專利名稱：取代的嘌呤衍生物、其制備方法、應(yīng)用以及含有它們的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及下式I或Ia化合物，其生理上可接受的鹽和其前藥，它們的制備，應(yīng)用以及含有它們的藥物制劑 其中X、Y、W、Wa、G和Ga如下文定義。
式I化合物是有價值的藥物活性化合物，特別是它們是玻連蛋白受體拮抗劑和適合于治療或預(yù)防由于玻連蛋白受體和它們的配體在細(xì)胞-細(xì)胞或細(xì)胞-基質(zhì)之間作用過程中的相互作用所引起的疾病，或者可以預(yù)防、減輕或治療這些作用的影響。此外，本發(fā)明還涉及式I化合物和其生理上可接受的鹽和含有這些化合物的藥物制劑的應(yīng)用，它們可用于預(yù)防性治療、減輕或治療至少部分是由不正常量的骨吸收引起的疾病，血管生成或血管平滑肌細(xì)胞的增生，或者治療或預(yù)防這些過程所帶來的影響。具體地說，式I化合物適合于作為，例如作為骨吸收抑制劑、腫瘤生長或腫瘤轉(zhuǎn)移抑制劑和抗感染劑，用于治療或預(yù)防心血管疾病，例如動脈硬化或再狹窄，或者治療或預(yù)防腎病或視網(wǎng)膜病，例如糖尿病引起的視網(wǎng)膜病。
本發(fā)明的式I或Ia化合物可抑制破骨細(xì)胞引起的骨吸收。可以用這些化合物治療的骨疾病特別是骨質(zhì)疏松癥、高鈣血癥、骨質(zhì)減少，例如由轉(zhuǎn)移引起的，牙病，甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和佩吉特氏病中關(guān)節(jié)周圍的侵蝕。式I化合物還可以用于減輕、避免或治療由糖皮激素、類固醇或皮質(zhì)激素治療引起的或由于缺少性激素引起的骨病。所有這些疾病的特征都是由于骨形成和骨破壞之間的不平衡所造成的骨損失。
人的骨骼經(jīng)常在經(jīng)歷著一個包括骨吸收和骨形成的動力學(xué)更新過程，這個過程被為此目的而特有的各種類型的細(xì)胞所控制。骨的形成是基于成骨細(xì)胞形成的骨骼基質(zhì)的沉積，而骨吸收是基于破骨細(xì)胞對骨骼基質(zhì)的破壞。大部分的骨疾病是由于破壞了骨形成和骨破壞之間的平衡所造成的。骨質(zhì)疏松的特征是骨基質(zhì)的損失活化的破骨細(xì)胞是直徑可大到400μm的多核細(xì)胞，它可以除去骨基質(zhì)?；罨钠乒羌?xì)胞附著于骨骼基質(zhì)表面，而且分泌出蛋白水解酶和酸進(jìn)入所謂的“封閉區(qū)”(“Sealing zone”)，該區(qū)域位于細(xì)胞膜和骨基質(zhì)之間。酸性環(huán)境和蛋白酶引起骨骼的破壞。
研究表明破骨細(xì)胞對骨骼的附著可被破骨細(xì)胞的細(xì)胞表面上的整聯(lián)蛋白受體控制。整聯(lián)蛋白是一種受體總科，其中包括血小板上的纖維蛋白原受體aIIbβ3和玻連蛋白受體avβ3。玻連蛋白受體avβ3是膜糖蛋白，該蛋白表達(dá)于很多細(xì)胞的表面，例如內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、破骨細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的表面。表達(dá)于破骨細(xì)胞膜的玻連蛋白受體avβ3控制其對骨骼的附著和骨吸收，從而造成骨質(zhì)疏松癥。在此情況下，avβ3結(jié)合于骨基質(zhì)蛋白質(zhì)，例如骨質(zhì)減少、骨唾液蛋白和血小板反應(yīng)蛋白，它們含有三肽的特征序列Arg-Gly-Asp(或RGD)。
Horton和他的同事們描述了RGD肽和抗玻連蛋白受體抗體(23C6)，該抗體可抑制破骨細(xì)胞所引起的牙齒破壞和破骨細(xì)胞的轉(zhuǎn)移(Horton等人，Exp.Cell.Res.，1991，195，368)。Sato等人在J.Cell Biol.，1990，111，1713中描述了鋸鱗血抑肽，一種取自蛇毒的RGD肽，在組織培養(yǎng)中可作為有效的骨吸收抑制劑和作為破骨細(xì)胞與骨骼結(jié)合的抑制劑。Fischer等(Endocrinology，1993，132，1411)指出鋸鱗血抑肽可抑制大鼠體內(nèi)的骨吸收。Wayne等(J.Clin.Invest.，1997，99，2284)證明了玻連蛋白受體拮抗劑對大鼠體內(nèi)的骨吸收的抑制作用的效率。
人體主動脈血管平滑肌細(xì)胞的玻連蛋白受體avβ3能刺激這些細(xì)胞轉(zhuǎn)移到新內(nèi)膜，最后會導(dǎo)致血管成形術(shù)后的動脈硬化和再狹窄(Brown等，Cardiovascular Res.，1994，28，1815)。
Brook等(Cell，1994，79，1157；J.Clin.Invest.，1995，96，1815)和Mitjans等(J.Cell Science，1995，108，2825)指出avβ3或avβ3拮抗劑的抗體可通過在血管生成期間誘導(dǎo)血管細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡而引起腫瘤的收縮。Cheresh等(Science，1995，270，1500)描述了抗avβ3抗體或avβ3拮抗劑對大鼠眼睛的bFGF誘導(dǎo)的血管生成過程有抑制作用，此性質(zhì)可用于治療視網(wǎng)膜疾病。
EP-A-0 528 586和EP-A-0 528 587公開了氨基烴基-或雜環(huán)基取代的苯丙氨酸衍生物，WO 95/32710公開了可作為破骨細(xì)胞引起的骨吸收的抑制劑的芳基衍生物，WO 95/28426描述了RGD肽可作為骨吸收、血管生成和再狹窄的抑制劑。WO 96/00574和WO 96/26190描述了苯并二氮雜。它們可作為玻連蛋白受體拮抗劑或整聯(lián)蛋白受體拮抗劑。WO 96/00730描述了血纖蛋白原受體拮抗劑模板，特別是連接于帶氮5-元環(huán)的苯并二氮雜類，可作為玻連蛋白受體拮抗劑。EP-A-0 531 883描述了稠合的5-元雜環(huán)，該化合物可抑制結(jié)合于血小板的血纖蛋白原。
本發(fā)明涉及式I或Ia化合物，以其所有的立體異構(gòu)體形式和任何比例的混合物形式存在，以及生理上可接受的鹽和其前藥，
其中X是氫、NR6R6’、氟、氯、溴、OR6、SR6、羥基-(C1-C6)烴基-NH、(羥基-(C1-C6)烴基)2N、氨基-(C1-C6)烴基-NH、(氨基-(C1-C6)烴基)2N、羥基-(C1-C6)烴基-O、羥基-(C1-C6)烴基-S或NH-CO-R6；Y是R6、氟、氯、溴、氰基、NR6R6’、OR6、SR6或羥基-(C1-C6)烴基-NH；G是下式II基團(tuán)-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R4(II)；W是下式III基團(tuán)-B-(CR1R2)r-A’-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-D-E(III)；Ga是下式IIa基團(tuán)-(CR1R2)r-A’-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-D-E(IIa)；Wa是下式IIIa基團(tuán)-B-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R4(IIIa)；A、A’各自獨立地是直接鍵、-C(O)NR5，-NR5C(O)-，-C(O)-，-NR5，-O-，-S-，-SO-，-SO2-，(C5-C14)-亞芳基，其中在芳基基團(tuán)上有1-5個碳原子可被1-5個雜原子所代替，(C2-C4)亞炔基，(C2-C4)亞烯基或3-7元飽和或不飽和環(huán)的二價基團(tuán)，所述環(huán)含有一或二個雜原子如氮、硫或氧并可被基團(tuán)＝O、＝S或R3一或二取代；R1、R2各自獨立地是氫、氟、氯、氰基、硝基、(C1-C10)烴基、(C3-C14)環(huán)烷基、(C3-C14)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基、(C5-C14)-芳基、(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基、R6-O-R7、R6-S(O)p-R7或R6R6’N-R7；
R3各自獨立地是氫、氟、氯、氰基、硝基、(C1-C18)烴基、(C3-C14)環(huán)烷基、(C3-C14)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基、(C5-C14)-芳基、(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基、R6-O-R7、R6R6’N-R7、R6-C(O)-O-R7、R6-C(O)-R7、R6-OC(O)-R7、R6N(R6’)-C(O)O-R7、R6S(O)p-N(R5)R7、R6OC(O)N(R5)R7、R6C(O)N(R5)R7、R6N(R6’)-C(O)N(R5)R7、R6N(R6’)S(O)pN(R5)R7、R6S(O)pR7、R6SC(O)N(R5)R7、R6N(R6’)-C(O)-R7或R6N(R6’)-S(O)pR7，其中的烴基可以是一元不飽和或多元不飽和的，并且其中的烴基和芳基還可被下述基團(tuán)一或多元取代氟、氯、溴、氰基、R6R6’N-R7、硝基、R6-OC(O)-R7、R6-C(O)-R7、R6N(R6’)-C(O)-R7、R6N(R6’)-S(O)pR7、R6或R6-O-R7；R4是C(O)R8、C(S)R8、S(O)pR8、P(O)R8R8’或4-8元飽和或不飽和雜環(huán)的基團(tuán)，該雜環(huán)基團(tuán)含有1，2，3或4個選自N、O、S的雜原子，例如四唑基、咪唑基、吡唑基、唑基、噻二唑基；R5各自獨立地是氫、(C1-C10)烴基、(C3-C14)環(huán)烷基、(C3-C14)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基、(C5-C14)-芳基或(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基；R6、R6’各自獨立地是氫、(C1-C18)烴基、(C3-C14)環(huán)烷基、(C3-C14)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基、其中有1-5個碳原子可被例如N、O、S的雜原子代替的(C5-C14)-芳基，或(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基，其中的芳基部分的1-5個碳原子可被例如N、O、S的雜原子代替，或者是R6和R6’與它們所連接的原子一起形成環(huán)系，特別是形成4-8元的環(huán)系，該環(huán)系還可選擇地含有另外的1、2或3個選自N、O、S的雜原子，并且可以是飽和或不飽和的，尤其是飽和的，例如嗎啉、硫嗎啉、哌嗪、哌啶、吡咯烷；R7各自獨立地是(C1-C4)亞烴基或是直接鍵；R8、R8’各自獨立地是羥基、(C1-C8)烴氧基、(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴氧基、(C5-C14)-芳氧基、(C1-C8)烴基羰氧基-(C1-C4)烴氧基、(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基羰氧基-(C1-C8)烴氧基、NR6R6’、(二((C1-C8)烴基)氨基)羰基甲氧基、(二((C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基)氨基)羰基甲氧基、(C5-C14)-芳基-氨基、氨基酸的基團(tuán)、N-((C1-C4)烴基)哌啶-4-基氧基、2-甲基磺?；已趸?、1，3-噻唑-2-基甲氧基、3-吡啶甲氧基、2-(二((C1-C4)烴基)氨基)乙氧基或基團(tuán)Q-(CH3)3N+-CH2-CH2-O-，其中Q-是生理上可接受的陰離子；B是-O-，-S-，-NR5-，-NR5C(O)-，-C(O)NR5-，直接鍵或3-7元飽和或不飽和環(huán)的二價基團(tuán)，該環(huán)可含有一或二個雜原子，如氮、硫或氧，并且可由＝O、＝S和R3一或二取代；D是直接鍵、-NR6、-C(O)NR6、NR6-C(O)-、-S(O)u-NR6、-NR6-C(O)NR6、-NR6-C(S)NR6-、-NR6-S(O)u-NR6、-NR6-C(O)O-、-NR6-N＝CR6、-NR6S(O)u-、-(C5-C14)-芳基-CO-、-(C5-C14)-芳基-S(O)u-、-N＝CR6-、-R6C＝N-或-R6C＝N-NR6-，其中用D表示的二價基團(tuán)通過右側(cè)的游離鍵鍵連于基團(tuán)E；E是氫、R6C(＝NR6)-NR6-、R6R6’N-C(＝NR6)-、R6R6’N-C(＝NR6)-NR6-，或4-11元的單環(huán)或多環(huán)、芳環(huán)或非芳環(huán)系的基團(tuán)，該環(huán)系可選擇地含有1、2、3或4個選自N、O、S的雜原子，并且可選擇性的被R3、R5、＝O、＝S和R6R6’N-C(＝NR6)-基團(tuán)一、二或三取代，例如是下述基團(tuán)
n是0，1，2，3，4或5；m是0，1，2，3，4或5；i是0或1；p各自獨立地是0，1或2；q是0，1或2；r是0，1，2，3，4，5或6；s是0，1，2，3，4，或5；t是0，1，2，3，4，或5；k是0或1；u是1或2；v是0，1，2或3；其中，也可以用3-脫氮嘌呤結(jié)構(gòu)、7-脫氮嘌呤結(jié)構(gòu)或7-脫氮-8-氮雜嘌呤結(jié)構(gòu)代替式I和Ia中的嘌呤結(jié)構(gòu)。
在式I和Ia化合物中，所有的基團(tuán)和系數(shù)可以出現(xiàn)多次，例如，出現(xiàn)于G和W基團(tuán)中的基團(tuán)R1、R2和R3，以及基團(tuán)R5、R6、R6’、R7和出現(xiàn)在其中的系數(shù)，而且這里所用的所有其它基團(tuán)和系數(shù)可以是相互獨立的，并且具有所指出的定義。它們可以是相同或不同的。同樣，雜環(huán)中的雜原子或基團(tuán)中相互獨立地出現(xiàn)幾次的取代基具有所指出的定義，并且可以相同或不同。
取代基中的烴基基團(tuán)可以是直鏈或支鏈的，飽和的或一或多元不飽和的。如果它們帶有取代基或者它們是作為其它基團(tuán)的取代基出現(xiàn)時都是如此，例如，在烴氧基、烴氧羰基或芳烷基基團(tuán)中。這同樣適用于二價亞烴基基團(tuán)。
適當(dāng)?shù)?C1-C18)烴基基團(tuán)是甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十六烷基、十八烷基、這些基團(tuán)的n-異構(gòu)體、異丙基、異丁基、異戊基、新戊基、異己基、3-甲基戊基、2，3，4-三甲基己基、仲丁基、叔丁基、叔戊基。優(yōu)選的烴基基團(tuán)是甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基。
不飽和的烴基基團(tuán)是例如，烯基基團(tuán)如乙烯基、1-丙烯基、烯丙基、丁烯基或3-甲基-2-丁烯基，炔基基團(tuán)如乙炔基、1-丙炔基或炔丙基。亞烯基和亞炔基基團(tuán)可以是直鏈或支鏈的，亞烯基基團(tuán)的實例是亞乙烯基或亞丙烯基，亞炔基基團(tuán)的實例是亞乙炔基或亞丙炔基。
環(huán)烷基基團(tuán)可以是單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)的。單環(huán)的環(huán)烷基基團(tuán)特別是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基，還有例如環(huán)壬基、環(huán)癸基、環(huán)十一碳烷基、環(huán)十二碳烷基或環(huán)十四碳烷基，所有這些均可以是被例如(C1-C4)烴基取代。取代的環(huán)烷基的實例可以是4-甲基環(huán)己基和2，3-二甲基環(huán)戊基。
二環(huán)和三環(huán)的環(huán)烷基基團(tuán)可以是未取代的或在任何需要的適當(dāng)?shù)奈恢蒙媳灰粋€或多個氧代基團(tuán)和/或一個或多個相同或不同的(C1-C4)烴基所取代，例如甲基或異丙基，優(yōu)選甲基基團(tuán)。二環(huán)和三環(huán)基團(tuán)的游離鍵可在分子的任何需要的位置；因此，該基團(tuán)可通過橋頭原子或橋上的某原子鍵連。游離鍵也可以在任何所需的立體化學(xué)位置，例如在外(exo)-或內(nèi)(endo)-的位置上。
雙環(huán)系統(tǒng)母體結(jié)構(gòu)的實例是降冰片烷(＝雙環(huán)[2.2.1]庚烷)，雙環(huán)[2.2.2]辛烷和雙環(huán)[3.2.1]辛烷。被氧代基團(tuán)取代的系統(tǒng)的實例是樟腦(＝1，7，7-三甲基-2-氧代雙環(huán)[2.2.1]庚烷)。
三環(huán)系統(tǒng)母體結(jié)構(gòu)的實例是扭烷(＝三環(huán)[4.4.0.03，8]癸烷)，金剛烷(三環(huán)[3.3.1.13，7]癸烷)，降金剛烷(三環(huán)[3.3.1.03，7]壬烷)，三環(huán)[2.2.1.02，6]庚烷，三環(huán)[5.3.2.04，9]十二碳烷，三環(huán)[5.4.0.02，9]十一碳烷，或三環(huán)[5.5.1.03，11]十三碳烷。
(C5-C14)芳基包括雜環(huán)的(C5-C14)芳基，其中的環(huán)碳原子被例如氮、氧或硫的雜原子所代替，以及碳環(huán)的(C6-C14)芳基基團(tuán)。碳環(huán)芳基基團(tuán)的實例是苯基、萘基、聯(lián)苯基、蒽基或芴基，其中1-萘基、2-萘基，特別是苯基是優(yōu)選的。芳基基團(tuán)，特別是苯基基團(tuán)可以是被相同或不同的選自下述的基團(tuán)一取代或多取代，優(yōu)選一、二或三取代(C1-C8)烴基，特別是(C1-C4)烴基，(C1-C8)烴氧基，特別是(C1-C4)烴氧基，鹵素，特別是氟、氯和溴，硝基，氨基，三氟甲基，羥基，亞甲基二氧基，氰基，羥基羰基，氨基羰基，(C1-C4)烴氧羰基，苯基，苯氧基，芐基，芐氧基，(R9O)2P(O)-，(R9O)2P(O)-O-或四唑基，其中R9是氫、(C1-C10)烴基、(C6-C14)芳基或(C6-C14)芳基-(C1-C8)烴基。這些可同樣地應(yīng)用于亞芳基基團(tuán)。
在一取代的苯基基團(tuán)中，取代基可位于2-，3-或4-位，3-和4-位是優(yōu)選的。如果苯基是二取代的，就彼此基團(tuán)而言，取代基可位于1，2-、1，3-或1，4-，相對于連接位置，取代基可位于2，3-、2，4-、2，5-、2，6-、3，4-或3，5-的位置。優(yōu)選的，在二取代苯基基團(tuán)中，相對于連接位置而言，二個取代基的位置在3-和4-位。
