專(zhuān)利名稱(chēng)：維生素d的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可用作藥品的維生素D3內(nèi)酰胺衍生物或其可藥用溶劑化物。本發(fā)明進(jìn)一步涉及對(duì)治療選自骨質(zhì)疏松癥、高鈣血癥和骨Peget病中的一種或多種疾病有效的維生素D3內(nèi)酰胺衍生物或其可藥用溶劑化物。
背景技術(shù)：
骨Peget病是一種由骨盆、大腿骨、頭蓋骨等處骨吸收異?？哼M(jìn)引起骨變形和骨痛等癥狀的原因不明的疾病。當(dāng)前使用的骨Peget病治療劑為也用作骨質(zhì)疏松癥治療劑的雙膦酸酯制劑、降鈣素制劑等等，然而前者的用量必須為對(duì)骨質(zhì)疏松癥患者的用量的4～5倍，導(dǎo)致存在用藥順應(yīng)性的問(wèn)題；后者則存在不能充分發(fā)揮骨吸收抑制作用的問(wèn)題。并且，由于這些制劑是立足于藥物的骨吸收抑制作用的對(duì)癥治療劑，不能期望根治疾病。
近年來(lái)，已發(fā)現(xiàn)從骨Peget病患者身上收集的破骨細(xì)胞前體細(xì)胞含有1α，25-二羥基維生素D3受體，并且其對(duì)1α，25-二羥基維生素D3的敏感度為正常人的破骨細(xì)胞前體細(xì)胞的10～100倍(J.Bone Miner.Res.，15卷，228～236頁(yè)，2000年)。進(jìn)一步地，由于骨Peget病患者血中的1α，25-二羥基維生素D3的濃度與正常人的相同，可以推測(cè)出由內(nèi)源性1α，25-二羥基維生素D3導(dǎo)致的骨吸收亢進(jìn)在骨Peget病的發(fā)作中扮演重要的角色。因此，抑制1α，25-二羥基維生素D3對(duì)破骨細(xì)胞前體細(xì)胞的作用的化合物，即維生素D的拮抗劑樣化合物，可以根本地抑制骨Peget病患者骨吸收的加速，還可以期望比現(xiàn)有的骨吸收抑制劑具有更好的治療效果。
另一方面，由各種疾病，例如淋巴瘤(Blood，82卷，1383～1394頁(yè)，1993年)、結(jié)核(N.Ingl.J.Med.，311卷，1683～1685頁(yè)，1984年)、肉樣瘤病(J.Clin.Endocrinol.Metab.，60卷，960～966頁(yè)，1985年)、念珠菌病(Am.J.Med.，74卷，721～724頁(yè)，1983年)、肉芽腫(Am.J.Nephrol.，13卷，275～277頁(yè)，1993年)、麻風(fēng)病(Ann.Intern Med.，105卷，890～891頁(yè)，1986年)、原發(fā)性甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)癥、惡性腫瘤等疾病引起的維生素D產(chǎn)生亢進(jìn)導(dǎo)致高鈣血癥的發(fā)生。由于已知是活性維生素D3的作用而使得血鈣濃度上升，因此可以認(rèn)為對(duì)活性維生素D3拮抗的化合物，即維生素D3的拮抗劑，對(duì)于高鈣血癥的治療是有效的。
進(jìn)一步地，認(rèn)為維生素D3拮抗劑作為骨質(zhì)疏松癥的治療劑也是有效的。該疾病中骨吸收超過(guò)骨形成從而導(dǎo)致骨重量的減少，該疾病多在絕經(jīng)后或隨著年齡的增長(zhǎng)而發(fā)生。雙膦酸酯制劑、維生素D3衍生物、雌激素、降鈣素等可以作為治療藥物使用。并且近年來(lái)，具有迄今為止最強(qiáng)的骨形成促進(jìn)作用的甲狀旁腺激素(PTH)進(jìn)入臨床，使得更有效的藥物治療成為可能。但是，PTH為注射劑，使得其在便利性、藥物順應(yīng)性、價(jià)格等方面存在問(wèn)題。因此，如果便宜的口服制劑可以達(dá)到與PTH相同的效果，這種藥物是有用的。此外，PTH的分泌受血鈣或活性維生素D3即1α，25-二羥基維生素D3等的控制，伴隨這些成分濃度的下降PTH的分泌增加。因此，對(duì)1α，25-二羥基維生素D3有拮抗作用的化合物，即維生素D3拮抗劑可以促進(jìn)PTH的分泌，可以期望其能發(fā)揮與上述PTH制劑相同的作用。
此外，在第22屆醫(yī)藥化學(xué)專(zhuān)題討論會(huì)暨第11屆日本藥學(xué)會(huì)醫(yī)藥化學(xué)部會(huì)年會(huì)(其核心內(nèi)容于2002年11月5日出版)中，已經(jīng)公開(kāi)了下述式(1)中R1＝R2＝Me的化合物和R1＝Bn并且R2＝Me的化合物。但是，這些化合物不包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。而且，其中并沒(méi)有關(guān)于維生素D3拮抗活性的啟示。
另外，國(guó)際公開(kāi)WO 00/24712號(hào)說(shuō)明書(shū)中公開(kāi)了維生素D3側(cè)鏈上具有內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)的衍生物。但是，與本發(fā)明化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)相比，有下列不同點(diǎn)該化合物內(nèi)酯環(huán)上的氮原子未取代，并且25位上的取代基不包含羥基。其中也沒(méi)有關(guān)于維生素D3拮抗活性的啟示。
已知國(guó)際公開(kāi)WO 95/33716號(hào)說(shuō)明書(shū)、國(guó)際公開(kāi)WO 03/070716號(hào)說(shuō)明書(shū)、國(guó)際公開(kāi)WO 94/07853號(hào)說(shuō)明書(shū)、國(guó)際公開(kāi)WO 97/00242號(hào)說(shuō)明書(shū)和國(guó)際公開(kāi)WO 97/41096號(hào)說(shuō)明書(shū)中記載了作為具有維生素D3拮抗活性的維生素D3衍生物的化合物。然而，與本發(fā)明化合物相比，化學(xué)結(jié)構(gòu)上有明顯不同前二者側(cè)鏈上具有α-外甲內(nèi)酯(methylenelactone)結(jié)構(gòu)，后三者側(cè)鏈上具有22-烯-24-羥基結(jié)構(gòu)。
此外，國(guó)際公開(kāi)WO 03/000634號(hào)說(shuō)明書(shū)中雖然也公開(kāi)了具有維生素D3拮抗活性的維生素D3衍生物，但是與本發(fā)明的化合物不同，其1位結(jié)合有酯基。
