專利名稱：8-(1-氨基環(huán)烷基)1，3-二烴基黃嘌呤衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及8-(1-氨基環(huán)烷基)-1，3-二烴基黃嘌泠衍生物和其鹽，它們具有作為腺苷受體的選擇性拮抗劑的活性;本發(fā)明還涉及它們的制備方法，以及含有上述物質(zhì)作為活性成分的藥物組合物，這些組合物在治療上被用作抗憂郁、抗遺忘(nootropic)和精神興奮藥劑。
已知茶堿(1，3-二甲基黃嘌呤)通過與相應(yīng)受體的相互作用能夠拮抗腺苷的作用，它對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的刺激作用主要?dú)w結(jié)于上述性質(zhì)。由于在受體亞型A1和A2之間缺乏選擇性，以及對上面提到的受體具有較低的親合力，這就嚴(yán)重地限制了這種物質(zhì)作為增強(qiáng)人的認(rèn)識能力、機(jī)敏性和記憶力的藥劑的可能性，因?yàn)樗瑫r(shí)對人的心臟、腎臟和平滑肌肉組織有相應(yīng)的藥理作用。歐洲專利申請EP203721描述了1，3-二烷基-8-芳基黃嘌呤衍生物用于治療心臟循環(huán)和腸道器官的癥狀;DE3843117描述了1，3-二烷基-8-環(huán)烷基黃嘌呤用于治療老年性變性癥狀。本發(fā)明提供了新的黃嘌呤衍生物，它能選擇性地拮抗腺苷A1受體，并且作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抗憂郁藥、抗遺忘藥(nootropa)和精神興奮藥同時(shí)具有驚人的活性，而且它們具有低的副作用，這種副作用不是由于上文所述腺苷A2受體引起的。因此，本發(fā)明涉及式(Ⅰ)化合物和其鹽
其中R1和R2表示相同或不同的直鏈或支鏈的(C1-C6)烷基，直鏈或支鏈(C3-C4)鏈烯基、直鏈或支鏈(C3-C4)的鏈炔基;
R3是氫;-COR4，其中R4表示未取代或由至少一個(gè)選自羧基和(C1-C6)烷氧羰基的基團(tuán)所取代的(C1-C6)烷基，未取代的或被至少一個(gè)選自(C1-C4)烷氧基和羥基的基團(tuán)取代的苯基，(C1-C4)烷氧基，(C1-C4)烷氨基;-SO2R5，其中R5是直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，未取代的或被至少一個(gè)(C1-C3)烷基基團(tuán)取代的苯基;
n是1至2。
在本發(fā)明式(Ⅰ)化合物中，優(yōu)選R1和R2是相同的直鏈或支鏈的(C1-C4)烷基，R3是氫，n是1的化合物，最優(yōu)選R1和R2是正丙基，R3是氫，n為1的化合物。
本發(fā)明式(Ⅰ)化合物可以有很多互變異構(gòu)形式存在，雖然為了方便起見只用一種互變形式來表示，但不論是單一的形式，還是混合的形式都包括在上述式(Ⅰ)之中。通式(Ⅰ)化合物的鹽包括酸加成鹽，它可以在最后的分離和純化階段使游離堿就地與適當(dāng)選擇的有機(jī)酸或無機(jī)酸的獨(dú)立反應(yīng)來制備，例如，可以選擇鹽酸、氫溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸、硫酸、酒石酸、乙酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、富馬酸、苯甲酸、乙醇酸、葡糖酸、琥珀酸和對甲苯磺酸。本發(fā)明也包括堿加成鹽，它們也可如上述方法制備，得到銨鹽、堿金屬鹽和堿土金屬鹽，如鈉鹽、鉀鹽和鈣鹽;或者與有機(jī)堿，例如二或三烷基胺或鏈烷醇胺，如三乙醇胺形成鹽。
本發(fā)明的另一目的是提供式(Ⅰ)化合物的制備方法，合成按下面流程進(jìn)行，它包括使式(Ⅱ)化合物
其中R1和R2與上文定義相同，與式(Ⅲ)的1-氨基環(huán)烷羧酸衍生物縮合，
其中n是1至2，R6是氨基官能團(tuán)的適當(dāng)保護(hù)基，特別是三氟乙?；琑7是OH、OCOCF3、Cl。
當(dāng)R7是OH時(shí)，反應(yīng)是在合適的縮合劑，例如二烷基碳化二酰亞胺或二環(huán)烷基碳化二酰亞胺，特別是二異丙基碳化二酰亞胺的存在下進(jìn)行的。
該縮合反應(yīng)形成式(Ⅳ)化合物
其中的取代基與上文定義相同。該化合物經(jīng)過分離，如果需要再經(jīng)過純化后，在脫水劑，如POCl3的存在下，在適宜的有機(jī)溶劑中進(jìn)行環(huán)化反應(yīng)，或是在水解條件下，例如用10%NaOH，在溶液的回流溫度下進(jìn)行環(huán)化，得到式(Ⅴ)化合物
