專利名稱：嘌呤衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的化合物、它們的制備方法、含有這些化合物的藥物制劑以及它們?cè)谥委熤械膽?yīng)用。
炎癥是一種對(duì)組織損傷或微生物侵入的初級(jí)反應(yīng)，并且特征在于白細(xì)胞粘附于內(nèi)皮、血細(xì)胞滲出以及組織內(nèi)的活化作用。白細(xì)胞的活化作用會(huì)導(dǎo)致毒性氧物質(zhì)(如超氧化物陰離子)的產(chǎn)生和顆粒產(chǎn)物(如過(guò)氧化物酶和蛋白酶)的釋放。循環(huán)白細(xì)胞包括嗜中性白細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。不同形式的炎癥涉及不同類型的滲透白細(xì)胞，通過(guò)粘附分子的分布、細(xì)胞因子和趨化因子在組織內(nèi)的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)特定的分布。
白細(xì)胞的主要功能是保護(hù)主體不受侵入生物體(例如，細(xì)菌和寄生蟲)的侵害。一旦組織受傷或感染，會(huì)出現(xiàn)一系列的情況，從而引起白細(xì)胞從循環(huán)液向感染組織局部募集。需要控制白細(xì)胞的募集以便使白細(xì)胞在組織修復(fù)和炎性滲透物的消除后對(duì)外來(lái)細(xì)胞或死細(xì)胞進(jìn)行有序的破壞和吞噬作用。但是在慢性炎癥狀態(tài)，募集往往是不適當(dāng)?shù)模荒艹浞值乜刂葡⑶已装Y反應(yīng)引起組織損傷。
從體外和體內(nèi)試驗(yàn)的證據(jù)表明對(duì)腺苷A2A受體有活性的化合物具有抗炎作用。Cronstein(1994)b已對(duì)此作了評(píng)述。對(duì)分離的嗜中性白細(xì)胞的研究顯示出A2受體介導(dǎo)的超氧化物產(chǎn)生、脫粒、聚集和粘附的抑制作用(Cronstein等人，1983和1985；Burkey和Webster，1993；Richter，1992；Skubitz等人，1988.)。當(dāng)使用對(duì)A2A受體選擇性比A2B受體選擇性更高的試劑(例如，CGS21680)時(shí)，抑制作用的特性表現(xiàn)出與對(duì)A2A受體亞型的作用一致(Dianzani等人，1994)。腺苷激動(dòng)劑也可抑制其它類型的白細(xì)胞對(duì)刺激的反應(yīng)(Elliot和Leonard，1989；Peachell等人，1989)。對(duì)所有動(dòng)物的研究表明氨甲喋呤的抗炎作用可經(jīng)過(guò)腺苷和A2受體活化作用介導(dǎo)(Asako等人，1993；Cronstein等人，1993和1994)。腺苷本身和提高腺苷循環(huán)水平的化合物在體內(nèi)也顯示出體內(nèi)的抗炎作用(Green等人，1991；Rosengren等人，1995)。此外，在男性中提高的循環(huán)腺苷水平(腺苷脫氨酶不足的結(jié)果)導(dǎo)致免疫抑制(Hirschorn，1993)。
本發(fā)明涉及化合物(以及其鹽和溶劑化物)，其抑制白細(xì)胞的募集和活化作用并且是腺苷A2A(以下稱A2A)受體的有效的激動(dòng)劑。因此，所述化合物在炎癥部位牽扯到白細(xì)胞的疾病中提供保護(hù)避免受白細(xì)胞誘導(dǎo)的組織損傷中有潛在的治療效益。本發(fā)明的化合物也代表一種對(duì)在炎癥疾病的治療中的皮質(zhì)類固醇的更安全的替代，皮質(zhì)類固醇的用途因其副作用輪廓而受限制。
此外，本發(fā)明的化合物顯示出優(yōu)于已知的A2A選擇性激動(dòng)劑的改善特性，因?yàn)樗鼈兙哂幸粋€(gè)或多個(gè)以下特性(I)對(duì)A2A的選擇性比人A3受體大大約100倍；(II)對(duì)A2A的選擇性比人A2B受體大大約100倍；(III)對(duì)A2A的選擇性比人A1受體大大約100倍；(IV)與人血清白蛋白的結(jié)合大于大約90％；和(V)不太顯著的心血管作用，特別是減少的心動(dòng)過(guò)速。
可以認(rèn)為這種特性是有益的，因?yàn)樵诎准?xì)胞(例如，嗜酸性粒細(xì)胞)和其它炎性細(xì)胞(例如，肥大細(xì)胞)表面也發(fā)現(xiàn)了存在A3受體，以及這些受體的活化作用可以有促炎癥作用(Kohno等人，1996；VanSchaick等人，1996)。甚至認(rèn)為腺苷在氣喘中的支氣管收縮作用可能是經(jīng)過(guò)腺苷A3受體介導(dǎo)的(Kohno等人，1996)。還可在肥大細(xì)胞表面發(fā)現(xiàn)A2B受體并可由此涉及肥大細(xì)胞活化作用。A1受體具有廣泛的組織分布并尤其可見于心臟、脂肪細(xì)胞、呼吸平滑肌、嗜中性白細(xì)胞、腎、海馬和皮層表面。因此A1受體的活化作用可以引起減少的脂肪分解、多尿和CNS活化作用(Fozard J.R.、McCarthy C，CurrentOpinion in Investigational Drugs 2002 Vol 3.No.1 p69-77)?？梢云诖憩F(xiàn)出大于大約90％與人血清白蛋白的結(jié)合，例如大約95％的結(jié)合或更高的化合物具有改善的副作用特性。例如，可以期待此類化合物較少地表現(xiàn)出心臟作用，如心動(dòng)過(guò)速。
因此，根據(jù)本發(fā)明，我們提供一種式(I)的化合物及其鹽和溶劑化物
式(I)化合物要求關(guān)于其中一個(gè)四氫呋喃環(huán)的絕對(duì)立體化學(xué)，使得在四氫呋喃環(huán)中關(guān)于每個(gè)立體中心的立體化學(xué)如下 然而，關(guān)于另一個(gè)四氫呋喃環(huán)中的每個(gè)立體中心的立體化學(xué)不需要被確定。在這一必要條件內(nèi)，本發(fā)明包括所有式(I)化合物的立體異構(gòu)體(即非對(duì)映異構(gòu)體)，無(wú)論是作為分離的以致基本上不含另一個(gè)立體異構(gòu)體(即純的)單個(gè)的立體異構(gòu)體還是作為混合物。分離的以致基本上不含另一個(gè)立體異構(gòu)體的單個(gè)的立體異構(gòu)體(即純的)將會(huì)被分離，以致有小于大約10％，例如小于大約1％或小于大約0.1％的另一個(gè)立體異構(gòu)體存在。
優(yōu)選的式(I)化合物中兩個(gè)四氫呋喃環(huán)的立體化學(xué)是使得在四氫呋喃環(huán)中的每個(gè)立體中心以上述式(Ia)所示的方式確定。
無(wú)論是呈單個(gè)的異構(gòu)體還是呈其混合物形式的式(I)化合物的所有幾何異構(gòu)體也都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。因此，呈反式和順式構(gòu)型，特別是呈反式的式(I)化合物形成本發(fā)明的另一方面。
本發(fā)明化合物的鹽也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。由于它們?cè)谒幤分械臐撛谟猛?，?I)化合物的鹽優(yōu)選是藥學(xué)上可接受的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽可以包括酸加成鹽。藥學(xué)上可接受的酸加成鹽可通過(guò)使式(I)化合物與合適的無(wú)機(jī)或有機(jī)酸(例如，氫溴酸、鹽酸、甲酸、硫酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、馬來(lái)酸、對(duì)苯二甲酸、鄰苯二甲酸、乙酸、富馬酸、檸檬酸、酒石酸、苯甲酸、對(duì)甲苯磺酸、甲磺酸或萘磺酸)，任選地在合適的溶劑(例如，有機(jī)溶劑)中反應(yīng)，以得到所述的鹽，該鹽通常通過(guò)例如結(jié)晶和過(guò)濾分離。因此，式(I)化合物的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽可以是例如氫溴酸鹽、鹽酸鹽、甲酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、琥珀酸鹽、馬來(lái)酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、對(duì)苯二甲酸鹽、乙酸鹽、富馬酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、苯甲酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽或萘磺酸鹽。其它非藥學(xué)上可接受的鹽，例如草酸鹽或三氟乙酸鹽，可以用于例如本發(fā)明化合物的分離，并且包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明將式(I)化合物所有可能的化學(xué)計(jì)量和非化學(xué)計(jì)量形式的鹽包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
還將本發(fā)明的化合物和鹽的所有溶劑化物、水合物、復(fù)合物和多晶型包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
式(I)化合物或其被保護(hù)的衍生物可以根據(jù)第一種方法(A)制備，通過(guò)使式(II)化合物或其被保護(hù)的衍生物
其中L表示離去基團(tuán)，例如鹵素，特別是氯，與[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]胺反應(yīng) 所述反應(yīng)通常包括在惰性溶劑(例如，DMSO)存在下將反應(yīng)物加熱到50℃-150℃，例如100℃-130℃，特別是大約110℃-120℃的溫度?；蛘?，所述反應(yīng)可以在較低的溫度，例如大約100℃下進(jìn)行延長(zhǎng)的時(shí)間，例如18-24小時(shí)。式(II)化合物可以以其中羥基被保護(hù)，例如被丙酮化合物或乙酰基，特別是乙酰基保護(hù)的形式使用。
式(II)化合物或其被保護(hù)衍生物可以通過(guò)式(III)化合物或其被保護(hù)的衍生物
其中L表示如上所定義的離去基團(tuán)，與1，4-二氨基環(huán)己烷，例如反式-1，4-二氨基環(huán)己烷反應(yīng)來(lái)制備。該反應(yīng)通常在堿(例如胺類堿，如二異丙基乙胺)的存在下在合適的溶劑(例如醇類，如異丙醇)中在升溫(例如50℃-60℃)條件下進(jìn)行。
式(III)化合物或其被保護(hù)的衍生物以及它的制備方法公開于WO 98/28319。式(III)化合物是WO 98/28319中的中間體7。簡(jiǎn)言之，式(III)化合物可以通過(guò)使式(IV)化合物 或其被保護(hù)的衍生物與2，6-二氯嘌呤在合適的溶劑中在路易斯酸(例如，三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯)存在的惰性條件下反應(yīng)來(lái)制備。
