專利名稱：植物性雌激素劑桉烷類化合物、其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然藥物化學和化學治療學領(lǐng)域，具體涉及桉烷類化合物的制備及其在預防和治療由雌激素缺乏或性激素代謝、特別是雌激素代謝調(diào)節(jié)障礙所導致的病癥中的用途。
背景技術(shù)：
婦女在40歲左右出現(xiàn)不規(guī)律的月經(jīng)周期，這標志著絕經(jīng)期的開始。這種內(nèi)分泌系統(tǒng)變化的時期稱為更年期，它可能持續(xù)十年或更長。它是卵泡生長衰竭和對促性腺激素反應(yīng)降低的結(jié)果。卵泡缺乏的結(jié)果是雌激素的生產(chǎn)降低并最終完全停止。伴隨它可能會產(chǎn)生多種癥狀，如潮熱、抑郁、焦慮、精神錯亂、失眠等。除此之外，雌激素生產(chǎn)的降低還可能引起嚴重的健康問題，如骨質(zhì)疏松、心功能不全、腦梗塞(中風)和癌癥。另外，雌激素生產(chǎn)的降低對皮膚和毛發(fā)的影響更為明顯。例如出現(xiàn)表皮變薄，皮膚彈性減弱，皮脂腺和汗腺的分泌、排泄功能的不同程度降低，皮膚漸漸出現(xiàn)皺紋，毛發(fā)漸漸失去光澤，頭發(fā)變稀，變白或脫落以及肌肉群減少、脂肪在腹腔或臀部堆積、骨質(zhì)疏松等各種衰老現(xiàn)象。雌激素的缺乏不僅可以通過生物合成膠原蛋白和透明質(zhì)酸的減少導致生理性衰老，而且可以加速紫外線對人體的傷害從而加速光老化的過程。因此，雌激素對于防止皮膚衰老起重要作用。
雖然采用雌激素的激素替代療法對于緩解與更年期有關(guān)的不適是非常有效的，但許多研究表明乳腺癌和子宮癌、心血管疾病和肝代謝改變的風險增加可能和這種治療有關(guān)。通過施用孕激素可以降低癌癥的風險。但是，孕激素的保護作用似乎隨著長期使用而削弱，并且認為激素替代療法(HRT)與35～40％的乳腺癌風險增加有關(guān)。由于存在這些副作用以及對這種類型治療可靠性的明顯懷疑，已趨于拒絕在40歲以上的絕經(jīng)后婦女中使用HRT藥物。據(jù)估計僅大約20％的絕經(jīng)后美國婦女接受HRT，其中僅有40％持續(xù)治療1年以上。
已在許多植物中發(fā)現(xiàn)了在人或動物中具有雌激素-激動作用或可與雌激素相互作用的物質(zhì)。已發(fā)現(xiàn)了至少20類不同的具有雌激素/抗雌激素性能的物質(zhì)，它們來自于16個科的植物中的300種以上的植物。大部分已知的植物雌激素屬于異黃酮、木脂素或香豆素家族。僅在最近，又發(fā)現(xiàn)了一種高效的植物性雌激素——8-異戊烯基柚配基(S.R.Milligan等人；Journal of Clin.Endocrinol.Metab.(臨床內(nèi)分泌代謝雜志)84，2249-2252 )。通過刺激Ishikawa-Var-I細胞內(nèi)的堿性磷酸酯酶測試了8-異戊烯基柚配基的體內(nèi)雌激素效力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)8-異戊烯基柚配基比長期以來為人們所熟悉的植物性雌激素如香豆雌酚、染料木黃酮或黃豆苷明顯具有更大活性，且產(chǎn)生的作用僅微弱于17β雌二醇。