隨后脫去保護(hù)基，得到R3為氫的式(Ⅰ)化合物。
在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3是氫的式(Ⅰ)化合物可以通過水解環(huán)化反應(yīng)，同時(shí)使環(huán)外胺官能團(tuán)去保護(hù)而直接得到。例如，當(dāng)R6是三氟乙?；鶗r(shí)，可得到上述結(jié)果。
本發(fā)明化合物在環(huán)烷基的1-位上有羧酰胺或磺酰胺官能團(tuán)的化合物可以通過本專業(yè)技術(shù)人員已知的方法制得，即用R3是氫的式(Ⅰ)化合物與適當(dāng)?shù)乃酭4COOH的活性衍生物反應(yīng)來制備，其中R4是被適當(dāng)保護(hù)或掩蔽的未端羧基選擇性取代的烷基，或者是可能被一個(gè)或多個(gè)烷氧基或一個(gè)或多個(gè)羥基取代的苯基;或者是與酸R5SO3H的適當(dāng)衍生物反應(yīng)制得，其中R5與上文定義相同。在環(huán)烷基環(huán)的1-位上有氨基甲?；螂逋楣倌軋F(tuán)的本發(fā)明化合物的合成可用已知方法，用R3為氫的式(Ⅰ)化合物為起始原料，使其分別與氯甲酸(C1-C4)烷基酯和異氰酸(C1-C4)烷基酯反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)。
當(dāng)式(Ⅱ)化合物不能從市場上得到時(shí)，可以根據(jù)文獻(xiàn)(J.org.Chem.，16，1879，(1951)和J.Am.Chem.Soc.，76，2798(1954))所述方法制備。
恰恰相反，要制備通式(Ⅲ)化合物，可以利用適宜的伯胺基團(tuán)的保護(hù)反應(yīng)，由1-氨基環(huán)烷羧酸開始制備，所說的保護(hù)反應(yīng)是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，上述保護(hù)可以通過用三氟乙酸酐進(jìn)行三氟乙酰化來完成。
正如下文實(shí)施例13-17所示，式(Ⅰ)化合物及其鹽是腺苷A1受體的選擇性拮抗劑，對于中樞神經(jīng)系統(tǒng)同時(shí)具有抗抑郁劑、nootropa和精神興奮劑的作用，并且由A2受體引起的副作用小。因此本發(fā)明的式(Ⅰ)化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽優(yōu)選用作抗抑郁劑藥、nootropa、和精神興奮藥治療劑的活性成分。另外可能的適應(yīng)癥是變性癥狀，如老年性癡呆、阿爾茨默爾氏病、大腦器質(zhì)性綜合癥、帕金森氏癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的外傷損害、后神經(jīng)系統(tǒng)短缺(Postneurologicaldeficits)、呼吸機(jī)能降低、新生兒智力障礙。
本發(fā)明化合物除了被用作作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥物以外，還可以用來治療心臟和呼吸系統(tǒng)疾病。
在所述治療應(yīng)用中，本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽可以藥劑形式通過口服、局部使用、非腸道或直腸途徑給藥，在上述藥劑中含有治療有效劑量的本發(fā)明化合物作為活性成分，以及常規(guī)的、無毒的藥用賦形劑。這里使用的術(shù)語“非腸道”包括皮下、靜脈和肌肉注射。
正如在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中所述，如果本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽為藥物組合物的形式，它們的確定劑型顯然取決于所選擇的給藥途徑。
適于口服的藥物組合物可以是例如片劑、水或油懸浮劑、可分散的粉劑或粒劑、硬質(zhì)或軟質(zhì)膠囊、糖漿或酏劑。在這些口服藥用制劑中可以含有一種或多種膨脹劑(Sweltening)、著色劑、調(diào)味劑和防腐劑，這樣就可以制成精制美味的藥劑。