已知維生素D3衍生物具有各種各樣非常有趣的生物活性，迄今為止眾多的研究者可以合成出各式各樣的維生素D3衍生物。不管怎樣，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)維生素D3拮抗活性的僅僅是三種相互沒(méi)有共通性、覆蓋范圍狹小的衍生物中。即，可以說(shuō)對(duì)于維生素D3衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與維生素D3拮抗活性之間的關(guān)系還沒(méi)有知識(shí)的積累。即使發(fā)現(xiàn)了一個(gè)維生素D3化合物具有維生素D3拮抗活性，也不能預(yù)料與之相比結(jié)構(gòu)上僅有稍許變化的化合物也具有維生素D3拮抗活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種對(duì)活性維生素D3的作用拮抗的化合物，即維生素D3拮抗劑。這種維生素D3拮抗劑被用作骨Peget病、高鈣血癥或骨質(zhì)疏松癥的治療劑的有效成分。
本發(fā)明人針對(duì)上述目的進(jìn)行研究，結(jié)果獲得了以下發(fā)明。
也就是說(shuō)，本發(fā)明為下式(1)表示的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物。
式(1)中，R1為C2～C10的烷基，或者芳環(huán)上可以被C1～C6的烷基、C1～C6的烷氧基、羥基、鹵素原子、或三氟甲基取代的C7～C15的芳烷基；R2為C1～C10的烷基，或者芳環(huán)上可以被C1～C6的烷基、C1～C6的烷氧基、羥基、鹵素原子、或三氟甲基取代的C7～C15的芳烷基；但R1為芐基并且R2為甲基的上述式(1)表示的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物除外。
23位和25位的立體構(gòu)型可以分別獨(dú)立地為(S)、(R)構(gòu)型。本發(fā)明還包括這些立體異構(gòu)體任意比例的混合物。
此外，本發(fā)明還包括含有上述式(1)表示的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物作為有效成分，治療選自高鈣血癥、骨Peget病和骨質(zhì)疏松癥中的一種或多種疾病的治療劑。而且，此處包括以R1為芐基并且R2為甲基的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物為有效成分的治療劑。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明中的術(shù)語(yǔ)定義如下。
烷基是指直鏈、支鏈、或者環(huán)狀的脂肪族烴基。C2～C10的烷基是指碳原子數(shù)為2～10的烷基，具體實(shí)例為乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、戊基、異戊基、己基、辛基、癸基、環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基和環(huán)己基等。同樣地，C1～C6的烷基的具體實(shí)例為甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、戊基、異戊基、己基、環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基和環(huán)己基等；C1～C10的烷基的具體實(shí)例為甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、戊基、異戊基、己基、辛基、癸基、環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基和環(huán)己基等。
C1～C6的烷氧基表示碳原子數(shù)為1～6的直鏈、支鏈或者環(huán)狀的脂肪族烴氧基。例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、戊氧基、異戊氧基、己氧基、環(huán)丙氧基、環(huán)丙基甲氧基、環(huán)己氧基等。
C7～C15的芳烷基為芳香烴基取代的直鏈、支鏈、或者環(huán)狀的脂肪族烴基，其總碳原子數(shù)為7～15。例如，芐基、苯乙基、3-苯基丙基、4-苯基丁基、5-苯基戊基、1-萘基甲基、2-萘基甲基、2-(1-萘基)乙基、2-(2-萘基)乙基、3-(1-萘基)丙基、3-(2-萘基)丙基、4-(1-萘基)丁基、4-(2-萘基)丁基、5-(1-萘基)戊基、5-(2-萘基)戊基等。
在本說(shuō)明書(shū)中，芐基有時(shí)用“Bn”表示。
上述式(1)中，R1為C2～C10的烷基，或者芳環(huán)上可以被C1～C6的烷基、C1～C6的烷氧基、羥基、鹵素原子、或三氟甲基取代的C7～C15的芳烷基。其中優(yōu)選異丙基、丁基、己基、辛基、芐基、苯乙基、3-苯基丙基、4-苯基丁基、2-萘基甲基或者4-甲氧基芐基，特別優(yōu)選芐基、苯乙基、4-苯基丁基或者4-甲氧基芐基。
上述式(1)中，R2為C1～C10的烷基，或者芳環(huán)上可以被C1～C6的烷基、C1～C6的烷氧基、羥基、鹵素原子、或三氟甲基取代的C7～C15的芳烷基。其中優(yōu)選甲基、乙基、丙基或者芐基，特別優(yōu)選甲基、乙基或者丙基。
上述式(1)中，23位和25位的立體構(gòu)型雖然可以分別獨(dú)立地為(S)、(R)構(gòu)型，但是優(yōu)選23(R)、25(R)構(gòu)型的化合物以及23(S)、25(S)構(gòu)型的化合物，特別優(yōu)選23(S)、25(S)構(gòu)型的化合物。
作為本發(fā)明式(1)表示的維生素D3衍生物的優(yōu)選具體實(shí)例，可以例舉出下表中的化合物。其中，如果沒(méi)有特別說(shuō)明的話，表中化合物的23位和25位的立體構(gòu)型可以為(S)構(gòu)型或者(R)構(gòu)型。



上述式(1)表示的維生素D3衍生物可由任何方法制備，例如可以根據(jù)反應(yīng)流程

圖1所示進(jìn)行。即，由維生素D2通過(guò)文獻(xiàn)已知的方法(例如，國(guó)際公開(kāi)WO 2004/067525號(hào)說(shuō)明書(shū))獲得的化合物(2)與結(jié)合了R1的羥胺在三乙基胺的存在下進(jìn)行反應(yīng)獲得硝酸靈(nitron)(3)。R2取代的丙烯酸酯(4)加成到硝酸靈(3)中獲得異唑烷衍生物(5)。當(dāng)R不是甲基時(shí)，將R先轉(zhuǎn)變?yōu)榧谆?；接著還原N-O鍵形成內(nèi)酰胺環(huán)；最后TBS基團(tuán)脫保護(hù)后獲得目標(biāo)產(chǎn)物(1)。