式(III)和(IV)化合物可以以其中羥基被合適的保護(hù)基，例如被丙酮化合物或乙?；?，特別是乙?；Ｗo(hù)的形式使用。
式(IV)化合物可以通過(guò)WO 98/28319中公開的方法或通過(guò)類似的方法來(lái)制備。式(IV)化合物是WO 98/28319中的中間體6。
根據(jù)第二種方法(B)，式(I)化合物或其被保護(hù)的衍生物可以通過(guò)使式(V)化合物
與如上文定義的式(IV)化合物或其被保護(hù)的衍生物反應(yīng)來(lái)制備。該反應(yīng)可以在受阻的堿(例如，DBU)和路易斯酸(例如，三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯)的存在下進(jìn)行。
式(V)化合物可以通過(guò)將式(VI)化合物脫保護(hù)來(lái)制備 其中L’是合適的胺類保護(hù)基，例如2-四氫吡喃。脫保護(hù)通?？梢栽谑覝叵峦ㄟ^(guò)用合適的酸(例如，HCl)進(jìn)行酸水解來(lái)完成。
式(VI)化合物可以通過(guò)使式(VII)化合物
其中L和L’如上所定義，與[2-(1-甲基-1H-咪唑基-4-基)乙胺反應(yīng)來(lái)制備。所述的反應(yīng)通常包括在惰性溶劑(例如，DMSO或乙二醇)存在下將反應(yīng)物加熱到50℃-150℃，例如100℃-130℃，特別是大約110℃-120℃的溫度。外加的堿(例如，磷酸氫二鉀)也可以用來(lái)提高反應(yīng)性。
式(VII)化合物可以通過(guò)使式(VIII)化合物 其中L和L’是如上所定義的離去基團(tuán)，與1，4-二氨基環(huán)己烷，例如反式-1，4-二氨基環(huán)己烷反應(yīng)來(lái)制備。該反應(yīng)通常在堿(例如胺類堿，如二異丙基乙胺)的存在下在合適的溶劑(例如醇類，如異丙醇或正丁醇)中在升溫(例如60℃-80℃)條件下進(jìn)行。
式(VIII)化合物可以根據(jù)WO 03/080613中描述的方法或通過(guò)類似的方法來(lái)制備。式(VIII)化合物是WO 03/080613中的中間體1。
此外式(I)化合物可以根據(jù)第三種方法(C)，通過(guò)將式(I)化合物的被保護(hù)的衍生物脫保護(hù)來(lái)制備，所述被保護(hù)的衍生物為例如糖部分上的羥基被乙?；Ｗo(hù)。
可以使用如上所述的本發(fā)明化合物或用于制備本發(fā)明化合物的中間體的被保護(hù)的衍生物。保護(hù)基的例子以及它們的除去方法可以見于T W Greene和P G M Wuts，“Protective Groups in OrganicSynthesis”(J Wiley和Sons，1991)。合適的羥基保護(hù)基包括烷基(例如，甲基)、縮醛(例如，丙酮化合物)和酰基(例如，乙?；虮郊柞；?，這些基團(tuán)可以通過(guò)水解除去，以及包括可以通過(guò)催化氫解除去的芳烷基(例如，芐基)。合適的胺類保護(hù)基包括磺?；?例如，對(duì)甲苯磺?；?、?；?例如，芐氧基羰基或叔丁氧羰基)和芳烷基(例如，芐基)，它們可以視情況通過(guò)水解或氫解來(lái)除去。
式(I)化合物及其鹽或溶劑化物抑制白細(xì)胞功能的潛在性可以，例如通過(guò)它們抑制用例如N-甲酰基甲二磺?；?亮氨酰基-苯基丙氨酸(fMLP)的化學(xué)吸引物刺激的嗜中性白細(xì)胞中超氧化物(O2-)產(chǎn)生的能力來(lái)證明。因此，式(I)化合物在炎癥部位涉及白細(xì)胞的疾病中為白細(xì)胞誘導(dǎo)的組織損傷提供保護(hù)中有潛在的治療效益。
其中抑制白細(xì)胞功能的化合物可具有潛在地有益抗炎作用的疾病狀態(tài)的例子包括呼吸道疾病，例如成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)、支氣管炎(包括慢性支氣管炎)、囊性纖維變性、哮喘(包括過(guò)敏原誘導(dǎo)的氣喘反應(yīng))、肺氣腫、鼻炎和膿毒性休克。其它相關(guān)的疾病狀態(tài)包括胃腸道疾病，例如包括炎癥性腸病的腸炎疾病(例如，克羅恩氏病或潰瘍性結(jié)腸炎)、幽門螺桿菌誘導(dǎo)的胃炎和對(duì)射線照射或過(guò)敏原暴露而繼發(fā)性的腸炎疾病，和非甾體抗炎藥物誘導(dǎo)的胃病。其它疾病可以包括皮膚病，例如牛皮癬、過(guò)敏性皮炎和過(guò)敏性反應(yīng)以及具有炎性成分的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，例如阿爾茨海默氏病和多發(fā)性硬化。
其中此類化合物具有潛在的有益效果的疾病狀態(tài)的其它例子包括心臟病，例如外周性血管疾病、局部出血后的再灌注損傷和自發(fā)的嗜酸性白細(xì)胞增多綜合征。
更進(jìn)一步地，抑制淋巴細(xì)胞功能的化合物可以用作免疫抑制劑，從而用于自身免疫疾病(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和糖尿病)的治療，以及可以用于抑制病變轉(zhuǎn)移。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解可參照本文進(jìn)行延伸到確定病癥的預(yù)防和治療的治療。
特別感興趣的是哺乳動(dòng)物(例如人)的哮喘、慢性肺阻塞性疾病(COPD)、慢性支氣管炎和氣腫，尤其是哮喘和COPD的治療和/或預(yù)防。
如上所述，式(I)化合物及其鹽和溶劑化物可以用于人或獸醫(yī)用藥，特別是作為抗炎藥。
因此，作為本發(fā)明的另一方面提供式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物用于人或獸用藥，特別是在患有炎性病癥且易患白細(xì)胞誘導(dǎo)的組織損傷的患者的治療中。
根據(jù)本發(fā)明另一方面，提供式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物在生產(chǎn)用于治療患有炎性病癥且易患白細(xì)胞誘導(dǎo)的組織損傷的患者的藥物中的用途。
在另外的或可供選擇的方面，提供一種用于治療患有炎性病癥和/或變應(yīng)性病癥且易患白細(xì)胞誘導(dǎo)的組織損傷的人或動(dòng)物受試者的方法，該方法包括向所述人或動(dòng)物受試者給予有效量的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
對(duì)于用于藥物，本發(fā)明的化合物通常以藥物組合物的形式給予。
因此，本發(fā)明在另一方面中提供一種藥物組合物，該藥物組合物包含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物，任選地具有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。
所述藥物組合物可以用于所有本文描述的病癥的治療和/或預(yù)防。
式(I)化合物及其鹽和溶劑化物和/或含有它們的藥物組合物可以例如通過(guò)非腸道(例如，靜脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi))、吸入、經(jīng)鼻、經(jīng)皮、或直腸給藥，或以局部治療的方式(例如，軟膏或凝膠)給藥。特別研究的給藥途徑包括吸入和鼻內(nèi)。吸入給藥包括對(duì)肺的局部給藥，例如通過(guò)氣霧劑或干粉組合物。
式(I)化合物及其鹽和溶劑化物和/或藥物組合物可以通過(guò)如WO00/50011中描述的控制或持續(xù)釋放的制劑給予。
非腸道的組合物可以包含所述化合物或藥學(xué)上可接受的鹽在無(wú)菌水溶液載體或胃腸外可接受的油中的溶液或懸浮液?；蛘?，可以將所述溶液冷凍干燥；所述冷凍干燥的非腸道藥物組合物可以在正要給藥前用合適的溶劑復(fù)原。
用于經(jīng)鼻或吸入給藥的組合物可以方便地以氣霧劑、溶液、懸浮液、滴劑、凝膠或干粉的方式，用含水或非水的賦形劑配制而成，任選地添加例如增稠劑、調(diào)節(jié)pH值的緩沖鹽或酸或堿、等滲調(diào)節(jié)劑、抗氧化劑和/或防腐劑的試劑。
可以配制用于吸入器或吹入器的例如明膠的膠囊和藥筒或者例如層壓鋁箔的囊泡，使其含有本發(fā)明化合物和合適的粉末基質(zhì)(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
這里還提供一種用于制備此類藥物制劑的方法，該方法包括混合所述成分。
對(duì)于合適和/或適合于吸入給藥的組合物，式(I)化合物或鹽或溶劑化物通常以顆粒-尺寸-減少的形式存在，并且特別是通過(guò)微粉化得到或可獲得的尺寸-減少的形式。通常，尺寸-減少的(例如微粉化)化合物或鹽的粒徑可以由大約0.5至大約10微米的D50值來(lái)定義(例如，使用激光衍射測(cè)量的)。
氣霧劑(例如用于吸入給藥)可以包含所述活性物質(zhì)在藥學(xué)上可接受的含水或非水溶劑中的溶液或微懸浮液。氣霧劑可以以單或多劑量的無(wú)菌形式存在于密封容器中，可以采取具有霧化裝置或吸入器的藥筒或使用替換物的形式。或者，所述密封容器可以是單一的分散裝置，例如單劑量的鼻吸入器或裝有計(jì)量閥的氣霧劑分配器(計(jì)量劑量的吸入器)，一旦容器的內(nèi)容物排出，該裝置可被有計(jì)劃地扔棄。
包含氣霧劑分配器的劑型優(yōu)選地含有合適的處于壓力下的推進(jìn)劑，例如壓縮空氣、二氧化碳或有機(jī)推進(jìn)劑，如氯氟烴(CFC)或氫氟烴(HFC)。合適的CFC推進(jìn)劑包括二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷和二氯四氟乙烷。合適的HFC推進(jìn)劑包括1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷和1，1，1，2-四氟乙烷。所述氣霧劑劑型還可以采取泵送霧化器的形式。
任選地，特別是對(duì)于干粉吸入組合物，用于吸入給藥的藥物組合物可以被摻入許多以條狀或帶狀縱向安裝在合適的吸入裝置內(nèi)部的密封劑量容器中(例如含有所述干粉組合物)。所述容器在需要時(shí)是可破裂的或能剝開的，例如干粉組合物的劑量可以通過(guò)經(jīng)例如GlaxoSmithKline出售的DISKUSTM裝置吸入給予。所述DISKUSTM吸入裝置作為例子被描述于GB 2242134A中，并且在這樣的裝置中將至少一個(gè)用于粉末形式藥物組合物的容器(所述容器優(yōu)選地是許多以條狀或帶狀縱向安裝的密封劑量容器)限定在兩個(gè)成員之間且彼此能安全的脫去；所述裝置包含限定所述容器開啟位置的工具；用于脫去在開口位置分開的成員以打開容器；和與打開的容器相通的出口，通過(guò)該出口使用者可以從打開的容器吸入粉末形式的藥物組合物。
式(I)的活性化合物或其鹽或溶劑化物在本發(fā)明的局部組合物中的比例取決于所制備的制劑的確切類型，但是通常可以在以重量計(jì)從0.001至10％的范圍內(nèi)。通常，對(duì)于大多數(shù)類型的制劑，使用的比例可以在0.005至1％范圍內(nèi)，例如0.01至0.5％。然而，在用于吸入或吹入的粉末中，使用比例可以在0.1至5％范圍內(nèi)。
