專利名稱：含有環(huán)狀磷脂酸衍生物的鎮(zhèn)痛劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有作為磷脂的1種的環(huán)狀磷脂酸衍生物的鎮(zhèn)痛劑。

背景技術(shù)：
日本的“疼痛”治療被認(rèn)為處于低于歐美的水準(zhǔn)?！疤弁础毕嚓P(guān)的基礎(chǔ)研究的研究環(huán)境也遠(yuǎn)差于歐美，此外，社會或政府對“疼痛”理解的低下，使得疼痛無法與治療聯(lián)系起來。
為打破這樣的現(xiàn)狀，改善“疼痛”醫(yī)療，日本有必要在醫(yī)療一線的醫(yī)師和從事基礎(chǔ)研究的研究者、政府相關(guān)的人們等的協(xié)作下推進(jìn)活動。從致力于日本“疼痛”治療的實況調(diào)查或?qū)ι鐣?jīng)濟(jì)的影響調(diào)查等開始，到“疼痛”機(jī)理的闡明，和其治療方法的開發(fā)，治療方針的策定，教育現(xiàn)場的“疼痛”教育的強(qiáng)化，對正常人或患者的啟發(fā)活動等，應(yīng)當(dāng)做的事情很多。即便是為不遠(yuǎn)將來的老齡化社會作準(zhǔn)備，“疼痛”醫(yī)療的確立也被視為當(dāng)務(wù)之急，這將關(guān)系到提高深受“疼痛”之苦的患者的生活質(zhì)量，并減輕社會醫(yī)療負(fù)擔(dān)，同時還抑制社會勞動生產(chǎn)力的損失，促進(jìn)日本經(jīng)濟(jì)。
已知的主要鎮(zhèn)痛劑，大致分為麻藥性鎮(zhèn)痛藥和解熱性鎮(zhèn)痛藥。麻藥性鎮(zhèn)痛藥主要作用于中樞，具有很強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用。麻藥性鎮(zhèn)痛藥作用于阿片受體。作為麻藥性鎮(zhèn)痛藥，存在鎮(zhèn)痛作用比較弱的弱阿片樣物質(zhì)(可待因等)和，鎮(zhèn)痛作用比較強(qiáng)具有耐藥性的強(qiáng)阿片樣物質(zhì)(嗎啡等)。另一方面，作為解熱性鎮(zhèn)痛藥，已知有阿司匹林、乙酰氨基酚、布洛芬、消炎痛等，主要作用于外周神經(jīng)系統(tǒng)，具有緩和的鎮(zhèn)痛作用。解熱性鎮(zhèn)痛藥一般具有COX阻斷引起的抗炎作用和鎮(zhèn)痛解熱作用，但也存在如乙酰氨基酚那樣沒有COX阻斷作用的鎮(zhèn)痛、解熱藥。
另一方面，本發(fā)明人等一直來就以真性粘菌多頭絨泡菌作為實驗材料，進(jìn)行著各種細(xì)胞生化學(xué)分析，清楚地揭示了真性粘菌根據(jù)外部環(huán)境的變化表現(xiàn)出形態(tài)變化，伴隨其增殖、分化，在生物膜脂質(zhì)的組成和代謝中可見顯著的變化。1992年從單倍體黏液變菌體分離、鑒定的新型脂質(zhì)成分，結(jié)構(gòu)解析的結(jié)果確認(rèn)了該脂質(zhì)成分是甘油骨架的sn-1位具有含環(huán)丙烷環(huán)的十六烷酸，在sn-2位和3位磷酸環(huán)狀地形成酯鍵的物質(zhì)(Murakami-Murofushi，K.，等J.Biol.Chem.，267，21512-21517(1992))。該物質(zhì)是來源于絨泡菌(Physarum)的LPA類似物，因此被命名為PHYLPA。PHYLPA抑制真核細(xì)胞的DNA聚合酶α的活性，并由抑制了動物培養(yǎng)細(xì)胞的增殖的脂質(zhì)組分得到，已確認(rèn)PHYLPA顯示上述生理活性。PHYLPA具有特征性脂肪酸，但有機(jī)合成將該脂肪酸部分置換為其它一般脂肪酸的結(jié)構(gòu)類似體，并調(diào)查它們的生理活性，結(jié)果顯示與PHYLPA相同的生理作用(Murakami-Murofushi，K.，等Biochem.Biophys.Acta，1258，57-60(1995))。由此，推測對其生理作用重要的結(jié)構(gòu)在于甘油sn-2位、3位的環(huán)狀磷酸結(jié)構(gòu)。具有該結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)統(tǒng)稱為環(huán)狀磷脂酸(cyclic phosphatidic acid；cPA)。進(jìn)一步揭示了環(huán)狀磷脂酸(cPA)是普遍存在于人血清中以及各種生物體中的生理活性脂質(zhì)(Kobayashi，T.，等Life Sci.，65，2185-2191(1999))。