反應(yīng)流程圖1 目標(biāo)產(chǎn)物還可以由反應(yīng)流程圖2所示的方法獲得。即，使用由維生素D2通過(guò)文獻(xiàn)已知的方法(例如國(guó)際公開(kāi)WO 95/33716號(hào)說(shuō)明書(shū))獲得的化合物(6)，進(jìn)行與反應(yīng)流程圖1相同的反應(yīng)，內(nèi)酰胺環(huán)的羥基用TMS保護(hù)，從而獲得具有內(nèi)酰胺環(huán)的溴亞甲基衍生物(9)。該化合物利用Trost等的方法(J.Am.Chem.Soc.，1992年，114卷，9836～9845頁(yè))與烯炔化合物(10)(例如按照Tetrahedron Lett.，1994年，35卷，8119～8122頁(yè)記載的方法得到)在鈀催化劑的存在下進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，接著脫保護(hù)除去TBS基團(tuán)獲得目標(biāo)產(chǎn)物(1)。
反應(yīng)流程圖2 通過(guò)上述方法得到的維生素D3必要時(shí)可以轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的前面提及的可藥用溶劑化物。這種溶劑的實(shí)例為水、甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、丁醇、2-甲基-2-丙醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、叔丁基甲基醚、苯、甲苯、DMF、DMSO等。特別優(yōu)選水、甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、乙腈、丙酮、甲乙酮和乙酸乙酯。
作為藥物有效成分，本發(fā)明化合物可以制成通常的藥物制劑，可以口服的方式，或者通過(guò)靜脈、皮下、肌肉、經(jīng)皮、經(jīng)鼻、直腸等非口服的方式或者吸入的方式給藥。本發(fā)明化合物的有效成分的治療有效量因給藥方式、患者年齡、性別、疾病程度而異，但通常約為0.001～1000μg/天，優(yōu)選約0.01～100μg/天，給藥次數(shù)通常為1～3次/天。優(yōu)選制成滿足這些條件的制劑。
實(shí)施例下面，通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，但是本發(fā)明并不受此限制。各個(gè)實(shí)施例中的化合物編號(hào)與上述表中所示的化合物編號(hào)、或者上述反應(yīng)流程圖1或2中的化合物編號(hào)對(duì)應(yīng)。
參考例12-苯基乙基羥胺的制備
在氮?dú)夥諊?，?℃下向BH3-THF的THF溶液1.1mL(1.0M，1.1mmol)中滴入160.0mg反式-β-硝基苯乙烯(1.1mmol)的THF溶液(2.2mL)。加入3.3mg的NaBH4(0.087mmol)，室溫下攪拌20分鐘。在0℃下加入5mL水，加入2M的HCl水溶液使溶液為酸性，在65℃下攪拌4小時(shí)。用乙酸乙酯萃取后，向水層中加入15％的NaOH水溶液和NaCl，進(jìn)一步用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用無(wú)水硫酸鎂干燥后，過(guò)濾，蒸去溶劑。殘?jiān)瞄W蒸柱色譜(フラツシユカラムクロマトグラフイ一)(氯仿∶甲醇＝1∶0→10∶1)純化得到白色結(jié)晶目標(biāo)產(chǎn)物(62.7mg，43％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.47(brs，1H)，7.31-7.20(m，5H)，3.26(t，J＝7.3Hz，2H)，2.97(t，J＝7.3Hz，2H)。
參考例23-苯基丙基羥胺的制備 (1)向0.16mL的3-苯基丙醛(1.20mmol)的二氯甲烷溶液5.0mL中加入166.7mg羥胺鹽酸鹽(2.40mmol)和0.7mL的Et3N(5.05mmol)，室溫?cái)嚢?小時(shí)。在0℃下加入飽和碳酸氫鈉水溶液，用二氯甲烷萃取。用無(wú)水硫酸鎂干燥后，過(guò)濾，蒸去溶劑。殘?jiān)瞄W蒸柱色譜(己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)純化得到白色結(jié)晶化合物A(190.0mg，100％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.47(t，J＝6.0Hz，1H)，7.32-7.19(m，5H)，6.80(brs，1H)，2.83(dd，J＝7.3，15.0Hz，2H)，2.74(m，1H)，2.54(m，1H)。
(2)在室溫下向46.8mg的化合物A(0.31mmol)的甲醇溶液2.0mL中加入13.8mg的NaBH3CN(0.22mmol)。加入2M的HCl-MeOH溶液，維持pH＝3，在室溫下攪拌2小時(shí)。加入15％的NaOH水溶液使之成為堿性后，加入氯化鈉，用苯萃取。用無(wú)水硫酸鎂干燥后，過(guò)濾，蒸去溶劑。殘?jiān)瞄W蒸柱色譜(氯仿∶甲醇＝1∶0→10∶1)純化得到白色結(jié)晶目標(biāo)產(chǎn)物(30.7mg，65％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.31-7.18(m，5H)，5.06(brs，2H)，2.97(t，J＝7.2Hz，2H)，2.67(t，J＝7.7Hz，2H)，1.89(m，2H)。
參考例34-苯基丁基羥胺的制備 (1)在氮?dú)夥諊?，向CH3NO2(8.1mL)中加入0.27mL的Et3N(1.95mmol)，0℃下攪拌5分鐘。在0℃下加入2.0mL的3-苯基丙醛(15.08mmol)，攪拌20小時(shí)。用乙酸乙酯稀釋?zhuān)来斡蔑柡吞妓釟溻c水溶液、飽和食鹽水洗滌。用無(wú)水硫酸鎂干燥后，過(guò)濾，蒸去溶劑。殘?jiān)瞄W蒸柱色譜(己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)純化得到白色結(jié)晶化合物B(2.72g，93％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.32-7.17(m，5H)，4.40(m，2H)，4.32(m，1H)，2.89-2.72(m，2H)，2.60(brs，1H)，1.96-1.76(m，2H)。
