本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。

背景技術(shù)：

白細(xì)胞減少癥是由于原因不明和繼發(fā)于其他疾病之后而引起的疾病，分為原發(fā)性和繼發(fā)性?xún)纱箢?lèi)。原發(fā)性者原因不明；繼發(fā)性者認(rèn)為其病因可由急性感染，物理、化學(xué)因素，血液系統(tǒng)疾病，伴脾腫大的疾病，結(jié)締組織疾病，過(guò)敏性疾病，遺傳性疾病等，獲得性或原因不明性粒細(xì)胞減少等。

白細(xì)胞減少的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問(wèn)題，從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物有重要價(jià)值。

本發(fā)明涉及的化合物I是一個(gè)2011年發(fā)表(Fan-Yu Meng et al.,2011.Schiglautone A,a New Tricyclic Triterpenoid with a Unique 6/7/9-Fused Skeleton from the Stems of Schisandra glaucescens.Organic Letters 13(2011)1502–1505)的化合物，我們對(duì)化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對(duì)該組合物升高白細(xì)胞活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其具有升高白細(xì)胞活性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開(kāi)了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為25％和75％。

本發(fā)明公開(kāi)的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。

本發(fā)明的目的是提供組合物在制備升高白細(xì)胞藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明組合物可以顯著升高失血和化學(xué)物品引起的白細(xì)胞降低。

以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1 化合物Schiglautone A的制備

化合物Schiglautone A(I)的制備方法參照Fan-Yu Meng等人發(fā)表的文獻(xiàn)(Fan-Yu Meng et al.,2011.Schiglautone A,a New Tricyclic Triterpenoid with a Unique 6/7/9-Fused Skeleton from the Stems of Schisandra glaucescens.Organic Letters 13(2011)1502–1505)的方法。

實(shí)施例2 Schiglautone A的O-溴乙基衍生物(II)的合成

將化合物I(502mg，1.00mmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(7.520g，40.00mmol)和6mL的50％氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏度攪拌8h。8h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然后對(duì)有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:1.0，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(508mg，71％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ13.40(s,1H),6.10(s,1H),5.63(s,1H),5.53(s,1H),3.85(d,J＝11.2Hz,4H),3.52(d,J＝10.8Hz,4H),2.96(s,1H),2.20(s,1H),2.16(s,2H),2.00(s,1H),1.84(d,J＝13.9Hz,4H),1.69(s,1H),1.58(dd,J＝22.2,8.5Hz,4H),1.51(s,1H),1.47(s,1H),1.26(dd,J＝9.1,4.4Hz,4H),1.21(s,1H),1.08–0.98(m,4H),0.96-0.94(m,9H),0.94-0.85(m,6H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ211.46(s),209.14(s),170.06(s),161.12(s),143.51(s),132.01(s),127.77(s),85.96(s),82.40(s),70.19(s),69.10(s),57.14(s),52.73(s),51.90(s),45.77(s),40.67(s),38.57(s),38.32(s),35.04(s),33.55(s), 33.27(s),29.85(s),28.98(s),26.71(s),25.50(s),24.05(s),22.31(s),21.06(s),20.56(s),20.00(s),18.69(s),18.11(s),15.07(s).

HRMS(ESI)m/z[M-H]^-calcd for C₃₄H₅₁Br₂O₆:715.2032；found 715.2027.

實(shí)施例3 Schiglautone A的O-(三唑基)乙基衍生物(III)的合成

將化合物II(358mg，0.5mmol)溶于10mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無(wú)水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和1,2,3-三氮唑(2760mg，40mmol)，混合物加熱回流3h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:1.0，v/v)，收集淡黃色集中洗脫帶即得到化合物III的黃色膠狀固體(245.7mg,71％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ18.00(s,1H),7.96(d,J＝15.5Hz,2H),7.67(d,J＝20.5Hz,2H),6.10(s,1H),5.63(s,1H),5.33(s,1H),4.29(d,J＝19.8Hz,2H),4.08(d,J＝4.0Hz,2H),3.83(d,J＝4.8Hz,4H),3.47(s,1H),2.39(d,J＝2.9Hz,3H),2.16(s,1H),1.84(d,J＝0.5Hz,4H),1.68–1.61(m,3H),1.61–1.50(m,3H),1.46(s,1H),1.39(d,J＝11.0Hz,2H),1.30–1.21(m,2H),1.21(s,1H),1.05–0.70(m,19H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ211.62(s),209.42(s),170.24(s),161.39(s),143.68(s),137.15(s),132.19(s),128.04(s),120.80(s),86.24(s),82.58(s),66.14(s),65.60(s),57.43(s),52.89(s),52.18(s),46.47(s),46.06(s),40.83(s),38.85(s),38.50(s),35.31(s),33.72(s),30.12(s),29.15(s),27.00(s),25.66(s),24.33(s),22.49(s),21.33(s),20.73(s),20.29(s),18.85(s),18.39(s),15.25(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₃₈H₅₇N₆O₆:693.4340；found:693.4338。