非專利文獻(xiàn)1Murakami-Murofushi，K.，等J.Biol.Chem.，267，21512-21517(1992) 非專利文獻(xiàn)2Murakami-Murofushi，K.，等Biochem.Biophys.Acta，1258，57-60(1995) 非專利文獻(xiàn)3Kobayashi，T.，等Life Sci.，65，2185-2191(1999)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的課題在于闡明cPA的新生理活性之一的鎮(zhèn)痛作用，并提供新型鎮(zhèn)痛劑。
本發(fā)明人由各種真核生物發(fā)現(xiàn)作為生理活性磷脂的環(huán)狀磷脂酸(cPA)，并對其生理作用持續(xù)進(jìn)行了十幾年的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)cPA具有顯著的鎮(zhèn)痛效果。在目前為止所采用的檢驗方法中，顯示具有不次于嗎啡程度的鎮(zhèn)痛作用。此外，cPA原本就包含在生物體內(nèi)，從生物體外部給藥時不顯示毒性或成癮性的事實，由動物實驗可知這一點。cPA的疼痛抑制效果的實驗結(jié)果的概要如下所述。
即，本發(fā)明人使用中樞神經(jīng)系統(tǒng)無傷的麻醉大鼠，以通過后肢軀體性傳入神經(jīng)(後肢體性求心性神経)的電刺激誘發(fā)的(1)心率增加反應(yīng)和(2)交感神經(jīng)心臟分支反射電位兩者作為指標(biāo)，研究了cPA的靜脈內(nèi)給藥引起鎮(zhèn)痛效果的可能性。其結(jié)果，通過上述兩種方法，可證實cPA具有明顯的鎮(zhèn)痛效果，并且其作用有可能由阿片受體介導(dǎo)。具體地，首先以大鼠感到疼痛的程度施加電脈沖，引起心率上升，研究通過cPA的給藥來抑制心率上升的可能性。進(jìn)一步地，將心神經(jīng)露出，利用測定神經(jīng)纖維放電水平的實驗系統(tǒng)，研究通過cPA的給藥來降低由電脈沖引起的放電水平的可能性。其結(jié)果顯示，cPA劑量依賴性地抑制放電水平，并且cPA具有作為鎮(zhèn)痛劑的高潛力。本發(fā)明基于上述發(fā)現(xiàn)而完成。
即，本發(fā)明提供含有以通式(1)表示的化合物作為有效成份的鎮(zhèn)痛劑
(式中，R為碳原子數(shù)1～30的直鏈狀或支鏈狀烷基、碳原子數(shù)2～30的直鏈狀或支鏈狀烯基、或碳原子數(shù)2～30的直鏈狀或支鏈狀炔基，這些基團(tuán)也可含有環(huán)烷烴環(huán)或芳香環(huán)。X和Y分別獨立地表示-O-或-CH2-，X和Y不同時為-CH2-。M為氫原子或反陽離子。) 優(yōu)選通式(1)中X和Y為-O-。
更優(yōu)選通式(1)中X或Y為-CH2-(稱前者為2卡巴(carba)cPA(縮寫為2ccPA)，后者為3卡巴cPA(縮寫為3ccPA))。特別地，更優(yōu)選X為-CH2-，Y為-O-(2卡巴體)。
此外，優(yōu)選通式(1)表示的化合物為1-油?；h(huán)狀磷脂酸或1-棕櫚油酰基環(huán)狀磷脂酸。
本發(fā)明的另一方面是提供抑制疼痛的方法，其包括對包括人在內(nèi)的哺乳動物給藥有效量的上述通式(1)表示的化合物。
本發(fā)明的另一方面是提供上述通式(1)表示的化合物在鎮(zhèn)痛劑的制備中的用途。
本發(fā)明確認(rèn)了通式(1)表示的化合物具有鎮(zhèn)痛作用。因此，清楚揭示了本發(fā)明中所用的通式(1)表示的化合物可以適合用作鎮(zhèn)痛劑。根據(jù)本發(fā)明，提供新型鎮(zhèn)痛劑。

具體實施例方式 以下，對本發(fā)明的實施形態(tài)詳細(xì)地進(jìn)行說明。
本發(fā)明的鎮(zhèn)痛劑含有下述通式(1)表示的化合物作為有效成分。

(其中，R為碳原子數(shù)1～30的直鏈狀或支鏈狀烷基、碳原子數(shù)2～30的直鏈狀或支鏈狀烯基、或碳原子數(shù)2～30的直鏈狀或支鏈狀炔基，這些基團(tuán)也可含有環(huán)烷烴環(huán)或芳香環(huán)。X和Y分別獨立地表示-O-或-CH2-，X和Y不同時為-CH2-。M為氫原子或反陽離子。) 通式(1)中，作為取代基R表示的碳原子數(shù)1～30的直鏈狀或支鏈狀烷基的具體例子，可舉出例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十五烷基、十八烷基等。