芳基或亞芳基基團(tuán)還可以是單環(huán)或多環(huán)的芳環(huán)系統(tǒng)，其中有1，2，3，4或5個環(huán)碳原子可被雜原子代替，例如2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、唑基、異唑基、噻唑基、異噻唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吲哚基、異吲哚基、吲唑基、2，3-二氮雜萘基、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、β-咔啉基，或這些基團(tuán)的苯并稠合、環(huán)戊基稠合、環(huán)己基稠合或環(huán)庚基稠合的衍生物。這些雜環(huán)可被上述碳環(huán)芳基系統(tǒng)所述的相同取代基所取代。
在這些芳基基團(tuán)或相應(yīng)的亞芳基基團(tuán)系列中，優(yōu)選的是含有1，2或3個選自N、O、S的雜原子的單環(huán)或雙環(huán)芳環(huán)系統(tǒng)，它們可以是未取代的，或是被1、2或3個選自下述的取代基所取代的(C1-C6)烴基、(C1-C6)烴氧基、氟、氯、硝基、氨基、三氟甲基、羥基、(C1-C4)烴氧羰基、苯基、苯氧基、芐氧基或芐基。
其中特別優(yōu)選的是含有1-3個選自N、O、S的雜原子的5-10元單環(huán)或雙環(huán)芳環(huán)系統(tǒng)，其可被1-2個選自下述的取代基所取代的(C1-C4)烴基、(C1-C4)烴氧基、苯基、苯氧基、芐基和芐氧基。
飽和或未飽和的環(huán)系，特別是含有1或2個例如氮、硫或氧的雜原子和選擇性地被＝O、＝S或R3取代的3-7元飽和或未飽和的環(huán)系的實例是環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷、環(huán)庚烷、環(huán)戊烯、環(huán)己烯、環(huán)庚烯、四氫吡喃、1，4-二氧雜環(huán)己烷、嗎啉、硫嗎啉、哌嗪、哌啶、吡咯烷、二氫異唑、四氫異唑、1，3-二氧戊環(huán)、1，2-二硫戊環(huán)、2，3-二氫呋喃、2，5-二氫呋喃、四氫呋喃、2，3-二氫噻吩、2，5-二氫噻吩、2-咪唑啉、3-咪唑啉、4-咪唑啉、2-唑啉、3-唑啉、4-唑啉、2-噻唑啉、3-噻唑啉、4-噻唑啉、噻唑烷、α-噻喃、α-吡喃或γ-吡喃。
R8和/或R8’表示的氨基酸基團(tuán)如同肽化學(xué)中常用的一樣，通常是由氨基酸的氨基上除去氫原子而得到的。然后氨基酸基團(tuán)通過通常如此得到的氨基基團(tuán)上的游離鍵連接于CO-R8基團(tuán)的CO基團(tuán)。氨基酸可以是天然的或非天然的氨基酸，優(yōu)選α-氨基酸。氨基酸可有不同的立體化學(xué)形式，如D-或L-氨基酸，以及均相的立體化學(xué)形式或立體異構(gòu)體的混合物形式?？梢蕴峒暗陌被崂缡?參見Houben-Weyl，Methoden der Organischen Chemie[Methods of OrganicChemistry]，Vol.XV/1和2，Georg Thieme Verlag，Stuttgart，1974)Aad，Abu，γAbu，ABz，2ABz，εAca，Ach，Acp，Adpd，Ahb，Aib，βAib，Ala，βAla，ΔAla，Alg，All，Ama，Amt，Ape，Apm，Apr，Arg，Asn，Asp，Asu，Aze，Azi，Bai，Bph，Can，Cit，Cys，(Cys)2，Cyta，Daad，Dab，Dadd，Dap，Dapm，Dasu，Djen，Dpa，Dtc，F(xiàn)el，Gln，Glu，Gly，Guv，hAla，hArg，hCys，hGln，hGlu，His，hlle，hLeu，hLys，hMet，hPhe，hPro，hSer，hThr，hTrp，hTyr，Hyl，Hyp，3Hyp，lle，lse，lva，Kyn，Lant，Lcn，Leu，Lsg，Lys，βLys，ΔLys，Met，Mim，Min，nArg，Nle，Nva，Oly，Orn，Pan，Pec，Pen，Phe，Phg，Pic，Pro，ΔPro，Pse，Pya，Pyr，Pza，Qin，Ros，Sar，Sec，Sem，Ser，Thi，βThi，Thr，Thy，Thx，Tia，Tle，Tly，Trp，Trta，Tyr，Val，叔丁基甘氨酸(Tbg)，新戊基甘氨酸(Npg)，環(huán)己基甘氨酸(Chg)，環(huán)己基丙氨酸(Cha)，2-噻吩基丙氨酸(Thia)，2，2-二苯基氨基乙酸，2-(對甲苯基)-2-苯基氨基乙酸，2-(對氯苯基)-2-苯基氨基乙酸；另外還有吡咯烷-2-羧酸；哌啶-2-羧酸；1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸；十氫異喹啉-3-羧酸；八氫吲哚-2-羧酸；十氫喹啉-2-羧酸；八氫環(huán)戊烷并[b]吡咯-2-羧酸；2-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3-羧酸；2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-羧酸；2-氮雜雙環(huán)[3.1.0]己烷-3-羧酸；2-氮雜螺[4.4]壬烷-3-羧酸；2-氮雜螺[4.5]癸烷-3-羧酸；螺(雙環(huán)[2.2.1]庚烷)-2，3-吡咯烷-5-羧酸；螺(雙環(huán)[2.2.2]辛烷)-2，3-吡咯烷-5-羧酸；2-氮雜三環(huán)[4.3.0.16，9]癸烷)-3-羧酸；十氫環(huán)庚烷并[b]吡咯-2-羧酸；十氫環(huán)辛烷并[c]吡咯-2-羧酸；八氫環(huán)戊烷并[c]吡咯-2-羧酸；八氫異吲哚-1-羧酸；2，3，3a，4，，6a-六氫環(huán)戊烷并[b]吡咯-2-羧酸；2，3，3a，4，5，7a-六氫吲哚-2-羧酸；四氫噻唑-4-羧酸；異 唑烷-3-羧酸；吡唑烷-3-羧酸；羥基吡咯烷-2-羧酸；所有這些都可以被選擇地取代(見下式)
上述雜環(huán)的基團(tuán)基于下述公開，例如US-A-4,344,949；US-A-4,347,847；US-A-4,350,704；EP-A 29,488；EP-A 31,741；EP-A46,953；Ep-A 49,605；EP-A 49,658；EP-A50,800；EP-A51,020；EP-A 52,870；EP-A 79,022；EP-A 84,164；EP-A89,637；EP-A 90,341；EP-A 90,362；EP-A 105,102；EP-A109,020；EP-A 111,873；EP-A 271,865和EP-A 344,682。
另外，氨基酸可以其酯或酰胺的形式存在，例如其甲酯、乙酯、異丙酯、異丁酯、叔丁酯、芐基酯、未取代的酰胺、甲酰胺、乙酰胺、氨基脲或ω-氨基-(C2-C8)-烴基酰胺。
氨基酸的官能基可以保護(hù)起來。適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基例如氨基甲酸乙酯保護(hù)基團(tuán)，羧基保護(hù)基團(tuán)和側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)描述在Hubbuch，Kontakte(Merck)1979，No.3，p14-23，和Büllesbach，Kontakte(Merck)1980，No.1，p23-35。下面應(yīng)特別提及的是Aloc，Pyoc，F(xiàn)moc，Tcboc，Z，Boc，Ddz，Bpoc，Adoc，Msc，Moc，Z(NO2)，Z(Haln)，Bobz，Iboc，Adpoc，Mboc，Acm，叔丁基，OBzl，ONbzl，OMbzl，Bzl，Mob，Pic，Trt。
本發(fā)明的式I和Ia化合物可以E/Z異構(gòu)體的形式存在。本發(fā)明涉及純的E異構(gòu)體和純的Z異構(gòu)體以及以各種比例存在的E/Z異構(gòu)體混合物。式I和Ia化合物可含有光學(xué)活性的碳原子，它們各自獨立地具有R-或S-構(gòu)型。它們可以純的對映異構(gòu)體或純的非對映體的形式存在，或以對映異構(gòu)體混合物的形式存在，例如，以外消旋體的形式，或非對映體的混合物的形式存在。本發(fā)明涉及純對映異構(gòu)體和各種比例的對映異構(gòu)體混合物，非對映體和各種比例的非對映體混合物兩種情況。非對映體，包括E/Z異構(gòu)體，可以分離成為單一的異構(gòu)體，例如通過色譜法分離。外消旋體可通過例如手性相色譜法或拆分的方法分離成為兩種對映異構(gòu)體。如果存在可移動的氫原子，則本發(fā)明還包括式I和Ia化合物所有的互變異構(gòu)體。
式I和Ia化合物生理上可接受的鹽特別是指可藥用的或無毒、生理上可利用的鹽。
含有酸性基團(tuán)如羧基的式I和Ia化合物的這種鹽可以是堿金屬鹽或堿土金屬鹽，例如鈉鹽鉀鹽、鎂鹽和鈣鹽，也可以是與生理上可接受的季銨離子形成的鹽和與銨和生理上可接受的有機(jī)胺形成的酸加成鹽，例如與三乙胺、乙醇胺或三(2-羥基乙基)胺形成的鹽。
含有堿性基團(tuán)如一個或多個氨基、脒基或胍基的式I和Ia化合物可與無機(jī)酸或有機(jī)羧酸和磺酸形成酸加成鹽，所述無機(jī)酸包括鹽酸、硫酸或磷酸，所述有機(jī)羧酸和磺酸包括乙酸、檸檬酸、苯甲酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、甲磺酸或?qū)妆交撬帷?br> 當(dāng)R8和/或R8’為2-三甲基銨-乙氧基基團(tuán)時，則式I和Ia化合物上帶有的生理上可接受的陰離子Q-是一價陰離子或是平衡價的多價無毒、生理上可利用的，特別是藥學(xué)上可利用的無機(jī)或有機(jī)酸陰離子，例如一種上述適合于形成酸加成鹽的陰離子或平衡價的陰離子。因此，Q-可以是選自下述一組基團(tuán)的陰離子(或平衡陰離子)之一氯、硫酸根、磷酸根、乙酸根、檸檬酸根、苯甲酸根、馬來酸根、富馬酸根、酒石酸根、甲磺酸根和對甲苯磺酸根。
對本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員而言，可由式I和Ia化合物用常規(guī)方法得到這些鹽，例如在溶劑或分散劑中使式I和Ia化合物與有機(jī)或無機(jī)酸或堿結(jié)合，或者由其它的鹽通過陽離子交換或陰離子交換而得到。本發(fā)明也包括式I和Ia化合物所有的鹽，其中由于生理上可接受的能力低，所述鹽不能直接用作藥物，只適合用作對式I和Ia化合物進(jìn)行其它化學(xué)修飾時的中間體或用作制備生理上可接受鹽的原料。
而且，本發(fā)明還包括式I和Ia化合物所有的溶劑化物，例如水合物或與醇的加成物，也包括式I和Ia化合物的衍生物，例如其作用和式I和Ia化合物類似的酯、前藥和代謝物。本發(fā)明還特別涉及在生理條件下可轉(zhuǎn)化成式I和Ia化合物的式I和Ia化合物的前藥。適當(dāng)?shù)氖絀和Ia化合物的前藥，即，以所需的方式具有改進(jìn)的性能的式I和Ia化合物經(jīng)過化學(xué)修飾的衍生物是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的。例如，關(guān)于前藥的詳細(xì)資料可參見文獻(xiàn)Fleisher等人，Advanced DrugDelivery Reviews，19(1996)，115-130；Design ofProdrugs，H.Bundgaard，Elsevier編輯，1985；H.Bundgaard，Drugs ofthe Future，16(1991)，443；Saulnier等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，4(1994)，1985；Safadi，Pharmaceutical Res.，10(1993)，1350。式I和Ia化合物的適當(dāng)前藥特別是指酸基團(tuán)如羧酸基團(tuán)，特別是表示為R4的COOH基團(tuán)的酯的前藥，也可以是可?；暮鶊F(tuán)(如氨基、脒基或胍基，特別是E基團(tuán)所表示的-R6C(＝NR6)-NR6’-、R6R6’N-C(＝NR6)-、R6R6’N-C(＝NR6)-NR6-基團(tuán)和4-11元的單環(huán)或多環(huán)，芳族或非芳族環(huán)系)的?；八幒桶被姿狨デ八?。對于酰基前藥和氨基甲酸酯前藥而言，位于這些基團(tuán)的氮原子上的氫原子可被?；鶊F(tuán)或氨基甲酸酯基團(tuán)取代一次或多次(如二次)。對于酰基前藥和氨基甲酸酯前藥而言，適當(dāng)?shù)孽；鶊F(tuán)和氨基甲酸酯基團(tuán)是例如-R6CO和-R6OCO，其中的R6如上述定義，即是氫，(C1-C18)烴基，(C3-C14)環(huán)烷基，(C3-C14)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基，其中有1-5個碳原子可被例如N、O、S的雜原子代替的(C5-C14)-芳基，或(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基，其中的芳基部分有1-5個碳原子可被例如N、O、S的雜原子代替，與單獨情況下的取代基定義結(jié)合而導(dǎo)致不穩(wěn)定化合物，例如形成不穩(wěn)定的游離氨基甲酸時的情況是不適當(dāng)?shù)?。這些前藥可按本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所熟悉的制備酰胺和氨基甲酸酯的常規(guī)方法制備。
本發(fā)明不限于具有嘌呤母體結(jié)構(gòu)的式I和Ia化合物，而且還包括在式I和Ia化合物中以3-脫氮嘌呤結(jié)構(gòu)、7-脫氮嘌呤結(jié)構(gòu)或7-脫氮-8-氮雜嘌呤結(jié)構(gòu)代替式I和Ia中的嘌呤結(jié)構(gòu)的那些化合物，即下面的式Ib和Ic，Id和Ie，以及If和Ig化合物
所有上文和下文中詳細(xì)描述式I和Ia化合物的內(nèi)容均可相應(yīng)的應(yīng)用于式Ib和Ic，Id和Ie，If和Ig化合物。除非另有說明，在討論式I和Ia化合物時也包括了式Ib和Ic，Id和Ie，以及If和Ig的脫氮和脫氮-氮雜類似物。優(yōu)選的本發(fā)明化合物確實是式I和Ia嘌呤結(jié)構(gòu)的化合物，其中的氮原子在3-和7-位，Y基團(tuán)所連接的碳原子在8-位。
式I和Ia化合物中，優(yōu)選的X是氫、NR6R6’、羥基-(C1-C6)烴基或NH-CO-R6，特別優(yōu)選氫、NR6R6’或NH-CO-R6，更優(yōu)選氫和NH2；優(yōu)選的Y是氫；優(yōu)選的R4是C(O)R8；優(yōu)選的式I和Ia化合物是R3是R6R6’N-R7、R6OC(O)N(R5)R7、R6S(O)p-N(R5)R7、R6C(O)N(R5)R7或R6N(R6’)-C(O)N(R5)R7，其中p是1或2，特別是其中R3是R6OC(O)N(R5)R7或R6S(O)p-N(R5)R7(其中p是1或2)的化合物；特別優(yōu)選的化合物是其中的親脂基團(tuán)包含在R3基團(tuán)中的化合物，例如基團(tuán)R6OC(O)N(R5)R7中的R6和/或R6’是諸如(C4-C14)烴基，(C5-C14)-芳基-(C1-C4)烴基如芐基，(C5-C14)環(huán)烷基或(C5-C14)環(huán)烷基-(C1-C4)烴基，優(yōu)選的環(huán)烷基基團(tuán)特別是1-金剛烷基和2-金剛烷基。
本發(fā)明優(yōu)選的一組化合物是由下述以其所有的立體異構(gòu)體和任何比例的混合物形式存在的式I和Ia化合物，以及生理可接受鹽組成的，其中X是氫、NH2、OH或NH-CO-R6；Y是氫；G是下式II基團(tuán)-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R4(II)；
W是下式III基團(tuán)-B-(CR1R2)r-A’-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-D-E(III)；Ga是下式IIa基團(tuán)-(CR1R2)r-A’-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-D-E(IIa)；Wa是下式IIIa基團(tuán)-B-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R4(IIIa)；A，A’各自獨立地是直接鍵、-C(O)NR5-，-NR5C(O)-，-C(O)-，-NR5，-O-，-S-，-SO-，-SO2-，(C5-C14)-亞芳基，其中在芳基基團(tuán)上可能有1-5個碳原子可被1-5個雜原子所代替，(C2-C4)亞炔基或(C2-C4)亞烯基；或二價的3-7-元飽和或不飽和環(huán)，其中含有1或2個例如氮、硫或氧的雜原子，并且可以是被＝S、＝O或R3一或二取代的；R1，R2各自獨立地是氫、氟、氯、氰基、硝基、(C1-C10)烴基、(C3-C14)環(huán)烷基、(C3-C12)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基、(C5-C14)-芳基、(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基、R6-O-R7、R6-S(O)p-R7或R6R6’N-R7；R3各自獨立地是氫、氟、氯、氰基、硝基、(C1-C14)烴基、(C3-C14)環(huán)烷基、(C3-C14)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基、(C5-C14)-芳基、(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基、R6-O-R7、R6S(O)nR7、R6R6’N-R7、R6CO2R7、R6COR7、R6OC(O)OR7、R6N(R5)C(O)OR7、R6S(O)p-N(R5)R7、R6OC(O)N(R5)R7、R6C(O)N(R5)R7、R6N(R5)-C(O)N(R5)R7、R6N(R5)S(O)pN(R5)R7、R6S(O)pR7、R6SC(O)N(R5)R7、R6C(O)R6、R6N(R5)-C(O)-R7或R6N(R5)-S(O)pR7，其中的烴基可以是一元不飽和或多元不飽和的，并且其中的烴基和芳基還可被下述基團(tuán)一或多元取代氟、氯、溴、氰基、R6N(R5)R7、R6R6’N-R7、硝基、R6O(C)OR7、R6C(O)R7、R6N(R5)C(O)R7、R6N(R5)S(O)pR7、R6或R6-O-R7；