實(shí)施例4 Schiglautone A的O-(二(2-甲硫基乙基)胺基)乙基衍生物的合成

1、Schiglautone A的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物的合成

將化合物II(358mg，0.5mmol)溶于15mL乙腈，加入無(wú)水碳酸鉀(0.345g，2.5mmol)，碘化鉀(0.084g，0.5mmol)和二乙醇胺(1.0514g，10mmol)，混合物加熱回流9h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冷水中，用二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相，依次用水和飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑。產(chǎn)物用硅膠柱層析純化(石油醚/丙酮100:1，v/v)，得到Schiglautone A的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物的淡黃色固體(0.199g,52％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ17.77(s,1H),6.00(s,1H),5.40(s,1H),5.20(s,1H),3.37(d,J＝17.8Hz,4H),3.28(s,8H),2.87(s,1H),2.51(d,J＝6.5Hz,4H),2.43(s,8H),2.24(s,2H),2.06(d,J＝12.7Hz,2H),1.76–1.68(m,5H),1.57(s,1H),1.53–1.39(m,8H),1.36(s,1H),1.24(s,1H),1.20–1.14(m,3H),1.11(s,1H),0.94–0.82(m,10H),0.80(s,3H),0.76(s,3H),0.72(d,J＝20.0Hz,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ211.39(s),208.98(s),169.80(s),160.73(s),143.02(s),131.42(s),127.05(s),85.91(s),82.25(s),66.70(s),65.63(s),58.62(s),56.55(s),56.61(s),53.30(s),52.45(s),51.52(s),45.29(s),40.06(s),38.52(s),38.17(s),34.73(s),33.17(s),29.35(s),28.38(s),26.34(s),25.00(s),23.45(s),22.05(s),20.67(s),20.07(s),19.31(s),18.41(s),17.73(s),14.59(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₄₂H₇₃N₂O₁₀:765.5265；found:765.5261。

2、Schiglautone A的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物的合成

按照上述步驟制備1g的Schiglautone A的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物，取Schiglautone A的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物(382mg，0.5mmol)溶于8mL氯仿，逐滴加入氯化亞砜(0.238g，2mmol)，反應(yīng)物加熱回流2h。將反應(yīng)物冷卻至室溫，滴加甲醇分解過(guò)量的氯化亞砜，減壓濃縮除去溶劑。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化(石油醚/丙酮100:1，v/v)，得到Schiglautone A的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物的淡黃色膠狀固體(0.297g，71％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.87(s,1H),6.01(s,1H),5.50(d,J＝8.4Hz,2H),3.61(s,4H),3.55(s,4H),3.45(s,2H),3.40(s,2H),2.98(s,1H),2.73(d,J＝17.4Hz,4H),2.67–2.57(m,6H),2.54(s,2H),2.40(s,1H),2.10(s,1H),1.99(s,2H),1.78(s,1H),1.73(d,J＝16.9Hz,4H),1.58(d,J＝3.0Hz,2H),1.46(d,J＝3.0Hz,2H),1.43(s,1H),1.37(s,1H),1.22(s,1H),1.17(dd,J＝18.9,11.1Hz,4H),0.95–0.83(m,10H),0.80(d,J＝20.0Hz,3H),0.78(d,J＝20.0Hz,3H),0.73(d,J＝20.0Hz,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ211.19(s),208.87(s),169.79(s),160.85(s),143.24(s),131.74(s),127.50(s),85.69(s),82.13(s),66.71(s),65.84(s),56.87(s),55.80(s),53.19(s),52.44(s),51.64(s),45.51(s),40.38(s),39.22(s),38.30(s),38.05(s),34.77(s),33.28(s),29.56(s),28.72(s),26.45(s),25.21(s),23.79(s),22.05(s),20.77(s),20.30(s),19.76(s),18.41(s),17.85(s),14.81(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₄₂H₆₉Cl₄N₂O₆:839.3880；found:839.3881。

3、Schiglautone A的O-(二(2-甲硫基乙基)胺基)乙基衍生物(IV)的合成

按照上述步驟制備1g的Schiglautone A的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物，將Schiglautone A的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物(0.419g，0.5mmol)溶于15mL乙醇，室溫下加入甲硫醇鈉(0.21g，3mmol)，反應(yīng)物加熱回流3h。減壓濃縮除去溶劑，所得產(chǎn)物用硅膠柱層析進(jìn)行純化(石油醚/丙酮100:0.2，v/v)，得到黃色固體物，即化合物IV(0.296g，67％)。