口服用制劑包括片劑，其中活性成分與無毒的藥學(xué)上可接受的賦形劑混合。所說的賦形劑可以是惰性稀釋劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉;成粒劑或崩解劑，如小麥淀粉或藻朊酸;粘合劑，例如淀粉或凝膠;潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。
為達(dá)到在腸胃系統(tǒng)中延遲崩解和吸收的目的，本專業(yè)技術(shù)人員可以采用常規(guī)技術(shù)手段把片劑包復(fù)或不包復(fù)，這樣就可以延長組分的釋放而達(dá)到延長作用的效果。
水懸浮劑通常在與適當(dāng)?shù)馁x形劑形成的混合物中含有活性成分。賦形劑可以是懸浮劑，如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮;分散劑和濕潤劑。其中還可以含有一種或多種防腐劑，如對羥基苯基甲酸乙酯或正丙酯;一種或多種著色劑;一種或多種調(diào)味劑;一種或多種膨脹劑。
油懸浮劑還可通過將活性組分懸浮于植物油或礦物油而制成，其中可以含有膨脹劑和調(diào)味劑以使制得的藥劑更可口。
適用于制備水懸浮劑的可分散粉劑和粒劑含有活性成分，它們與分散劑或濕潤劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑相混合，通過加水可將這些粉劑和粒劑制成水懸浮劑。
本發(fā)明的藥物組合物也可以是一種油/水乳液的形式，油相由植物油或礦物油組成。乳化劑可以是天然樹膠，例如阿拉伯膠、或天然磷脂，如卵磷脂，或者天然或合成脂肪酸的酯化合物。糖漿和酏劑可以用膨脹劑，如甘油、山梨醇或蔗糖制劑。
藥物組合物還可以是無菌注射用水或油懸浮液的形式。該懸浮劑可以按常規(guī)方法用已知分散劑或濕潤劑以及懸浮劑制劑。無菌注射制劑可以是在無毒的、適用于非腸道使用的溶劑或稀釋劑中的無菌注射溶液或懸浮液。
本發(fā)明化合物或其鹽也可以以栓劑的形式由直腸給藥。把活性組分與適當(dāng)?shù)臒o刺激性賦形劑混合可制成這種劑型，這些賦形劑在室溫下是固體，而在直腸溫度下是液體的，這樣它在直腸中就融化而釋放出藥物。為達(dá)到此目的，適用的賦形劑是聚乙二醇和可可脂。
本發(fā)明化合物或其鹽的治療或預(yù)防有效量取決于多種因素，包括例如病人的年齡和體重，治療所針對的癥狀和病情的嚴(yán)重程度，以及給藥的方法，但本發(fā)明化合物在用于治療學(xué)習(xí)和記憶方面的疾病時(shí)的有效量通常在每天0.05-50mg/Kg體重范圍內(nèi)，更常用每天0.5-5mg/Kg體重范圍內(nèi)。
下面的實(shí)施例將更好的說明本發(fā)明，但無論如何都不會限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例18-(1-氨基環(huán)戊基)-1，3-二丙基黃嘌呤的制備把11.4g1-三氟乙酰基氨基環(huán)戊烷羧酸和10.4g5，6-二氨基-1，3-二丙基尿嘧啶在120ml甲醇中的混合物用8.7ml二異丙基碳化二酰亞胺(DIPC)處理。在室溫?cái)嚢?小時(shí)，在4℃攪拌1小時(shí)以后，將所形成的沉淀真空過濾、洗滌并干燥，由此得到15.1g6-氨基-1，3-二丙基-5-(1-三氟乙?；被h(huán)戊烷羧酰氨基)尿嘧啶，m.p.203-4℃。
然后把上述化合物在280ml10%NaOH水溶液中回流4小時(shí)，冷卻后中和至pH＝6，真空過濾形成的沉淀，并用水洗滌和干燥，得到最后用乙醇結(jié)晶純化的產(chǎn)物10.5g。
m.p.(DSC)＝195.6℃(onset);IR(KBr)3314(
NH)，1698，1650 cm-1(
C＝0);1H-NMR(CDCl3)δ5.7(3H，sb)，4.2-3.8(4H，m)，2.5-1.5(12H，m)，1.0(6H，t);UV(EtOH)λmax＝276nm.
元素分析C15H25N5O2(M.W.319.41)C%H%N%計(jì)算值60.16;7.89;21.92;
測定值59.97;8.09;22.48。
實(shí)施例28-(1-氨基環(huán)戊基)-1，3-二甲基黃嘌呤的制備按照與實(shí)施例1相似的方法，由1，3-二甲基-5，6-二氨基尿嘧啶開始制備標(biāo)題化合物。
m.p.＝288-90℃;IR(KBr)1700，1661(
C＝0)，1628 cm-1(δNH);1H-NMR(CD3OD)δ3.7(3H，s)，3.6(3H，s)，2.2-1.7(8H，m);UV(EtOH)λmax＝275nm.