R4是C(O)R8、C(S)R8、S(O)pR8、POR8R8’、L或D氨基酸或4-8元飽和或不飽和雜環(huán)的基團(tuán)，該雜環(huán)基含有1，2，3，或4個選自N、O、S的雜原子，例如四唑基、咪唑基、吡唑基、唑基、噻二唑基；R5是氫、(C1-C10)烴基、(C3-C14)環(huán)烷基、(C3-C14)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基、(C5-C14)-芳基或(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基；R6、R6’各自獨立地是氫、(C1-C8)烴基、(C3-C14)環(huán)烷基、(C3-C14)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基、其中有1-5個碳原子可被雜原子代替的(C5-C14)-芳基，或(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基，其中的芳基部分有1-5個碳原子可被雜原子代替，或者是R6和R6’與它們所連接的原子一起形成環(huán)系，該環(huán)系還可選擇地有另外的選自N、O、S的雜原子，例如嗎啉、哌嗪、哌啶、吡咯烷；R7各自獨立地是(C1-C4)亞烴基或是直接鍵；R8、R8’各自獨立地是羥基、(C1-C8)烴氧基、(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴氧基、(C5-C14)-芳氧基、(C1-C8)烴基羰氧基-(C1-C4)烴氧基、(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基羰氧基-(C1-C8)烴氧基、NR6R6’、二(C1-C8)烴基氨基羰基甲氧基、(C5-C14)-芳基-二(C1-C8)烴基氨基羰基甲氧基、(C5-C14)-芳基-氨基或L或D氨基酸；B是-O-，-S-，-NR5，-NR5-C(O)-，-C(O)NR5-，直接鍵或3-7元飽和或不飽和環(huán)的二價基團(tuán)，該環(huán)可含有一或2個例如氮、硫或氧的雜原子，并且可由＝O、＝S和R3一或二取代；D是直接鍵、-NR6-、-C(O)NR6-、-NR6-C(O)-、-S(O)2-NR6-、-NR6-C(O)NR6、-NR6-C(S)NR6-、-NR6-S(O)u-NR6-、-NR6-C(O)O-、-NR6-N＝CR6-、-NR6S(O)u-、-(C5-C14)-芳基-CO-、-(C5-C14)-芳基-S(O)u-、-N＝CR6-、-R6C＝N-或-R6C＝N-NR6-；E是氫、R6C(＝NR6)-NR6-、R6R6’N-C(＝NR6)-、R6R6’N-C(＝NR6)-NR6-，或4-11元的單環(huán)或多環(huán)，芳環(huán)或非芳環(huán)系的基團(tuán)，該環(huán)系選擇地含有1-4個選自N、O、S的雜原子，并且可選擇性的被R3、R5、＝O、＝S和R6R6’N-C(＝NR6)-基團(tuán)一、二或三取代；例如在上面的E定義中用它們的結(jié)構(gòu)式表示的基團(tuán)。
n是0，1，2，3，4或5；m是0，1，2，3，4或5；i是0或1；p各自獨立地是0，1或2；q各自獨立地是0，1或2；r是0，1，2，3，4，5或6；s是0，1，2，3，4或5；t是0，1，2，3，4或5；k是0或1；u是1或2；上述E基團(tuán)定義中的v是0，1，2或3；在這組優(yōu)選的化合物中，具有3-脫氮嘌呤結(jié)構(gòu)、7-脫氮嘌呤結(jié)構(gòu)或7-脫氮-8-氮雜嘌呤結(jié)構(gòu)的類似物不包括在內(nèi)。
進(jìn)一步優(yōu)選的化合物是由以及其所有的立體異構(gòu)體形式和任何比例的混合物形式存在的式I或Ia化合物，以及其生理上可接受的鹽和其前藥組成的，其中X是氫、NR6R6’、羥基-(C1-C6)烴基-NH或NH-CO-R6；Y是氫；G是下式II基團(tuán)-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R4(II)；W是下式III基團(tuán)-B-(CR1R2)r-A’-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-D-E(III)；Ga是下式IIa基團(tuán)-(CR1R2)r-A’-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-D-E(IIa)；Wa是下式IIIa基團(tuán)
-B-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R4(IIIa)；A、A’各自獨立地是直接鍵、-C(O)NR5，-NR5C(O)-，-C(O)-，-NR5，-O-，-S-，-SO-，-SO2-，(C5-C14)-亞芳基，其中在芳基基團(tuán)上可能有1-3個碳原子可被選自O(shè)、N、S的雜原子所代替，(C2-C4)亞炔基或(C2-C4)亞烯基；R1、R2各自獨立地是氫、氟、氰基、(C1-C4)烴基、(C5-C6)-芳基、(C5-C6)-芳基-(C1-C4)烴基、R6-O-R7或R6R6’N-R7；R3各自獨立地是氫、(C1-C18)烴基、(C3-C14)環(huán)烷基、(C3-C14)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基、(C5-C14)-芳基、(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基、R6R6’N-R7、R6C(O)R7、R6S(O)p-N(R5)R7、R6OC(O)N(R5)R7、R6C(O)N(R5)R7、R6N(R6’)-C(O)N(R5)R7、R6N(R6’)S(O)pN(R5)R7或R6N(R6’)-C(O)-R7，其中的烴基可以是一元不飽和或多元不飽和的，并且其中的烴基和芳基還可被下述基團(tuán)一或多元取代氟、氯、溴、氰基、R6R6’N-R7、硝基、R6O(C)OR7、R6C(O)R7、R6N(R6’)C(O)R7、R6N(R6’)S(O)pR7、R6或R6-O-R7；R4是C(O)R8；R5各自獨立地是氫或(C1-C4)烴基；R6、R6’各自獨立地是氫、(C1-C18)烴基、(C3-C14)環(huán)烷基、(C3-C14)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基、其中有1-3個碳原子可被1-3個選自N、S、O的雜原子代替的(C5-C14)-芳基，或(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基，其中的芳基部分有1-3個碳原子可被1-3個選自N、S、O的雜原子代替，或者是R6和R6’與它們所連接的原子一起形成環(huán)系，該環(huán)系還可選擇地有另外的選自N、O、S的雜原子，例如嗎啉、哌嗪、哌啶、吡咯烷；R7各自獨立地是(C1-C2)亞烴基或是直接鍵；R8各自獨立地是羥基、(C1-C4)烴氧基、(C5-C14)-芳基-(C1-C4)烴氧基、(C5-C14)-芳氧基、(C1-C8)烴基羰氧基-(C1-C4)烴氧基、(C5-C14)-芳基-(C1-C4)烴基羰氧基-(C1-C4)烴氧基或氨基酸的基團(tuán)
B是-O-，-S-，-NR5-，直接鍵或3-7元飽和或不飽和環(huán)的二價基團(tuán)，該環(huán)可含有一或二個例如氮、硫或氧的雜原子，并且可由＝O、＝S和R3一或二取代；D是直接鍵、-NR6-、-C(O)NR6-、-NR6-C(O)-、-NR6-C(O)NR6、-NR6-C(O)O-、-NR6-N＝CR6、-R6C＝N-NR6-、-N＝CR6-或-R6C＝N-，其中用D表示的二價基團(tuán)通過右側(cè)的游離鍵鍵連于基團(tuán)E；E是氫、-R6C(＝NR6)-NR6-、R6R6’N-C(＝NR6)-、R6R6’N-C(＝NR6)-NR6-或下式基團(tuán) 這些基團(tuán)可選擇性地被R3、R5、＝O、＝S和R6R6’N-C(＝NR6)-基團(tuán)一、二或三取代；n是1，2，3或4；m是0或1；i是0或1；
q是0或1；p各自獨立地是0，1或2；r是0，1，2，3，4或5；s是0，1或2；t是0，1或2；k是0或1；v是0、1、2或3；特別優(yōu)選的式I或Ia化合物是以其所有的立體異構(gòu)體形式和任何比例的混合物形式存在的化合物，以及生理上可接受的鹽和其前藥，其中X是氫、NR6R6’或NH-CO-R6；Y是氫；G是下式II基團(tuán)-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R4(II)；W是下式III基團(tuán)-B-(CR1R2)r-A’-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-D-E(III)；Ga是下式IIa基團(tuán)-(CR1R2)r-A’-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-D-E(IIa)；Wa是下式IIIa基團(tuán)-B-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R4(IIIa)；A，A’各自獨立地是直接鍵、-C(O)NR5-，-NR5C(O)-或(C5-C6)-亞芳基，其中在芳基基團(tuán)上可能有1-2個碳原子被氮原子所代替；R1，R2是氫；R3各自獨立地是氫、(C1-C10)烴基、(C3-C14)環(huán)烷基、(C3-C14)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基、(C5-C14)-芳基、(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基、R6R6’N-R7、R6OC(O)N(R5)R7、R6C(O)N(R5)R7、R6N(R6’)-C(O)N(R5)R7、R6-C(O)-R7或R6N(R6’)-C(O)-R7，其中的烴基可以是一元不飽和或多元不飽和的，并且其中的烴基和芳基還可被下述基團(tuán)一或多元取代氟、氯、溴、氰基、R6R6’N-R7、R6-C(O)-R7、R6N(R6’)-C(O)-R7、R6或R6-O-R7；R4是C(O)R8；R5各自獨立地是氫或(C1-C4)烴基；R6，R6’各自獨立地是氫，(C1-C8)烴基，(C3-C12)環(huán)烷基，(C3-C12)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基，其中有1-3個碳原子可被1-3個選自N、O、S的雜原子代替的(C5-C14)-芳基，或(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基，其中的芳基部分有1-3個碳原子可被1-3個選自N、O、S的雜原子代替；R7是直接鍵；R8各自獨立地是羥基、(C1-C4)烴氧基、(C5-C14)-芳基-(C1-C4)烴氧基、(C5-C14)-芳氧基、(C1-C8)烴基羰氧基-(C1-C4)烴氧基、(C5-C14)-芳基-(C1-C4)烴基羰氧基-(C1-C4)烴氧基或氨基酸的基團(tuán)；B是-O-，-S-，-NR5，直接鍵或3-7元飽和或不飽和環(huán)的二價基團(tuán)，該環(huán)可含有一或二個例如氮、硫或氧的雜原子，并且可由選自＝O、＝S和R3的基團(tuán)一或二取代；D是直接鍵、-NR6、-C(O)NR6-或-NR6-C(O)-；E是氫、R6C(＝NR6)-NR6’-、R6R6’N-C(＝NR6’)-、R6R6’N-C(＝NR6’)-NR6-或下式基團(tuán)
上述環(huán)系可選擇性地被R3、R5、＝O、＝S和R6R6’N-C(＝NR6)-的基團(tuán)一、二或三取代；r是0，1，2，3，4或5；s是0或1；t是0或1；k是0或1；n是0，1，2，3或4；m是0或1；i是0或1；q是0或1。
特別優(yōu)選的式I化合物是以其所有的立體異構(gòu)體形式和任何比例的混合物形式存在的化合物，以及生理上可接受的鹽和其前藥，其中X是氫、NR6R6’或NH-CO-R6；Y是氫；G是下式II基團(tuán)-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R4(II)；W是下式III基團(tuán)-B-(CR1R2)r-A’-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-D-E(III)；A、A’是直接鍵；R1、R2各自獨立地是氫、(C1-C4)烴基、(C5-C6)-芳基或(C5-C6)-芳基-(C1-C4)烴基；R3各自獨立地是氫、(C1-C18)烴基、(C3-C14)環(huán)烷基、(C3-C14)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基、(C5-C14)-芳基、(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基、R6R6’N-R7、R6OC(O)N(R5)R7、R6SO2N(R5)R7、R6C(O)N(R5)R7、R6N(R6’)C(O)N(R5)R7、R6C(O)R7或R6N(R6’)C(O)R7，其中的烴基可以是一元不飽和或多元不飽和的，并且其中的烴基和芳基還可被下述基團(tuán)一或多元取代氟、氯、溴、氰基、R6R6’N-R7、R6C(O)R7、R6N(R6’)C(O)R7、R6或R6OR7；R4是C(O)R8；R5各自獨立地是氫或(C1-C4)烴基；R6，R6’各自獨立地是氫，(C1-C18)烴基，(C3-C12)環(huán)烷基，(C3-C12)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基，其中有1-3個碳原子可被1-3個選自N、O、S的雜原子代替的(C5-C14)-芳基，或(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基，其中的芳基部分有1-3個碳原子可被1-3個選自N、O、S的雜原子代替，R6和，R6’也可以與它們所連接的原子一起形成環(huán)系，該環(huán)系還可選擇地有另外的，特別是1，2或3個選自N、O、S的雜原子；R7是直接鍵；R8各自獨立地是羥基、(C1-C4)烴氧基、(C5-C14)-芳基-(C1-C4)烴氧基、(C5-C14)-芳氧基、(C1-C8)烴基羰氧基-(C1-C4)烴氧基或(C5-C14)-芳基-(C1-C4)烴基羰氧基-(C1-C4)烴氧基；B是1，4-哌啶二基或1，4-哌嗪二基；當(dāng)B為1，4-哌啶二基時，哌啶的氮原子與嘌呤結(jié)構(gòu)相連；D是直接鍵、-NR6、-C(O)NR6-或-NR6-C(O)-；E是氫、R6C(＝NR6)-NR6’-、R6R6’N-C(＝NR6’)-、R6R6’N-C(＝NR6’)-NR6-或下式基團(tuán)
上述環(huán)系可選擇性地被選自R3、R5、＝O、＝S和R6R6’N-C(＝NR6)-的基團(tuán)一、二或三取代；r是0，1或2；s是0或1；t是0或1；k是0或1；n是0，1或2；m是0或1；i是0或1；q是0或1。
更特別優(yōu)選的式I化合物是以其所有的立體異構(gòu)體形式和任何比例的混合物形式存在的化合物，以及生理上可接受的鹽和其前藥，其中X是氫；Y是氫；G是下式II基團(tuán)-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R4(II)；W是下式III基團(tuán)-B-(CR1R2)r-A’-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-D-E(III)；A，A’是直接鍵；R1，R2各自獨立地是氫或(C1-C2)烴基，特別是氫；R3是R6R6’N-R7、R6OC(O)N(R5)R7、R6SO2N(R5)R7、R6C(O)N(R5)R7或R6N(R6’)C(O)N(R5)R7，特別是R6OC(O)N(R5)R7；R4是C(O)R8；R5是氫或(C1-C2)烴基，特別是氫；R6，R6’各自獨立地是氫，(C1-C18)烴基，(C3-C12)環(huán)烷基，(C3-C12)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基，其中有1-3個碳原子可被1-3個選自N、O、S的雜原子代替的(C5-C14)-芳基，或(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基，其中的芳基部分有1-3個碳原子可被1-3個選自N、O、S的雜原子代替，R6和，R6’也可以與它們所連接的原子一起形成環(huán)系，該環(huán)系還可選擇地有另外的，例如1，2或3個選自N、O、S的雜原子；R7是直接鍵；R8是羥基、(C1-C4)烴氧基、(C5-C14)-芳基-(C1-C4)烴氧基、(C5-C14)-芳氧基、(C1-C8)烴基羰氧基-(C1-C4)烴氧基或(C5-C14)-芳基-(C1-C4)烴基羰氧基-(C1-C4)烴氧基，特別是羥基或(C1-C4)烴氧基；B是1，4-哌啶二基，該基團(tuán)通過哌啶的氮原子與嘌呤結(jié)構(gòu)相連；D是-NR6-或-C(O)NR6-，-C(O)NR6-基團(tuán)是由其中的氮原子鍵連于基團(tuán)E；E是R6R6’N-C(＝NR6’)-或下式基團(tuán)
上述環(huán)系可選擇性地被選自R3、R5、＝O、＝S和R6R6’N-C(＝NR6)-的基團(tuán)1-3取代；r是0或1；s是0；t是0；k是0；n是1；m是0；i是1；q是0。
本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物是以其所有的立體異構(gòu)體形式和任何比例的混合物形式存在的式Ih化合物，以及生理上可接受的鹽和其前藥，
其中，R3是R6R6’N-R7、R6OC(O)N(R5)R7、R6SO2N(R5)R7、R6C(O)N(R5)R7或R6N(R6’)C(O)N(R5)R7，特別是R6OC(O)N(R5)R7；而Rh是羧酸基團(tuán)COOH或羧酸衍生物，例如酯，如(C1-C4)烴基酯，即例如基團(tuán)COO-(C1-C4)烴基。在R7是直接鍵的Ih式化合物中，Ih式中的立體化學(xué)中心(h)優(yōu)選為S構(gòu)型。R7是直接鍵的Ih式化合物可命名為2-氨基-3-(6-(4-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸和其衍生物，例如酯，在其2-氨基基團(tuán)上可選擇取代。最特別優(yōu)選的化合物是式Ik的2S-芐氧羰基氨基-3-(6-(4-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基-氨基甲?；?哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸和其生理上可接受的鹽和其前藥。