作為取代基R表示的碳原子數(shù)2～30的直鏈狀或支鏈狀烯基的具體例子，可舉出例如烯丙基、丁烯基、辛烯基、癸烯基、十二碳二烯基、十六碳三烯基等，更具體地可舉出8-癸烯基、8-十一碳烯基、8-十二碳烯基、8-十三碳烯基、8-十四碳烯基、8-十五碳烯基、8-十六碳烯基、8-十七碳烯基、8-十八碳烯基、8-二十碳烯基、8-二十二碳烯基、十七碳-8，11-二烯基、十七碳-8，11，14-三烯基、十九碳-4，7，10，13-四烯基、十九碳-4，7，10，13，16-五烯基、二十一碳-3，6，9，12，15，18-六烯基等。
作為取代基R表示的碳原子數(shù)2～30的直鏈狀或支鏈狀炔基的具體例子，可舉出例如8-癸炔基、8-十一碳炔基、8-十二碳炔基、8-十三碳炔基、8-十四碳炔基、8-十五碳炔基、8-十六碳炔基、8-十七碳炔基、8-十八碳炔基、8-二十二碳炔基、十七碳-8，11-二炔基等。
作為上述烷基、烯基或炔基中可以包含的環(huán)烷烴環(huán)的具體例子，可舉出例如環(huán)丙烷環(huán)、環(huán)丁烷環(huán)、環(huán)戊烷環(huán)、環(huán)己烷環(huán)、環(huán)辛烷環(huán)等。環(huán)烷烴環(huán)也可含有1個以上的雜原子，作為這樣的實例，可舉出例如環(huán)氧乙烷環(huán)、環(huán)氧丙烷環(huán)、四氫呋喃環(huán)、N-甲基前賴氨酸(プロリジン)環(huán)等。
作為上述烷基、烯基或炔基中可以包含的芳香環(huán)的具體例子，可舉出例如苯環(huán)、萘環(huán)、吡啶環(huán)、呋喃環(huán)、噻吩環(huán)等。
因此，作為取代基R為被環(huán)烷烴環(huán)取代的烷基時的具體例子，可舉出例如環(huán)丙基甲基、環(huán)己基乙基、8，9-橋亞甲基十五烷基等。
作為取代基R為被芳香環(huán)取代的烷基時的具體例子，可舉出例如苯甲基、苯乙基、對戊基苯基辛基等。
通式(1)表示的化合物中的X和Y分別獨立地表示-O-或-CH2-，但X和Y不同時為-CH2-。即，X和Y的組合為以下3種 (1)X為-O-，Y為-O-。
(2)X為-CH2-，Y為-O-。
(3)X為-O-，Y為-CH2-。
通式(1)表示的化合物中的M為氫原子或反陽離子。作為M為反陽離子時的例子，可舉出例如堿金屬原子、堿土金屬原子、取代或未取代銨基。作為堿金屬原子，可舉出例如鋰、鈉、鉀等，作為堿土金屬，可舉出例如鎂、鈣等。作為取代銨基，可舉出例如丁基銨基、三乙基銨基、四甲基銨基等。
作為本發(fā)明所用的通式(1)表示的cPA的具體例子，優(yōu)選油酰基cPA(Ole-cPA)，特別優(yōu)選棕櫚油?；?卡巴cPA(ΔPal-2ccPA)、棕櫚油?；?卡巴cPA(ΔPal-3ccPA)。
通式(1)表示的化合物之中，X和Y為-O-的化合物可以根據(jù)例如日本特開平5-230088號公報、日本特開平7-149772號公報、日本特開平7-258278號公報、日本特開平9-25235號公報中記載的方法化學(xué)合成。
此外，通式(1)表示的化合物之中，X和Y為-O-的化合物可以根據(jù)日本特開2001-178489號公報中記載的方法，通過使磷脂酶D與溶血型磷脂作用來合成。此處所用溶血型磷脂只要能與磷脂酶D作用即可，而沒有特別限定。溶血型磷脂已知有許多種類，已知有脂肪酸種類不同的，具有醚或者乙烯基醚鍵的分子種類等，它們可作為市售品獲得。作為磷脂酶D，來源于卷心菜或花生等高等植物的磷脂酶D或來源于色褐鏈霉菌(Streptomyces chromofuscus)、馬杜拉放線菌(Actinomadula sp.)等微生物的磷脂酶D可作為市售品獲得，但來源于馬杜拉放線菌No.362的酶極具選擇性地合成cPA(日本特開平11-367032號說明書)。溶血型磷脂和磷脂酶D的反應(yīng)，只要在酶可表達(dá)活性的條件下即可沒有特別的限定，例如，在含有氯化鈣的醋酸緩沖液(pH為5～6左右)中在室溫至加熱條件下(優(yōu)選37℃左右)使之反應(yīng)1至5小時左右。生成的cPA衍生物可按照常法通過萃取、柱層析、薄層色譜(TLC)等來進(jìn)行精制。