優(yōu)選地安排氣霧劑以便每個(gè)計(jì)量劑量或“噴出”的氣霧劑中含有20μg-2000μg，優(yōu)選大約20μg-500μg的式(I)化合物。給藥可以每天一次或每天幾次，例如2、3、4或8次，每次給予例如1、2或3劑量。氣霧劑的整個(gè)日劑量在100μg-10mg范圍內(nèi)，優(yōu)選200μg-2000μg。在吸入器或吹入器中通過(guò)膠囊和藥筒輸送的整個(gè)日劑量和計(jì)量的劑量通常是氣霧劑劑量的兩倍。
根據(jù)本發(fā)明的化合物(或其鹽和溶劑化物)和藥物制劑可以與一種或多種其它藥物聯(lián)合使用或包括一種或多種其它藥物，其它藥物例如選自抗炎藥、抗膽堿能試劑(特別是M1、M2、M1/M2或M3受體激動(dòng)劑)、β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑、抗感染藥劑(例如，抗生素、抗病毒藥物)或抗組胺藥物。因此，本發(fā)明在另一方面提供一種包含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或生理功能衍生物和一種或多種其它的治療活性劑的組合，其它的治療活性劑例如選自抗炎劑(例如，皮質(zhì)類固醇或NSAID)、抗膽堿能劑、β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑、抗感染藥劑(例如，抗生素或抗病毒藥物)或抗組胺藥物。本發(fā)明具體的組合包括式(I)化合物或其生理上可接受的鹽或溶劑化物和甾族化合物、β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑、抗膽堿能藥和/或PDE-4抑制劑。優(yōu)選的組合包含一種或兩種其它治療劑。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)清楚，其它治療成分可以合適的以鹽(例如，堿金屬或胺鹽或酸加成鹽的形式)、或前藥、或酯(例如，低級(jí)烷基酯)、或溶劑化物(例如，水合物)的形式以確保所述治療成分的活性和/或穩(wěn)定性和/或物理性質(zhì)(例如，溶解度)的最佳性質(zhì)。還應(yīng)當(dāng)清楚，所述治療成分可以適宜的以光學(xué)純的形式使用。
因此，本發(fā)明在另外一方面提供一種包含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物和一種或多種其它的治療活性劑的組合，例如，β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑、抗組胺劑、抗變應(yīng)性劑、抗炎劑(包括，甾族化合物或PDE-4抑制劑)、抗膽堿能劑或抗感染藥劑(例如，抗生素或抗病毒藥物)。
β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑的例子包括沙美特羅(可以是外消旋體或單一的對(duì)映體，如R-對(duì)映體)、沙丁胺醇、福莫特羅、甲氧苯舒喘寧、非諾特羅或特布他林及其鹽，例如，沙美特羅的xinafoate鹽、沙丁胺醇的硫酸鹽或游離堿或福莫特羅的富馬酸鹽。長(zhǎng)效的β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑例如沙美特羅或福莫特羅是優(yōu)選的。
其它的長(zhǎng)效β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑包括那些在WO 02/66422A、WO 02/270490、WO 02/076933、WO 03/024439、WO 03/072539、WO03/091204、WO 04/016578、WO 04/022547、WO 04/037807、WO04/037773、WO 04/037768、WO 04/039762、WO 04/039766、WO01/42193和WO 03/042160中描述的β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑。
具體的長(zhǎng)效β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑是3-(4-{[6-({(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥基甲基)苯基]乙基}氨基)己基]氧}丁基)苯磺酰胺；3-(3-{[7-({(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-羥基甲基)苯基]乙基}-氨基)庚基]氧}丙基)苯磺酰胺；4-{(1R)-2-[(6-{2-[(2，6-二氯芐基)氧]乙氧基}己基)氨基]-1-羥基乙基}-2-(羥基甲基)苯酚；4-{(1R)-2-[(6-{4-[3-(環(huán)戊磺酰基)苯基]丁氧基}己基)氨基]-1-羥基乙基}-2-(羥基甲基)苯酚；N-[2-羥基-5-[(1R)-1-羥基-2-[[2-4-[[(2R)-2-羥基-2-苯基乙基]氨基]苯基]乙基]氨基]乙基]苯基]甲酰胺，和N-2{2-[4-(3-苯基-4-甲氧基苯基)氨基苯基]乙基}-2-羥基-2-(8-羥基-2(1H)-喹啉-5-基)乙胺。
可以摻入組合中的抗炎劑包括具有抗炎活性的皮質(zhì)類固醇，特別是吸入的皮質(zhì)類固醇和它們的前藥。皮質(zhì)類固醇的例子包括甲基強(qiáng)的松龍、強(qiáng)的松龍、地塞米松、丙酸氟替卡松、6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-二乙酮氧-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-(2-氧代-四氫呋喃-3S-基)酯、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-17α-(1-甲基環(huán)丙基羰基)氧-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-(2，2，3，3-四甲基環(huán)丙基羰基)氧-雄甾-1，4-二烯-17β-羧酸氰甲基酯、倍氯米松酯(例如，17-丙酸酯或17，21-二丙酸酯)、布地奈德、氟尼縮松、毛他松酯(如糠酸酯)、氟羥強(qiáng)的松龍丙酮化合物、rofleponide、ciclesonide、(16α，17-[[(R)-環(huán)己基亞甲基]二(氧)]-11β，21-二羥基-孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮)、丙酸butixocort、RPR-106541和ST-126。優(yōu)選的皮質(zhì)類固醇包括丙酸氟替卡松、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1，3-噻唑-5-羰基)氧]-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯和6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯，更優(yōu)選6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代數(shù)酸S-氟甲基酯。
具有糖皮質(zhì)激素活性的非甾體化合物包括以下專利申請(qǐng)中記載的那些化合物WO 03/082827、WO 01/10143、WO 98/54159、WO04/005229、WO 04/009016、WO 04/009017、WO 04/018429、WO03/104195、WO 03/082787、WO 03/082280、WO 03/059899、WO03/101932、WO 02/02565、WO 01/16128、WO 00/66590、WO03/086294、WO 04/026248、WO 03/061651、WO 03/08277。
抗炎劑包括非甾體抗炎藥(NSAID′s)。
可用于組合的合適的NSAID′s包括色甘酸二鈉、nedocromil鈉、磷酸二酯酶(PDE)抑制劑(例如，茶堿、PDE4抑制劑或混合的PDE3/PDE4抑制劑)、白三烯拮抗劑、白三烯合成的抑制劑(例如，montelukast)、iNOS抑制劑、類胰蛋白酶和彈性蛋白酶抑制劑、β-2整聯(lián)蛋白拮抗劑和腺苷受體激動(dòng)劑或拮抗劑(例如，腺苷2a激動(dòng)劑)、細(xì)胞因子拮抗劑(例如，趨化因子拮抗劑，如CCR3拮抗劑)或細(xì)胞因子合成的抑制劑，或5-脂氧合酶抑制劑。iNOS(可誘導(dǎo)的氧化氮合酶抑制劑)優(yōu)選用于口服給藥。其它iNOS抑制劑包括那些公開于WO 93/13055、WO 98/30537、WO 02/50021、WO 95/34534和WO99/62875中的iNOS抑制劑。合適的CCR3包括那些公開于WO02/26722中的CCR3。
可以用于組合的磷酸二酯酶4(PDE4)抑制劑包括已知的抑制PDE4酶的或發(fā)現(xiàn)作為PDE4抑制劑的任何化合物，并且只是PDE4抑制劑，不是抑制其它PDE家族成員(如PDE3和PDE5以及PDE4)的化合物。
化合物包括順式-4-氰基-4-(3-環(huán)戊氧基-4-甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-羧酸、2-甲氧甲?；?4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-酮和順式-[4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-醇]。其它感興趣的化合物是描述于1996年9月3日發(fā)布的美國(guó)專利US 5,552,438中的順式-4-氰基-4-[3-(環(huán)戊氧基)-4-甲氧基苯基]環(huán)己烷-1-羧酸(也稱為cilomilast)以及它的鹽、酯、前藥或自然形式；將該專利以及其公開的化合物在此以全文引入作為參考。
其它PDE4抑制劑包括來(lái)自Elbion的AWD-12-281(Hofgen，N等人，15th EFMC Int Symp Med Chem(Sept 6-10，Edinburgh)1998，Abst P.98；CA登記號(hào)No.247584020-9)；命名為NCS-613(INSERM)的9-芐基腺嘌呤衍生物；來(lái)自Chiroscience和Schering-Plough的D-4418；稱為Cl-1018(PD-168787)并歸于Pfizer的苯并二氮雜卓PDE4抑制劑；Kyowa Hakko在WO 99/16766中公開的苯并間二氧環(huán)戊烯；來(lái)自Kyowa Hakko的K-34；來(lái)自Napp的V-11294A(Landells，L.J.等人，Eur Resp J[Annu Cong Eur Resp Soc(Sept 19-23，日內(nèi)瓦)1998]1998，12(Suppl.28)Abst P2393)；roflumilast(CA登記號(hào)No162401-32-3)和來(lái)自BykGulden的pthalazinone(WO 99/47505，將其公開內(nèi)容在此引入作為參考)；由Almirall-Prodesfarma研制的arofylline；來(lái)自Vernalis的VM554/UM565；或T-440(TanabeSeiyaku；Fuii，K.等人，J Pharmacol Exp Ther，1998，284(1)162)和T2585。