(2)在氮?dú)夥諊?，?00.0mg化合物B(2.55mmol)的二氯甲烷溶液10.0mL中加入1.4mL的Et3N(10.1mmol)后，于0℃下滴入0.6mL的MsCl(7.7mmol)，0℃下攪拌3小時(shí)。加水后，用乙酸乙酯萃取。用飽和食鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥后，蒸去溶劑。殘?jiān)瞄W蒸柱色譜(己烷∶乙酸乙酯＝20∶1)純化得到白色結(jié)晶化合物C(396.1mg，88％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.34-7.23(m，5H)，7.18(d，J＝7.7Hz，1H)，6.96(d，J＝13.3Hz，1H)，2.84(t，J＝7.5Hz，2H)，2.60(dd，J＝7.5，14.7Hz，2H)。
(3)在氮?dú)夥諊校?℃下向1.02M的BH3-THF的2.2mL溶液(2.24mmol)中滴入396.1mg化合物C(2.24mmol)的THF溶液20.0mL。加入3.0mg的NaBH4(0.08mmol)，在室溫下攪拌1小時(shí)。在0℃下加入20mL水后，加入2M的HCl水溶液使之成為酸性，在65℃下攪拌2小時(shí)。用乙酸乙酯萃取后，向水層中加入15％的NaOH水溶液和氯化鈉，進(jìn)一步用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用無(wú)水硫酸鎂干燥后，過(guò)濾，蒸去溶劑。殘?jiān)瞄W蒸柱色譜(氯仿∶甲醇＝10∶1)純化得到白色結(jié)晶目標(biāo)產(chǎn)物(286.2mg，77％)。
1H NMR(CDCl3)δ9.88(brs，2H)，7.28-7.14(m，5H)，3.28(brs，2H)，2.63(t，J＝7.6Hz，2H)，1.89(m，2H)，1.70(m，2H)。
參考例44-甲氧基芐羥胺的制備 (1)向1.4mL 4-甲氧基苯甲醛(11.57mmol)的二氯甲烷溶液50.0mL中加入1.39g羥胺鹽酸鹽(20mmol)和5.5mL的Et3N(39.68mmol)，室溫?cái)嚢?4小時(shí)。在0℃下加入飽和碳酸氫鈉水溶液，用二氯甲烷萃取。用無(wú)水硫酸鎂干燥后，過(guò)濾，蒸去溶劑。殘?jiān)瞄W蒸柱色譜(氯仿)純化得到白色結(jié)晶化合物D(1.87g，100％)。
1H NMR(CDCl3)δ8.10(s，1H)，7.52(d，J＝8.8Hz，2H)，6.91(d，J＝8.8Hz，2H)，3.84(s，3H)。
(2)在室溫下向77.8mg化合物D(0.52mmol)的甲醇溶液1.0mL中加入22.7mg的NaBH3CN(0.36mmol)。加入2M的HCl-MeOH溶液，維持pH＝3，在室溫下攪拌3小時(shí)。加入15％的NaOH水溶液使之成為堿性后，加入氯化鈉，用乙酸乙酯萃取。用無(wú)水硫酸鎂干燥后，過(guò)濾，蒸去溶劑。殘?jiān)瞄W蒸柱色譜(氯仿∶甲醇＝1∶0→10∶1)純化得到白色結(jié)晶目標(biāo)產(chǎn)物(73.5mg，92％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.25(d，J＝8.6Hz，2H)，6.87(d，J＝8.6Hz，2H)，4.73(brs，2H)，3.97(s，2H)，3.80(s，3H)。
參考例52-乙基丙烯酸鄰苯二甲酰亞氨基甲酯的制備(反應(yīng)流程圖1的化合物(4)(R2＝Et，R＝Pim)) 將250mg的2-乙基丙烯酸(2.5mmol)溶于8.0mL的無(wú)水二甲苯甲酰胺中，加入660.0mg的N-溴代甲基鄰苯二甲酰亞胺(2.8mmol)和291.0mg的氟化鉀(5.0mmol)，在氮?dú)夥諊?，?0℃攪拌12小時(shí)。往反應(yīng)液減壓濃縮所得的殘?jiān)屑尤?0mL水，用二氯甲烷萃取，有機(jī)層用硫酸鎂干燥。減壓濃縮所得殘?jiān)霉枘z柱色譜(己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)純化得到目標(biāo)產(chǎn)物(463.1mg，72％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.94(dd，J＝5.4，3.2Hz，2H)，7.79(dd，J＝2.8，1.4Hz，2H)，6.16(d，J＝1.0Hz，1H)，5.80(s，2H)，5.57(d，J＝1.5Hz，1H)，2.35-2.25(m，2H)，1.06(t，J＝7.4Hz，3H)。
參考例62-丙基丙烯酸鄰苯二甲酰亞氨基甲酯的制備(反應(yīng)流程圖1的化合物(4)(R2＝Pr，R＝Pim)) 使用2-丙基丙烯酸(300mg，2.63mmol)按照與參考例5同樣的方法進(jìn)行反應(yīng)，得到目標(biāo)產(chǎn)物(643.2mg，90％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.94(dd，J＝5.4，2.7Hz，2H)，7.79(dd，J＝5.4，2.7Hz，2H)，6.16(d，J＝0.7Hz，1H)，5.80(s，2H)，5.57(d，J＝1.5Hz，1H)，2.32-2.23(m，2H)，1.55-1.43(m，2H)，0.96-0.89(m，3H)。
實(shí)施例11α，25-二羥基維生素D3-26，23-內(nèi)酰胺-N-異丙基(化合物11)的制備
(1)在氮?dú)夥諊校ㄟ^(guò)文獻(xiàn)記載的方法(例如國(guó)際公開(kāi)WO2004/067525號(hào)說(shuō)明書(shū))得到的化合物(2)53.7mg(0.092mmol)的二氯甲烷溶液2.0mL中加入20.5mg異丙基羥胺(0.18mmol)和0.05mL的Et3N(0.36mmol)，在室溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)液冷卻到0℃，加入飽和NH4Cl水溶液，用二氯甲烷萃取。用無(wú)水硫酸鎂干燥后，過(guò)濾，蒸去溶劑。殘?jiān)瞄W蒸柱色譜(己烷∶乙酸乙酯＝10∶1→氯仿∶甲醇＝10∶1)純化得到無(wú)色透明的油狀化合物(3)(R1＝iPr)(47.1mg，80％)。
1H NMR(CDCl3)δ6.74(t，J＝5.9Hz，1H)，6.23(d，J＝11.0Hz，1H)，6.01(d，J＝11.5Hz，1H)，5.17(d，J＝1.5Hz，1H)，4.85(d，J＝2.4Hz，1H)，4.36(dd，J＝3.4，6.3Hz，1H)，4.18(m，1H)，4.02(m，1H)，2.82(d，J＝12.2Hz，1H)，2.57(m，1H)，2.44(d，J＝12.9Hz，1H)，2.31(m，1H)，2.21(dd，J＝7.6，12.9Hz，1H)，2.01-1.25(m，14H)，1.41(d，J＝6.3Hz，6H)，0.99(d，J＝6.6Hz，3H)，0.87(m，18H)，0.55(s，3H)，0.06(m，12H)。