式I或Ia化合物通常可用例如，通過將可由式I或Ia化合物按照與合成相反的路線能夠衍生出來的二個或多個片段連接起來的縮合合成過程制備。在式I或Ia化合物的制備中，一般可有利地或者有必要在合成過程中，以在以后能轉(zhuǎn)化成所需官能基團(tuán)的前藥形式引入官能基團(tuán)，在各自的合成步驟中該官能基團(tuán)可能導(dǎo)致不希望有的反應(yīng)或副反應(yīng)，或用適合于該合成情況的保護(hù)基策略暫時保護(hù)官能基，這些都是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的(Greene，Wuts，Protective Groups inOrganic Synthesis，Wiley，1991)。
本發(fā)明還涉及式I化合物的合成方法，該方法包括合成式I化合物的下述一個或多個步驟。
a1)使下式IV化合物 其中L1是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的一般離去基團(tuán)，例如，氯、溴、碘、OTos或OMes，優(yōu)選氯或溴，而X和Y如上文定義，但是官能團(tuán)也可選擇性地以其前體或其保護(hù)形式存在，與下式V化合物進(jìn)行反應(yīng)L2-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R10(V)其中R1、R2、R3、A、n、m、i和q如上文定義，R10如上文R4的定義，但可選擇性地被保護(hù)基團(tuán)保護(hù)，例如R4＝被叔丁基或甲基或乙基保護(hù)基團(tuán)保護(hù)的COOH，L2是羥基或是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所知道的離去基團(tuán)，如氯、溴、碘、OTos、OMes或OTf，得到式VI化合物 其中R11是-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R10和上文關(guān)于此基團(tuán)的定義；此反應(yīng)可按照本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行(參見文獻(xiàn)J.March，Advanced Organic Chemistry，第4版，Wiley，1992)。優(yōu)選地，反應(yīng)在適當(dāng)?shù)娜軇┗蛳♂寗┲羞M(jìn)行，這些溶劑或稀釋劑例如DCM，CHCl3，THF，乙醚，正庚烷，正己烷，正戊烷，環(huán)己烷，二異丙醚，甲基叔丁基醚，乙腈，DMF，DMSO，二烷，甲苯，苯，乙酸乙酯或這些溶劑的混合物，適當(dāng)?shù)目杉尤雺A，例如丁基鋰、二異丙基氨基化鋰(LDA)、氫化鈉、氨化鈉、叔丁醇鉀、CaCO3、Cs2CO3、三乙胺、二異丙基乙基胺或復(fù)合堿(氨化鈉/R12ONa，其中R12是(C2-C6)烴基或，CH3CH2OCH2CH2)。當(dāng)L2＝OH時，反應(yīng)可在例如Mitsunobu反應(yīng)所述的條件(Hughes，Organic Reactions，42(1992)335-656)下進(jìn)行，例如在THF中與三苯膦和DEAD反應(yīng)。
a2)式VI化合物與式VII化合物反應(yīng)H-B-(CR1R2)r-A1-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-R13(VII)其中，R13為-D-E或可被轉(zhuǎn)變成D-E或任意地帶有適當(dāng)保護(hù)基的基團(tuán)R14；其它基團(tuán)具有上文定義。R14為，例如，任意保護(hù)的氨基-NHR6，可用作保護(hù)基的例如Boc保護(hù)基、保護(hù)的羧酸酯、醛-C(O)H、酮基-C(O)R6或保護(hù)的巰基。
該反應(yīng)得到式VIII化合物 其中R15為-B-(CR1R2)r-A′-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-R13，其它基團(tuán)使用如上文定義。
根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法(參見源文獻(xiàn)J.March，AdvancedOrganic Chemistry，第4版，Wiley，1992)進(jìn)行該反應(yīng)；優(yōu)選在適當(dāng)有機(jī)溶劑或稀釋劑中進(jìn)行，如DCM、CHCl3、THF、乙醚、正庚烷、正己烷、正戊烷、環(huán)己烷、二異丙醚、甲基叔丁基醚、乙腈、DMF、DMSO、二烷、甲苯、苯、乙酸乙酯或者這些溶劑的混合物；如果適合的話，可加入堿，如丁基鋰、二異丙基氨化鋰(LDA)、氫化鈉、氨化鈉、叔丁醇鈉、CaCO3、Cs2CO3、三乙胺、二異丙基乙胺或復(fù)合堿(氨化鈉/R12ONa，其中R12為(C2-C6)-烷基或CH3CH2OCH2CH2)，其中當(dāng)B＝NR6時，過量的式VII化合物也可用作堿。
a3)如果適合的話，式VIII化合物中R13和/或R10上的保護(hù)基可通過公知的方法(Greene，Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，Wiley，1991)去除。例如R13為Boc-被護(hù)氨基時，該Boc基團(tuán)可通過例如與三氟乙酸反應(yīng)而被去除。
a4)然后如果適合的話，根據(jù)公知的方法，如下述方法之一使式VIII化合物中的R13進(jìn)行反應(yīng)，得到基團(tuán)D-E。
a4.1)通過將其中R13＝NHR6的化合物與1H-吡唑-1-羧基脒或氨基氰反應(yīng)，得到胍(參見Bernatowicz等人，J.Org.Chem.57(1992)2497)。
a4.2)通過將其中R13＝NHR6的化合物與下列形式的單環(huán)系或多環(huán)系反應(yīng)， 其中L3為可親核取代的離去基團(tuán)，如鹵素或SH、SCH3、SOCH3、SO2CH3或HN-NO2，得到具有下述端基的化合物 (此方法可參見如A.F.Mckay等人，J.Med.Chem.6(1963)587；M.N.Buchman等人，J.Am.Chem.Soc.71(1949)766；F.Jung等人，J.Med.Chem.34(1991)1110或G.Sorba等人，Eur.J.Med.Chem.21(1986)，391)。
a4.3)通過將其中R13＝NHR6的化合物與下列形式的化合物反應(yīng)，
其中L3為可親核取代的離去基團(tuán)，如鹵素或SH、SCH3、SOCH3、SO2CH3或HN-NO2，得到具有下述端基的化合物 (對于方法，可參見如Miller，Synthesis 1986，777或Brimble，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1(1990)311)。
a4.4)通過將其中R13＝NHR6的化合物與下列形式的單環(huán)系或多環(huán)系反應(yīng)， 其中L3為可親核取代的離去基團(tuán)，如SCH3，得到具有下述端基的化合物 (對于方法，可參見如T.Hiroki等人，Synthesis(1984)703或M.Purkayastha等人，Indian J.Chem.Sect.B 30(1991)646)。
a4.5)根據(jù)常規(guī)文獻(xiàn)方法(如類似于文獻(xiàn)N.Desideri等人，Arch.Pharm.325(1992)773-777或A.Alves等人，Eur.J.Med.Chem.Chim.Ther.21(1986)297-304的方法)，其中-D-E為下列形式的氨基胍基亞胺
或下列形式的環(huán)氨基胍基亞胺 的化合物可通過使下式化合物 或 和O＝C(R6)-形式的酮類或醛類化合物或其對應(yīng)的乙縮醛類或縮酮類化合物進(jìn)行縮合而制得；其中上述氨基胍基亞胺是以E/Z異構(gòu)體混合物的形式得到的，該混合物可用常規(guī)色譜方法分離。
a4.6)用類似于a4.5)的方法，可得到其中-D-E為R6-C(＝NR6)-NR6-N＝C(R6)-或為含下列形式的單環(huán)系或多環(huán)系的化合物 a4.7)根據(jù)文獻(xiàn)中公知的方法(參見Houben-Weyl，Methoden derOrganischen Chemie，Bd.E 12/2，Georg Thieme Verlag，Stuttgart1985，p.1058ff)，例如將R13＝SH的化合物氧化成磺酸(R13＝SO3H)，可制得其中-D-E為-S(O)2NR6-的化合物；由此，可直接或通過連接酰胺鍵由對應(yīng)的磺酰鹵制得-D-為-S(O)2NR6-的化合物，其中如果需要的話，可在進(jìn)行氧化前將分子中對氧化敏感的基團(tuán)，如氨基、脒基或胍基由適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基保護(hù)。
a4.8)其中-D-為-S(O)NR6-的化合物可通過如將R13＝SH的化合物轉(zhuǎn)變成對應(yīng)的硫化物，然后利用間氯過苯甲酸氧化成亞磺酸(R13＝SO2H)而制得(參見Houben-Weyl，Methoden der OrganischenChemie，Vol.E 11/1，Georg Thieme Verlag，Stuttgart 1985，p.618f)；由此，根據(jù)文獻(xiàn)中公知的方法，可制得對應(yīng)的磺酰胺。一般地，文獻(xiàn)中公知的其它方法也可用于制備-D-＝-S(O)uNR6(u＝1、2)的式I和Ia化合物(參見Houbeh-Weyl，Methoden der Organischen Chemie，Vol.E 11/1，Georg Thieme Verlag，Stuttgart 1985，p.618ff或Vol.E11/2，Stuttgart 1985，p.1055ff)。
a4.9)其中-D-E為R6R6′N-C(＝NR6)-NR6-C(O)-或下列形式的環(huán)?；一鶊F(tuán)的化合物 可通過例如下述方法制得將其中R13為-C(O)-L4且L4為容易親核取代的離去基團(tuán)的化合物，與下列形式的適當(dāng)胍(衍生物)進(jìn)行反應(yīng) 或與下列形式的環(huán)胍(衍生物)反應(yīng)
含上述基團(tuán)L4(O)C-的活化酸衍生物可有利地通過本身公知的方法，由羧酰氯(L4＝Cl)獲得，例如使用亞硫酰氯；其中部分羧酰氯是通過本身公知的方法由羧酸制得。所述的L4例如是烴氧基，優(yōu)選為甲氧基，苯氧基，苯硫基，甲硫基，2-吡啶硫基，或氮雜環(huán)，優(yōu)選1-咪唑基。除了羧酰氯(L4＝Cl)以外，進(jìn)一步活化的、帶有L4(O)C-類型基團(tuán)的酸衍生物也可以公知的方法例如由羧酸(L4＝OH的情況)直接制得，例如在甲醇中利用氣體HCl處理得到甲基酯(L4＝OCH3)，利用羰基二咪唑處理得到imidazolides(L4＝1-咪唑基)(參見Staab，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1，351-367(1962))，或者在惰性溶劑中，在三乙胺存在下利用Cl-COOC2H5或甲苯磺酰氯處理得到混合酐(L4＝C2H5OC(O)O或TosO)。利用碳化二亞胺如二環(huán)己基碳化二亞胺(DCCI)或利用O-((氰基)乙氧基羰基)亞甲基)氨基)-1，1，3，3-四甲基脲陽離子四氟硼酸鹽(“TOTU”)(Knig等人，Proc.21st Europ.Peptide Symp.1990，(Eds.Giralt，Andreu)，Escom，Leiden，1991，p.143)及其它肽化學(xué)中常用的活性劑，也可進(jìn)行羧酸的活化(適用于制備活化羧酸衍生物的許多方法公開在下述文獻(xiàn)中J.March，Advanced Organic Chemistry，第3版(John Wiley&Sons，1985)，p.350)。具有L4(O)C-類型基團(tuán)的活化羧酸衍生物與相應(yīng)的胍(衍生物)之間的反應(yīng)優(yōu)選地以本身公知的方法在質(zhì)子或非質(zhì)子極性惰性有機(jī)溶劑中進(jìn)行；甲基酯(L4＝OMe)與相應(yīng)的胍之間的反應(yīng)在甲醇、異丙醇或THF溶劑中、于20℃至這些溶劑的沸點溫度之間進(jìn)行更為有利。具有基團(tuán)L4(O)C-的化合物與游離胍的大多數(shù)反應(yīng)是在非質(zhì)子惰性溶劑，如THF、二甲氧基乙烷或二烷中進(jìn)行的；但是在具有L4(O)C-基團(tuán)的化合物與胍的反應(yīng)中，當(dāng)使用如NaOH的堿時也可利用水為溶劑。如果L4＝Cl，為了結(jié)合氫鹵酸，該反應(yīng)在加入酸清除劑，例如在加入過量胍(衍生物)形式的條件下進(jìn)行更為有利。
a4.10)根據(jù)類似于a4.9)的方法，可獲得其中-D-E為R6-C(＝NR6)-NR6-C(O)-或為含下列形式的單環(huán)系或多環(huán)系基團(tuán)的化合物 a4.11)其中-D-E為磺酰基胍或R6R6′N-C(＝NR6)-NR6-S(O)u-(u＝1、2)或下列形式的次磺?；一鶊F(tuán)的化合物 (u＝1，2)可利用公知文獻(xiàn)中的方法通過式R6R6′N-C(＝NR6)-NHR6和下式化合物 與其中R13為S(O)uL5(u＝1、2)且L5例如為Cl或NH2的化合物進(jìn)行反應(yīng)而制得(如類似于S.Birtwell等人，J.Chem.Soc.(1946)491或Houben Wely，Methoden der Organishchen Chemie，Vol.E4，Georg Thiemie Verlag，Stuttgart 1983，p.620 ff)。
a4.12)用類似于a4.11)的方法，可獲得其中-D-E為R6-C(＝NR6)-NR6-S(O)u-(u＝1、2)或為含下列形式的單環(huán)系或多環(huán)系基團(tuán)的化合物
a4.13)其中-D-為-NR6-C(O)-的化合物可通過將R13＝-NHR6的化合物先與適當(dāng)?shù)奶妓嵫苌铮瑑?yōu)選光氣雙光氣(氯甲酸三氯甲酯)、三光氣(雙-三氯甲基碳酸酯)、氯甲酸乙酯、氯甲酸異丁酯、雙(1-羥基-1H-苯并三唑)碳酸酯或N，N′-羰基二咪唑)進(jìn)行反應(yīng)，得到其中R13為下式的化合物 其中根據(jù)所使用的碳酸衍生物，L6可為羥基、鹵素(如氯)、乙氧基、異丁氧基、苯并三唑-1-氧基或1-咪唑基；該反應(yīng)是在對所用試劑為惰性的溶劑中，優(yōu)選在DMF、THF或甲苯中，在20℃至上述溶劑沸點之間的溫度(優(yōu)選0℃至60℃)下進(jìn)行。然后，如上文a4.9)描述的制備?；?或其衍生物)的方法，隨后這些衍生物與R6R6′N-C(＝NR6)-NR6′H或R6-C(＝NR6)-NHR6或與含下列形式的單環(huán)系或多環(huán)系的基團(tuán)的化合物進(jìn)行下步反應(yīng) 或 a4.14)其中-D-E為雙-氨基三唑基團(tuán)或雙-氨基二唑基團(tuán)的式I化合物可根據(jù)如P.J.Garrett等人，Tetrahedron 49(1993)165或R.LeeWebb等人，J.Heterocyclic Chem.24(1987)275描述的方法制得。
a4.15)其中-D-E為脲或硫脲基團(tuán)的式I化合物可根據(jù)公知的方法合成(如總結(jié)在C.Ferri，Reaktionen der organischen Synthese，GeorgThieme Verlag，Stuttgart 1978中的方法)，例如通過對應(yīng)的胺與異氰酸酯或異硫代氰酸酯反應(yīng)而制得。
a5)如果適合的話，在式VIII化合物中的R13反應(yīng)得到基團(tuán)D-E之后，仍將待去除的進(jìn)一步保護(hù)基可通過公知的方法(參見上文Greene，Wuts的文獻(xiàn))去除。
a6)如果適合的話，可將所得的式I化合物轉(zhuǎn)變成其鹽，特別是可藥用或無毒的生理可接受的鹽，和/或?qū)⑺鼈冝D(zhuǎn)變成前藥。
本發(fā)明還另外涉及合成式Ia化合物的方法，該方法包括進(jìn)行一步或多步合成式Ia化合物的下列步驟。
b1)將式IV化合物與式IX化合物反應(yīng)L2-(CR1R2)r-A′-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-R13(IX)；其中R1、R2、R3、A′、r、s、k、t、R13和L2如上文定義，得到式X化合物 其中R16為-(CR1R2)r-A′-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-R13，L1、X和Y如上文定義且上文指明的含義可在不同情況下使用。反應(yīng)可通過本領(lǐng)域公知的方法進(jìn)行(參見源文獻(xiàn)J.March，Advanced OrganicChemistry，第4版，Wiley，1992)，優(yōu)選在適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑或稀釋劑中進(jìn)行，如DCM、CHCl3、THF、乙醚、正庚烷、正己烷、正戊烷、環(huán)己烷、二異丙醚、甲基叔丁基醚、乙腈、DMF、DMSO、二烷、甲苯、苯、乙酸乙酯或者這些溶劑的混合物；如果適合的話，可加入堿，如丁基鋰、二異丙基氨化鋰(LDA)、氫化鈉、氨化鈉、叔丁醇鉀、CaCO3、Cs2CO3、三乙胺、二異丙基乙胺或復(fù)合堿(氨化鈉/R12ONa，其中R12為(C2-C6)-烷基或CH3CH2OCH2CH2)。對于L2＝OH，可根據(jù)Mitsunobu反應(yīng)(Hughes，Organic Reactions 42(1992)335-656)進(jìn)行該反應(yīng)，例如通過在THF中與三苯膦和DEAD反應(yīng)。
b2)將式X化合物與式XI化合物反應(yīng)H-B-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R10(XI)；其中R1、R2、R3、R10、A、B、n、m、i和q如上文定義，得到式XII化合物 其中R16、X和Y如上文定義，R17為-B-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R10且上文指明的含義可在不同情況下使用。
b3)為了進(jìn)一步合成式Ia化合物，可參照合成式I化合物中的步驟a3)至a6)的方法。
在合成式I化合物的方法中，步驟a2)也可在步驟a1)之前進(jìn)行。在合成式Ia化合物的方法中，步驟b2)也可在步驟b1)之前進(jìn)行。
嘌呤結(jié)構(gòu)的6-位中的碳取代基的引入可通過例如Stille偶合(如Langli等人，Tetrahedron 52(1996)5625；Gundersen，TetrahedronLett.35(1994)3153中描述的方法)而進(jìn)行；或通過Heck偶合(如Koyama等人，Nucleic Acids ReS.，Symp.Ser.11(1982)41中描述的方法)而進(jìn)行。