此外，通式(1)表示的化合物之中，X為-CH2-、Y為-O-的化合物可通過日本特開2004-010582號公報中記載的方法來合成。
此外，通式(1)表示的化合物之中，X為-O-、Y為-CH2-的化合物可以根據(jù)文獻(xiàn)記載的方法(Kobayashi，S.，等，Tetrahedron Letters 34，4047-4050(1993)；以及“日本藥學(xué)會第23次反應(yīng)和合成的進(jìn)步座談會1997年11月17、18日(熊本市民會館)環(huán)狀磷脂酸和卡巴體衍生物的合成和生理作用，概要(第101-104頁)”來合成，還可根據(jù)國際公開WO2002/094286號公報中記載的方法來進(jìn)行合成。具體合成路線的一例如下所示。

上述合成路線中，首先用BF3·Et2O使市售的(R)-苯甲基縮水甘油醚(1)活化，通過使甲基磷酸二甲酯與n-BuLi作用而得的鋰衍生物反應(yīng)，得到醇(2)。
使所得醇(2)在甲苯中與過量的對甲苯磺酸的吡啶鹽在80℃下反應(yīng)，由此得到環(huán)化物(3)。將該環(huán)化物在氫氣氛圍下用20％Pd(OH)2-C加氫分解，進(jìn)行脫苯甲基化(4)。使用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽作為縮合劑，使之與脂肪酸反應(yīng)得到偶合物(5)。隨后，使用溴三甲基硅烷作為親核試劑，位置選擇性地單獨除去甲基，得到環(huán)狀磷酸(6)。用醚將該環(huán)狀磷酸(6)轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，滴加少量0.02N的氫氧化鈉水溶液，進(jìn)行分液操作，以鈉鹽(7)的形式萃取目的化合物并精制。
本發(fā)明中作為有效成分使用的式(1)表示的化合物具有鎮(zhèn)痛作用。因此，根據(jù)本發(fā)明，提供含有該化合物作為有效成分的鎮(zhèn)痛劑。
本說明書中以下記載的實施例中，作為鎮(zhèn)痛效果的評價方法，使用中樞神經(jīng)系統(tǒng)無傷的麻醉大鼠，以通過后肢軀體性傳入神經(jīng)的電刺激誘發(fā)的(1)心率增加反應(yīng)，和(2)交感神經(jīng)心臟分支反射電位兩者作為指標(biāo)，研究了cPA的靜脈內(nèi)給藥引起鎮(zhèn)痛效果的可能性。本次所用的兩個實驗體系基本上是根據(jù)研究嗎啡效果的Uchida等(Neurosci Lett269161，1999)的方法進(jìn)行的。
作為研究鎮(zhèn)痛物質(zhì)效果的方法，大多使用人的鎮(zhèn)痛效果的評價或使用動物以對各種傷害性刺激，例如尾部的掐捏或加熱的動物的逃避行為作為指標(biāo)的方法。然而，對無麻醉動物施加傷害性刺激會給動物的情緒帶來影響，因而鎮(zhèn)痛效果的定量評價困難，而且給動物造成痛苦還產(chǎn)生倫理性問題。
即便是在經(jīng)麻醉的動物中，傷害性刺激也能誘發(fā)各種反應(yīng)。例如，使外周傷害感受性初級傳入神經(jīng)纖維活動，使中樞神經(jīng)系統(tǒng)的傷害感受性神經(jīng)元活動，進(jìn)而可引起各種反射性反應(yīng)。熟知的麻醉下的反射性反應(yīng)有傷害性屈曲反射等軀體性運動反射，如傷害性升壓反射的自律神經(jīng)性反射，如傷害性血中兒茶酚胺水平上升的內(nèi)分泌性反射等。
本次所用(1)“后肢軀體性傳入神經(jīng)的頻繁電刺激誘發(fā)的(1)心率增加反應(yīng)”，不是以僅使粗有髓A·纖維興奮程度的弱刺激強(qiáng)度(0.2V)來誘發(fā)，而是以使細(xì)有髓A·纖維的興奮閾值以上的刺激強(qiáng)度(1V)來誘發(fā)的。進(jìn)一步增強(qiáng)刺激(10V)使無髓C纖維興奮時，心率增加反應(yīng)的振幅增大達(dá)到最大(Sato et al，J Auton Nerv Syst 4231，1981；Uchidaet al，Neurosci Lett 269161，1999)。傷害性信號通過A·纖維和C纖維傳導(dǎo)，因此軀體性傳入A·纖維和C纖維的興奮引起的心率增加反應(yīng)可作為評價鎮(zhèn)痛效果的一個指標(biāo)。