(2)在氮?dú)夥諊校蛏鲜鏊玫幕衔?3)(R1＝iPr)(47.1mg，0.073mmol)的甲苯溶液3.0mL中加入0.078mL甲基丙烯酸甲酯(化合物(4)(R2＝R＝Me)，0.73mmol)，在90℃下攪拌24小時(shí)。冷卻到室溫后，蒸去溶劑，殘?jiān)瞄W蒸柱色譜(己烷∶乙酸乙酯＝50∶1→10∶1)純化，得到無(wú)色透明的油狀化合物(5)(R1＝iPr，R2＝R＝Me)(51.8mg，95％)。
1H NMR(CDCl3)δ6.24(d，J＝11.0Hz)，6.02(d，J＝11.2H)，5.18(brs)，4.86(d，J＝2.4Hz)，4.37(m)，4.20(m)，3.74(m)，3.25(m)，3.12(dd，J＝7.3，12.7Hz)，3.01-2.93(m)，2.80(m)，2.45(m)，2.22(dd，J＝7.6，12.9Hz)，2.02-0.94(m)，1.51(m)，0.89(m)0.55(m)，0.07(m)。
(3)將上述得到的化合物(5)(R1＝iPr，R2＝R＝Me)51.8mg(0.070mmol)溶于乙腈-水混合溶劑(7∶1，3.5mL)中，并加入66.7mg六羰基鉬(0.25mmol)和0.5mg的NaBH4(0.013mmol)，90℃下加熱回流4小時(shí)。硅藻土過(guò)濾后，蒸去溶劑，殘?jiān)瞄W蒸柱色譜(氯仿∶甲醇＝1∶0→10∶1)純化，得到無(wú)色透明的油狀內(nèi)酰胺環(huán)化物(23.9mg，48％)。
1H NMR(CDCl3)δ6.24(d，J＝11.0Hz)，6.02(d，J＝10.7Hz)，5.18(s)，4.86(s)，4.38(m)，4.19(m)，3.96-3.16(m)，2.83(d，J＝12.2Hz)，2.45(d，J＝13.4Hz)，2.36-1.26(m)，1.00(m)，0.88(m)，0.54(m)，0.07(m)。
在0℃下向所得的內(nèi)酰胺環(huán)化物40.5mg(0.083mmol)的THF溶液3.0mL中加入2mL的HF·Py，攪拌3小時(shí)。用乙酸乙酯稀釋后，加入固體碳酸氫鈉和飽和碳酸氫鈉水溶液。用乙酸乙酯萃取后，用飽和食鹽水洗滌。用無(wú)水硫酸鎂干燥后，過(guò)濾，蒸去溶劑。殘?jiān)瞄W蒸柱色譜(氯仿∶甲醇＝1∶0→10∶1)純化，得到無(wú)色透明的油狀化合物11(16.6mg，60％)。將18.8mg這樣得到的化合物11用反相HPLC(ODS柱，流動(dòng)相A＝95％H2O/CH3CN，B ＝0.5％H2O/60％CH3CN/MeOH，B＝75％)分離純化非對(duì)映異構(gòu)體，得到化合物11a(23S，25S體)1.6mg(5.1％)，化合物11b(23R，25R體)1.8mg(5.8％)，化合物11c(23S，25R體)1.9mg(6.1％)，化合物11d(23R，25S體)2.2mg(7.1％)。
化合物11a1H-NMR(CDCl3)δ6.38(d，J＝11.5Hz，1H)，6.03(d，J＝11.2Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.00(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.24(brs，1H)，4.02-3.92(m，1H)，3.73-3.63(m，1H)，2.87-2.80(m，1H)，2.64-2.21(m，4H)，2.07-1.22(m，25H)，1.00(d，J＝5.9Hz，3H)，0.59(s，3H)。
化合物11b1H NMR(CDCl3)δ6.38(D，J＝11.2Hz，1H)，6.03(d，J＝10.7Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.00(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.24(brs，1H)，3.95-3.84(m，1H)，3.66-3.55(m，1H)，2.88-2.80(m，1H)，2.65-2.26(m，4H)，2.08-1.08(m，25H)，1.02(d，J＝6.3Hz，3H)，0.65(s，3H)。
化合物11c
1H-NMR(CDCl3)δ6.38(D，J＝11.2Hz，1H)，6.02(d，J＝11.5Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.00(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.24(brs，1H)，3.97-3.88(m，1H)，3.60-3.49(m，1H)，2.87-2.80(m，1H)，2.63-2.53(m，2H)，2.32(dd，J＝12.6，6.7Hz，1H)，2.20(dd，J＝12.6，6.7Hz，1H)，2.05-1.20(m，25H)，0.99(d，J＝6.3Hz，3H)，0.57(s，3H)。
化合物11d1H-NMR(CDCl3)δ6.38(d，J＝11.2Hz，1H)，6.03(d，J＝11.2Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.00(s，1H)，4.43(brs，1H)，4.23(brs，1H)，3.89-3.80(m，1H)，3.48-3.40(m，1H)，2.87-2.80(m，1H)，2.63-2.50(m，2H)，2.32(dd，J＝12.7，6.5Hz，1H)，2.25(dd，J＝12.7，6.8Hz，1H)，2.10-1.15(m，25H)，1.03(d，J＝6.6Hz，3H)，0.57(s，3H)。
參考例71α，25-二羥基維生素D3-26，23-內(nèi)酰胺-N-芐基(化合物51)的制備 (1)使用化合物(2)63.3mg(0.11mmol)和芐羥胺35.0mg(0.22mmol)按照與實(shí)施例1(1)同樣的方法得到無(wú)色透明的油狀化合物(3)(R1＝Bn)(77.7mg，100％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.39-7.32(m，5H)，6.78(brs，1H)，6.22(d，J＝11.0Hz，1H)，6.00(d，J＝11.0Hz，1H)，5.17(s，1H)，4.94(brs，2H)，4.85(m，1H)，4.36(m，1H)，4.18(m，1H)，2.81(d，J＝11.2Hz，1H)，2.43(d，J＝12.8Hz，1H)，2.21(m，1H)，1.96-1.19(m，16H)，0.94-0.87(m，21H)，0.51(s，3H)，0.05(s，12H)。