元素分析C12H17N5O2(M.W.263.30)C%H%N%計(jì)算值54.74;6.51;26.60;
測定值54.39;6.80;26.35。
實(shí)施例38-(1-氨基環(huán)戊基)-1，3-二烯丙基黃嘌呤的制備按照與實(shí)施例1相似的方法，由1，3-二烯丙基-5，6-二氨基尿嘧啶開始制備標(biāo)題化合物。
m.p.＝186-80℃;IR(KBr)1697，1658 cm-1
;1H-NMR(CDCl3)δ6.0-5.6(2H，m)，5.2-5.0(4H，m)，4.5(4H，d)，2.2-1.7(8H，m);UV(EtOH)λmax＝279nm.
元素分析C16H21N5O2(M.W.315.38)C%H%N%計(jì)算值60.93;6.71;22.21;
測定值60.69;6.89;22.45。
實(shí)施例48-(1-氨基環(huán)己基)-1，3-二丙基黃嘌呤的制備按照與實(shí)施例1類似的方法，由1-三氟乙酰氨基環(huán)己烷羧酸開始，制備標(biāo)題化合物。
m.p.＝172-3℃;IR(KBr)3319
，1698，1657
，1612cm-1(δNH);1H-NMR(CDCl3)δ5.2(2H，sb)，4.2-3.8(4H，m)，2.2-1.5(14H，m)，0.95(6H，t);UV(EtOH);λmax＝276nm.
元素分析C17H27N5O2(M.W.333.44)C%H%N%計(jì)算值61.24;8.16;21.00;
測定值61.08;8.38;20.89。
實(shí)施例58-(1-乙酰氨基環(huán)戊基)-1，3-二丙基黃嘌呤的制備在0.86g8-(1-氨基環(huán)戊基)-1，3-二丙基黃嘌呤在8ml無水四氫呋喃的懸浮液中加入0.3ml吡啶和0.4ml乙酰氯，混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，接著加入1N鹽酸，并用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相用水洗滌、干燥、蒸發(fā)得到0.8g粗產(chǎn)物，最后用乙酸異丙酯結(jié)晶。
m.p.(DSC)＝132，2℃(onset);IR(KBr)1699，1661，1638 cm-1(
C＝0);1H-NMR(CDCl3)δ6.4(1H，s)，4.2-3.8(4H，m)，2.7-2.3(4H，m)，2.2-1.5(11H，m)，1.9(6H，t);UV(EtOH)λmax＝276nm.
元素分析C18H27N5O3(M.W.361.45)C%H%N%計(jì)算值59.81;7.53;19.38;
測定值59.67;7.38;19.31。
實(shí)施例68-(1-苯甲酰氨基環(huán)戊基)-1，3-二丙基黃嘌呤的制備向4.3g8-(1-氨基環(huán)戊基)-1，3-二丙基黃嘌呤在40ml無水四氫呋喃的懸浮液中加入1.3ml吡啶和1.9ml苯甲酰氯，混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，接著加入1NHCl并用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相用水洗滌、干燥并蒸發(fā)得到5.2g粗產(chǎn)物，該產(chǎn)物最后用乙酸異丙酯結(jié)晶。
m.p.(DSC)＝199，2C(onset);IR(KBr)3349(
NH)，1697，1656 cm-1(
C＝0);1H-NMR(CDCl3)δ7.8-7.6(2H，m)，7.5-7.2(3H，m)，6.6(1H，s)，4.2-3.8(4H，m)，2.7-2.3(4H，m)，2.2-1.5(8H，m)，1.9(6H，t);UV(EtOH)λmax＝277nm.
元素分析C23H29N5O3(M.W.423.52)C%H%N%計(jì)算值65.23;6.90;16.54;
測定值65.27;7.07;16.77。
實(shí)施例71，3-二丙基-8-[1-(3，4，5-三甲氧基苯甲酰氨基)環(huán)戊基]黃嘌呤的制備按照與實(shí)施例6相似的方法，由3，4，5-三甲氧基苯甲酰氯開始，制備標(biāo)題化合物。
m.p.＝(DSC)＝98，7C(onset);IR(KBr)1704，1663，1624 cm-1
;1H-NMR(CDCl3/CD3OD)δ7，2(2H，s)，4.2-3.8(4H，m)，3.9(6H，s)，3.8(3H，s)，2.7-2.3(4H，m)，2.2-1.5(8H，m)，1.9(6H，t);UV(EtOH)λmax＝273nm.