¹H NMR(500MHz,Chloroform-d1)δ13.21(s,1H),6.02(s,1H),5.48(s,1H),5.44(s,1H),3.45(s,2H),3.38(s,2H),3.00(s,1H),2.57–2.48(m,20H),2.16–2.09(m,4H),1.96(s,12H),1.73(d,J＝15.4Hz,4H),1.55(s,1H),1.44(dd,J＝7.8,2.8Hz,4H),1.35(s,1H),1.29–1.14(m,6H),0.97–0.49(m,19H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ211.72(s),209.42(s),170.36(s),161.38(s),143.79(s),132.31(s),128.03(s),86.24(s),82.70(s),67.24(s),66.39(s),57.44(s),53.73(s),53.00(s),52.69(s),52.17(s),46.06(s),40.95(s),38.84(s),38.61(s),35.32(s),33.82(s),32.41(s),30.13(s),29.25(s),27.00(s),25.77(s),24.34(s),22.59(s),21.33(s),20.85(s),20.28(s),18.96(s),18.40(s),15.35(s),15.03(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₄₆H₈₁N₂O₆S₄⁺:885.4977；found:885.4979。

實(shí)施例5 組合物升高白細(xì)胞活性

一、組合物對(duì)失血小鼠的治療作用

對(duì)失血小鼠的影響ICR小鼠50只，♀♂各半，均分成5組(n＝10)。除生理鹽水組外，其它組每只小鼠從眼眶靜脈放血0.5ml，24h后再取血測(cè)全部各組白細(xì)胞指標(biāo)，然后連續(xù)灌胃給藥1周，末次給藥1h后，從眼眶靜脈叢取血用F-800全血小板分析儀測(cè)白細(xì)胞指標(biāo)。

組合物的制備：將研磨之后過(guò)200目網(wǎng)的25mg化合物III的粉末和研磨之后過(guò)200目網(wǎng)的75mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時(shí)用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。

表1組合物對(duì)因失血所致白細(xì)胞減少的治療作用(10⁹/L)

與模型組比較：*p<0.05

結(jié)果表明，放血小鼠經(jīng)服用組合物治療7天后，組合物給藥組與模型組比較，白細(xì)胞顯著高于模型組，接近生理鹽水組。而化合物III和化合物IV不具有此活性。

二、組合物對(duì)環(huán)磷酰胺致白細(xì)胞減少的治療作用

對(duì)小鼠骨髓造血功能損傷的防治作用ICR小鼠50只，♀♂兼用，均分成5組(n＝10)，即生理鹽水組、造模組、組合物1.2mg/kg組、化合物III 1.2mg/kg組和化合物IV 1.2mg/kg組，口服給藥，每天1次。第0、5、10日除生理鹽水組外，其它各組小鼠分別腹腔注射環(huán)磷酸胺80mg/kg，然后繼續(xù)給藥3天。于末次給藥后1h，從眼眶靜脈叢取血，測(cè)白細(xì)胞。

表2組合物對(duì)環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞減少的治療作用(10⁹/L)

與模型組比較：*p<0.05

結(jié)果表明，與生理鹽水組比較，環(huán)磷酸胺能使小鼠骨髓損傷，造成外周血細(xì)胞下降，組合物組與模型組比較，均可明顯對(duì)抗環(huán)磷酸胺所致小鼠白細(xì)胞下降。而化合物III和化合物IV不具有此活性。

三、組合物對(duì)苯所致白細(xì)胞減少的治療作用

對(duì)再生障礙性貧血小鼠的影響：昆明種小鼠50只，♀♂兼用，均分成5組(n＝10)，除生理鹽水組外，其它組小鼠皮下注射苯0.5ml/kg，連續(xù)12天，造模的當(dāng)日，同時(shí)口服給藥，每天1次，共18天，末次給藥后1h，眼眶靜脈叢取血，測(cè)白細(xì)胞。

表3組合物對(duì)苯所致血細(xì)胞減少的治療作用(10⁹/L)

與模型組比較：*p<0.05

結(jié)果表明，組合物組與模型組比較，可明顯對(duì)抗苯所致再生障礙性貧血小鼠白細(xì)胞的下降。而化合物III和化合物IV不具有此活性。

結(jié)論：組合物能夠顯著升高白細(xì)胞，可以用來(lái)制備抗白細(xì)胞降低藥物。而化合物III和化合物IV不具有顯著升高白細(xì)胞的活性，不可以用來(lái)制備抗白細(xì)胞降低藥物。

實(shí)施例6 本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備

取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。

實(shí)施例7 本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備

取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。