其它化合物披露于公開的國(guó)際專利申請(qǐng)WO 04/024728(GlaxoGroup Ltd)、PCT/EP2003/014867(Glaxo Group Ltd)和PCT/EP2004/005494(Glaxo Group Ltd)。
抗膽堿能劑是作為毒蕈堿(muscarinic)受體拮抗劑的化合物，特別是M1或M3受體拮抗劑、M1/M3或M2/M3受體雙向拮抗劑、或M1/M2/M3受體總拮抗劑的那些化合物。通過(guò)吸入給藥的示例性化合物包括異丙阿托品(例如，其溴化物，CAS 22254-24-6，以商品名Atrovent銷售)、oxitropium(例如，其溴化物，CAS 30286-75-0)和tiotropium(例如，其溴化物，CAS 136310-93-5，以商品名Spiriva銷售)。同樣感興趣的是revatropate(例如，其氫溴酸鹽，CAS262586-79-8)和公開于WO 01/04118中的LAS-34273。用于口服給藥的示例性化合物包括哌侖西平(例如，CAS 28797-61-7)、darifenacin(例如，CAS 133099-04-4或其以商品名Enablex銷售的氫溴酸鹽，CAS133099-07-7)、奧昔布寧(例如，CAS 5633-20-5，以商品名Ditropan銷售)、雙苯丁胺(例如，CAS 15793-40-5)、tolterodine(例如，CAS124937-51-5或其以商品名Detrol銷售的酒石酸鹽CAS 124937-52-6)、otilonium(例如，其溴化物，CAS 26095-59-0，以商品名Spasmomen銷售)、鹽酸t(yī)rospium(例如，CAS 10405-02-4)和solifenacin(例如，CAS 242478-37-1或CAS 242478-38-2，或又稱為YM-905并以商品名Vesicare銷售的琥珀酸鹽)。
其它抗膽堿能劑包括式(XXI)化合物，該化合物公開于美國(guó)專利申請(qǐng)US 60/487981 其中連接在托烷環(huán)上的烷基鏈的優(yōu)選取向是內(nèi)型；R31和R32獨(dú)立地選自優(yōu)選具有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的低級(jí)烷基、具有5-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、具有6-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基-烷基、2-噻吩基、2-吡啶基、苯基、被不超過(guò)4個(gè)碳原子的烷基取代的苯基和被不超過(guò)4個(gè)碳原子的烷氧基取代的苯基；
X-表示與N原子的正電荷締合的陰離子。X-可以是但不限于氯離子、溴離子、碘離子、硫酸根離子、苯磺酸根離子和甲苯磺酸根離子，包括，例如(3-內(nèi)型)-3-(2，2-二-2-噻吩基乙烯基)-8，8-二甲基-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物；(3-內(nèi)型)-3-(2，2-二苯基乙烯基)-8，8-二甲基-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物；(3-內(nèi)型)，3-(2，2-二苯基乙烯基)-8，8-二甲基-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷-甲基苯磺酸鹽；(3-內(nèi)型)-8，8-二甲基-3-[2-苯基-2-(2-噻吩基)乙烯基]-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物；和/或(3-內(nèi)型)-8，8-二甲基-3-[2-苯基-2-(2-吡啶基)乙烯基]-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物。
其它的抗膽堿能劑包括式(XXII)或(XXIII)化合物，這些化合物公開于美國(guó)專利申請(qǐng)US 60/511009 其中指示的H原子處于外型位置；R41-表示與N原子的正電荷締合的陰離子。R1-可以是但不限于氯離子、溴離子、碘離子、硫酸根離子、苯磺酸根離子和甲苯磺酸根離子；R42和R43獨(dú)立地選自直鏈或支鏈的低級(jí)烷基(優(yōu)選具有1-6個(gè)碳原子)、環(huán)烷基(具有5-6個(gè)碳原子)、環(huán)烷基-烷基(具有6-10個(gè)碳原子)、雜環(huán)烷基(具有5-6個(gè)碳原子)和N或O作為雜原子、雜環(huán)烷基-烷基(具有6-10個(gè)碳原子)和N或O作為雜原子、芳基、任選取代的芳基、雜芳基，以及任選取代的雜芳基；R44選自(C1-C6)烷基、(C3-C12)環(huán)烷基、(C3-C7)雜環(huán)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C12)環(huán)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C7)雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、(C1-C6)烷基-芳基、(C1-C6)烷基-雜芳基、-OR45、-CH2OR45、-CH2OH、-CN、-CF3、-CH2O(CO)R46、-CO2R47、-CH2NH2、-CH2N(R47)SO2R45、-SO2N(R47)(R48)、-CON(R47)(R48)、-CH2N(R48)CO(R46)、-CH2N(R48)SO2(R46)、-CH2N(R48)CO2(R45)、-CH2N(R48)CONH(R47)；R45選自(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C12)環(huán)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C7)雜環(huán)烷基、(C1-C6)烷基-芳基、(C1-C6)烷基-雜芳基；R46選自(C1-C6)烷基、(C3-C12)環(huán)烷基、(C3-C7)雜環(huán)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C12)環(huán)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C7)雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、(C1-C6)烷基-芳基、(C1-C6)烷基-雜芳基；R47和R48獨(dú)立地選自H、(C1-C6)烷基、(C3-C12)環(huán)烷基、(C3-C7)雜環(huán)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C12)環(huán)烷基、(C1-C6)烷基(C3-C7)雜環(huán)烷基、(C1-C6)烷基-芳基和(C1-C6)烷基-雜芳基，包括，例如(內(nèi)型)-3-(2-甲氧基-2，2-二-噻吩-2-基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物；3-((內(nèi)型)-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙腈；(內(nèi)型)-8-甲基-3-(2，2，2-三苯基-乙基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷；3-(2-氰基-2，2-二苯基-乙基)-2，2-二苯基-丙酰胺；3-((內(nèi)型)-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙酸；(內(nèi)型)-3-(2-氰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物；(內(nèi)型)-3-(2-氰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物；3-((內(nèi)型)-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-1-丙醇；N-芐基-3-((內(nèi)型)-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙酰胺；(內(nèi)型)-3-(2-氨基甲?；?2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物；1-芐基-3-[3-((內(nèi)型)-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-脲；1-乙基-3-[3-((內(nèi)型)-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-脲；
N-[3-((內(nèi)型)-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-乙酰胺；N-[3-((內(nèi)型)-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-苯甲酰胺；3-((內(nèi)型)-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二-噻吩-2-基-丙腈；(內(nèi)型)-3-(2-氰基-2，2-二-噻吩-2-基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物；N-[3-((內(nèi)型)-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-苯磺酰胺；[3-((內(nèi)型)-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-脲；N-[3-((內(nèi)型)-8-甲基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-甲磺酰胺；和/或(內(nèi)型)-3-(2，2-二苯基-3-[(1-苯基-甲酰氧基)-氨基]-丙基)-8，8-二甲基-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物。