元素分析C26H35N5O6(P.W.513.595)C%H%N%計(jì)算值60.80;6.87;13.64;
測定值60.49;7.02;13.40。
實(shí)施例81，3-二丙基-8-(1-甲磺酰氨基環(huán)戊基)黃嘌呤的制備在4.2g8-(1-氨基環(huán)戊基)-1，3-二丙基黃嘌呤于40ml無水四氫呋喃的懸浮液中加入1.7ml吡啶和1.7ml甲磺酰氯，混合物在室溫下攪拌4小時(shí)，接著加入1NHCl并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用水洗滌、干燥并蒸發(fā)得到2.39g粗產(chǎn)物，最后將其用色譜法在SiO2上純化，并用乙醇-水結(jié)晶。
m.p.(DSC)＝144.1℃(onset);IR(KBr)1697，1659(
C＝0)，1155 cm-1(
S02);1H-NMR(CDCl3)δ6.3(1H，s)，4.2-3.8(4H，m)，2.8(3H，s)，2.5-2.2(4H，m)，2.2-1.5(8H，m)，1.0(6H，t);UV(EtOH)λmax＝277nm.
元素分析C17H27N5O4S(M.W.397.49)C%H%N%計(jì)算值51.37;6.85;17.62;
測定值51.34;7.02;18.01。
實(shí)施例91，3-二丙基-8-(1-對甲苯磺酰氨基環(huán)戊基)黃嘌呤的制備在200mg8-(1-氨基環(huán)戊基)-1，3-二丙基黃嘌呤于1.5ml二甲基甲酰胺的懸浮液中加入0.18ml吡啶和190mg對甲苯磺酰氯，將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，接著加入1NHCl。將所得沉淀真空過濾、洗滌并干燥，由此得到45mg產(chǎn)品。
m.p.＝208-211 C;IR(KBr)1701，1649(
C＝0)，1162 cm-1(
SO2);1H-NMR(CDCl3)∶δ7.5(2H，d)，7.0(2H，d)，6.5(1H，s)，4.0(4H，t)，2.5-2.1(4H，m)，2.2(3H，s)，2.1-1.5(8H，m)，1.0(6H，t);UV(EtOH)λmax＝277nm.
元素分析C23H31N5O4SC%H%N%計(jì)算值58.33;6.60;14.79;
測定值57.98;6.50;14.46。
實(shí)施例101，3-二丙基-8-[1-(N-乙氧羰基氨基)環(huán)戊基]黃嘌呤的制備向4.5g8-(1-氨基環(huán)戊基)-1，3-二丙基黃嘌呤在45ml無水四氫呋喃的懸浮液中加入1.83ml吡啶和1.97ml氯甲酸乙酯，將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，然后加入1NHCl并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用水洗滌、干燥并蒸發(fā)，得到4.2g粗產(chǎn)品，最后將其由乙醇/水中結(jié)晶。
m.p.(DSC)＝158.4℃(onset);IR(KBr)1712，1685，1643cm-1
;1H-NMR(CDCl3)δ5.4(1H，s)，4.3-3.8(6H，m)，2.5-2.1(4H，m)，2.1-1.5(8H，m)，1.3-0.8(9H，m);UV(EtOH)λmax＝277nm.
元素分析C27H29N5O4(M.W.391.47)C%H%N%計(jì)算值58.30;7.47;17.89;
測定值58.55;7.64;18.04。
實(shí)施例111，3-二丙基-8-[1-(N′-丙基脲基)環(huán)戊基]黃嘌呤的制備將100mg8-(1-氨基環(huán)戊基)-1，3-二丙基黃嘌呤于10ml無水四氫呋喃的懸浮液用0.05ml異氰酸正丙酯處理，混合物在室溫下攪拌18小時(shí)，然后真空蒸發(fā)，得到124mg產(chǎn)品。
m.p.＝198-200℃IR(KBr)1706，1655，1635cm-1(
C＝0);1H-NMR(CDCl3/CD3OD)δ3.9(4H，t)，3，0(2H，t)，2，4-2，1(4H，m)，2，1-1，4(10H，m)，1，0(6H，t);UV(EtOH)λmax＝277nm.