本次所用(2)“后肢軀體性傳入神經(jīng)的單次電刺激誘發(fā)的交感神經(jīng)心臟分支反射電位”之中，潛伏期短的A反射電位主要由A·纖維的興奮誘發(fā)，隨A·纖維的興奮而增大。若加強(qiáng)刺激的強(qiáng)度，使無髓C纖維興奮時，在上述A反射電位之后，誘發(fā)延后的C反射電位(Ito et al，NeurosciLett 39169，1983；Adachi et al，Neurosci Res 15281，1992)。
C反射電位由參與傷害性信號的傳導(dǎo)、特別是灼燒那樣的延遲疼痛傳導(dǎo)的無髓C纖維的興奮特異性地誘發(fā)，因此以C反射電位作為指標(biāo)的方法在評價鎮(zhèn)痛藥的作用上十分優(yōu)異。在各種疼痛中，通過C纖維傳導(dǎo)的延遲疼痛造成的不適感強(qiáng)，在臨床上特別重要。佐藤等人在麻醉貓中使用該模型，證明嗎啡僅選擇性地抑制C反射電位，報道了軀體性傳入C纖維的興奮誘發(fā)的C反射電位可作為鎮(zhèn)痛效果研究的一個指標(biāo)5(參見Pain Clinic 10(5)605，1989)。該方法不僅可長時間穩(wěn)定地進(jìn)行測定，還可以分鐘為單位連續(xù)地調(diào)查效果，因此也是評價藥物效果隨時間變化的優(yōu)異方法。
另一方面，對A反射電位而言，有髓纖維中，參與傷害性信號的傳達(dá)的A·纖維的刺激引起的反射與A·纖維引起的反射重疊，因此難以研究藥物對于僅由強(qiáng)烈而迅速的疼痛相關(guān)的A·纖維引起的反射的效果。
本次所用的兩種方法均使用經(jīng)麻醉的動物，因此可施加不伴隨疼痛的傷害性刺激，并且具有可研究傷害性刺激誘發(fā)的特異性反射的優(yōu)點，因而可作為客觀的測定方法評價鎮(zhèn)痛效果。
本發(fā)明的鎮(zhèn)痛劑優(yōu)選以藥物組合物的形式提供，所述藥物組合物含有1種或2種以上可藥用的制劑用添加劑和作為有效成分的通式(1)表示的化合物。
本發(fā)明的鎮(zhèn)痛劑可以各種形式給藥，但作為優(yōu)選的給藥形式，可以是口服給藥或非口服給藥(例如向靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下或皮內(nèi)等的注射、直腸內(nèi)給藥、經(jīng)粘膜給藥等)。作為適合于口服給藥的藥物組合物，可舉出例如片劑、顆粒劑、膠囊劑、散劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑等；作為適合于非口服給藥的藥物組合物，可舉出例如注射劑、輸液劑、栓劑、透皮吸收劑等，但本發(fā)明的鎮(zhèn)痛劑的劑型不限于這些。進(jìn)一步地，也可通過公知的技術(shù)制為長效制劑。
制備本發(fā)明的鎮(zhèn)痛劑時使用的制劑用添加劑的種類沒有特別限定，本領(lǐng)域技術(shù)人員可適當(dāng)選擇?？墒褂美缳x形劑、崩解劑或崩解助劑、粘合劑、潤滑劑、包衣劑、基質(zhì)、溶解劑或助溶劑、分散劑、混懸劑、乳化劑、緩沖劑、抗氧化劑、防腐劑、等滲劑、pH調(diào)節(jié)劑、溶解劑、穩(wěn)定劑等，這些按目的使用的各種具體成分是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。
作為可在口服給藥用制劑的制備中使用的添加劑，可使用例如葡萄糖、乳糖、D-甘露糖、淀粉或結(jié)晶纖維素等賦形劑；羧甲基纖維素、淀粉或羧甲基纖維素鈣等崩解劑或崩解助劑；羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或明膠等粘合劑；硬脂酸鎂或滑石等潤滑劑；羥丙基甲基纖維素、白糖、聚乙二醇或氧化鈦等包衣劑；凡士林、液體石蠟、聚乙二醇、明膠、高嶺土、純水或固體脂肪等基質(zhì)。
作為可在注射或輸液制劑的制備中使用的添加劑，可使用注射用蒸餾水、生理鹽水、丙二醇等可構(gòu)成水性或即用即溶型注射劑的溶解劑或溶解助劑；葡萄糖、氯化鈉、D-甘露糖、甘油等等滲劑；無機(jī)酸、有機(jī)酸、無機(jī)堿或有機(jī)堿等pH調(diào)節(jié)劑等制劑用添加劑。
本發(fā)明的鎮(zhèn)痛劑可對包括人在內(nèi)的哺乳動物進(jìn)行給藥。