(2)使用如上得到的化合物(3)(R1＝Bn)77.7mg(0.12mmol)按照與實(shí)施例1(2)相同的方法得到無(wú)色透明的油狀化合物(5)(R1＝Bn，R2＝R＝Me)(68.0mg，77％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.40-7.31(m)，6.23(d，J＝10.0Hz)，6.01(d，J＝10.8Hz)，5.18(m)，4.86(m)，4.38(m)，4.19(m)，4.13-3.88(m)，3.76(s)，3.13-1.26(m)，0.89(s)，0.69(d，J＝6.1Hz)，0.54-0.50(m)，0.06(s)。
(3)使用如上得到的化合物(5)(R1＝Bn，R2＝R＝Me)41.0mg(0.052mmol)按照與實(shí)施例1(3)相同的方法得到無(wú)色透明的油狀內(nèi)酰胺環(huán)化物(21.7mg，55％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.38-7.20(m)，6.23-6.21(m)，6.02-5.99(m)，5.18(s)，4.86(m)，4.37(m)，4.19(m)，4.09(d，J＝15.0Hz)，3.98(d，J＝15.0Hz)，3.52(m)，3.30(m)，2.81(m)，2.43(m)，2.27-1.25(m)，1.10-0.87(m)，0.54-0.46(m)，0.10-0.06(m)。
使用如上得到的內(nèi)酰胺環(huán)化物21.7mg(0.029mmol)按照與實(shí)施例1(3)同樣的方法(非對(duì)映異構(gòu)體分離用正相HPLC(硅膠柱，流動(dòng)相己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝35/52/13，或者己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝51/45/4)進(jìn)行)，分別得到化合物51a(23S，25S體)2.3mg(15％)，化合物51b(23R，25R體)2.3mg(15％)，化合物51c(23S，25R體)1.5mg(9.9％)，化合物51d(23R，25S體)0.6mg(3.8％)。
化合物51a[α]24D＝+3.54(c0.20，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.33-7.22(m，5H)，6.37(d，J＝11.5Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.32(s，1H)，4.99(s，1H)，4.97(d，J＝11.1Hz，1H)，4.43(m，1H)，4.23(m，1H)，3.97(d，J＝12.0Hz，1H)，3.51(m，1H)，2.82(d，J ＝12.4Hz，1H)，2.59(d，J＝10.3Hz，1H)，2.32(dd，J＝6.4，13.7Hz，1H)，2.27(dd，J＝7.7，13.7Hz，1H)，2.05-1.84(m，5H)，1.66(dd，J＝5.1，13.3Hz，1H)，1.68-1.17(m，12H)，1.49(s，3H)，0.88(m，2H)，0.77(d，J＝6.0Hz，3H)，0.53(s，3H)。
化合物51b[α]24D＝+13.73(c0.32，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.33-7.18(m，5H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H)，6.00(d，J＝11.1Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.00(s，1H)，4.98(d，J＝15.0Hz，1H)，4.44(m，1H)，4.23(m，1H)，4.06(d，J＝15.4Hz，1H)，3.50(m，1H)，2.81(d，J＝12.8Hz，1H)，2.60(d，J＝9.8Hz，1H)，2.48(brs，1H)，2.36(dd，J＝7.7，13.3Hz，1H)，2.31(dd，J＝6.4，13.3Hz，1H)，2.04(m，1H)，1.92(m，3H)，1.77(dd，J＝5.1，13.3Hz，1H)，1.66-1.20(m，11H)，1.50(s，3H)，1.03(m，2H)，0.88(m，1H)，0.86(d，J＝6.4Hz，3H)，0.48(s，3H)。
化合物51c[α]24D＝+13.75(c0.155，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.34-7.18(m，5H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H)，6.00(d，J＝11.5Hz，1H)，5.32(s，1H)，5.00(d，J＝14.5Hz，1H)，4.99(s，1H)，4.43(m，1H)，4.23(m，1H)，4.06(d，J＝15.2Hz，1H)，3.27(m，1H)，2.82(d，J＝12.4Hz，1H)，2.76(brs，1H)，2.60(d，J＝13.5Hz，1H)，2.33(m，1H)，2.21(dd，J＝6.4，12.8Hz，1H)，2.19-1.95(m，5H)，1.73(dd，J＝8.1，12.8Hz，1H)，1.68-1.20(m，12H)，1.35(s，3H)，0.88(m，4H)，0.76(d，J＝6.4Hz，3H)，0.51(s，3H)。
化合物51d[α]24D＝-11.38(c0.058，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.33-7.14(m，5H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H)，6.00(d，J＝11.5Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.01(d，J＝15.0Hz，1H)，4.99(s，1H)，4.43(m，1H)，4.23(m，1H)，4.06(d，J＝15.2Hz，1H)，3.28(m，1H)，2.81(d，J＝12.8Hz，1H)，2.68(brs，1H)，2.60(d，J＝16.7Hz，1H)，2.32(m，1H)，2.27(dd，J＝6.4，12.8Hz，1H)，2.17-1.92(m，5H)，1.87(dd，J＝8.1，12.8Hz，1H)，1.75-1.22(m，11H)，1.39(s，3H)，1.06(m，2H)，0.87(d，J＝6.4Hz，3H)，0.48(s，3H)。