元素分析C19H27N5O5(M.W.405.455)C%H%N%計(jì)算值59.38;7.97;20.78;
測定值59.15;8.09;20.79。
實(shí)施例121，3-二丙基-8-(1-emimalonamido環(huán)戊基)黃嘌呤的制備在4.5g 8-(1-氨基環(huán)戊基)-1，3-二丙基黃嘌呤于45ml無水四氫呋喃的懸浮液中加入1.4ml吡啶，冷卻至5℃后，滴加2.26ml丙二酸乙酯單酰氯。將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，接著真空濃縮，加入1N HCl，用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相用水洗滌，干燥并蒸發(fā)，得到6.5g粗產(chǎn)品，將其用柱色譜法(SiO2)純化，得到2.6g丙二酸單乙酯單酰胺，最后用四氫呋喃(26ml)和NaOH，1N(30ml)在室溫下皂化1小時(shí)。
反應(yīng)混合物于真空下濃縮，用2NHCl酸化，得到的產(chǎn)物沉淀在真空下過濾，用水洗滌并干燥，得到2.33白色固體，最后將其在乙醇/水中重結(jié)晶。
m.p.(DSC)＝195，6℃(onset);IR(KBr)1731，1704，1665，1633cm-1(
C＝0);1H-NMR(CDCl3)δ4.0(4H，t)，3，6(2H，s)，2，5-2，1(4H，m)，2，1-1，5(8H，m)，0，9(6H，t);UV(EtOH)λmax＝277nm.
元素分析C19H27N5O5(M.W.405.455)C%H%N%計(jì)算值56.28;6.71;17.27;
測定值56.48;6.58;17.07。
實(shí)施例13腺苷受體的連接受體連接試驗(yàn)是用由鼠腦中得到的Sinaptosomial膜制劑進(jìn)行的。
連接A1受體按下面的方法進(jìn)行將200μg膜蛋白與在400μl·50mMtris-HCl，pH＝7.4中的測試物質(zhì)和0.3mM(3H)-DPCPX在25℃一起孵育1小時(shí)，用20μMR-PIA測定非特異性連接。與A2受體的連接由200μg膜蛋白與測試物、4nM(3H)-NECA和50nMCPA在25℃一起孵育1小時(shí)來完成。用200μMCPA測定其非特異性連接。
用離心方法中止孵育并由游離物質(zhì)中分離出結(jié)合物，然后用液體閃爍計(jì)數(shù)方法測定帶有的放射性。通過14種不同濃度試驗(yàn)物的受體取代試驗(yàn)(每個(gè)試驗(yàn)進(jìn)行三次重復(fù)試驗(yàn))得到劑量-抑制曲線。試驗(yàn)物被溶于二甲亞砜并用50mM Tris-HCl稀釋，緩沖液pH＝7.4。IC50值是通過非線性回歸曲線并根據(jù)Cheng-Prusoff方程換算成Ki值而確定的。
表1腺苷受體親合力試驗(yàn)物質(zhì)Ki,A1(nM)Ki,A2(nM)選擇性(A2/A1)實(shí)施例1化合物26546152100實(shí)施例6化合物115實(shí)施例8化合物166實(shí)施例10化合物108實(shí)施例12化合物6992實(shí)施例14抗抑郁活性“絕望行為(Behavioraldespair)”試驗(yàn)此試驗(yàn)在R.D.Porsolt等人，Arch.Int.Pharmacodyn.229，327(1977)中描述，它是用處于異常的、引起緊張的環(huán)境，如水環(huán)境中的動物評價(jià)抗抑郁藥的活性。使用體重為25-35g雄性CD1(CharlesRiver)白鼠。
在動物被浸入水前一小時(shí)，經(jīng)腹膜內(nèi)(i.p.)途徑給藥試驗(yàn)化合物。動物在水中的停留時(shí)間是6分鐘，從第2分鐘至第6分鐘測定動物保持靜止不動的持續(xù)時(shí)間(靜止不動是顯示出抑郁的癥狀)。表Ⅱ說明了本發(fā)明的一些化合物的試驗(yàn)結(jié)果，以相對于對照組經(jīng)處理的動物靜止不動持續(xù)時(shí)間的變化百分?jǐn)?shù)表示。參比物包括黃嘌呤茶堿和咖啡堿，增智(nootropically)作用藥物oxiracetam和三環(huán)抗抑郁藥去郁敏。