對美國、歐洲、中國和日本人群的流行病控制研究已表明在隨食物一起攝入植物性雌激素與多種腫瘤，特別是乳腺癌和前列腺癌的出現(xiàn)之間存在密切的負相關(guān)關(guān)系。還在動物試驗中證明了植物性雌激素對乳腺和前列腺腫瘤細胞生長的抑制作用。植物性雌激素的保護性能顯然是基于大量不同的生物學特征，而這些生物學特征在這些合成和天然雌激素的組合之間是有區(qū)別的。依賴于劑量和內(nèi)源激素的狀況，植物性雌激素還具有雌激素作用或者甚至抗雌激素作用。其它的生物學作用包括，例如抑制酪氨酸激酶、DNA拓撲異構(gòu)酶、核糖體s6激酶、鳥氨酸脫羧酶、芳香酶或5α還原酶。此外植物性雌激素通常還具有抗氧化性能，而且顯然所有這些不同作用的總和在抑制腫瘤的出現(xiàn)和生長中起作用(Tham等人，Journal of Clin.Endocrin.Metab.(臨床內(nèi)分泌代謝雜志)83，2223-2235 )。植物性雌激素還能促進皮膚膠原蛋白的合成、抑制皮膚膠原蛋白的降解、抑制皮脂腺分泌、抗皮膚蜂窩織炎等作用。顯然這些在抗皮膚衰老等方面起作用。(Kawai n.Cosmetics and Toiletries(化妝品和盥洗用品)118(5)，73-80， )。
在文獻《植物雌激素與雌激素相關(guān)性疾病》中記載了更年期婦女使用植物性雌激素可以改善因內(nèi)源性雌激素不足所致激素相關(guān)性疾病，如更年期綜合癥、骨質(zhì)疏松癥、冠心病、高血脂及部分腫瘤的發(fā)病情況，從而發(fā)揮潛在的預防保健作用(國外醫(yī)學內(nèi)分泌學分冊2000年7月第20卷第4期，P208～P210)。文獻《植物性雌激素的研究進展》中記載了植物性雌激素的雌激素樣作用的構(gòu)效關(guān)系、雌激素活性檢測方法以及其應(yīng)用前景，其中敘述了植物性雌激素對激素依賴性腫瘤、心臟病、骨質(zhì)疏松癥、絕經(jīng)期綜合癥以及老年性癡呆等病癥的作用(中成藥Chinese TraditionalPatent Medicine 1999，21[1]，P42～45)。文獻《植物雌激素研究概況(II)——生理功能進展》中記載了植物性雌激素的作用機制以及其對人體健康的潛在效果(中國食品添加劑，China Food Additives，2002 No.4)。
桉烷型化合物是常見的一種雙環(huán)倍半萜，存在于各種植物揮發(fā)油中，結(jié)構(gòu)上常帶有羥基、羰基和雙鍵。少數(shù)天然桉烷類化合物已報導具有生物活性，如桉雙烯酮[(+)-Eudesma-4(15)-7(11)-dien-8-one]是菊科植物關(guān)蒼術(shù)的成分，具有抗炎作用。存在于桉葉、厚樸、蒼術(shù)中的-桉醇具有鎮(zhèn)靜作用。
香附，異名雀頭香、莎草根等，為莎草科植物莎草Cyperus rotundusL.的干燥根莖。秋季采挖，去毛須，置沸水中略煮或蒸透后曬干，或撩后直接曬干。主產(chǎn)于山東、浙江、湖南、河南等地。本品味辛、微苦、微甘、平。歸肝、脾三焦經(jīng)。有行氣解郁、調(diào)經(jīng)止痛之功效。用于肝郁氣滯，月經(jīng)不調(diào)。
本發(fā)明的一個目的是提供一種植物性雌激素劑桉烷類化合物或其衍生物的鹽、酯、水合物。
本發(fā)明另一個目的是提供此種植物性雌激素劑桉烷類化合物或其衍生物的鹽、酯、水合物的制備方法。
本發(fā)明還有一個目的是提供此種植物性雌激素劑桉烷類化合物或其衍生物的鹽、酯、水合物在制備用于預防和治療由雌激素缺乏或性激素代謝、特別是雌激素代謝調(diào)節(jié)障礙所導致的病癥的藥物中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
降桉烷-4，6-二烯-3，11-二酮是首次從香附中分離得到的新型降桉烷類化合物，經(jīng)文獻檢索，未見有相同結(jié)構(gòu)和活性方面的報道。經(jīng)多次雌激素活性實驗研究表明，該化合物具有刺激雌激素敏感細胞-MCF-7細胞生長的顯著活性。