本發(fā)明的鎮(zhèn)痛劑的給藥量應(yīng)根據(jù)患者的年齡、性別、體重、癥狀和給藥途徑等條件而適當(dāng)增減，但一般而言，成人一天的有效成分的量為1μg/kg至1，000mg/kg左右的范圍，優(yōu)選為10μg/kg至100mg/kg左右的范圍。上述給藥量的鎮(zhèn)痛劑可一天一次給藥，也可分?jǐn)?shù)次(例如，2～4次左右)給藥。
本發(fā)明的鎮(zhèn)痛劑也可與其它鎮(zhèn)痛劑等合用。
需要說明的是，本發(fā)明中作為有效成分的cPA本身就是哺乳類的血清或腦等中存在的物質(zhì)，可認(rèn)為對生物體是安全的。
通過以下實施例來具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受實施例的限定。
實施例 (1)實驗方法 生物材料 使用Wister系雄性大鼠(體重300-375g)。
麻醉 初次腹腔給藥烏拉坦1.1g/Kg，進(jìn)行麻醉。由血壓和心率的變化來觀察麻醉深度，每1-2小時皮下給藥初次給藥量的1/20-1/10，以維持麻醉深度。
呼吸的維持 切開大鼠的氣管，插入氣管插管，使用人工呼吸器(SN-480-7，Shinano，Tokyo)維持呼吸。使用呼氣氣體監(jiān)測儀(1H26，NEC San-ei，Tokyo)監(jiān)測呼氣中的二氧化碳濃度，實驗中調(diào)節(jié)呼吸量為約3％。
體溫的維持 向直腸內(nèi)插入熱敏電阻，不斷地監(jiān)測深部體溫，使用體溫控制器(ATB-1100，Nihon Kohden)將體溫維持在35℃。
血壓測定、補(bǔ)液 向右大腿動脈插入插管。由動脈插管，通過壓力傳感器(TP-400T，Nihon Kohden，Tokyo)連續(xù)地記錄動脈壓。
心率的測定 將血壓波形連接到脈沖轉(zhuǎn)速計(AT601-G，Nihon Kohden)，連續(xù)地記錄心率。
交感神經(jīng)心臟分支活動的記錄 以仰臥位除去左側(cè)第2肋骨。盡量在靠近心臟處分離并切斷從星狀神經(jīng)節(jié)出發(fā)到心臟的左交感神經(jīng)心臟分支。將神經(jīng)浸于石蠟油中以使其不干燥。將分離出的神經(jīng)的中樞端置于鉑銥電極上，導(dǎo)出交感神經(jīng)心臟分支的傳出神經(jīng)活動，并用放大器(S-0476，Nihon Kohden，時間常數(shù)0.33s)放大。后肢軀體性傳入神經(jīng)的電刺激誘發(fā)的反射性反應(yīng)使用加法運算裝置(ATAC3700，Nihon Kohden)加法運算50次。平均后的反應(yīng)顯示在屏幕上，并記錄在微型記錄器中。反射性反應(yīng)的大小根據(jù)誘發(fā)的反應(yīng)的面積的計量來評價，按相對于cPA給藥前的對照大小以％來表示。記錄交感神經(jīng)活動時，為了避免有可能妨害穩(wěn)定的神經(jīng)活動記錄的軀體運動，給予了肌松弛藥加拉碘銨(20mg/kg，i.v.)。
后肢軀體性傳入神經(jīng)的電刺激 將左脛骨神經(jīng)從周圍的組織切斷。將切斷中樞端置于刺激電極上，使用電刺激裝置(SEN-7103，Nihon Kohden)，以超大的(supramaximal)矩形波脈沖(脈沖寬度0.5ms，強(qiáng)度10-20V)進(jìn)行電刺激。在調(diào)查心率增加反應(yīng)的實驗中，施加5秒時間的不間斷電刺激(10Hz)。在反射電位的實驗中，施加每3秒一次的單次電刺激。
cPA的制備和給藥 Pal-cPA(16∶0)(sn-1位上結(jié)合棕櫚酸)、ΔPal-cPA(16∶1)(sn-1位上結(jié)合棕櫚油酸)和Ole-cPA(18∶1)(sn-1位上結(jié)合油酸)，使用根據(jù)Kobayashi，S.，等Tetradron Lett.，34，4047-4050(1993)記載的方法合成的化學(xué)合成物，或根據(jù)日本特開2001-178489號公報記載的方法合成的酶合成物。經(jīng)精制的化學(xué)合成物、酶合成物之間沒有效果的差異。
2卡巴體和3卡巴體，前者是根據(jù)日本特開2004-010582號公報記載的方法，后者是根據(jù)國際公開WO2002/094286號公報記載的方法合成的。
將結(jié)晶溶解在乙醇中后，用氮氣干燥固結(jié)為膜狀。將其在即將給藥前溶于生理鹽水(0.9％NaCl)中，制備成2.5mg/mL或0.5mg/mL溶液。