表Ⅱ試驗(yàn)物質(zhì)劑量(mg/Kg)靜止不動持續(xù)時(shí)間變化百分?jǐn)?shù)%實(shí)施例1化合物10-28.33實(shí)施例1化合物20-42.93實(shí)施例6化合物10-24.22茶堿18.7-48.88咖啡堿25-30.34Oxiracetam500-29.07去郁敏15-24.50實(shí)施例15抗抑郁活性對利血平的拮抗作用在M.Bourin等人Arzneim.-Forsch./DrugRes.33(Ⅱ)，1173(1983)中描述了如何進(jìn)行此試驗(yàn)。以藥物對利血平引起的體溫過低的拮抗作用的功能來試驗(yàn)抗郁活性。使用體重23-35g的CD1(CharlesRiver)雄性白鼠。
每次試驗(yàn)前，記錄每只白鼠直腸基部的溫度。在通過腹膜內(nèi)途徑注入利血平(2.5mg/Kg)后4小時(shí)，通過腹膜內(nèi)途徑(i.p.)給藥試驗(yàn)物質(zhì)，在給藥后時(shí)間t＝0以及30′，60′，90′和120′時(shí)再次測量直腸溫度。表Ⅲ是用實(shí)施例1化合物、去郁敏、去甲替林、茶堿和咖啡堿處理的動物相對于t＝0時(shí)記錄的最大溫度變化。
表Ⅲ試驗(yàn)物質(zhì)劑量(mg/Kg)△溫度(℃)實(shí)施例1化合物10+0.26實(shí)施例1化合物20+0.71去郁敏16+1.39去甲替林10+2.34茶堿20+0.81咖啡堿20+1.63實(shí)施例16Nootropic活性“被動回避(Passiveaviodance)”試驗(yàn)此試驗(yàn)在R.Verloes等人Psychopharmacology95，226，(1988)中描述，它是由拮抗因東莨菪堿引起的遺忘癥的能力的功能來評價(jià)新藥的抗遺忘作用。試驗(yàn)使用體重25-35gCD1(CharlesRiver)雄性白鼠。
把動物第一次引進(jìn)一個(gè)箱子，箱子包括一個(gè)明亮區(qū)域和一個(gè)黑暗區(qū)域，二區(qū)域間有一門相連。打開門以后，白鼠由明亮區(qū)進(jìn)入思考問題區(qū)，并受到70V的電擊5秒鐘(獲得試驗(yàn))。24小時(shí)后，在同樣條件下重復(fù)上述試驗(yàn)(記憶試驗(yàn))，記錄在開始3分鐘內(nèi)從開著的門進(jìn)入黑暗區(qū)的缺少的數(shù)量。第2組動物在獲得試驗(yàn)前30分鐘經(jīng)腹膜內(nèi)給藥東莨菪堿，劑量為2mg/Kg。在獲得試驗(yàn)前1小時(shí)和在東莨菪堿給藥前30分鐘時(shí)，也用腹膜內(nèi)給藥的方式給第3組用藥試驗(yàn)化合物。表Ⅳ說明了實(shí)施例1化合物和參比物質(zhì)的抗遺忘性。以用東莨菪堿+試驗(yàn)化合物處理動物組在開始3分鐘內(nèi)不通過門的百分?jǐn)?shù)表示。
表Ⅳ試驗(yàn)物質(zhì)劑量抗遺忘活性實(shí)施例1化合物1080%咖啡堿1060%茶堿2030%8-苯基茶堿1040%去郁敏4530%Oxiracetam1000(OS)40%實(shí)施例17自發(fā)運(yùn)動活性“活動箱(ActivityCage)”試驗(yàn)本試驗(yàn)研究動物的自發(fā)運(yùn)動活性。使用體重150-250g的雄性Wistar(CharlesRiver)大鼠。
在進(jìn)入活性箱前30分鐘，動物用腹膜內(nèi)給藥試驗(yàn)物質(zhì)處理。連接在系統(tǒng)上的打印機(jī)記錄大鼠進(jìn)入箱子后開始的5分鐘內(nèi)運(yùn)動的次數(shù)。表Ⅴ列出了ED50值，該值與相對于對照組經(jīng)過處理的動物自發(fā)運(yùn)動增加的百分?jǐn)?shù)相關(guān)。
表Ⅴ試驗(yàn)物質(zhì) ED50(mg/Kg) 95%置信界限實(shí)施例1化合物0.4920.480-0.504咖啡堿4.3334.024-4.6438-苯基茶堿6.0114.179-7.825茶堿～3.7權(quán)利要求
1.式(Ⅰ)化合物及其鹽