本發(fā)明提供具有如下式(I)結(jié)構(gòu)的桉烷類化合物或其衍生物的鹽、酯、水合物 式中R1表示氫、羥基、氨基、鹵素、羰基或C1～6的烷基、烷氧基、鏈烯基、炔基、甲酰氧基、肼、腙、哌啶、吡啶，或各種氨基酸修飾的羥基，或-SO2NHCOR基；R2、R3、R10為氫、羰基、末端雙鍵、羥基、鹵素或C1～6的烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基。R4為氫、羥基、甲氧基、乙氧基或乙?；Ｗo的羥基；R5、R6、R7、R9為氫、羰基、羥基、甲氧基、乙氧基、氨基酸?；?、C1～6的烷氧基、烷基或鏈烯基。R8為甲基、羥甲基。
本發(fā)明還提供具有式(I)結(jié)構(gòu)的桉烷類化合物或其衍生物的鹽、酯、水合物的如下制備方法(1)取香附根莖，粉碎后用有機溶劑室溫浸泡提取，減壓濃縮得到浸膏；(2)用水-乙酸乙酯分配，乙酸乙酯層濃縮后上硅膠柱，用兩相溶劑梯度洗脫，分別獲得F-1，F(xiàn)-2。
(3)其中F-1用硅膠柱層析得桉烷-4，11-二烯-3-酮。F-2用交聯(lián)葡聚糖LH-20去雜，再經(jīng)硅膠柱層析，分離得降桉烷-4，6-二烯-3，11-二酮和桉烷-3，11-二烯-2-酮-5α-醇。
其中(1)所述的有機溶劑選自甲醇、乙醇、甲醇-水、乙醇-水；(2)所述的兩相溶劑可以是石油醚-乙酸乙酯、石油醚-氯仿、石油醚-乙醚、環(huán)己烷-乙酸乙酯、環(huán)己烷-氯仿、環(huán)己烷-乙醚。
本發(fā)明還提供式(I)所示桉烷類化合物或其衍生物的鹽、酯、水合物在制備用于預防和治療由雌激素缺乏或性激素代謝、特別是雌激素代謝調(diào)節(jié)障礙所導致的病癥的藥物中的應(yīng)用，以及此類化合物在化妝品制備中的用途。
除非特別注明，本文中采用的術(shù)語具有如下定義“烷基”表示飽和或不飽和的、取代或非取代的直鏈、支鏈烷烴鏈，具體地可列舉如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、新戊基、叔戊基等。這些基團中，以甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、戊基等碳原子數(shù)為1-6個的烷基為佳。
“藥學上可接受的鹽”具體地可列舉與鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機酸的鹽，與甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、苦味酸、甲磺酸、乙磺酸等有機酸和天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸的酸加成鹽，或與堿形成的鹽，如鈉、鉀、鈣、鋁等無機堿的鹽，銨鹽，甲胺鹽，乙胺鹽，乙醇胺鹽等，或與賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸等堿性氨基酸形成的鹽。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步闡述，但這些實施例不對本發(fā)明構(gòu)成任何限制。實施例中的1H-NMR用Bruker AMX 400MHz核磁共振儀記錄，化學位移以δ(ppm)表示。
實施例1總提取物的制備和分離莎草科植物香附(Cyperus rotundus)的根莖含有多種桉烷類倍半萜成分。將干燥粉碎的香附根莖(1kg)用甲醇室溫浸泡提取完全(3天/次，8L/次×3)。減壓濃縮提取液得甲醇浸膏(132g)，浸膏用水-乙酸乙酯分配，乙酸乙酯層濃縮后得浸膏65g，乙酸乙酯提取物中含多種桉烷類倍半萜成分。乙酸乙酯提取物上硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯(100∶1～0∶100)梯度洗脫，分別獲得F-1，F(xiàn)-2兩個流份。其中F-1(約2g)用硅膠柱層析得桉烷-4，11-二烯-3-酮。F-2(約3g)用交聯(lián)葡聚糖LH-20去雜，再經(jīng)硅膠柱層析，分離得降桉烷-4，6-二烯-3，11-二酮和桉烷-3，11-二烯-2-酮-5α-醇。