嘌呤結(jié)構(gòu)位置2中的取代基X的引入可在合成式I和Ia化合物的最后通過公知的方法進(jìn)行(如D.A.Nugiel，J.Org.Chem.62(1997)201-203；N.S.Gray，Tetrahedron Lett.38(1997)1161及其所引用的參考文獻(xiàn)中描述的方法)。
8-位中以Y表示的取代基的引入可通過公知的方法引入(如E.J.Reist等人，J.Org.Chem.33(1968)1600；J.L.Kelley等人，J.Med.Chem.33(1990)196；或E.Vanotti等人，Eur.J.Chem.29(1994)287中描述的方法)。
本發(fā)明的式I和Ia化合物及其生理可接受鹽可以以相互混合的混合物形式或以藥物制劑形式對動物進(jìn)行給藥，優(yōu)選對哺乳動物給藥。特別是作為藥物本身對人進(jìn)行給藥。藥物劑型可以是經(jīng)腸或非腸道使用；作為活性組分，該制劑含有有效劑量的至少一種式I或式Ia化合物或其鹽或其前藥，同時加入了常規(guī)藥物無毒載體和/或添加劑。該藥物制劑一般含有大約0.5至90％重量的治療活性化合物。
所述藥物可以以丸劑、片劑、漆片、包衣片、顆粒、硬或軟明膠膠囊、溶液、糖漿、乳液、懸浮液或氣溶膠混合物的形式經(jīng)口給藥。但是，給藥也可經(jīng)直腸(如以栓劑形式)或非腸道(如以注射溶液或輸注溶液、微膠囊或條劑形式)、經(jīng)皮(如以油膏或酊劑)或經(jīng)鼻(如以鼻用噴霧劑形式)進(jìn)行。
藥物制劑可通過本身公知的方式制得，使用可藥用惰性無機(jī)或有機(jī)載體。對于生產(chǎn)丸劑、片劑、包衣片和硬明膠膠囊，可使用如乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽等。用于軟明膠膠囊和栓劑的載體例如可以是脂肪、石蠟、半固體或液體多元醇、天然或硬化油等。適用于生產(chǎn)溶液或糖漿的載體是例如水、蔗糖、轉(zhuǎn)化糖、葡萄糖、多元醇等。適用于生產(chǎn)注射溶液的載體是水、醇類、甘油、多元醇、植物油等。適用于微膠囊、植入劑或條劑的載體為乙醇酸和乳酸的共聚物。
除了活性化合物和載體之外，藥物制劑可另外包含添加劑如填料、增量劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、增濕劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、保存劑、甜味劑、著色劑、香味劑或芳香劑、增稠劑、稀釋劑、緩沖物質(zhì)，也含有用于獲得儲存效果的溶劑或增溶劑試劑，也可含有用于改變滲透壓的鹽、包衣劑或抗氧化劑。它們也可包含兩種或多種式I或Ia化合物和/或其生理可接受鹽；除了至少一種式I或Ia化合物或其鹽之外，也可含有另外一種或多種治療活性物質(zhì)。
劑量可在很寬的范圍內(nèi)變化，必須適應(yīng)于每種特殊情況下的特殊條件。在口服給藥情況下，為了獲得有效的效果，日劑量一般約為0.01至100mg/kg，優(yōu)選0.1至5mg/kg，特別優(yōu)選0.3至0.5mg/kg體重。在靜脈內(nèi)給藥情況下，日劑量一般約為0.01至100mg/kg，優(yōu)選0.05至10mg/kg體重。日劑量可分?jǐn)?shù)次給藥，特別是在相對大劑量給藥情況下，例如可分成2、3或4次給藥。如果適合的話，根據(jù)個體的情況，可以有必要在給定的日劑量中進(jìn)行向上或向下的調(diào)整。
除了用作藥物活性化合物之外，式I和Ia化合物也可用于診斷目的，例如用于體外診斷；也可用作生化新究的工具，試圖使所述化合物能夠抑制玻連蛋白受體或影響細(xì)胞-細(xì)胞或細(xì)胞-基質(zhì)之間的相互作用。進(jìn)一步地，它們可用作制備其它化合物特別是其它藥物活性化合物的中間體，所述其它化合物可通過殘基或基團(tuán)的修飾或引入，由式I或Ia化合物獲得。
所使用的縮略語AcOH 乙酸Boc 叔丁氧羰基DCCI 二環(huán)己基碳化二亞胺DCM 二氯甲烷DEAD 偶氮二羧酸二乙酯DIPEA 二異丙基乙胺DMF 二甲基甲酰胺DMSO 二甲基亞砜EA乙酸乙酯HOOBt 3-羥基-4-氧代-3，4-二氫-1，2，3-苯并三嗪MeOH 甲醇Mes 甲磺?；鵕T室溫
Tf 三氟甲磺?；鵗HF四氫呋喃Tos對-甲苯磺?；鵝 芐氧羰基實施例嘌呤結(jié)構(gòu)的6-位含有不是組成環(huán)的氨基的式I和Ia化合物也可被認(rèn)為是腺嘌呤(＝6-氨基嘌呤)衍生物并可在化合物命名中歸屬于腺嘌呤。與腺嘌呤6-位的氨基的氮原子鍵合的取代基以附加符號N6表示。與9-位環(huán)氮原子鍵合的取代基以附加符號N9表示。在取代基的命名中，以取代基的位置開始；在選擇的符號中，所述取代基與氮原子N6或N9鍵合。在歸屬于N9-取代的嘌呤衍生物的化合物中，采用相同的命名方法。
腺嘌呤 嘌呤實施例1N6-(1-(5-胍基戊基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-腺嘌呤1a)N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸叔丁酯))-6-氯嘌呤在氬氣氣氛下，將2.63g(17mmol)6-氯嘌呤和4.46g(16.5mmol)三苯膦懸浮于50ml無水THF中。在RT下加入2.56ml(16.3mmol)DEAD，混合物在RT下攪拌15分鐘，得到澄清溶液。在1.5小時時間內(nèi)，將溶解于50ml無水THF中的3.78g(12.8mmol)N-芐氧基羰基-L-絲氨酸叔丁酯(根據(jù)M.Schultz，H.Kunz，TetrahedronAsymmetry 4(1993)1205-1220制得)加入到該溶液中，然后將混合物在RT下進(jìn)一步攪拌2小時。蒸發(fā)溶劑，利用乙醚研磨殘留物，通過硅膠色譜純化(甲苯∶EA 98∶2至7∶3)，得到2.85g(51％)純產(chǎn)物。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.30(s，9H，C(CH3)3)；4.48-4.73(m，3H，N9-CH2-CH(NHZ))；4.98(s，2H，CH2-aryl)；7.19-7.40(m，5H，aryl-H)；7.87(d，1H，NH)；8.61+8.77(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(FAB)m/e＝432.1(100％；(M+H)+)；376.0(60).
1b)N6-(1-(5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸叔丁酯))-腺嘌呤將0.170ml(1mmol)DIPEA和5mg碘化鉀加入到431mg(1mmol)N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸叔丁酯))-6-氯嘌呤(實施例1a)和404mg(2mmol)5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-戊胺的5ml無水DMF溶液中，混合物在40℃下攪拌72小時。蒸發(fā)溶劑，殘余物通過硅膠色譜純化(甲苯∶EA 7∶3至1∶2)，得到190mg(32％)純產(chǎn)物。
MS(FAB)m/e＝598.3(100％；(M+H)+)。
1c)N6-(1-(5-氨基戊基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-腺嘌呤將190mg(0.32mmol)N6-(1-(5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸叔丁酯))-腺嘌呤(實施例1b)溶解在2ml90％強度的三氟乙酸中，溶液在RT下攪拌2小時。蒸發(fā)至干，殘留物與乙酸共蒸發(fā)兩次。然后將殘留物溶解在水中并凍干。收率134mg(95％)。
MS(ES+)m/e＝442.3(20％；(M+H)+)，308.2(35)。
1d)N6-(1-(5-胍基戊基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-腺嘌呤將34mg(0.077mmol)N6-(1-(5-氨基戊基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-腺嘌呤(實施例1c)溶解在1.5ml水和0.5ml DMF中，利用0.033ml(0.193mmol)DIPEA和13.5mg(0.092mmol)1H-吡唑-1-甲脒鹽酸化物處理該溶液，在RT下攪拌40小時。然后蒸發(fā)溶劑，將殘留物溶于水并將溶液凍干。為了進(jìn)一步純化，可利用硅膠色譜純化(DCM∶甲醇∶乙酸∶水15∶5∶1∶1)。收率70％。
MS(FAB)m/e＝484.2(100％；(M+H)+)。
實施例2N6-(1-(4-胍基丁基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-腺嘌呤2a)N6-(1-(4-(叔丁氧基羰基氨基)丁基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸叔丁酯))-腺嘌呤由431mg(1mmol)N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸叔丁酯))-6-氯嘌呤(實施例1a)和376mg(2mmol)4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-丁胺，進(jìn)行類似于實施例1b的合成。收率214mg(37％)。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.30(s，9H，C(CH3)3)；1.38(s，9H，C(CH3)3)；1.41(m，2H，CH2)；1.57(m，2H，CH2)；3.46(m，2H，CH2-NH-Boc)；2.92(t，2H，C2-NH-CH2)；4.31-4.58(m，3H，N1-CH2-CH(NHZ))；5.01(s，2H，CH2-aryl)；6.99(t，1H，C2-NH)；7.10-7.38(m，5H，aryl-H)；7.75(m，1H，NH-Boc)；7.91(d，1H，NH-Z)；8.02+8.20(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝584.3(100％；(M+H)+).
2b)N6-(1-(4-氨基丁基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-腺嘌呤由N6-(1-(4-(叔丁氧基羰基氨基)丁基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸叔丁酯))-腺嘌呤(實施例2a)，進(jìn)行類似于實施例1c的合成。
收率96％。
MS(ES+)m/e＝428.2(100％；(M+H)+)，291.1(70)。
2c)N6-(1-(4-胍基丁基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-腺嘌呤由N6-(1-(4-氨基丁基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-腺嘌呤(實施例2b)，進(jìn)行類似于實施例1d的合成。收率76％。
MS(ES+)m/e＝470.1(20％；(M+H)+)。
實施例3
N6-(1-(3-胍基丙基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-腺嘌呤3a)N6-(1-(3-(叔丁氧基羰基氨基)丙基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸叔丁酯))-腺嘌呤由60mg(0.14mmol)N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸叔丁酯))-6-氯嘌呤(實施例1a)和30mg(0.17mmol)3-(叔丁氧基羰基氨基)-1-丙胺，進(jìn)行類似于實施例1b的合成。收率30mg(38％)。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.28(s，9H，C(CH3)3)；1.36(s，9H，C(CH3)3)；1.68(m，2H，CH2-CH2-CH2)；1.41(m，2H，CH2)；2.98(t，2H，C2-NH-CH2)；3.46(t，2H，CH2-NH-Boc)；4.29-4.59(m，3H，N1-CH2-CH(NHZ))；5.00(s，2H，CH2-aryl)；6.82(t，1H，C2-NH)；7.21-7.40(m，5H，aryl-H)；7.72(m，1H，NH-Boc)；7.91(d，1H，NH-Z)；8.03+8.20(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝570.3(100％；(M+H)+).
3b)N6-(1-(3-氨基丙基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-腺嘌呤由N6-(1-(3-(叔丁氧基羰基氨基)丙基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸叔丁酯))-腺嘌呤(實施例3a)，進(jìn)行類似于實施例1c的合成。
收率100％。
MS(ES+)m/e＝414.2(100％；(M+H)+)，280.1(30)。
3c)N6-(1-(3-胍基丙基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-腺嘌呤由N6-(1-(3-氨基丙基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-腺嘌呤(實施例3b)，進(jìn)行類似于實施例1d的合成。收率66％。
MS(ES+)m/e＝456.3(20％；(M+H)+)，130.1(100)。
實施例4N6-(1-(4-(4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基)丁基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-腺嘌呤將153mg(0.36mmol)N6-(1-(4-氨基丁基))-N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-腺嘌呤(實施例2b)和88mg(0.36mmol)2-(甲巰基)-2-咪唑啉氫碘酸鹽溶解在2ml水中，利用1N NaOH將溶液調(diào)節(jié)至pH9.0。在50℃下攪拌100小時。然后利用1N HCl將溶液調(diào)節(jié)至pH1.5，蒸發(fā)溶劑，殘留物通過硅膠進(jìn)行幾次色譜純化(DCM∶MeOH9∶1至1∶2，在各種情況下使用0.1％AcOH、0.1％H2O)，然后用DCM∶MeOH∶H2O∶AcOH 8∶2∶0.4∶0.4。收率7mg(4％)。
MS(FAB)m/e＝496.2(M+H+，100％)；518.2(M+Na+，50)。
實施例5N6-(1-(3-胍基丙基))-N9-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸))-腺嘌呤5a)N9-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸叔丁酯))-6-氯嘌呤由6-氯嘌呤和N-芐氧基羰基-L-高絲氨酸叔丁酯，進(jìn)行類似于實施例1a的合成。收率24％。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.34(s，9H，C(CH3)3)；2.08-2.43(m，2H，N-CH2-CH2-CH)；3.81-3.93(m，1H，CH-NHZ)；4.39(t，2H，N9-CH2)；5.02(s，2H，CH2-aryl)；7.26-7.42(m，5H，aryl-H)；7.87(d，1H，NH)；8.63+8.75(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(FAB)m/e＝446.1(100％；(M+H)+)；390.1(65).
5b)N6-(1-(3-(叔丁氧基羰基氨基)丙基))-N9-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸叔丁酯))-腺嘌呤由50mg(0.11mmol)N9-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸叔丁酯))-6-氯嘌呤(實施例 5a)和38mg(0.22mmol)3-(叔丁氧基羰基氨基)-1-丙胺，進(jìn)行類似于實施例1b的合成。收率26mg(41％)。
MS(ES+)m/e＝584.3(100％；(M+H)+)。
5c)N6-(1-(3-氨基丙基))-N9-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸))-腺嘌呤由N6-(1-(3-(叔丁氧基羰基氨基)丙基))-N9-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸叔丁酯))-腺嘌呤(實施例5b)，進(jìn)行類似于實施例1c的合成。
收率94％。
MS(FAB)m/e＝428.3(100％；(M+H)+)。
5d)N6-(1-(3-胍基丙基))-N9-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸))-腺嘌呤由N6-(1-(3-氨基丙基))-N9-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸))-腺嘌呤(實施例5c)，進(jìn)行類似于實施例1d的合成。收率71％。
MS(FAB)m/e＝470.3(70％；(M+H)+)。
5e)N-芐氧基羰基-L-高絲氨酸將6g(50.4mmol)L-高絲氨酸溶解在50ml DMF中，并在0℃下利用12.56g(50.4mmol)N-(芐氧基羰基氧基)琥珀酰亞胺分批處理。混合物在0℃下攪拌1小時，然后在RT下攪拌48小時。蒸餾出溶劑，殘留物分配在EA和飽和NaCl溶液中。有機(jī)相用飽和NaCl溶液、5％強度的檸檬酸洗滌，再用飽和NaCl溶液洗滌，干燥，過濾并濃縮。在乙醚中攪拌晶體殘留物，吸濾并用乙醚和戊烷洗滌。收率9.55g(75％)。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.61-1.95(m，2H，CH2-CH2-OH)；3.42(m，2H，CH2-OH)；4.08(m，1H，CH-NH-Z)；4.57(s，broad，1H，OH)；5.02(s，2H，CH2-Ph)；7.32(m，5H，aryl-H)，7.49(d，1H，NH-Z).