用于本發(fā)明的更優(yōu)選的化合物包括(內(nèi)型)-3-(2-甲氧基-2，2-二-噻吩-2-基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物；(內(nèi)型)-3-(2-氰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8二氮二環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物；(內(nèi)型)-3-(2-氰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物；(內(nèi)型)-3-(2-氨基甲?；?2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物；(內(nèi)型)-3-(2-氰基-2，2-二-噻吩-2-基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷碘化物；和/或(內(nèi)型)-3-{2，2-二苯基-3-[(1-苯基-甲酰氧基)-氨基]-丙基}-8，8-二甲基-8-氮二環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物。
抗組胺劑(也稱為H1-受體拮抗劑)包括已知的抑制H1-受體并且人使用安全的許多拮抗劑中的任何一種或多種。第一代拮抗劑包括乙醇胺衍生物、亞乙基二胺、和烷基胺，如二苯基醇胺、吡拉明、氯馬斯汀、氯苯吡胺。第二代拮抗劑是非鎮(zhèn)靜性的，包括loratidine、desloratidine、特非那定、阿司咪唑、acrivastine、azelastine、levocetirizine fexofenadine、西替立嗪和efletirizine。
因此，本發(fā)明在另外一方面提供一種包含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物和PDE4抑制劑的組合。
因此，本發(fā)明在另外一方面提供一種包含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物和β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑的組合。
因此，本發(fā)明在另外一方面提供一種包含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物和抗膽堿能藥的組合。
因此，本發(fā)明在另外一方面提供一種包含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物和抗組胺劑的組合。
上述組合可以方便地以藥物制劑的形式使用，因此包含如上所定義的組合和藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體的藥物制劑代表本發(fā)明的另一方面。
可以在分開的或混合的藥物制劑中順序或同時(shí)地給予此類組合中的單個(gè)的化合物。優(yōu)選地，在混合的藥物制劑中同時(shí)給予單個(gè)的化合物。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可容易地知道已知藥物的適宜劑量。
式(I)化合物及其鹽和溶劑化物可以通過(guò)下文描述的方法制備，并構(gòu)成本發(fā)明的另一方面。
上述組合可以方便地以藥物組合物的形式使用，因此包含如上所定義的組合任選地和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑的藥物組合物代表本發(fā)明的另一方面。
可以在分開的或混合的藥物組合物中順序或同時(shí)地給予此類組合中的單個(gè)的化合物。
本文描述的中間體化合物可以形成本發(fā)明的另一方面。
本發(fā)明的化合物具有一個(gè)或多個(gè)以下有利特性更有效；顯示出更大的選擇性；具有較少的副作用；具有較長(zhǎng)的作用持續(xù)時(shí)間；通過(guò)優(yōu)選的途徑更加生物可利用；通過(guò)吸入給藥時(shí)顯示較少的全身性活性；和/或比類似的已知化合物具有其它更理想的特性。
特別是本發(fā)明的化合物對(duì)A2A受體高度有效，對(duì)A2A受體亞型顯示出的更大的選擇性超過(guò)其它腺苷受體亞型(尤其是A1和A3受體亞型)，能與人血清白蛋白高度結(jié)合(大于大約90％，特別是大于大約95％)，和/或與迄今已知的化合物相比表現(xiàn)出較少的明顯的心臟作用。
根據(jù)以下的或類似的試驗(yàn)/模型，可以測(cè)試本發(fā)明化合物的體外和體內(nèi)的生物學(xué)活性。
1)體外對(duì)腺苷A1、A2A、A2B和A3受體的激動(dòng)劑活性。
使用中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞或用相應(yīng)受體的基因轉(zhuǎn)染的酵母細(xì)胞測(cè)定化合物對(duì)人腺苷受體的激動(dòng)劑效力和選擇性。
(a)CHO細(xì)胞兩種方法可用于CHO細(xì)胞。(i)對(duì)于SPAP試驗(yàn)，同樣將細(xì)胞用促進(jìn)分泌胎盤堿性磷酸酯酶(SPAP)的基因的環(huán)腺苷酸(cAMP)響應(yīng)元件轉(zhuǎn)染。以SPAP的水平變化測(cè)定cAMP的變化。(ii)DiscoveRx試驗(yàn)是涉及β-半乳糖苷酶、酶受體(EA)和酶供體(ED)的兩個(gè)片段的酶互補(bǔ)試驗(yàn)。在產(chǎn)生的cAMP EA與ED結(jié)合后，產(chǎn)生活性酶并且在加入底物后形成發(fā)光的產(chǎn)物。對(duì)于兩種方法，試驗(yàn)化合物的效果是通過(guò)它們對(duì)cAMP(A2A和A2B)的基態(tài)水平的影響或者對(duì)毛喉素增強(qiáng)的cAMP(A1和A3)的影響來(lái)確定的。
(b)酵母細(xì)胞對(duì)于酵母試驗(yàn)，受體刺激會(huì)引起指示基因(即FUS1-HIS3)的活化，導(dǎo)致對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)必不可少的組氨酸產(chǎn)生。將酵母細(xì)胞在缺乏組氨酸的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，試驗(yàn)化合物的加入導(dǎo)致刺激細(xì)胞生長(zhǎng)的組氨酸產(chǎn)生。從產(chǎn)生的外切葡聚糖酶測(cè)定反應(yīng)值，該酶基本上由酵母細(xì)胞分泌。
在所有的體外試驗(yàn)中，將測(cè)試化合物的活性表示成與無(wú)選擇性的腺苷受體激動(dòng)劑N-乙基甲酰胺腺苷(NECA)活性的比值。
在這些或類似的試驗(yàn)中，式(I)化合物的甲酸鹽顯示出對(duì)A2A的選擇性比對(duì)A1、A2B和A3高100倍的高度選擇性。對(duì)A2A的效力小于0.5(EMR比NECA)，并且通常為大約0.02(EMR比NECA)。
體內(nèi)抗炎激動(dòng)劑活性LPS模型在對(duì)LPS暴露前，將試驗(yàn)化合物給予雄性CD白大鼠。以200ul的容量將化合物(或賦形劑)經(jīng)過(guò)反向經(jīng)口放置的插管注入氣管，此時(shí)動(dòng)物處于異氟烷麻醉下。30分鐘恢復(fù)期后，將大鼠放在室內(nèi)并處于大腸桿菌衍生的LPS的氣霧下15分鐘。LPS攻擊四小時(shí)后，殺死大鼠，灌洗肺，確定總的和差別的細(xì)胞計(jì)數(shù)。確定嗜中性白細(xì)胞累積量減少50％(ED50)的試驗(yàn)化合物的劑量。
在這個(gè)或類似的試驗(yàn)中，式(I)化合物的甲酸鹽在30μg/kg或更少的劑量下產(chǎn)生大于50％的嗜中性白細(xì)胞累積量的減少。
3)治療指數(shù)(TI)心血管模型用氯醛糖/戊巴比妥麻醉雄性Wistar大鼠并且在頸靜脈、左頸動(dòng)脈和氣管插入導(dǎo)管。動(dòng)脈導(dǎo)管與用于連續(xù)測(cè)量血壓和心率的傳感器相連。將在100ul容量中的化合物(或賦形劑)給入氣管，確定使血壓和心率增加20％的試驗(yàn)化合物劑量(ED20)。
以心血管模型中的ED20和LPS模型中的ED50相比的比值來(lái)計(jì)算試驗(yàn)化合物的TI。
在這個(gè)或相似的模型中，對(duì)式(I)化合物的甲酸鹽確定的劑量為大約7μg/kg。
(4)HSA結(jié)合儀器始終使用Agilent HP1100 HPLC儀器。
HPLC柱從Chromtech(Cheshire，UK)購(gòu)買的ChromtechImmobilised HSA HPLC柱50×3mm。
流動(dòng)相和檢測(cè)流動(dòng)相A是50mM(pH 7.4)乙酸銨溶液，而流動(dòng)相B是2-丙醇(HPLC級(jí)，Runcorn，UK)。流動(dòng)相的流速是1.8ml/min。柱溫保持在30℃。對(duì)每個(gè)柱子的梯度分布和持續(xù)時(shí)間一樣，從0-3分鐘應(yīng)用線性梯度0-30％的2-丙醇。從3-10分鐘，流動(dòng)相組合物是恒定的30％2-丙醇和70％50mM乙酸銨。從10分鐘至10.5分鐘，流動(dòng)相組合物轉(zhuǎn)變?yōu)?00％乙酸銨緩沖液，并保持到運(yùn)行結(jié)束。15分鐘后停止各個(gè)分離。
檢測(cè)在室溫下用二極管陣列UV吸收檢測(cè)器在230和254nm處記錄色譜圖。
蛋白柱的校正在分析各個(gè)96孔板之前，進(jìn)行柱性能檢驗(yàn)和校正。將用于柱校正的化合物分別以0.5mg/ml的濃度溶于50％2-丙醇和50％(pH值7.4)乙酸銨溶液的混合物。將校正組的化合物、它們的血漿蛋白結(jié)合％的文獻(xiàn)值及其線性變換值(logK lit)，以及典型的保留時(shí)間、它們的對(duì)數(shù)值，由校準(zhǔn)曲線得到的log K和結(jié)合數(shù)據(jù)的百分率列于表1。
表1、校正組化合物的文獻(xiàn)值和從HSA柱獲得的典型的測(cè)定色譜分析數(shù)據(jù)(文獻(xiàn)數(shù)據(jù)從參考文件16中獲得)。
使用以下方程式將文獻(xiàn)的PPB％(血漿中結(jié)合的)的轉(zhuǎn)變?yōu)榕c線性自由能相關(guān)的logk值(表觀親合力常數(shù)的對(duì)數(shù))。
在這個(gè)或類似的試驗(yàn)中，式(I)化合物的甲酸鹽顯示出大于大約90％與HSA的結(jié)合率。
現(xiàn)在將參考以下實(shí)施例描述本發(fā)明的各個(gè)方面。這些實(shí)施例僅僅是說(shuō)明性的并不應(yīng)被解釋成對(duì)本發(fā)明范圍的限制。
一般的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)除非另有說(shuō)明，所有反應(yīng)是在氮?dú)鈿夥障逻M(jìn)行的。所有溫度是以攝氏度給出的。
當(dāng)用柱色譜純化產(chǎn)物時(shí)，“閃式硅膠”是指色譜用硅膠，0.035-0.070mm(220-440目)(例如，F(xiàn)luka硅膠60)，其中通過(guò)施加至多10p.s.i的氮?dú)鈮毫?lái)促進(jìn)柱子洗脫。當(dāng)應(yīng)用薄層層析法(TLC)時(shí)，它是指使用通常為4×10cm的在鋁箔板上帶有熒光指示劑(254nm)的硅膠板的硅膠TLC(例如，F(xiàn)luka 60778)。Biotage是指含有在閃式12英寸色譜模塊上運(yùn)行的KP-Sil的預(yù)先填充的硅膠柱。固相萃取(SPE)柱是通常用于在真空下進(jìn)行平行純化的預(yù)先填充的柱體。這些是從Varian購(gòu)買的。SCX柱體是離子交換SPE柱，其中的固定相是聚合的苯磺酸。這些用來(lái)分離胺類。
