法。此外，本發(fā)明涉及使用化合物A在制備用于治療哺乳動物中的炎癥性腸病的低劑量藥物組合物中的應(yīng)用。
【IPC分類】A61K31/519, A61P1/00
【公開號】CN105209043
【申請?zhí)枴緾N201480028313
【發(fā)明人】海坦亞·杜特, 維賈伊·喬泰瓦利, 拉姆·古普塔, 希塔爾庫馬爾·桑巴德, 沙伊萊什·德什潘德, 吉格內(nèi)什·科特查, 拉梅什·古普塔, 桑賈伊·斯里瓦斯塔瓦, 拉克西米坎特·奇帕, 賈亞·亞伯拉罕
【申請人】托倫特藥物有限公司
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2014年5月12日
【公告號】CA2912011A1, EP2996693A1, US20160120801, WO2014184631A1