實(shí)施例21α，25-二羥基維生素D3-26，23-內(nèi)酰胺-N-(2-苯乙基)(化合物61)的制備 (1)使用化合物(2)27.4mg(0.047mmol)和參考例1所得的2-苯乙基羥胺13.0mg(0.095mmol)按照與實(shí)施例1(1)同樣的方法得到無(wú)色透明的油狀化合物(3)(R1＝Ph(CH2)2)(33.5mg，100％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.30-7.20(m，5H)，6.38(brs，1H)，6.23(d，J＝11.1Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.18(s，1H)，4.86(d，J＝2.6Hz，1H)，4.37(dd，J＝3.4，6.8Hz，1H)，4.19(m，1H)，3.96(t，J＝6.6Hz，2H)，3.21(m，2H)，2.82(d，J＝12.4Hz，1H)，2.44(m，2H)，2.23(m，2H)，1.95-1.17(m，14H)，0.87(s，18H)，0.79(d，J＝6.8Hz，3H)，0.50(s，3H)，0.06(s，12H)。
(2)使用如上得到的化合物(3)(R1＝Ph(CH2)2)73.5mg(0.104mmol)按照與實(shí)施例1(2)同樣的方法得到無(wú)色透明的油狀化合物(5)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝R＝Me)(75.7mg，90％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.28-7.19(m)，6.23(d，J＝11.1Hz)，6.02(d，J＝11.1Hz)，5.18(s)，4.86(s)，4.38(m)，4.19(m)，3.78-3.76(m)，3.08-1.24(m)，0.94-0.88(m)0.53-0.50(m)，0.06(s)。
(3)使用如上得到的化合物(5)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝R＝Me)75.7mg(0.094mmol)按照與實(shí)施例1(3)相同的方法得到無(wú)色透明的油狀內(nèi)酰胺環(huán)化物(28.8mg，40％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.31-7.19(m)，6.23(d，J＝10.7Hz)，6.02-6.00(m)，5.19-5.18(m)，4.87-4.86(m)，4.38(m)，4.19(m)，4.01-3.76(m)，3.49(m)，3.28(m)，3.20-3.07(m)，2.93-2.72(m)，2.45(d，J＝11.3Hz)，2.35-1.14(m)，0.98-0.87(m)，0.56-0.52(m)，0.08-0.06(m)。
使用如上得到的內(nèi)酰胺環(huán)化物28.8mg(0.037mmol)按照與實(shí)施例1(3)同樣的方法(非對(duì)映異構(gòu)體分離用正相HPLC(硅膠柱，流動(dòng)相己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝35/52/13，或者己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝14/81/5)進(jìn)行)，分別得到化合物61a(23S，25S體)5.2mg(26％)，化合物61b(23R，25R體)5.7mg(28％)，化合物61c(23S，25R體)1.6mg(7.9％)，化合物61d(23R，25S體)2.2mg(11％)。
化合物61a[α]24D＝+11.78(c0.52，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.31-7.21(m，5H)，6.37(d，J＝11.1Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.32(s，1H)，4.99(s，1H)，4.43(dd，J＝4.3，7.7Hz，1H)，4.23(m，1H)，3.79(m，1H)，3.47(m，1H)，3.19(m，1H)，2.90(m，1H)，2.85-2.77(m，2H)，2.60(d，J＝9.8Hz，1H)，2.32(dd，J＝6.8，13.3Hz，1H)，2.23(dd，J＝7.3，13.3Hz，1H)，2.01-1.21(m，20H)，1.41(s，3H)，0.87(d，J＝5.6Hz，3H)，0.55(s，3H)。
化合物61b[α]24D＝+32.12(c0.57，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.31-7.20(m，5H)，6.37(d，J＝11.1Hz，1H)，6.02(d，J＝11.1Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.00(s，1H)，4.44(dd，J＝4.3，7.7Hz，1H))，4.24(m，1H)，3.83(m，1H)，3.48(m，1H)，3.18(m，1H)，2.91(m，1H)，2.85-2.76(m，2H)，2.60(dd，J＝3.0，13.3Hz，1H)，2.53(brs，1H)，2.32(dd，J＝7.7，13.3Hz，1H)，2.02-1.20(m，19H)，1.69(dd，J＝5.1，13.3Hz，1H)，1.49(s，3H)，0.96(d，J＝6.8Hz，3H)，0.56(s，3H)。
化合物61c[α]24D＝+56.13(c0.16，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.30-7.19(m，5H)，6.37(d，J＝11.5Hz，1H)，6.02(d，J＝11.1Hz，1H)，5.33(s，1H)，4.99(s，1H)，4.44(dd，J＝4.3，7.7Hz，1H)，4.23(m，1H)，3.97(m，1H)，3.26(m，1H)，3.19(m，1H)，2.90(m，1H)，2.83(d，J＝13.3Hz，1H)，2.76(m，1H)，2.61(d，J＝13.3Hz，1H)，2.31(dd，J＝6.4，13.3Hz，1H)，2.14(dd，J＝6.4，12.8Hz，1H)，2.01-1.13(m，19H)，1.62(dd，J＝8.1，12.8Hz，1H)，1.25(s，3H)，0.89(d，J＝6.0Hz，3H)，0.54(s，3H)。
化合物61d 24D＝+1.81(c0.22，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.28-7.16(m，5H)，6.36(d，J＝11.5Hz，1H)，6.01(d，J＝11.5Hz，1H)，5.32(s，1H)，4.99(s，1H)，4.43(m，1H)，4.22(m，1H)，3.96(m，1H)，3.26(m，1H)，3.18(m，1H)，2.89(m，1H)，2.81(m，1H)，2.72(m，1H)，2.58(m，1H)，2.57-2.27(m，2H)，2.17(dd，J＝6.4，12.4Hz，1H)，2.02-1.13(m，18H)，1.75(dd，J＝8.1，12.4Hz，1H)，1.23(s，3H)，0.96(d，J＝6.4Hz，3H)，0.55(s，3H)。