在400MHz下運(yùn)轉(zhuǎn)的Bruker AV400400或者在250MHz下運(yùn)轉(zhuǎn)的Bruker DPX-250上記錄H1-核磁共振譜。除非另有說(shuō)明，使用D6-DMSO作溶劑。四甲基硅烷被用作內(nèi)標(biāo)。
LC/MS系統(tǒng)使用了液相色譜質(zhì)譜(LC/MS)系統(tǒng)LCMS系統(tǒng)在Supelcosil LCABZ+PLUS柱(3.3cm×4.6mm ID)上進(jìn)行LCMS，用0.1％HCO2H和0.01M乙酸銨的水溶液(溶劑A)和0.05％HCO2H 5％水的乙腈溶液(溶劑B)洗脫，在3mL/min的流速下使用下列洗脫梯度0.0-7分鐘的0％B、0.7-4.2分鐘的100％B、4.2-5.3分鐘的100％B、5.3-5.5分鐘的0％B。使用電噴霧的正電荷和負(fù)電荷方式(ES+ve和ES-ve)在Fisons VG Platform光譜儀上記錄質(zhì)譜。
制備性HPLC條件將產(chǎn)物用制備性HPLC純化，純化在C18反相柱(10×2.1cm i.d.，7μm粒徑的Genesis柱)上進(jìn)行，在5ml/min的流速下首先用10％乙腈相無(wú)梯度洗脫，然后用乙腈(含有0.1％三氟乙酸)在水中(含有0.1％三氟乙酸)的梯度溶液洗脫。梯度起始于10％乙腈并以每分鐘1％的速度增加。除非另有說(shuō)明，在230nm使用UV檢測(cè)。
質(zhì)量指向的自動(dòng)制備性(MDAP)HPLC條件在由帶有延長(zhǎng)的泵壓頭的Waters 600泵、Waters 2700自動(dòng)取樣器、Waters 996二極管陣列和在10cm×2.54cm ill ABZ+柱上的Gilson202餾分收集器組成的Waters FractionLynx系統(tǒng)上進(jìn)行制備性質(zhì)量指向的HPLC，用0.1％甲酸水溶液(溶劑A)和0.1％甲酸的乙腈溶液(溶劑B)洗脫，在20ml/min的流速下使用下列洗脫梯度0.0-1.0分鐘的15％B、1.0-10.0分鐘的55％B、10.0-14.5分鐘的99％B、14.5-14.9分鐘的99％B、14.9-15.0分鐘的15％B，并在室溫下在200-320nm處檢測(cè)。使用電噴霧的正電荷和負(fù)電荷方式，交替掃描，在Micromass ZMD質(zhì)譜儀上記錄質(zhì)譜。使用的軟件是帶有OpenLynx和FractionLynx選項(xiàng)的MassLyn.x 3.5。
根據(jù)以下或類似的方法進(jìn)行某些鹽的XRPD分析。
使用X′Celerator檢測(cè)器，在PANalytical X′Pert Pro X-射線粉末衍射儀(X′Pert Pro PW3040/60型，序號(hào)DY1850)上進(jìn)行XRPD分析。獲得條件是射線Cu K，加速器電壓40KV，加速器電流45mA，起始角2.000°2θ，終止角40.000°2θ，步長(zhǎng)0.0167，每步時(shí)間31.75秒。使用齊平的硅圓片制備樣品。
用于實(shí)驗(yàn)部分的縮寫IPA＝異丙醇DCM＝二氯甲烷THF＝四氫呋喃MeOH＝甲醇
DMF＝二甲基甲酰胺DIPEA＝二異丙基乙基胺EtOAc＝乙酸乙酯ACN＝乙腈CHC＝環(huán)己烷DMSO＝二甲亞砜RT＝室溫DMAP＝4-二甲基氨基吡啶HATU＝O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸鹽NBS＝N-溴代琥珀酰亞胺IMS＝工業(yè)用甲醇變性酒精TFA＝三氟乙酸Boc＝叔丁氧羰基Rt＝保留時(shí)間h小時(shí)min分鐘閃式硅膠是指Merck ART No.9385；硅膠是指Merck ART No.7734中間體1反式-1，4-環(huán)己二基二[亞氨基(2-氯-9H-嘌呤-6，9-二基)(2R，3R，4R，5R)-5-(2-乙基-2H-四唑-5-基)四氫呋喃-2，3，4-三基]四乙酸酯 手性將(2R，3R，4R，5R)-2-(2，6-二氯-9h-嘌呤-9-基)-5-(2-乙基-2h-四唑-5-基)四氫呋喃-3，4-二基二乙酸酯(WO 98/28319中的中間體7)(2.36g，5mmol)、反式-1，4-二氨基環(huán)己烷(630mg，5.5mmol)和DIPEA(0.960mL)在IPA(30mL)中的混合物攪拌并在60℃加熱19.5h。冷卻后，在真空下除去溶劑。將粗反應(yīng)混合物在閃式硅膠柱(50g)上純化，以從環(huán)己烷經(jīng)環(huán)己烷/乙酸乙酯(1∶3至1∶1)到純的乙酸乙酯的梯度進(jìn)行洗脫。合并適當(dāng)?shù)慕M分并在真空下除去溶劑，得到白色固體狀的標(biāo)題化合物(1.46g)。
LC/MS Rt3.58min m/z 983[MH]+中間體2反式-N，N′-二[2-氯-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基]-1，4-環(huán)己烷二胺 將攪拌的2，6-二氯-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤(WO03/080613中的中間體1)(17g；62.3mmole)在異丙醇(500ml)中的懸浮液用反式-1，4-二氨基環(huán)己烷(3.6g；31.5mmole)處理并且將二丙基乙胺(15ml)在75℃加熱6小時(shí)。
加入另外的反式-1，4-二氨基環(huán)己烷(0.9g；7.9mmole)并繼續(xù)加熱16小時(shí)。加入另一份反式-1，4-二氨基環(huán)己烷(0.9g；7.9mmole)并繼續(xù)在85℃加熱7小時(shí)。讓懸浮液冷卻至室溫并靜置。將固體過(guò)濾并用異丙醇洗滌，接著用醚洗滌，然后吸干。將固體(18.5g)在乙酸乙酯和飽和碳酸氫鈉水溶液之間分配。分離水相和固體并用乙酸乙酯萃取。過(guò)濾不溶解的固體并在氯仿和飽和碳酸氫鈉溶液之間分配。將合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥并蒸干溶劑。將得到的泡沫懸浮在乙酸乙酯中以產(chǎn)生固體。蒸干溶劑并將殘余物與醚一起進(jìn)行研磨以產(chǎn)生固體，將該固體過(guò)濾，用醚洗滌并干燥以得到白色固體狀的標(biāo)題化合物(16.3g)。
LC/MS Rt3.33min m/z 587，589[MH]+中間體3N6，N6′-反式-1，4-環(huán)己烷二基二[N-[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2，6-二胺] 將中間體2(10g；17.0mmole)和N-甲基組胺(25.4g，來(lái)自100g二甲苯磺酸酯，203mmole)在無(wú)水二甲亞砜(20ml)中的混合物在115℃加熱24小時(shí)。讓深色的溶液冷卻至室溫，然后緩慢地用水(400ml)，接著用乙酸乙酯(75ml)稀釋。劇烈攪拌混合物直至粘性的結(jié)塊凝固并裂開。將固體過(guò)濾，用水洗滌并干燥以得到標(biāo)題化合物(12.2g)。
LC/MS Rt2.08min m/z 383[(M+2H)/2]+，765[MH]+中間體4
N6，N6′-反式-1，4-環(huán)己烷二基二{N2-[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]-3H-嘌呤-2，6-二胺}將中間體3(11.8g；15.4mmole)在甲醇(100ml)中的溶液用2M鹽酸(25ml)處理并在室溫下攪拌4小時(shí)。濃縮混合物以除去甲醇，然后用水(50ml)稀釋。加入飽和碳酸氫鈉水溶液(70ml)并將混合物攪拌1小時(shí)。將固體過(guò)濾并用水洗滌，然后干燥。固體與水?dāng)嚢?5min。將懸浮液與氯仿和水混合。加入甲醇并搖動(dòng)混合物。在真空中濃縮混合物，加入甲醇并蒸干。操作三次以得到固體。用醚研制固體，過(guò)濾并在35℃真空下干燥以得到標(biāo)題化合物(8.2g)。
LC/MS Rt1.73min m/z 299[(M+2H)/2]+，597[MH]+中間體5反式-1，4-環(huán)己烷二基二[亞氨基(2-{[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]氨基}-9H-嘌呤-6，9-二基)(2R，3R，4R，5R)-5-(2-乙基-2H-四唑-5-基)四氫呋喃-2，3，4三基]四乙酸酯
將中間體4(5.5g；9.22mmole)在乙酸乙酯(50ml)中的懸浮液用rel-乙酸4R，5-二乙酰氧基-2R-(2-乙基-2H-四唑-5-基)-四氫-呋喃-3R-基酯(WO 98/28319中的中間體6)(11.4g，33.2mmole)在乙酸乙酯(50ml)中的溶液處理并冷卻到0℃。加入DBU(3.54ml；23.6mmole)，隨后加入三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(15.4ml；92.9mmole)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物4.5小時(shí)，然后在50℃加熱3小時(shí)。讓反應(yīng)物冷卻，然后放置過(guò)夜。加入水，接著加入飽和碳酸氫鈉水溶液。攪拌后得到三相。分離水相和油相并用氯仿萃取(3次)。將合并的有機(jī)萃取液(氯仿和乙酸乙酯)經(jīng)硫酸鈉干燥并蒸干溶劑。將殘余物進(jìn)行硅膠柱(Merck ART 9385600ml)色譜，用氯仿(400ml)，接著用氯仿/甲醇/0.88氨水溶液(95∶5∶0.4)洗脫。合并適當(dāng)?shù)慕M分并蒸干溶劑以得到標(biāo)題化合物(9.5g，4.2g大約90％純的產(chǎn)品)LC/MS Rt2.33min m/z 581[(M+2H)/2]+實(shí)施例1甲酸-(2R，3R，4S，5R，2′R，3′R，4′S，5′R)-2，2′-{反式-1，4-環(huán)己烷二基二[亞氨基(2-{[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]氨基}-9H-嘌呤-6，9-二基)]}二[5-(2-乙基-2H-四唑-5-基)四氫-3，4-呋喃二醇](4∶1)
將[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]胺(763mg，6.1mM)加入到溶于無(wú)水DMSO(5ml)中的中間體1(300mg，0.31mM)中并在120℃在氮?dú)鈼l件下將溶液攪拌21h，然后讓其冷卻。加入水(20ml)并將沉淀過(guò)濾，將沉淀物用質(zhì)譜-指向的自動(dòng)制備性HPLC純化。合并適當(dāng)?shù)慕M分并蒸干以得到黃白色固體狀的標(biāo)題化合物(36mg)。
MDAP LC/MS Rt2.39min m/z 993.7[MH]+1Hnmr250MHz+