其特征在于R1和R2表示相同或不同的直鏈或支鏈的(C1-C6)烷基，直鏈或支鏈的(C3-C4)鏈烯基，直鏈或支鏈的(C3-C4)炔基基團(tuán)；R3是氫；-COR4，其中R4表示未取代或由至少一個(gè)選自羧基和(C1-C6)烷氧羰基的基團(tuán)所取代的(C1-C6)烷基，未取代的或被至少一個(gè)選自(C1-C4)烷氧基和羥基的基團(tuán)取代的苯基，(C1-C4)烷氧基，(C1-C4)烷氨基；-SO2R5，其中R5是直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，未取代的或被至少一個(gè)(C1-C3)烷基取代的苯基；n是1至2。
2.權(quán)利要求1的化合物，其特征在于其中R1和R2是相同的直鏈或支鏈(C1-C4)烷基，R3是氫以及n是1。
3.權(quán)利要求1的化合物，其特征在于R1和R2是正丙基，R3是氫以及n是1。
4.制備權(quán)利要求1-3的化合物的方法，其特征在于使式(Ⅱ)化合物
其中R1和R2如權(quán)利要求1定義，與式(Ⅲ)化合物
其中R6是氨基官能團(tuán)的保護(hù)基，R7是羥基、三氟乙酰氧基或氯，n是1至2，可能在有選自二烷基碳化二酰亞胺和二環(huán)烷基碳化二酰亞胺的縮合劑存在下，在隋性有機(jī)溶劑中進(jìn)行反應(yīng)，得到式(Ⅳ)化合物
其中R1、R2和n如權(quán)利要求1定義，R6如上文定義;在有例如POCl3的適當(dāng)脫水劑存在下，在適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑或在含水堿介質(zhì)中，在室溫至溶液的回流溫度下使式(Ⅳ)化合物反應(yīng)，可以使式(Ⅳ)化合物脫保護(hù)，以及可以在惰性溶劑中，可能在作為催化劑的堿如吡啶或三乙胺存在下，以及可能在適當(dāng)?shù)目s合劑存在下使式(Ⅳ)化合物與R4CO2H、R5SO3H、它們的活性衍生物以及異氰酸(C1-C4)烷基酯反應(yīng)，其中R4和R5如權(quán)利要求1定義。
5.權(quán)利要求4的方法，其特征在于R6是氨基官能團(tuán)的保護(hù)基，如三氟乙?；?。
6.權(quán)利要求4和5制備式(Ⅰ)化合物的方法，其中R1、R2和n如權(quán)利要求1定義，R3是COR4，R4是被至少一個(gè)選自羧基和(C1-C6)烷氧羰基的基團(tuán)所取代的(C1-C6)烷基，其特征是使R3是氫的式(Ⅰ)化合物與選自有關(guān)的環(huán)狀酸酐和單氯化物單酯的二羧酸活性衍生物反應(yīng)，接著可以在堿性介質(zhì)中水解。
7.權(quán)利要求4和5制備式(Ⅰ)化合物的方法，其中R1、R2和n如權(quán)利要求1定義，R3是COR4，R4是(C1-C4)烷氧基，其特征是使R3是氫的式(Ⅰ)化合物在有機(jī)溶劑，如四氫呋喃中，可能是用堿，如吡啶或三乙胺作催化劑的情況下與適當(dāng)?shù)穆燃姿?C1-C4)烷基酯反應(yīng)。
8.權(quán)利要求4和5制備式(Ⅰ)化合物的方法，其中R1、R2和n如權(quán)利要求1定義，R3是COR4，R4是(C1-C4)烷氨基，其特征是使R3是氫的式(Ⅰ)化合物在有機(jī)溶劑，如四氫呋喃中與適當(dāng)?shù)漠惽杷?C1-C4)烷基酯反應(yīng)。
9.藥物組合物，其特征是含有至少一種有效量的權(quán)利要求1的化合物，和一種或多種常規(guī)、無毒的賦形劑。
10.權(quán)利要求9的藥物組合物的應(yīng)用，該組合物在治療應(yīng)用中可作為抗抑郁藥、nootopic和精神興奮藥。
全文摘要
本發(fā)明描述了具有腺苷拮抗活性的8-(1-氨基環(huán)烷鹽)-1，3-二烴基黃嘌呤，它們的衍生物及其鹽，還描述了所述化合物的制備方法，以及含有所述化合物和作為抗抑郁藥、nootropic和精神興奮藥的藥物組合物。
文檔編號C07D473/08GK1082047SQ9310205
公開日1994年2月16日 申請日期1993年1月22日 優(yōu)先權(quán)日1992年1月24日
發(fā)明者M·布拉法尼, S·塞卡利, P·D·威廉斯, P·嘉內(nèi)蒂, A·佩森諾, S·斯科瑞, S·贊瑞拉 申請人:韋斯卡瑪生物工業(yè)化學(xué)藥物合股公司