MS(Cl+)m/e＝236.1(M+H+-H2O，20％)；192.1(50)；91.0(100)5f)N-芐氧基羰基-L-高絲氨酸叔丁酯在氨氣氣氛下，將3.8g(15mmol)Z-L-高絲氨酸和3.42g(15mmol)氯化芐基三乙基銨溶解在110ml N-甲基-2-吡咯烷酮中，并用53.9g(390mmol)K2CO3和98.7g(720mmol)叔丁基溴順序地處理。溶液在55℃下攪拌22小時。將反應(yīng)混合物注入到1.5l冰水中，利用甲苯萃取二次，有機(jī)相用飽和NaCl溶液洗滌兩次，干燥，過濾并濃縮。為了進(jìn)一步純化，產(chǎn)物通過硅膠色譜進(jìn)一步純化(正庚烷∶EA7∶3至1∶1)。收率2.0g(43.1％)。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ＝1.45(s，9H，tBu)；1.51-1.74+2.03-2.26(m，2H，CH2-CH2-OH)；3.01(s，broad，1H，OH)；3.70(m，2H，CH2-OH)；4.41(m，1H，CH-NH-Z)；5.12(s，2H，CH2-Ph)；5.60(d，1H，NH-Z)；7.36(m，5H，aryl-H)，MS(Cl+)m/e＝310.3(M+H+，50％)；254.2(100).
實施例6N6-(1-(4-胍基丁基))-N9-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸))-腺嘌呤6a)N6-(1-(4-(叔丁氧基羰基氨基)丁基))-N9-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸叔丁酯))-腺嘌呤由50mg(0.11mmol)N9-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸叔丁酯))-6-氯嘌呤(實施例5a)和41mg(0.22mmol)4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-丁胺，進(jìn)行類似于實施例1b的合成。產(chǎn)率38mg(58％)。
MS(ES+)m/e＝598.3(100％；(M+H)+)。
6b)N6-(1-(4-氨基丁基))-N9-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸))-腺嘌呤由N6-(1-(4-(叔丁氧基羰基氨基)丁基))-N9-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸叔丁酯))-腺嘌呤(實施例6a)，進(jìn)行類似于1c的合成。收率100％。
MS(FAB)m/e＝442.3(100％；(M+H)+)。
6c)N6-(1-(4-胍基丁基))-N9-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸))-腺嘌呤由N6-(1-(4-氨基丁基))-N9-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸))-腺嘌呤(實施例6b)，進(jìn)行類似于實施例1d的合成。收率65％。
MS(ES+)m/e＝484.3(5％；(M+H)+)，350.2(10)，333.2(5)，130.0(100).
實施例7N6-(1-(3-胍基丙基))-N9-(3-丙酸))-腺嘌呤7a)N9-(3-丙酸叔丁酯)-6-氯嘌呤將15.45g(0.1mol)6-氯嘌呤、43.5ml(0.3mol)丙烯酸叔丁酯和1.34ml(7mmol)5.22N甲醇鈉(于MeOH中)溶解在400ml無水MeOH中，回流沸騰4.5小時，同時重復(fù)加入2.6ml(14mmol)5.22N甲醇鈉(于MeOH中)。為了進(jìn)行精制，吸濾固體，蒸發(fā)溶劑，硅膠(+10％H2O)層析純化(甲苯∶EA 3∶1)殘留物。收率1.35g(5％)。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.29(s，9H，C(CH3)3)；2.95(t，2H，CH2C(O))；4.50(t，2H，N-CH2)；8.70+8.79(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝283.1(70％；(M+H)+)；227.0(100).
7b)N6-(1-(3-(叔丁氧基羰基氨基)丙基))-N9-(3-丙酸叔丁酯)-腺嘌呤由282mg(1.0mmol)N9-(3-丙酸叔丁酯)-6-氯嘌呤(實施例7a)和209mg(1.2mmol)3-(叔丁氧基羰基氨基)-1-丙胺，進(jìn)行類似于實施例1b的合成。收率160mg(38％)。
MS(ES+)m/e＝421.2(100％；(M+H)+)，365.2(60)，321.2(50)，265.1(30).
插入原文P61數(shù)據(jù)27c)N6-(1-(3-氨基丙基))-N9-(3-丙酸)-腺嘌呤由N6-(1-(3-(叔丁氧基羰基氨基)丙基))-N9-(3-丙酸叔丁酯)-腺嘌呤(實施例7b)，進(jìn)行類似于實施例1c的合成。收率100％。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.88(t，2H，CH2-CH2-CH2-)；2.80-2.93(m，4H，NH-CH2+CH2-C(O))；3.56(m，2H，CH2-NH2)；4.38(t，2H，N9-CH2)；7.72(s，broad，2H，NH2)；7.95(t，1H，NH)；8.15+8.23(2 s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝265.1(100％；(M+H)+)；248.1(40)，176.0(30).
7d)N6-(1-(3-胍基丙基))-N9-(3-丙酸)-腺嘌呤由N6-(1-(3-氨基丙基))-N9-(3-丙酸)-腺嘌呤(實施例7c)，進(jìn)行類似于實施例1d的合成。收率41％。
1H-NMR(200MHz，D2O)δ＝1.95(t，2H，CH2-CH2-CH2-)；2.71(t，2H，CH2-C(O))；3.24(t，2H，Gua-CH2)；3.65(m，2H，CH2-NH2)；4.40(t，2H，N9-CH2)；8.00+8.15(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝307.1(100％；(M+H)+)，290.1(30).
實施例8N6-(1-(4-胍基丁基))-N9-(3-丙酸)-腺嘌呤8a)N6-(1-(4-(叔丁氧基羰基氨基)丁基))-N9-(3-丙酸叔丁酯)-腺嘌呤由141mg(0.5mmol)N9-(3-丙酸叔丁酯)-6-氯嘌呤(實施例7a)和104mg(0.55mmol)4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-丁胺，進(jìn)行類似于實施例1b的合成。收率130mg(60％)。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.32(s，9H，C(CH3)3)；1.35(s，9H，C(CH3)3)；1.40(t，2H，CH2)；1.57(t，2H，CH2)；2.84(t，2H，-CH2-C(O))；2.95(t，2H，C2-NH-CH2)；3.45(m，2H，CH2-NH-Boc)；4.34(t，2H，N9-CH2)；6.78(t，1H，C2-NH)；7.70(m，1H，NH-Boc)；8.08+8.19(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝435.2(100％；(M+H)+)，379.2(20)，335.2(55)，279.1(50).
8b)N6-(1-(4-氨基丁基))-N9-(3-丙酸)-腺嘌呤由N6-(1-(4-(叔丁氧基羰基氨基)丁基))-N9-(3-丙酸叔丁酯)-腺嘌呤(實施例8a)，進(jìn)行類似于實施例1c的合成。收率100％。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.50-1.70(m，4H1-CH2-CH2-)；2.74-2.91(m，4H，NH-CH2+CH2-C(O))；3.50(m，2H，CH2-NH2)；4.36(t，2H，N9-CH2)；7.64(s，broad，2H，NH2)；7.90(t，1H，NH)；8.11+8.21(2 s，2H，C6-H+C8-H).
MS(FAB)m/e＝279.2(100％；(M+H)+).
8c)N6-(1-(4-胍基丁基))-N9-(3-丙酸)-腺嘌呤由N6-(1-(4-氨基丁基))-N9-(3-丙酸)-腺嘌呤(實施例8b)，進(jìn)行類似于實施例1d的合成。收率65％。
MS(ES+)m/e＝321.1(100％；(M+H)+)。
實施例9N6-(1-(5-胍基戊基))-N9-(3-丙酸)-腺嘌呤9a)N6-(1-(5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基))-N9-(3-丙酸叔丁酯)-腺嘌呤由282mg(1.0mmol)N9-(3-丙酸叔丁酯)-6-氯嘌呤(實施例7a)和243mg(1.2mmol)5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-戊胺，進(jìn)行類似于實施例1b的合成。收率219mg(41％)。
MS(ES+)m/e＝449.3(100％；(M+H)+)。
9b)N6-(1-(5-氨基戊基))-N9-(3-丙酸)-腺嘌呤由N6-(1-(5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基))-N9-(3-丙酸叔丁酯)-腺嘌呤(實施例9a)，進(jìn)行類似于實施例1c的合成。收率100％。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.39(m，2H，CH2)1.50-1.67(m，4H，2×CH2)；2.79(dt，2H，NH-CH2)；2.89(m，2H，CH2-C(O))；3.48(m，2H，CH2-NH2)；4.37(t，2H，N9-CH2)；7.67(s，broad，2H，NH2)；8.04(t，1H，NH)；8.13+8.25(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝293.1(100％；(M+H)+).
9c)N6-(1-(5-胍基戊基))-N9-(3-丙酸)-腺嘌呤由N6-(1-(5-氨基戊基))-N9-(3-丙酸)-腺嘌呤(實施例9b)，進(jìn)行類似于實施例1d的合成。收率37％。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.38-1.79(m，6H，3×CH2)；2.80(t，2H，NH-CH2)；3.12(m，2H，CH2-C(O))；3.58(m，2H，CH2-Gua)；4.43(t，2H，N9-CH2)；8.07+8.21(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(FAB)m/e＝335.2(100％；(M+H)+).
實施例10N6-(2-乙酸)-N9-(1-(5-氨基戊基))-腺嘌呤10a)N6-(2-乙酸叔丁酯)-腺嘌呤將155mg(1mmol)6-氯嘌呤和420mg(2mmol)甘氨酸叔丁酯鹽酸化物(80％濃度)溶解在5ml無水DMF中，利用0.17ml DIPEA和一刮勺碘化鉀處理，混合物在50℃下攪拌6小時。蒸發(fā)溶劑，通過硅膠色譜純化(甲苯∶EA 1∶1至1∶2)殘留物。收率76mg(31％)。
MS(ES+)m/e＝250.0(M+H，10％)，193.9(95)，163.9(100)。
10b)N6-(2-乙酸)-N9-(1-(5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基))-腺嘌呤將75mg(0.3mmol)N6-(2-乙酸叔丁酯)-腺嘌呤(實施例10a)、214mg(0.6mmol)5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基4-甲苯磺酸酯和42mg(0.3mmol)K2CO3溶解在6ml無水DMF中，溶液在RT下攪拌5天。蒸發(fā)溶劑，通過硅膠色譜純化(甲苯∶EA 7∶3至1∶2)殘留物。收率92mg(71％)。
MS(ES+)435.3(M+H，25％)；349.3(100).
10c)N6-(2-乙酸)-N9-(1-(5-氨基戊基))-腺嘌呤由N6-(2-乙酸)-N9-(1-(5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基))-腺嘌呤(實施例10b)，進(jìn)行類似于實施例1c的合成。收率93％。
MS(ES+)m/e＝279.2(15％；(M+H)+，249.1(100).
實施例11N6-(2-(N-(2-氨基乙基)乙酰胺))-N9-(2-乙酸)-腺嘌呤11a)N9-(2-乙酸叔丁酯)-腺嘌呤在氮氣氣氛下，將6.76g(0.05mol)腺嘌呤懸浮在300ml無水DMF中，然后加入2.4g(0.06mol)NaH分散液，混合物在RT下攪拌2小時。在30分鐘內(nèi)滴入14.7ml(0.1mol)溴乙酸叔丁酯，形成清亮溶液，在RT下進(jìn)一步攪拌5小時。蒸發(fā)溶劑，殘留物與500ml水一起攪拌，吸濾固體并由乙醇結(jié)晶。收率5.1g(41％)。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.42(s，9H，tBu)；4.95(s，2H，N9-CH2)；7.22(s，broad，2H，N6H2)； 8.10+8.15(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝250.1(M+H+，65％)，194.0(100).
11b)N6-(2-乙酸乙酯)-N9-(2-乙酸叔丁酯)-腺嘌呤將978mg(3mmol)NaH和250mg(1mmol)N9-(2-乙酸叔丁酯)-腺嘌呤(實施例11a)懸浮于10ml無水DMF中，在10分鐘內(nèi)滴入0.12ml氯乙酸乙酯。然后在50℃下攪拌混合物6小時，再加入相同量的CsCO3，混合物在50℃下攪拌6小時。蒸發(fā)溶劑，殘留物分配在水和EA之間，干燥有機(jī)相并濃縮。收率16％。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.20(t，3H，CH2-CH3)；1.41(s，9H，tBu)；4.00-4.28(m，4H，CH2-CH3+N6-CH2)；4.98(s，2H，N9-CH2)；8.09(s，broad，1H，N6H)；8.15+8.21(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝336.3(M+H+，100％)；280.3(60).
11c)N6-(2-乙酸)-N9-(2-乙酸叔丁酯)-腺嘌呤將249mg(0.74mmol)N6-(2-乙酸乙酯)-N9-(2-乙酸叔丁酯)-腺嘌呤(實施例11b)溶解在6ml二烷∶水∶三乙胺中，在RT下攪拌4天。蒸發(fā)溶劑，通過硅膠色譜純化(DCM∶MeOH 95∶5至90∶10)殘留物。收率36％。
MS(ES+)m/e＝308.3((M+H)+；100％)。
11d)N6-(2-(N-(2-叔丁氧基羰基氨基乙基)乙酰胺))-N9-(2-乙酸叔丁酯)-腺嘌呤在氨氣氣氛下，將80mg(0.26mmol)N6-(2-乙酸)-N9-(2-乙酸叔丁酯)-腺嘌呤(實施例11c)、42mg(0.26mmol)2-叔丁氧基羰基氨基乙胺溶解在5ml無水DMF中，混合物在0℃下用85mg(0.26mmol)TOTU和0.13ml(0.78mmol)DIpEA處理，然后在0℃下攪拌10分鐘并在RT下攪拌2.5小時。利用EA稀釋至100ml，然后用飽和碳酸氫鉀溶液洗滌，干燥并濃縮，通過硅膠色譜純化(DCM∶MeOH 98∶2至90∶10)。收率5％。
MS(ES+)m/e＝450.3((M+H)+；100％)。
11e)N6-(2-(N-(2-氨基乙基)乙酰胺))-N9-(2-乙酸)-腺嘌呤由N6-(2-(N-(2-叔丁氧基羰基氨基乙基)乙酰胺))-N9-(2-乙酸叔丁酯)-腺嘌呤(實施例11d)，進(jìn)行類似于實施例1c的合成。
收率80％。
MS(ES+)m/e＝293.1(100％；(M+H)+)。
實施例12N6-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸))-N9-(1-(3-胍基丙基))-腺嘌呤12a)N9-(1-(3-(叔丁氧基羰基氨基)丙基))-6-氯嘌呤將154.6mg(1mmol)6-氯嘌呤溶解在2.5ml無水DMF中，在攪拌條件下利用331.7mg(2.4mmol)K2CO3和285.8mg(1.2mmol)N-(3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯處理?；旌衔镌赗T下攪拌11小時，蒸發(fā)溶劑，把殘留物溶于EA中，溶液用飽和NaHCO3溶液洗滌兩次，干燥、過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化(EA∶正庚烷8∶2)殘留物。收率267mg(86％)。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.37(s，9H，tBu)；2.00(tt，2H，CH2-CH2-CH2)；2.95(dt，2H，CH2-NH)；4.30(t，2H，N9-CH2)；6.91(t，broad，1H，NH)；8.70+8.78(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝312.2(100％；(M+H)+)；256.1(20).
12b)N6-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸))-N9-(1-(3-叔丁氧基羰基氨基)丙基))-腺嘌呤將370mg(1.19mmol)N9-(1-(3-(叔丁氧基羰基氨基)丙基))-6-氯嘌呤(實施例12a)溶解在10ml無水DMF和5ml DIPEA中。在RT下加入449mg(1.8mmol)2S-芐氧基羰基氨基-4-氨基丁酸，混合物在65℃下50小時。蒸發(fā)溶劑，將殘留物在EA和飽和NaCl溶液(20％KHSO4)之間分配。有機(jī)相用水洗滌，干燥、過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化(EA∶MeOH 8∶2)殘留物。收率331mg(53％)。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.39(s，9H，tBu)；1.73-2.21(m，2H，CH2-CH(NH-Z))；1.90(m，2H，CH2-CH2-CH2)；2.92(dt，2H，CH2-NHBoc)；3.15(dt，2H，N6H-CH2)；3.88-4.10(m，1H，CH-NHZ)；4.14(t，2H，N9-CH2)；5.03(s，2H，CH2-Ph)；6.91(t，broad，1H，NH-Boc)；7.37(s，5H，Ar-H)；7.55-7.81(m，2H，NH-Z+N6H-CH2)；8.13+8.19(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝528.2(100％；(M+H)+).