實(shí)施例2(2R，3R，4S，5R，2′R，3′R，4′S，5′R)-2，2′-{反式-1，4-環(huán)己烷二基二[亞氨基(2-{[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]氨基}-9H-嘌呤-6，9-二基)]}二[5-(2-乙基-2H-四唑-5-基)四氫-3，4-呋喃二醇] 將中間體5(18.1g；15.6mmole)在甲醇(150ml)中的溶液用甲醇鈉(1g；18.5mmole)處理。30分鐘后，加入Dowex 50[H+]來(lái)中和溶液并且加入額外的甲醇(100ml)。將樹脂過(guò)濾并蒸干濾液以剩下泡沫/膠狀的標(biāo)題化合物(13.3g)LC/MS Rt2.06min m/z 497[(M+2H)/2]+。
1Hnmr400MHz
鹽的制備單馬來(lái)酸水合物鹽在75℃下將游離堿形式的化合物(300mg)溶于乙醇(4.4ml，14.7體積)。在室溫下將馬來(lái)酸(35.9mg，1.05當(dāng)量)溶于乙醇(1ml，3.3體積)。以分批方式將馬來(lái)酸溶液加入到加熱至75℃(視情況而定)帶有晶種的化合物/乙醇溶液中。在經(jīng)過(guò)2小時(shí)冷卻至室溫之前，將所得的懸浮液在75℃老化30分鐘，然后在室溫下再老化1小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾來(lái)分離產(chǎn)物，用乙醇(1ml)洗滌并在真空條件下在室溫下干燥過(guò)夜。收率是84.9％。XRPD跡線顯示在

圖1中。
單對(duì)苯二甲酸鹽將游離堿形式的化合物(300mg)和對(duì)苯二甲酸(49.2mg，1.05當(dāng)量)懸浮在乙醇(5.4ml，18體積)中。懸浮液加熱至75℃30分鐘，然后冷卻至40℃并在磁力攪拌下在0-40℃的溫度循環(huán)下過(guò)夜。通過(guò)過(guò)濾分離產(chǎn)物，用乙醇洗滌(3×2ml)并在真空下在60℃干燥過(guò)夜。收率是71.3％。XRPD跡線在圖2中給出。
在可供選擇的方法中，按照下述方法制備對(duì)苯二甲酸鹽將游離堿形式的化合物(1g)懸浮在乙醇(80ml，80體積)中并在80℃加熱以形成溶液。然后在7小時(shí)內(nèi)以分批方式將對(duì)苯二甲酸(123mg，1.05當(dāng)量)加入到溶液中。然后將懸浮液在磁力攪拌下用兩天冷卻至室溫，然后在室溫下在沒有任何磁力攪拌器的情況下放置3天。通過(guò)過(guò)濾來(lái)分離產(chǎn)物，用乙醇(3×5ml)洗滌并在真空下干燥過(guò)夜。收率是55％。
單鄰苯二甲酸鹽將游離堿形式的化合物(300mg)和鄰苯二甲酸(49.2mg，1.05當(dāng)量)懸浮在乙醇(5.4ml，18vol)中。將懸浮液加熱至75℃30分鐘，此時(shí)懸浮液實(shí)質(zhì)上形成了溶液。將反應(yīng)混合物冷卻至40℃并在磁力攪拌下在0-40℃的溫度循環(huán)下過(guò)夜。通過(guò)過(guò)濾來(lái)分離產(chǎn)物，用乙醇(2×2ml)洗滌并在60℃真空下干燥過(guò)夜。收率是80.0％。XRPD跡線在圖3中給出。
可以使用需要的酸(例如，馬來(lái)酸、鹽酸、對(duì)苯二甲酸和鄰苯二甲酸)通過(guò)常規(guī)方法和通過(guò)本文描述的方法來(lái)生成晶種。得到的晶種可用于隨后的鹽的制備，通常為相同的鹽的制備，也可用于不同鹽的制備，以改善成鹽產(chǎn)物的結(jié)晶度。
實(shí)施例3通過(guò)方法A進(jìn)一步制備(2R，3R，4S，5R，2′R，3′R，4′S，5′R)-2，2′-{反式-1，4-環(huán)己烷二基二[亞氨基(2-{[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]氨基}-9H-嘌呤-6，9-二基)]}二[5-(2-乙基-2H-四唑-5-基)四氫-3，4-呋喃二醇]階段1乙酸4R-乙酰氧基-2R-(2，6-二氯-嘌呤-9-基)-5R-(2-乙基-2H-四唑-5-基)-四氫-呋喃-3R-基酯(WO98/28319中的中間體7)
將三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(200g，900.9mmol)加入到2，6-二氯嘌呤(85.1g，450.5mmol)在乙腈(850ml)中的懸浮液中并攪拌45分鐘。然后在55分鐘內(nèi)加入rel-乙酸4R，5-二乙酰氧基-2R-(2-乙基-2H-四唑-5-基)-四氫-呋喃-3R-基酯(WO 98/28319中的中間體6)(123.2g，360.4mmol)在乙腈(510ml)中的溶液。將混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，然后用水(200ml)淬滅10分鐘，之后用飽和碳酸氫鈉水溶液(1.6L)淬滅。蒸干乙腈并用二氯甲烷(2×400ml)萃取得到的水溶液。將合并的有機(jī)萃取液用飽和碳酸氫鈉水溶液(200ml)、水(200ml)洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至油狀。將油在50℃溶于IPA(1L)，冷卻至大約42℃、結(jié)晶并超聲處理。繼續(xù)冷卻至大約28℃并將得到的混合物在38-40℃老化30分鐘。將混合物冷卻至大約25℃，過(guò)濾，用IPA(3×170ml)洗滌并干燥，得到標(biāo)題化合物(111.5g)。
階段2反式-1，4-環(huán)己烷二基二[亞氨基(2-氯-9H-嘌呤-6，9-二基)(2R，3R，4R，5R)-5-(2-乙基-2H-四唑-5-基)四氫呋喃-2，3，4-三基]四乙酸酯(中間體1)
階段1的產(chǎn)物(110.3g，234.2mmol)、1，4-反式-二氨基環(huán)己烷(16.02g，140.5mmol)、二異丙基乙基胺(122.2ml，702.6mmol)和異丙醇(550ml)的混合物在82℃加熱20小時(shí)。加入另外的1，4-反式-二氨基環(huán)己烷(0.8g)、二異丙基乙基胺(6.1ml)并繼續(xù)再加熱24小時(shí)。將混合物冷卻至50℃，用乙醇(250ml)稀釋并在50℃加熱1小時(shí)。然后將漿液冷卻至室溫、過(guò)濾并用乙醇(250ml)洗滌。在78℃用1小時(shí)用乙醇(550ml)將濕濾餅重新形成漿液，冷卻至室溫(大約30℃)，過(guò)濾并用乙醇(250ml)洗滌。在78℃用1小時(shí)將濕濾餅用乙醇(550ml)和水(110ml)重新形成漿液，冷卻至室溫，過(guò)濾，用5∶1的乙醇/水(240ml)和乙醇(250ml)洗滌，然后干燥得到標(biāo)題化合物(77.9g)。
階段3(3R，4S，5R，3′R，4′S，5′R)-2，2′-{反式-環(huán)己烷-1，4-二基二[亞氨基(2-氯-9H-嘌呤-6，9-二基)]}二[5-(2-乙基-2H-四唑-5-基)四氫呋喃-3，4-二醇]
將甲醇鈉(0.63g，11.7mmol)加入到階段3的產(chǎn)物(77g，78.2mmol)在甲醇(770ml)中的漿液中并攪拌23小時(shí)。將漿液過(guò)濾，用甲醇(380ml)洗滌并干燥，得到標(biāo)題化合物(61.4g)。
1H NMR(d6-DMS0，400MHz)δ1.45-1.68(10H，m)，1.83-2.07(4H，m)，4.03(1.4H，br s)*，4.54-4.59(2H，m)，4.63(0.6H，br s)*，4.69-4.82(6H，m)，5.22(2H，d)，5.86(4H，br s)，6.03-6.09(2H，m)，8.26-8.37(2H，m)，8.44(1H，s)，8.46(1H，s)。
*表示由于旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的存在而致的非整數(shù)的積分。
階段4(2R，3R，4S，5R，2′R，3′R，4′S，5′R)-2，2′-{反式-1，4-環(huán)己烷二基二[亞氨基(2-{[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]氨基}-9H-嘌呤-6，9-二基)]}二[5-(2-乙基-2H-四唑-5-基)四氫-3，4-呋喃二醇]馬來(lái)酸水合物鹽
階段3的產(chǎn)物(55g，67.4mmol)、N-甲基組胺(84.7g，674mmol)和無(wú)水二甲亞砜(138ml)的混合物在100℃加熱16.5小時(shí)。將混合物冷卻至室溫，然后在45分鐘內(nèi)加入水(1.4L)。將漿液攪拌45分鐘，過(guò)濾，用水(2×700ml)洗滌并干燥。將粗產(chǎn)物(60g)、馬來(lái)酸(7g)和甲醇(360ml)在65℃加熱90分鐘，冷卻至30℃并結(jié)晶，然后冷卻至室溫(20-25℃)并攪拌90分鐘。過(guò)濾漿液，用甲醇(110ml)洗滌并干燥，得到標(biāo)題化合物(39.2g)。
1H NMR(d4-MeOH，400MHz)δ1.39-1.53(4H，m)，1.6(6H，t)，2.10-2.21(4H，m)，2.92(4H，t)，3.64(4H，t)，3.71(6H，s)，4.06(2H，br s)，4.70(4H，q)，4.80(2H，br s)，4.89(2H，brs)*，5.30(2H，d)，6.09(2H，d)，6.24(2H，s)，7.08(2H，s)，8.06(2H，s)，8.08(2H，s)。*被HOD隱沒的信號(hào)實(shí)施例4通過(guò)方法B進(jìn)一步制備(2R，3R，4S，5R，2′R，3′R，4′S，5′R)-2，2′-{反式-1，4-環(huán)己烷二基二[亞氨基(2-{[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]氨基}-9H-嘌呤-6，9-二基)]}二[5-(2-乙基-2H-四唑-5-基)四氫-3，4-呋喃二醇]階段1反式-N，N′-二[2-氯-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基]-1，4-環(huán)己烷二胺(中間體2)
將攪拌的2，6-二氯-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤(WO03/080613中的中間體1)(1.14kg)在正丁醇(1.7L)中的懸浮液用反式-1，4-二氨基環(huán)己烷(239.2g)和二異丙基乙基胺(2.5L)處理，然后在75℃加熱17小時(shí)。讓懸浮液冷卻至室溫、過(guò)濾、用正丁醇洗滌(2×2.3L)并在60℃真空下干燥，得到標(biāo)題化合物(0.9kg)。
階段2N6，N6′-反式-1，4-環(huán)己烷二基二{N2-[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]-3H-嘌呤-2，6-二胺}(中間體4) 將階段1的產(chǎn)物(59.3g；100mmol)、N-甲基組胺(50.5g；400mmole)、磷酸氫二鉀(35.1g，200mmol)在乙二醇(60ml)中的混合物在120℃加熱8天。讓混合物冷卻至室溫，然后在冰冷卻下用50分鐘加入5M鹽酸水溶液(245ml)。加入甲醇(296ml)，接著在30分鐘內(nèi)滴加二異丙基乙基胺(246ml)并將溶液加熱至60℃1小時(shí)。在60℃下在30分鐘內(nèi)緩慢地加入水(178ml)，然后在25℃攪拌過(guò)夜。將得到的漿液加熱至60℃并滴加入水(160ml)。將漿液冷卻至室溫、過(guò)濾，用水(120ml)、1∶2甲醇/水(120ml)、甲醇(120ml)洗滌并在40℃真空下干燥，得到潮濕的產(chǎn)物(48.8g)。將潮濕的產(chǎn)物(40.8g)進(jìn)一步在60℃真空下干燥2天，得到標(biāo)題化合物(38.9g)。