實施例2降桉烷-4，6-二烯-3，11-二酮(4，6-Subeudesmadiene-3，11-dione)的分離純化。
香附甲醇提取物的乙酸乙酯可溶部分，經(jīng)硅膠柱層析，取石油醚-乙酸乙酯(9∶1)洗脫部位，經(jīng)交聯(lián)葡聚糖LH-20去雜，再經(jīng)硅膠柱層析反復純化，石油醚-乙醚洗脫，得到無色油狀物。C14H18O2，HRESI[M+H]+m/z219.1382，計算值219.1385。[α]D+255°。易溶于氯仿。
1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ7.44(1H，s，H-6)，2.43(3H，s，H-12)，1.96(3H，s，H-14)，1.10(3H，s，H-13)；13C NMR(CDCl3，100MHz)198.9(s，C-3)，198.8(s，C-11)，153.0(s，C-5)，143.1(s，C-7)，133.2(s，C-4)，132.4(d，C-6)，36.3(t，C-2)，36.2(t，C-9)，33.9(t，C-1)，33.1(s，C-10)，25.8(q，C-12)，21.2(q，C-13)，20.9(t，C-8)，10.8(q，C-14)。
實施例3桉烷-4，11-二烯-3-酮(4，11-Eudesmadien-3-one)的分離純化香附甲醇提取物的乙酸乙酯可溶部分，經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯洗脫，反復純化得到無色油狀物。C15H22O，易溶于氯仿。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ4.78(2H，s，H-12)，2.74(2H，q，J＝1.7Hz，H-6)，2.52(2H，q，J＝6.5Hz，H-2)，2.43(2H，t，J＝6.5Hz，H-2)，2.08(2H，d，J＝8.9Hz，H-6)，1.78(6H，s，H-13，H-14)，1.24(3H，s，H-15)。
實施例4桉烷-3，11-二烯-2-酮-5α-醇(5α-Hydroxy-3，11-eudesmadien-2-one)的分離純化香附甲醇提取物的乙酸乙酯可溶部分，經(jīng)硅膠柱層析，取石油醚-乙酸乙酯(9∶1)洗脫部位，經(jīng)Sephadex LH-20去雜，再經(jīng)硅膠柱層析反復純化，石油醚-乙醚洗脫，得到無色膜狀物。C15H22O2，易溶于氯仿。
1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ5.81(1H，s，H-3)，4.76(1H，m，H-12)，1.97(1H，s，H-14)，1.77(1H，s，H-13)。
實施例5采用對雌激素敏感的細胞株-人乳腺癌細胞MCF-7測定化合物的雌激素活性。取無酚紅DMEM(含10％CDT-FBS)培養(yǎng)4天的MCF-7細胞接種于96孔培養(yǎng)板(4×103個/孔)培養(yǎng)24小時，待細胞貼壁后棄去陳舊培養(yǎng)液，分別加入不同濃度的試樣(總體積200μl/孔)，每一劑量組在37℃，5％CO2，相對飽和濕度下孵育5天后，用MTT比色法在570nm波長測定各孔吸光值(A)，計算平均值和增殖率。結(jié)果如下試樣編號A4，6-Subeudesmadiene-3，11-dione；B4，11-Eudesmadien-3-one；C5α-Hydroxy-3，11-eudesmadien-2-one