12c)N6-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸))-N9-(1-(3-氨基丙基))-腺嘌呤將30ml(0.06mmol)N6-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸))-N9-(1-(3-叔丁氧基羰基氨基)丙基))-腺嘌呤(實施例12b)溶解在2ml 90％強度的三氟乙酸中，溶液在RT下攪拌70分鐘并濃縮，殘留物與乙醚一起攪拌數(shù)次，然后將殘留物溶解在水中，凍干溶液。收率100％。
MS(ES+)m/e＝428.2(100％；(M+H)+)；294.1(90).
12d)N6-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸))-N9-(1-(3-胍基丙基))-腺嘌呤由N6-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸))-N9-(1-(3-氨基丙基))-腺嘌呤(實施例12c)，進(jìn)行類似于實施例1d的合成。收率77％。
MS(ES+)m/e＝470.3(25％；(M+H)+)；336.2(100).
實施例13N6-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丁酸))-N9-(1-(3-(4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基)丙基))-腺嘌呤由N6-(4-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(3-氨基丙基))-腺嘌呤(實施例12c)，進(jìn)行類似于實施例4的合成。收率63％。
MS(ES+)m/e＝496.3(100％；(M+H)+)。
實施例14N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(5-胍基戊基))-腺嘌呤14a)N9-(1-(5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基))-6-腺嘌呤由6-氯嘌呤和N-(5-甲苯磺酰氧基戊基)氨基甲酸叔丁酯，進(jìn)行類似于實施例12a的合成。收率66％。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.11-1.48(m，4H，2×CH2)；1.35(s，9H，tBu)；1.87(tt，2H，CH2)；2.97(dt，2H，CH2-NHBoc)；4.28(t，2H，N9-CH2)；6.72(t，broad，1H，NH)；8.71+8.78(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝340.2(100％；(M+H)+)；284.1(50).
14b)N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基))-腺嘌呤由N9-(1-(5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基))-6-氯腺嘌呤和2S-芐氧羰基氨基-3-氨基丙酸，進(jìn)行類似于實施例12b的合成。收率23％。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.10-1.49(m，4H，2×CH2；1.36(s，9H，tBu)；1.62-1.88(m，2H，CH2)；2.87(dt(2H，CH2-NHBoc)；3.68-4.98(m，5H，N9-CH2+CH2-CH-NHZ)；5.00(s，2H，CH2-Ph)；6.75(t，broad，1H，NH)；8.02+8.20(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(FAB)m/e＝542.3(100％；(M+H)+).
14c)N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(5-氨基戊基))-腺嘌呤由N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基))-腺嘌呤(實施例14b)，進(jìn)行類似于實施例12c的合成。收率100％。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.18-1.40+1.44-1.65+1.71-1.93(2 m，6H，3×CH2)；2.77(dt(2H，CH2-NHBoc)；3.64-4.35(m，5H，N9-CH2+CH2CH-NHZ)；5.00(s，2H，CH2-Ph)；7.66(m，3H，NH3+)；8.20+8.24(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝442.3(40％；(M+H)+)；308.2(100).
14d)N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(5-胍基戊基))-腺嘌呤由N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(5-氨基戊基))-腺嘌呤(實施例14c)，進(jìn)行類似于實施例1d的合成。收率90％。
MS(ES+)m/e＝484.3(70％；(M+H)+)；350.2(60).
實施例15N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(5-(4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基)戊基))-腺嘌呤由N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(5-氨基戊基))-腺嘌呤(實施例14c)，進(jìn)行類似于實施例4的合成。收率75％。
MS(ES+)m/e＝510.3(40％；(M+H)+)；376.2(100).
實施例16N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(3-胍基丙基))-腺嘌呤16a)N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(3-(叔丁氧基羰基氨基)丙基))-腺嘌呤由N9-(1-(3-(叔丁氧基羰基氨基)丙基))-6-氯腺嘌呤(實施例12a)和2S-芐氧羰基氨基-3-氨基丙酸，進(jìn)行類似于實施例12b的合成。收率27％。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.37(s，9H，tBu)；1.90(m，2H，CH2-CH2-CH2)；2.92(dt，2H，CH2-NHBoc)；3.86(m，broad，2H，CH2-CH(NH-Z))；4.13(t，2H，N9-CH2)；4.40(m，1H，CH-NHZ)；5.01(s，2H，CH2-Ph)；6.92(t，broad，1H，NH-Boc)；7.33(s，5H，Ar-H)；7.55-7.75(m，2H，NH-Z+N6H-CH2)；8.16+8.22(2 s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝514.3(100％；(M+H)+).
16b)N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(3-氨基丙基))-腺嘌呤由N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(3-(叔丁氧基羰基氨基)丙基))-腺嘌呤(實施例16a)，進(jìn)行類似于實施例12c的合成。收率100％。
MS(ES+)m/e＝414.2(100％；(M+H)+)；280.2(70).
16c)N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(3-胍基丙基))-腺嘌呤由N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(3-氨基丙基))-腺嘌呤(實施例16b)，進(jìn)行類似于實施例1d的合成。收率98％。
MS(ES+)m/e＝456.3(40％；(M+H)+)；322.2(100).
實施例17N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(4-胍基丁基))-腺嘌呤17a)N9-(1-(4-(叔丁氧基羰基氨基)丁基))-6-氯嘌呤由6-氯嘌呤和N-(4-甲苯磺酰氧基丁基)氨基甲酸叔丁酯，進(jìn)行類似于實施例12a的合成。收率66％。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.30(m，2H，CH2)；1.35(s，9H，tBu)；1.86(tt， 2H，CH2)；2.93(dt，2H，CH2-NHBoc)；4.31(t，2H，N2-CH2)；6.79(t，broad，1H，NH)；8.72+8.78(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝326.2(80％；(M+H)+)；270.1(100).
17b)N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(4-(叔丁氧基羰基氨基)丁基))-腺嘌呤由N9-(1-(4-(叔丁氧基羰基氨基)丁基))-6-氯嘌呤(實施例17a)和2S-芐氧羰基氨基-3-氨基丙酸，進(jìn)行類似于實施例12b的合成。收率33％。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.30(m，2H，CH2)；1.35(s，9H，tBu)；1.75(m，2H，CH2)；2.91(dt(2H，CH2-NHBoc)；3.71-4.34(m，5H，CH2-CH(NH-Z)+N9-CH2)；5.01(s，2H，CH2-Ph)；6.89(t，broad，1H，NH-Boc)；7.35(s，5H，Ar-H)；7.46-7.73(m，2H，NH-Z+N6H-CH2)；8.10(broad)+8.20(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(FAB)m/e＝528.4(100％；(M+H)+).
17c)N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(4-氨基丁基))-腺嘌呤由N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(4-(叔丁氧基羰基氨基)丁基))-腺嘌呤(實施例17b)，進(jìn)行類似于實施例12c的合成。收率100％。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.48(m，2H，CH2)；1.87(m，2H，CH2)；2.80(dt，2H，CH2-NH2)；3.69-4.02(m，2H，CH2-CH(NH-Z))；4.20(t，2H，N9-CH2)；4.36(m，1H，CH(NH-Z))；5.01(s，2H，CH2-Ph)；7.33(s，5H，Ar-H)；7.64(s，broad，4H，NH3++N6H-CH2)；8.10(broad)+8.20(2s，2H，C6-H+C8-H).
MS(ES+)m/e＝428.3(50％；(M+H)+)；294.2(100).
17d)N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(4-胍基丁基))-腺嘌呤由N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(4-氨基丁基))-腺嘌呤(實施例17c)，進(jìn)行類似于實施例1d的合成。收率78％。
MS(ES+)m/e＝470.2(50％；(M+H)+)；336.2(100).
實施例18N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(4-(4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基)丁基))-腺嘌呤由N6-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸))-N9-(1-(4-氨基丁基))-腺嘌呤(實施例17c)，進(jìn)行類似于實施例4的合成。收率41％。
MS(ES+)m/e＝496.3(60％；(M+H)+)；362.2(100).
實施例192S-芐氧基羰基氨基-3-(6-(4-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸19a)2S-芐氧基羰基氨基-3-(6-(4-羧基哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯在60℃下，將于4ml無水DMF中的260mg(0.6mmol)2S-芐氧基羰基氨基-3-(6-嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯(實施例1a)、116.3mg(0.9mmol)哌啶-4-羧酸和310mg(2.4mmol)DIPEA攪拌16小時。然后再加入310mg DIPEA，混合物再在60℃下攪拌24小時。蒸發(fā)溶劑，將殘留物分配在EA和水之間，有機(jī)相先用KHSO4/K2SO4溶液洗滌，然后用NaCl溶液洗滌，干燥，過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化(EA)殘留物。收率219mg(69％)。
MS(ES+)m/e＝525.3(100％；(M+H)+)。
19b)2S-芐氧基羰基氨基-3-(6-(4-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯向3ml無水DMF中順序地加入126mg(0.24mmol)2S-芐氧基羰基氨基-3-(6-(4-羧基哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯(實施例19a)、39.3mg(0.29mmol)2-氨基-1，4，5，6-四氫嘧啶鹽酸化物、86.6mg(0.264mmol)TOTU(O-((乙氧基羰基)氰基亞甲基氨基)-N，N，N′，N′-四甲基脲陽離子四氟硼酸鹽)(W.Konig等人，Proceedings of 21st European Peptide Symposium 1990，E.Giralt，D.Andreu，Eds.ESCOM，Leiden，p.143)和124mg DIPEA。溶液在RT下攪拌3小時，然后再加入28mg DIPEA，溶液在RT下攪拌12小時。利用冰醋酸/甲苯(1∶1)將反應(yīng)混合物調(diào)節(jié)至pH 6，濃縮反應(yīng)溶液，將殘留物分配在EA和飽和NaHCO3溶液中。利用NaCl洗滌有機(jī)相，干燥并濃縮。通過硅膠色譜純化(EA∶MeOH∶TEA 85∶15∶1.5)殘留物。收率70mg。
MS(ES+)m/e＝606.4(60％；(M+H)+)；416.3(40)；275.7(100)。
19c)2S-芐氧基羰基氨基-3-(6-(4-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸將80mg 2S-芐氧基羰基氨基-3-(6-(4-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯(實施例19b)溶解在16ml預(yù)冷的95％強度的三氟乙酸中，先在0℃下攪拌30分鐘，然后在RT下攪拌30分鐘。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除去三氟乙酸，殘余物用甲苯共蒸發(fā)三次，在乙醇/乙醚(1∶2)中攪拌，用乙醚洗滌并真空干燥。收率59mg。
MS(ES+)m/e＝550.3(60％；(M+H)+)；416.3(100)。
實施例202S-芐氧基羰基氨基-3-(1-(9-(2-胍基乙基)-9H-嘌呤-6-基)-1H-咪唑-4-基)丙酸20a)N9-(1-(2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基))-6-氯嘌呤由6-嘌呤和N-(2-甲苯磺酰氧基乙基)氨基甲酸叔丁酯，進(jìn)行類似于實施例12a的合成。收率36％。
1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝1.24(s，9H，tBu)；3.40(dt，2H，CH2-NHBoc)；4.35(t，2H，N9-CH2)；6.91(t，broad，1H，NH)；8.60+8.78(2 s，2H，C6-H+C8-H).
MS(FAB)m/e＝298.2(100％；(M+H)+).
20b)2S-芐氧基羰基氨基-3-(1-(9-(2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)-1H-咪唑-4-基)丙酸由N9-(1-(2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基))-6-氯嘌呤(實施例20a)和Nα-Z-L-組氨酸，進(jìn)行類似于實施例12b的合成。
收率33％。
MS(ES+)m/e＝551.3(100％；(M+H)+)。
20c)3-(1-(9-(2-氨基乙基)-9H-嘌呤-6-基)-1H-咪唑-4-基)-2S-芐氧基羰基氨基丙酸由2S-芐氧基羰基氨基-3-(1-(9-(2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)-1H-咪唑-4-基)丙酸(實施例20b)，進(jìn)行類似于實施例12c的合成。收率100％。
MS(ES+)m/e＝451.3(70％；(M+H)+)；1H-NMR(200MHz，DMSO)δ＝2.87-3.15(m，2H，1m-CH2)；3.38-3.51(m，2H，CH2-NH2)；4.36(m，1H，CH-NHZ)；4.60(t，2H，N9-CH2)；5.00(s，2H，CH2-Ph)；7.28(s，5H，aryl-H)；7.62(d，1H，NH-Z)；8.23+9.05(2s，2H，lmH)；8.71+8.88(2s，2H，C6-H+C8-H).