cPA經(jīng)插入到右大腿靜脈中的插管進(jìn)行靜脈內(nèi)給藥。給藥量不足1mg/Kg體重時注入0.5mg/mL的溶液，給藥量為1mg/Kg體重以上時注入2.5mg/mL的溶液。兩者注入速度均為150mL/分。
(2)結(jié)果和討論 cPA對心率上升的作用 Ole-cPA給藥產(chǎn)生的對心率上升的抑制效果使用兩只大鼠進(jìn)行了驗證。該抑制效果在給藥量為1mg/Kg體重以上觀察到，之后抑制效果濃度依存性地增大(圖1)。給藥量為5mg/Kg體重時，心率的上升變?yōu)閷φ盏囊话胍韵?。對于抑制效果的持續(xù)時間，給藥量若超過1mg/Kg體重，給藥20分鐘后也確認(rèn)有抑制效果。之后抑制效果濃度依存性地增大，給藥量為5mg/Kg時20分鐘后也可觀察到顯著的抑制效果。如上所述，揭示了Ole-cPA的給藥顯著地抑制了電刺激下肢神經(jīng)誘發(fā)的心率的上升。
另一方面，Pal-cPA的給藥中，雖然全面性地確認(rèn)了上升抑制效果，但沒有發(fā)現(xiàn)一致的傾向。
cPA給藥對血壓的影響 使用兩只大鼠，與對心率上升的抑制效果同時進(jìn)行了研究。Ole-cPA的給藥量為2mg/Kg體重以下時，血壓大致在90mmHg恒定，未見給藥帶來的影響。另一方面，Pal-cPA中，給藥300mg/Kg體重時，血壓暫時性地上升至100mmHg左右，給藥2mg/Kg體重后上升至130mmHg。之后，血壓在130mmHg左右變得穩(wěn)定，給藥30分鐘之后也未見下降。
cPA給藥引起的心神經(jīng)放電的變化 心神經(jīng)放電的水平使用4只大鼠進(jìn)行了研究。由于cPA對刺激引起的心率上升的抑制效果在Ole-cPA中顯著地觀察到，而在Pal-cPA中并不顯著，因而僅針對Ole-cPA研究刺激引起的心神經(jīng)放電水平的變化。cPA給藥前和給藥后的典型電記錄圖如圖2所示。cPA的給藥尤其降低C反射的水平。
cPA給藥后的放電水平的經(jīng)時變化如圖3所示。此處，將放電水平(圖2中的峰面積)表示為用cPA給藥前的水平歸一化得到的相對值。任何濃度均在給藥10～15分鐘之后使C反射的放電水平最大降低40％(約1mV)。放電水平在20～25分鐘之后開始再次上升，但以2mg/Kg給藥時，給藥30分鐘之后與給藥前比較，也維持了20％左右的降低狀態(tài)。cPA給藥后的放電水平抑制的時間變化和心率上升抑制時觀察到的時間變化大致一致，此外，就抑制水平而言，也觀察到了與心率上升的抑制效果同樣的劑量依存性。
另一方面，對于Aδ反射，雖然在cPA給藥后觀察到放電水平的變化，但與C反射比較，變化中卻未見一致性。此外，對實驗中所用的4只大鼠各自而言，C反射中4只大鼠顯示了一致性的變化，與此相對地，可認(rèn)為Aδ反射中的放電水平變化具有容易受到個體差異或生理條件影響的特性。
用和天然cPA一樣的方法，調(diào)查了2卡巴cPA(Ole-、Pal-、ΔPal-)、3卡巴cPA(Ole-、Pal-、ΔPal-)對心率、血壓、心神經(jīng)放電水平的效果。
對心率的效果，在Ole-、ΔPal-卡巴cPA中，觀察到了與天然Ole-cPA大致同樣的對心率上升的抑制效果。
對于血壓，所有情形中均未發(fā)現(xiàn)與Ole-cPA同樣的給藥產(chǎn)生的影響。
2卡巴cPA之中，給藥棕櫚油?；?2卡巴cPA(ΔPal-2ccPA)時，觀察到了心神經(jīng)的去極化水平，特別是C反射的顯著的水平降低。
對50-500μg/Kg濃度的ΔPal-2ccPA對C反射的去極化水平提供的效果進(jìn)行分析時，所有濃度下，給藥10-15分鐘之后C反射的去極化水平降低，在天然Ole-cPA顯示約50％降低的濃度(2mg/Kg)的1/40的濃度50μg/Kg時顯示了30％以上的降低，1/20的濃度100μg/Kg時顯示了約60％的降低，1/10的濃度200μg/Kg時顯示了約70％的降低，1/4的濃度500μg/Kg時顯示了約80％的降低。去極化水平在20～25分鐘之后開始再次上升，緩慢恢復(fù)至給藥時的水平。
3卡巴cPA之中，和2卡巴體同樣，棕櫚油酰基-3卡巴cPA(ΔPal-3ccPA)給藥中，觀察到了心神經(jīng)的去極化水平，特別是C反射的顯著的水平降低。其程度要比2卡巴體稍低，但用濃度為50-200μg/Kg的ΔPal-3ccPA時，給藥10-15分鐘之后C反射的去極化水平降低。在天然Ole-cPA顯示約50％降低的濃度(2mg/Kg)的1/40的濃度50μg/Kg時顯示了約30％的降低，1/20的濃度100μg/Kg時顯示了約50％的降低，1/10的濃度200μg/Kg時顯示了約60％的降低。此時，去極化水平也在20～25分鐘之后開始再次上升，緩慢恢復(fù)至給藥時的水平。