步驟3反式-1，4-環(huán)己烷二基二[亞氨基(2-{[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]氨基}-9H-嘌呤-6，9-二基)(2R，3R，4R，5R)-5-(2-乙基-2H-四唑-5-基)四氫呋喃-2，3，4-三基]四乙酸酯(中間體5) 將三氟磺酸三甲基甲硅烷基酯(30.3ml，167mmol)加入階段2的產(chǎn)物(20g，33.9mmol)在乙腈(200ml)中的懸浮液中，然后在50℃加熱30分鐘。然后在30分鐘內(nèi)加入rel-乙酸4R，5-二乙酰氧基-2R-(2-乙基-2H-四唑-5-基)-四氫呋喃-3R-基酯(WO 98/28319中的中間體6)(28.7g，84mmol)在乙腈(200ml)中的溶液中并攪拌20小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并用水(50ml)淬滅35分鐘，然后用5M鹽酸水溶液(2×50ml)淬滅90分鐘。讓混合物在二氯甲烷(250ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(700ml)間分配并在室溫下將二氯甲烷層放置過(guò)夜。然后用1M鹽酸水溶液(2×300ml)萃取有機(jī)部分。用飽和碳酸氫鈉水溶液(750ml)中和酸性萃取液，然后用二氯甲烷(2×200ml)萃取。用鹽水(100ml)洗滌合并的二氯甲烷萃取液，經(jīng)無(wú)水硫酸鎂干燥并濃縮，得到標(biāo)題化合物(28.9g)，該化合物可不經(jīng)過(guò)純化直接使用。
階段4(2R，3R，4S，5R，2′R，3′R，4′S，5′R)-2，2′-{反式-1，4-環(huán)己烷二基二[亞氨基(2-{[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]氨基}-9H-嘌呤-6，9-二基)]}二[5-(2-乙基-2H-四唑-5-基)四氫-3，4-呋喃二醇] 在用另一份甲醇鈉(0.44g，8.13mmol)處理之前，將階段3的產(chǎn)物(28.6g；假定為24.7mmol)在甲醇(515ml)中的溶液用甲醇鈉(0.44g，8.13mmol)處理90分鐘。30分鐘后，加入Dowex 50[H+]以中和溶液。將樹脂過(guò)濾并蒸干濾液以剩下泡沫狀的標(biāo)題化合物(24g)。
階段5單馬來(lái)酸水合物鹽在65℃下，將馬來(lái)酸(0.25g，2.11mmol)在甲醇(2ml)中的溶液加入到(2R，3R，4S，5R，2′R，3′R，4′S，5′R)-2，2′-(反式-1，4-環(huán)己烷二基二[亞氨基(2-{[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]氨基}-9H-嘌呤-6，9-二基)]}二[5-(2-乙基-2H-四唑-5-基)四氫-3，4-呋喃二醇](2g，2.01mmol)在甲醇(8ml)中的溶液中并攪拌1小時(shí)。混合物冷卻至室溫(在40℃結(jié)晶)，然后攪拌過(guò)夜、過(guò)濾、用甲醇(2×2ml)洗滌并在55℃真空下干燥。將固體進(jìn)一步地從甲醇(2×5體積)中重結(jié)晶(兩次)，得到馬來(lái)酸鹽(0.6g)。
參考文獻(xiàn)Asako H，Wolf，RE，Granger，DN(1993)，Gastroenterology 104，pp 31-37；Bedford CD，Howd RA，Dailey OD，Miller A，Nolen HW III，KenleyRA，Kern JR，Winterle JS，(1986)，J.Med.Chem.29，pp2174-2183；Burkey TH，Webster，RO，(1993)，Biochem.Biophys Acta 1175，pp 312-318；Castanon MJ，Spevak W，(1994)，Biochem.Biophys Res.Commun.198，pp 626-631；Cronstein BN，Kramer SB，Weissmann G，Hirschhorn R，(1983)，Trans.Assoc.Am.Physicians 96，pp 384-91；Cronstein BN，Kramer SB，Rosenstein ED，Weissmann G，HirschhornR，(1985)，Ann N.Y.Acad.Sci.451，pp 291-301；Cronstein BN，Naime D，Ostad E，(1993)，J.Clin.Invest.92，pp2675-82；Cronstein BN，Naime D，Ostad E，(1994)，Adv.Exp.Med.Biol.，370，pp 411-6；Cronstein BN，(1994)，J.Appl.Physiol.76，pp 5-13；Dianzani C，Brunelleschi S，Viano I，F(xiàn)antozzi R，(1994)，Eur.J.Pharmacol 263，pp 223-226；Elliot KRF，Leonard EJ，(1989)，F(xiàn)EBS Letters 254，pp 94-98；Flora KP，van′t Riet B，Wampler GL，(1978)，Cancer Research，38，pp 1291-1295；Green PG，Basbaum Al，Helms C，Levine JD，(1991)，Proc.Natl.Acad Sci.88，pp 4162-4165；Hirschorn R，(1993)，Pediatr.Res 33，pp S35-41；Kohno Y；Xiao-duo J；Mawhorter SD；Koshiba M；Jacobson KA.(1996).Blood 88 p3569-3574；Peachell PT，Lichtenstein LM，Schleimer RP，(1989)，BiochemPharmacol 38，pp 1717-1725；Richter J，(1992)，J.Leukocyte Biol.51，pp 270-275；Rosengren S，Bong GW，F(xiàn)irestein GS，(1995)，J.Immunol.154，pp 5444-5451；Sanjar S，McCabe PJ，F(xiàn)attah D，Humbles AA，Pole SM，(1992)，Am.Rev.Respin.Dis.145，A40；Skubitz KM，Wickman NW，Hammerschmidt DE，(1988)，Blood 72，pp 29-33Valko K，Nunhuck S，BevanC，Abraham MC，Reynolds DP.(2003)J Pharm Sci 92 p2236-2248；Van Schaick EA；Jacobson KA；Kim HO；ljzerman AP；Danhof M.(1996)Eur J Pharmacol 308 p311-314；Wood KV.(1995)Curr Opinion Biotechnology 6 p50-58。
將本說(shuō)明書中引用的所有出版物(包括但不限于專利和專利申請(qǐng))引入本文作為參考。
權(quán)利要求
1.(2R，3R，4S，5R，2′R，3′R，4′S，5′R)-2，2′-{反式-1，4-環(huán)己烷二基二[亞氨基(2-{[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]氨基}-9H-嘌呤-6，9-二基)]}二[5-(2-乙基-2H-四唑-5-基)四氫-3，4-呋喃二醇]及其鹽和溶劑化物
2.(2R，3R，4S，5R，2′R，3′R，4′S，5′R)-2，2′-{反式-1，4-環(huán)己烷二基二[亞氨基(2-{[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]氨基}-9H-嘌呤-6，9-二基)]}二[5-(2-乙基-2H-四唑-5-基)四氫-3，4-呋喃二醇]的藥學(xué)上可接受的鹽。
3.一種藥物組合物，包含如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2中定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物，任選地包括一種或多種藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
4.用于治療的如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2中定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
5.用于治療炎癥疾病的如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2中定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
6.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2中定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物在制造用于治療炎癥疾病的藥物中的用途。
7.一種治療或預(yù)防炎癥疾病的方法，該方法包括向患者給予有效量的如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2中定義的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
8.一種用于制備如權(quán)利要求1中定義的式(I)化合物的方法，該方法包括(A)使式(II)的化合物或其被保護(hù)的衍生物 其中L表示離去基團(tuán)，與[2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)乙基]胺反應(yīng)；或(B)使式(V)的化合物 與式(IV)的化合物或其被保護(hù)的衍生物反應(yīng) 或者(C)將被保護(hù)的式(I)化合物的衍生物脫保護(hù)。
全文摘要
本發(fā)明提供式(I)化合物及其鹽和溶劑化物。式(I)化合物是腺苷A文檔編號(hào)A61K31/519GK1956989SQ200580016618
公開日2007年5月2日 申請(qǐng)日期2005年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月24日
發(fā)明者P·布拉徹爾, R·P·C·庫(kù)辛斯, D·N·埃文斯 申請(qǐng)人:葛蘭素集團(tuán)有限公司