20d)2S-芐氧基羰基氨基-3-(1-(9-(2-胍基乙基)-9H-嘌呤-6-基)-1H-咪唑-4-基)丙酸由3-(1-(9-(2-氨基乙基)-9H-嘌呤-6-基)-1H-咪唑-4-基)-2S-芐氧基羰基氨基丙酸(實施例20c)，進(jìn)行類似于實施例1d的合成。收率38％。
MS(ES+)m/e＝493.3((M+H)+)。
實施例212R-芐氧基羰基氨基-3-(6-(N-(4-胍基環(huán)己基)氨基)-嘌呤-9-基)丙酸21a)N9-(3-(2R-(芐氧基羰基氨基)丙酸)叔丁酯))-6-氯嘌呤由6-嘌呤和N-芐氧基羰基-D-絲氨酸叔丁酯，進(jìn)行類似于實施例1a的合成。
MS(FAB)m/e＝432.2(100％；(M+H)+)；376.1(30)。
21b)2R-芐氧基羰基氨基-3-(6-(N-(4-(叔丁氧基羰基氨基)環(huán)己基)氨基)-嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯由4-氨基-1-(叔丁氧基羰基氨基)環(huán)己烷和N9-(3-(2R-(芐氧基羰基氨基)丙酸)叔丁酯))-6-氯嘌呤(實施例21a)，進(jìn)行類似于實施例1b的合成。收率55％。
MS(FAB)m/e＝610.3(100％；(M+H)+)。
21c)3-(6-(N-(4-氨基環(huán)己基)氨基)-嘌呤-9-基)-2R-芐氧基羰基氨基丙酸由2R-芐氧基羰基氨基-3-(6-(N-(4-(叔丁氧基羰基氨基)環(huán)己基)氨基)-嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯(實施例21b)，進(jìn)行類似于實施例1c的合成。收率100％。
MS(ES+)m/e＝454.2(50％；(M+H)+)。
21d)2R-芐氧基羰基氨基-3-(6-(N-(4-胍基環(huán)己基)氨基)-嘌呤-9-基)丙酸由3-(6-(N-(4-氨基環(huán)己基)氨基)-嘌呤-9-基)-2R-芐氧基羰基氨基丙酸(實施例21c)，進(jìn)行類似于實施例1d的合成。收率80％。MS(ES+)m/e＝496.3(50％；(M+H)+)。
實施例22
2R-芐氧基羰基氨基-3-(6-(N-(3-胍基甲基芐基)氨基)-嘌呤-9-基)丙酸22a)2R-芐氧基羰基氨基-3-(6-(N-(3-(叔丁氧基羰基氨基甲基芐基)氨基)-嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯由3-氨基甲基-1-(叔丁氧基羰基氨基甲基)苯和N9-(3-(2R-(芐氧基羰基氨基)丙酸)叔丁酯))-6-氯嘌呤(實施例21a)，進(jìn)行類似于實施例1b的合成。收率51％。
MS(ES+)m/e＝632.3(100％；(M+H)+)。
22b)3-(6-(N-(3-氨基甲基芐基)氨基)-嘌呤-9-基)-2R-芐氧基羰基氨基丙酸由2R-芐氧基羰基氨基-3-(6-(N-(4-叔丁氧基羰基氨基甲基芐基)氨基)-嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯(實施例22a)，進(jìn)行類似于實施例1c的合成。收率100％。
MS(ES+)m/e＝476.2((M+H)+；50％)；342.2(70)。
22c)2R-芐氧基羰基氨基-3-(6-(N-(3-胍基甲基芐基)氨基)-嘌呤-9-基)丙酸由3-(6-(N-(3-氨基甲基芐基)氨基)-嘌呤-9-基)-2R-芐氧基羰基氨基丙酸(實施例22b)，進(jìn)行類似于實施例1d的合成。收率30％。
MS(ES+)m/e＝518.3((M+H)+；20％)。
實施例233-(6-((4-(苯并咪唑-2-基氨基)丁基)氨基)嘌呤-9-基)-2S-芐氧基羰基氨基丙酸23a)1-(4-叔丁氧基羰基氨基丁基)-3-(2-硝基苯基)硫脲在0℃下，在0.97g(5.15mmol)4-(叔丁氧基羰基氨基丁基)-1-胺的25ml無水DMF溶液中滴加0.928g(5.15mmol)異硫代氰酸2-硝基苯基酯的5ml無水DMF溶液。蒸餾出溶劑，通過硅膠色譜純化(EA∶正庚烷1∶2至1∶1)殘留物。收率1.8g(95％)。
MS(ES+)m/e＝369.2((M+H)+；100％)。
23b)3-(2-氨基苯基)-1-(4-叔丁氧基羰基氨基丁基)硫脲將1.78g(4.8mmol)1-(4-叔丁氧基羰基氨基丁基)-3-(2-硝基苯基)硫脲(實施例23a)溶解在120ml甲醇中，室溫下在1g Pd/C上氫化(1巴)3小時。過濾出催化劑，濃縮濾液，通過硅膠色譜純化(EA∶正庚烷1∶1)殘留物。收率1.4g。
23c)4-(苯并咪唑-2-基氨基)-1-(叔丁氧基羰基氨基)丁烷向于30ml乙醇的1.4g(4.14mmol)3-(2-氨基苯基)-1-(4-叔丁氧基羰基氨基丁基)硫脲(實施例23b)中加入1.79g(8.28mmol)黃色氧化汞和27mg硫粉，反應(yīng)混合物在50-55℃下加熱3小時。吸濾固體并用乙醇洗滌。濃縮濾液，通過硅膠色譜純化(DCM∶甲醇9∶5，然后9∶1)產(chǎn)物。收率43％。
MS(ES+)m/e＝305.2((M+H)+；100％)。
23d)4-(苯并咪唑-2-基氨基)-1-氨基丁烷在0℃下，將198mg(0.65mmol)4-(苯并咪唑-2-基氨基)-1-(叔丁氧基羰基氨基)丁烷(實施例23c)溶解在20ml 95％強度的三氟乙酸中，并在0℃下攪拌2小時，然后在30分鐘內(nèi)在RT下濃縮。殘留物與甲苯一起共蒸發(fā)三次，然后與乙醚攪拌，和用戊烷洗滌并真空干燥。收率100％。
MS(ES+)m/e＝205.2((M+H)+；100％)。
23e)3-(6-((4-(苯并咪唑-2-基氨基)丁基)氨基)嘌呤-9-基)-2S-芐氧基羰基氨基丙酸叔丁酯由4-(苯并咪唑-2-基氨基)-1-氨基丁烷(實施例23d)和N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸叔丁酯))-6-氯嘌呤(實施例1a)，進(jìn)行類似于實施例1b的合成。收率32％。
MS(ES+)m/e＝600.3((100％；M+H)+)。
23f)3-(6-((4-(苯并咪唑-2-基氨基)丁基)氨基)嘌呤-9-基)-2S-芐氧基羰基氨基丙酸由3-(6-((4-(苯并咪唑-2-基氨基)丁基)氨基)嘌呤-9-基)-2S-芐氧基羰基氨基丙酸叔丁酯(實施例23e)，進(jìn)行類似于實施例1c的合成。收率100％。
MS(ES+)m/e＝544.2((M+H)+；70％)。
實施例242S-芐氧基羰基氨基-3-(6-(4-((4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基)甲基)哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸24a)3-(6-(4-(氨基甲基)哌啶-1-基)嘌呤-9-基)-2S-芐氧基羰基氨基丙酸叔丁酯由4-(氨基甲基)哌啶和N9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸叔丁酯))-6-氯嘌呤(實施例1a)，進(jìn)行類似于實施例1b的合成。收率96.4％。
MS(ES+)m/e＝510.3(100％；(M+H)+)。
24b)3-(6-(4-(氨基甲基)哌啶-1-基)嘌呤-9-基)-2S-芐氧基羰基氨基丙酸由3-(6-(4-(氨基甲基)哌啶-1-基)嘌呤-9-基)-2S-芐氧基羰基氨基丙酸叔丁酯(實施例24a)，進(jìn)行類似于實施例1c的合成。收率100％。
MS(ES+)m/e＝454.3((M+H)+；30％)。
24c)2S-芐氧基羰基氨基-3-(6-(4-((4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基)甲基)哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸由3-(6-(4-(氨基甲基)哌啶-1-基)嘌呤-9-基)-2S芐氧基羰基氨基丙酸(實施例24b)，進(jìn)行類似于實施例4的合成。收率95％。
MS(ES+)m/e＝522.3((M+H)+；40％)。
實施例252R-芐氧基羰基氨基-3-(6-(4-((4，5-二氫-1H-咪唑-2-基氨基)甲基)哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸由N9-(3-(2R-(芐氧基羰基氨基)丙酸)叔丁酯))-6-氯嘌呤(實施例21a)，進(jìn)行類似于實施例24的合成。
MS(ES+)m/e＝522.3((M+H)+；20％)。
實施例262S-芐氧基羰基氨基-3-(6-(4-(胍基甲基)哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸由3-(6-(4-(氨基甲基)哌啶-1-基)嘌呤-9-基)-2S芐氧基羰基氨基丙酸(實施例24b)，進(jìn)行類似于實施例1d的合成。收率74％。
MS(ES+)m/e＝496.3((M+H)+；40％)。
實施例27
2S-芐氧基羰基氨基-3-(6-(3-(3-芐基脲基)苯基硫烷基)嘌呤-9-基)丙酸27a)3-(6-(3-氨基苯基硫烷基)嘌呤-9-基)-2S-芐氧基羰基氨基丙酸叔丁酯在DMF和DIPEA中攪拌0.602mmol 3-巰基苯胺和0.602mmolN9-(3-(2S-(芐氧基羰基氨基)丙酸叔丁酯))-6-氯嘌呤(實施例1a)12小時。濃縮反應(yīng)溶液，將殘留物分配在EA和飽和NaHCO3溶液之間，相分離，利用半飽和的NaHCO3溶液和NaCl溶液洗滌有機(jī)相，干燥并濃縮，通過硅膠色譜純化(EA∶庚烷1∶1)產(chǎn)物。收率190mg。
MS(ES+)m/e＝521.3((M+H)+；100％)。
27b)2S-芐氧基羰基氨基-3-(6-(3-(3-芐基脲基)苯基硫烷基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯通過注射器將于1ml乙腈中的46.1mg異氰酸芐基酯加入到于3ml無水乙腈中的3-(6-(3-氨基苯基硫烷基)嘌呤-9-基)-2S-芐氧基羰基氨基丙酸叔丁酯(實施例27a)中?；旌衔镌赗T下攪拌48小時并濃縮，通過硅膠色譜純化(DCM∶EA 7∶3至1∶1)殘留物。收率205mg。
MS(ES+)m/e＝654.4((M+H)+；100％)。
27c)2S-芐氧基羰基氨基-3-(6-(3-(3-芐基脲基)苯基硫烷基)嘌呤-9-基)丙酸由2S-芐氧基羰基氨基-3-(6-(3-(3-芐基脲基)苯基硫烷基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯(實施例27b)，進(jìn)行類似于1c的合成。收率100％。
MS(ES+)m/e＝598.4((M+H)+；100％)。
實施例282S-新戊氧基羰基氨基-3-(6-(4-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸28a)2S-氨基-3-(6-(4-羧基哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯將1.7g 2S-芐氧基羰基氨基-3-(6-(4-羧基哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯(實施例19a)溶解在200ml AcOH中并在H2壓力為1atm下在Pd/C上氫化。過濾催化劑，蒸出溶劑并凍干殘留物。收率100％。
MS(ES+)m/e＝391.3((M+H)+；100％)。
28b)2S-新戊氧基羰基氨基-3-(6-(4-羧基哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯在0℃下，利用230mg(1mmol)N-(新戊氧基羰基氧基)琥珀酰亞胺和0.17ml DIPEA處理于4ml DMF中的390mg(1mmol)2S-氨基-3-(6-(4-羧基哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯(實施例28a)，之后慢慢溫?zé)?，在RT下攪拌12小時。濃縮反應(yīng)混合物，通過硅膠色譜純化(Lobar-C，DCM∶MeOH∶AcOH∶H2O 90∶10∶1∶1)殘留物。
收率540mg。
MS(ES+)m/e＝505.4((M+H)+；100％)。
28c)2S-新戊氧基羰基氨基-3-(6-(4-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯將505mg(1mmol)2S-新戊氧基羰基氨基-3-(6-(4-羧基哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯(實施例28b)溶解在10ml乙腈中，利用250mg DCCI和184mg五氟苯酚處理，然后在RT下攪拌30分鐘。過濾混合物，濃縮母液，將殘留物溶于5ml DMF中，利用200mg 2-氨基-1，4，5，6-四氫嘧啶處理并在RT下攪拌12小時。真空蒸出溶劑，色譜純化(Lobar-C，DCM∶MeOH∶AcOH∶H2O 98∶8∶0.8∶0.8)殘留物。收率270mg。
MS(ES+)m/e＝586.5((M+H)+；100％)。
28d)2S-新戊氧基羰基氨基-3-(6-(4-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸由2S-新戊氧基羰基氨基-3-(6-(4-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯(實施例28c)，進(jìn)行類似于實施例19c的合成。收率94％。
MS(ES+)m/e＝530.4((M+H)+；20％)。
實施例292S-(1-金剛烷基甲氧基羰基氨基)-3-(6-(4-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸
29a)2S-(1-金剛烷基甲氧基羰基氨基)-3-(6-(4-羧基哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯由N-(1-金剛烷基甲氧基羰基氧基)琥珀酰亞胺和2S-氨基-3-(6-(4-羧基哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯(實施例28a)，進(jìn)行類似于實施例28b的合成。收率85％。
MS(ES+)m/e＝583.4((M+H)+；100％)。
29b)2S-(1-金剛烷基甲氧基羰基氨基)-3-(6-(4-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯由2S-(1-金剛烷基甲氧基羰基氨基)-3-(6-(4-羧基哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯(實施例29a)，進(jìn)行類似于實施例28c的合成。收率75％。
MS(ES+)m/e＝664.5((M+H)+；30％)。
29c)2S-(1-金剛烷基甲氧基羰基氨基)-3-(6-(4-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸由2S-(1-金剛烷基甲氧基羰基氨基)-3-(6-(4-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?哌啶-1-基)嘌呤-9-基)丙酸叔丁酯(實施例29b)，進(jìn)行類似于實施例19c的合成。產(chǎn)率100％。
MS(ES+)m/e＝608.4((M+H)+；10％)。
藥理試驗作為一種試驗方法，下文描述了對蝮蛇毒素與人玻連蛋白受體(VnR)結(jié)合的抑制，由此測得了本發(fā)明化合物對玻連蛋白受體的拮抗作用(αvβ3ELISA試驗；在列舉試驗結(jié)果時，該試驗方法被縮寫為“K/VnR”)。
純化蝮蛇毒素蝮蛇毒素的純化是根據(jù)如Dennis等人在Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1989，87，2471-2475和PROTEINSStructure，F(xiàn)unction andGenetics 1993，15，312-321中描述的方法進(jìn)行的。
純化人玻連蛋白受體(αvβ3)人玻連蛋白受體是根據(jù)Pytela等人的方法(Methods Enzymol.1987，144，475)從人胎盤中獲得的。人玻連蛋白受體αvβ3還可從一些細(xì)胞系(如293細(xì)胞、人胚胎腎細(xì)胞系)獲得，用DNA序列協(xié)同轉(zhuǎn)染得到玻連蛋白受體的αv亞單位和β3亞單位，該亞單位可用辛基配糖物提取，然后通過伴刀豆球蛋白A、肝素瓊脂糖和S-300色譜純化。
單克隆抗體對玻連蛋白受體的β3亞單位有特異性的鼠單克隆抗體是根據(jù)Newman等人的方法(Blood，1985，227-232)或類似的方法制得的。與辣根過氧化酶結(jié)合的兔Fab 2抗鼠Fc(抗鼠Fc HRP)是從PelFreeze獲得的(序號為No.715 305-1)。
ELISA試驗物質(zhì)抑制蝮蛇毒素結(jié)合玻連蛋白受體的能力可通過使用ELISA試驗測定。為此，可根據(jù)Dennis等人的方法(描述在PROTEINSStructure，F(xiàn)unction and Genetics 1993，15，312-321中)，將Nunc 96-孔微滴定板涂上蝮蛇毒素(0.002mg/ml)溶液，然后用PBS/0.05％吐溫-20洗滌所述板兩次并通過利用于pH＝7的Tris-HCl(50mM)、NaCl(100mM)、MgCl2(1mM)、CaCl2(1mM)、MnCl2(1mM)中的牛血清蛋白(BSA，0.5％，RIA級或更好)孵育而封阻。已知抑制劑和試驗物質(zhì)的溶液被制備成于試驗緩沖液(BSA(0.5％，RIA級或更好，于pH＝7的Tris-HCl(50mM)、NaCl(100mM)、MgCl2(1mM)、CaCl2(1mM)、MnCl2(1mM))中的濃度為2×10-12至2×10-6mol/l的溶液。倒空封阻的板，在每種情況下，向每個孔中加入0.025ml該溶液，該溶液含一定濃度(2×10-12至2×10-6mol/l)的已知抑制劑或試驗物質(zhì)。把0.025ml玻連蛋白受體于試驗緩沖液中的溶液(0.03mg/ml)吸移至板的每個孔中，將板在搖蕩器上于室溫下孵育60-180分鐘；與此同時，在試驗緩沖液(0.0015mg/ml)中制成對玻連蛋白受體β3亞單位有特異性的鼠單克隆抗體的溶液(6ml/板)。向該溶液中加入第二兔抗體(0.001ml儲存溶液/6ml鼠單克隆抗-β3抗體溶液)，所述第二兔抗體是抗鼠FcHRP抗體結(jié)合物；在受體-抑制劑孵育期間孵育鼠抗-β3抗體和兔抗鼠Fc HRP抗體結(jié)合物的混合物。用含0.05％吐溫-20的PBS溶液洗滌試驗板四次，在各種情況下，將0.05ml/孔的抗體混合物吸移至板的每個孔中并孵育60-180分鐘。用PBS/0.05％吐溫-20洗滌板四次，然后以用含0.67mg/ml鄰苯二胺和0.012％H2O2的PBS溶液以0.05ml/孔的量顯色。另外，可使用于含Na3PO4和檸檬酸的緩沖液(pH 5)中的鄰苯二胺。利用1N H2SO4(0.05ml/孔)使顏色的顯色停止。在492-405nm之間測定每個孔的吸收并通過常規(guī)方法評估數(shù)據(jù)。
得到的試驗結(jié)果如下實施例 K/VnR K/VnR化合物 于10μM時的抑制(％) IC50(μM)1 751.12 800.73 772.24 930.1512860.5813920.1914840.6514c 2215920.2116850.5416b 2917920.1718950.07519970.00423930.1624950.05225890.34526910.3權(quán)利要求
1.式I或Ia化合物，以其所有的立體異構(gòu)體形式和任何比例的混合物形式存在，以及生理上可接受的鹽和其前藥， 其中X是氫、NR6R6’或NH-CO-R6；Y是氫；G是下式II基團(tuán)-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R4(II)；W是下式III基團(tuán)-B-(CR1R2)r-A’-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-D-E(III)；Ga是下式IIa基團(tuán)-(CR1R2)r-A’-(CR1R2)s-(CR1R3)k-(CR1R2)t-D-E(IIa)；Wa是下式IIIa基團(tuán)-B-(CR1R2)n-A-(CR1R2)m-(CR1R3)i-(CR1R2)q-R4(IIIa)；A、A’各自獨立地是直接鍵、-C(O)NR5，-NR5C(O)-，或(C5-C6)-亞芳基，其中在芳基基團(tuán)上有1-2個碳原子可被1-2個氮原子所代替；R1、R2各自是氫；R3各自獨立地是氫、(C1-C10)烴基、(C3-C14)環(huán)烷基、(C3-C14)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基、(C5-C14)-芳基、(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基、R6R6’N-R7、R6-C(O)-R7、R6S(O)2-N(R5)R7、R6OC(O)N(R5)R7、R6C(O)N(R5)R7、R6N(R6’)-C(O)N(R5)R7或R6N(R6’)-C(O)-R7，其中的烴基可以是一元不飽和或多元不飽和的，并且其中的烴基和芳基還可被下述基團(tuán)一或多元取代氟、氯、溴、氰基、R6R6’N-R7、R6-C(O)-R7、R6N(R6’)-C(O)-R7、R6或R6-O-R7；R4是C(O)R8；R5各自獨立地是氫或(C1-C4)烴基；R6、R6’各自獨立地是氫、(C1-C8)烴基、(C3-C12)環(huán)烷基、(C3-C12)環(huán)烷基-(C1-C8)烴基、其中有1-3個碳原子可被選自N、O、S的雜原子代替的(C5-C14)-芳基，或(C5-C14)-芳基-(C1-C8)烴基，其中的芳基部分的1-3個碳原子可被選自N、O、S的雜原子代替；R7是直接鍵；R8各自獨立地是羥基、(C1-C4)烴氧基或(C5-C14)-芳基-(C1-C4)烴氧基；B是-O-，-S-，-NR5-或咪唑；D是直接鍵、-NR6、-C(O)NR6、NR6-C(O)-或NR6-C(O)-NR6；E是氫、R6C(＝NR6)-NR6、R6R6’N-C(＝NR6)-、R6R6’N-C(＝NR6)-NR6-，或4-11元的單環(huán)或多環(huán)，芳環(huán)或非芳環(huán)系的基團(tuán)，該環(huán)系可選擇地含有1，2，3或4個選自N、O、S的雜原子，并且可選擇性的被R3、R5、＝O、＝S和R6R6’N-C(＝NR6)-基團(tuán)一、二或三取代；n是1，2，3或4；m是0或1；i是0或1；q是0或1；r是0，1，2，3，4或5；s是0或1；t是0或1；k是0或1。
全文摘要
本發(fā)明涉及下式I或Ia化合物，其生理上可接受的鹽和其前藥，它們的制備，應(yīng)用以及含有它們的藥物制劑其中X、Y、W、W
文檔編號C07D239/00GK1495184SQ0310093
公開日2004年5月12日 申請日期1997年12月19日 優(yōu)先權(quán)日1996年12月20日
發(fā)明者A·派曼, J·克諾爾, V·維納, G·布里波爾, J·F·格爾維斯特, D·卡尼亞托, T·R·加戴克, A 派曼, 刀, 加戴克, 嵫峭, 格爾維斯特, 鋝ǘ 申請人:赫徹斯特股份公司, 吉尼泰克公司