圖4中表示了Ole-cPA和ΔPal-2ccPA、ΔPal-3ccPA的比較。
以上示出了伴隨電刺激的心率上升或心神經(jīng)的去極化，通過cPA或2ccPA、3ccPA的給藥而降低的結(jié)果。C反射的去極化水平被認(rèn)為反映慢性疼痛，強(qiáng)烈暗示了cPA和其衍生物2ccPA、3ccPA具有顯著的鎮(zhèn)痛效果。
cPA引起鎮(zhèn)痛作用的預(yù)測機(jī)理 作為cPA引起鎮(zhèn)痛作用的作用機(jī)制，預(yù)測有下述機(jī)制。
(1)由于通過傷害感受器使用中樞側(cè)的傳入神經(jīng)纖維的電刺激引起的反應(yīng)進(jìn)行評價，因此排除了對傷害感受器周圍的外周神經(jīng)作用的可能性。
(2)有可能阻斷初級傳入C纖維中的興奮傳導(dǎo)。
(3)有可能抑制中樞神經(jīng)內(nèi)的傷害信號傳導(dǎo)物質(zhì)的釋放，例如抑制從脊髓后角中的初級傳入C纖維末端釋放谷氨酸鹽或P物質(zhì)。
(4)有可能在中樞神經(jīng)內(nèi)，例如在脊髓后角中，通過內(nèi)源性阿片樣物質(zhì)釋放促進(jìn)作用或阿片受體敏感性亢進(jìn)作用，來活化阿片樣物質(zhì)鎮(zhèn)痛系統(tǒng)。
(5)有可能活化血清素能下行抑制系統(tǒng)或去甲腎上腺素能下行抑制系統(tǒng)、GABA介導(dǎo)的鎮(zhèn)痛系統(tǒng)等非阿片類物質(zhì)鎮(zhèn)痛系統(tǒng)。
(6)有可能拮抗LPA引起的產(chǎn)生疼痛的作用。



圖1圖1表示cPA給藥對下肢神經(jīng)刺激后的心率變化的效果。
圖2圖2表示cPA給藥前(左)和給藥后(右)的電記錄圖的典型例。左右的峰分別表示Aδ反射、C反射。
圖3圖3表示下肢神經(jīng)刺激后的心神經(jīng)中的Aδ和C反射水平的變化。各數(shù)據(jù)點表示每5分鐘的平均值。將對各大鼠進(jìn)行2～3次給藥所得的應(yīng)答水平的平均值進(jìn)一步用4只大鼠來平均。棒表示標(biāo)準(zhǔn)誤差。
圖4圖4表示將各種濃度(μg/Kg)的ΔPal-2ccPA給藥和ΔPal-3ccPA給藥引起的下肢神經(jīng)刺激后的心神經(jīng)中的C反射水平變化，與天然Ole-cPA的效果比較的結(jié)果。測定C反射的峰面積，將其結(jié)果作為各反射的去極化水平。各給藥中，以即將給藥前(0分)的去極化水平為基準(zhǔn)，計算相對去極化水平(％)。圖表表示給藥后10～15分鐘測定的相對去極化水平的平均值。
權(quán)利要求
1.鎮(zhèn)痛劑，其含有以通式(1)表示的化合物作為有效成分
式中，R為碳原子數(shù)1～30的直鏈狀或支鏈狀烷基、碳原子數(shù)2～30的直鏈狀或支鏈狀烯基、或碳原子數(shù)2～30的直鏈狀或支鏈狀炔基，這些基團(tuán)也可含有環(huán)烷烴環(huán)或芳香環(huán)；X和Y分別獨立地表示-O-或-CH2-，X和Y不同時為-CH2-，M為氫原子或反陽離子。
2.權(quán)利要求1所述的鎮(zhèn)痛劑，所述通式(1)中，X和Y為-O-。
3.權(quán)利要求1所述的鎮(zhèn)痛劑，所述通式(1)中，X或Y為-CH2-。
4.權(quán)利要求1～3中任意一項所述的鎮(zhèn)痛劑，其中以通式(1)表示的化合物為1-油?；h(huán)狀磷脂酸或1-棕櫚油?；h(huán)狀磷脂酸。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于闡明cPA的新生理活性之一的鎮(zhèn)痛作用，并提供新型鎮(zhèn)痛劑。根據(jù)本發(fā)明，提供含有作為磷脂的1種的環(huán)狀磷脂酸衍生物的鎮(zhèn)痛劑。
文檔編號A61K31/665GK101610775SQ200780045798
公開日2009年12月23日 申請日期2007年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月28日
發(fā)明者室伏貴美子, 金敷晴美 申請人:國立大學(xué)法人御茶水女子大學(xué)