**p＜0.01.
從表中結(jié)果可以看到，化合物降桉烷-4，6-二烯-3，11-二酮、桉烷-4，11-二烯-3-酮和桉烷-3，11-二烯-2-酮-5α-醇顯著刺激MCF-7細胞的增殖。
權(quán)利要求
1.如下式(I)所示的桉烷化合物或其衍生物的藥學上可接受的鹽、酯、水合物 式中R1表示氫、羥基、氨基、鹵素、羰基或C1～6的烷基、烷氧基、鏈烯基、炔基、甲酰氧基、肼、腙、哌啶、吡啶，或各種氨基酸修飾的羥基，或-SO2NHCOR基；R2、R3、R10為氫、羰基、末端雙鍵、羥基、鹵素或C1～6的烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基。R4為氫、羥基、甲氧基、乙氧基或乙酰基保護的羥基；R5、R6、R7、R9為氫、羰基、羥基、甲氧基、乙氧基、氨基酸?；1～6的烷氧基、烷基或鏈烯基。R8為甲基、羥甲基。
2.如權(quán)利要求1所述的桉烷化合物或其衍生物的藥學上可接受的鹽、酯、水合物，其特征在于所述化合物可以是單一桉烷類化合物或由這些桉烷類化合物組成的活性部位。
3.按照權(quán)利要求1所述的桉烷化合物，其特征在于所述化合物是降桉烷-4，6-二烯-3，11-二酮。
4.如權(quán)利要求1或2或3所述的桉烷化合物或其衍生物的藥學上可接受的鹽、酯、水合物的制備方法所述方法的特征在于(1)取香附根莖，粉碎后用有機溶劑室溫浸泡提取，減壓濃縮得到浸膏；(2)用水-乙酸乙酯分配，乙酸乙酯層濃縮后上硅膠柱，用兩相溶劑梯度洗脫，分別獲得F-1，F(xiàn)-2。(3)其中F-1用硅膠柱層析得桉烷-4，11-二烯-3-酮。F-2用交聯(lián)葡聚糖LH-20去雜，再經(jīng)硅膠柱層析，分離得降桉烷-4，6-二烯-3，11-二酮。和桉烷-3，11-二烯-2-酮-5α-醇。
5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其中(1)所述的有機溶劑選自甲醇、乙醇、甲醇-水、乙醇-水。
6.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其中(2)所述的兩相溶劑可以是石油醚-乙酸乙酯、石油醚-氯仿、石油醚-乙醚、環(huán)己烷-乙酸乙酯、環(huán)己烷-氯仿、環(huán)己烷-乙醚。
7.式(I)所示的桉烷化合物或其衍生物的藥學上可接受的鹽、酯、水合物在制備用于預防和治療由雌激素缺乏或性激素代謝、特別是雌激素代謝調(diào)節(jié)障礙所導致的病癥的藥物中的應(yīng)用。
8.如權(quán)利要求7所述應(yīng)用，其中所述的病癥包括更年期不適、性激素依賴性癌癥、良性前列腺增生、骨質(zhì)疏松、阿耳茨海默氏病和心血管疾病。
9.式(I)所示的桉烷化合物或其衍生物的藥學上可接受的鹽、酯、水合物在化妝品制備中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供如下式(I)所示的桉烷化合物或其衍生物的鹽、酯、水合物式中R1表示氫、羥基、氨基、鹵素、羰基或C1～6的烷基、烷氧基、鏈烯基、炔基、甲酰氧基、肼、腙、哌啶、吡啶，或各種氨基酸修飾的羥基，或－SO2NHCOR基。R2、R3、R10為氫、羰基、末端雙鍵、羥基、鹵素或C1～6的烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基。R4為氫、羥基、甲氧基、乙氧基或乙?；Ｗo的羥基。R5、R6、R7、R9為氫、羰基、羥基、甲氧基、乙氧基、氨基酸?；?、C1～6的烷氧基、烷基或鏈烯基。R8為甲基、羥甲基。本發(fā)明還提供此類化合物的制備方法及在制備用于預防和治療由雌激素缺乏或性激素代謝、特別是雌激素代謝調(diào)節(jié)障礙所導致的病癥的藥物中的用途，以及在化妝品制備中的用途。
文檔編號A61P25/28GK1935768SQ20051002978
公開日2007年3月28日 申請日期2005年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月20日
發(fā)明者趙亞, 魏少敏, 胡昌奇 申請人:上海家化聯(lián)合股份有限公司