實(shí)施例31α，25-二羥基維生素D3-26，23-內(nèi)酰胺-N-(3-苯基)丙基(化合物71)的制備 (1)使用化合物(2)120.7mg(0.206mmol)和參考例2所得的3-苯基丙羥胺(63.0mg，0.42mmol)按照與實(shí)施例1(1)同樣的方法得到無(wú)色透明的油狀化合物(3)(R1＝Ph(CH2)3)(166.0mg，100％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.30-7.18(m，5H)，6.65(t，J＝5.7Hz，1H)，6.24(d，J＝11.2Hz，1H)，6.02(d，J＝11.2Hz，1H)，5.18(d，J＝1.5Hz，1H)，4.86(d，J＝2.4Hz，1H)，4.37(m，1H)，4.21(m，1H)，3.77(m，1H)，2.87-2.81(m，2H)，2.68(t，J＝7.4Hz，2H)，2.61-2.43(m，3H)，2.27(m，2H)，2.00-1.32(m，14H)，1.01(d，J＝6.6Hz，3H)，0.88(m，18H)，0.56(s，3H)，0.07(s，12H)。
(2)使用如上得到的化合物(3)(R1＝Ph(CH2)3)166.0mg(0.23mmol)按照與實(shí)施例1(2)同樣的方法得到無(wú)色透明的油狀化合物(5)(R1＝Ph(CH2)3，R2＝R＝Me)(151.2mg，90％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.30-7.14(m)，6.24(d，J＝11.2Hz)，6.02(d，J＝11.2Hz)，5.19(m)，4.87(m)，4.38(m)，4.20(m)，3.76-3.72(m)，2.85-2.44(m)，2.24(dd，J＝7.7，12.7Hz)，1.97-1.26(m)，0.90-0.88(m)，0.54-0.51(m)，0.07(m)。
(3)使用如上得到的化合物(5)(R1＝Ph(CH2)3，R2＝R＝Me)151.2mg(0.184mmol)按照與實(shí)施例1(3)相同的方法得到無(wú)色透明的油狀內(nèi)酰胺環(huán)化物(109.4mg，75％)。
1H NMR(CDClx)δ7.35-7.18(m)，6.26(d，J＝11.2Hz)，6.05(d，J＝11.2Hz)，5.23(s)，5.21(s)，4.91(s)，4.90(s)，4.41(m)，4.23(m)，3.72-3.44(m)，3.03(m)，2.86(d，J＝12.9Hz)，2.61(m)，2.48(d，J＝11.5Hz)，2.43-2.22(m)，2.01-1.27(m)，0.92(m)，0.59-0.55(m)，0.08(m)。
使用如上得到的內(nèi)酰胺環(huán)化物95.0mg(0.12mmol)按照與實(shí)施例1(3)同樣的方法(非對(duì)映異構(gòu)體分離用正相HPLC(硅膠柱，流動(dòng)相己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝32/58/10，或者己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝19/78/3)進(jìn)行)，分別得到化合物71a(23S，25S體)14.2mg(21％)，化合物71b(23R，25R體)14.4mg(21％)，化合物71c(23S，25R體)9.2mg(14％)，化合物71d(23R，25S體)7.6mg(11％)。
化合物71a[α]24D＝+10.47(c0.45，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.28(m，2H)，7.19(m，3H)，6.37(d，J＝11.1Hz，1H)，6.02(d，J＝11.1Hz，1H)，5.33(s，1H)，4.99(s，1H)，4.43(dd，J＝4.3，7.7，Hz，1H)，4.23(m，1H)，3.68(m，1H)，3.60(m，1H)，3.01(m，1H)，2.83(d，J＝12.8Hz，1H)，2.63(m，3H)，2.32(m，1H)，2.29(dd，J＝7.3，13.3Hz，1H)，2.07-1.25(m，21H)，1.60(dd，J＝5.6，13.3Hz，1H)，1.43(s，3H)，0.95(d，J＝5.6Hz，3H)，0.57(s，3H)。
化合物71b[α]24D＝+26.19(c0.57，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.27(m，2H)，7.18(m，3H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H))，6.02(d，J＝11.5Hz，1H)，5.35(s，1H)，5.00(s，1H)，4.44(m，1H)，4.24(m，1H)，3.61(m，2H)，3.00(m，1H)，2.83(m，1H)，2.61(m，3H)，2.37(dd，J＝7.7，13.3Hz，1H)，2.32(dd，J＝6.4，13.3Hz，1H)，2.04-1.25(m，21H)，1.71(dd，J＝5.1，13.3Hz，1H)，1.43(s，3H)，0.97(d，J＝6.8Hz，3H)，0.53(s，3H)。
化合物71c[α]24D＝+56.21(c0.65，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.29(m，2H)，7.19(m，3H)，6.37(d，J＝11.1Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.33(s，1H)，4.99(s，1H)，4.43(dd，J＝4.3，7.7Hz，1H)，4.23(m，1H)，3.63(m，1H)，3.48(m，1H)，3.01(m，1H)，2.83(d，J＝12.8Hz，1H)，2.60(m，3H)，2.31(dd，J＝6.4，13.3Hz，1H)，2.23(m，1H)，2.04-1.24(m，22H)，1.33(s，3H)，0.95(d，J＝6.0Hz，3H)，0.55(s，3H)。
化合物71d 24D＝+3.58(c0.24，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.29(m，2H)，7.18(m，3H)，6.38(d，J＝11.1Hz，1H)，6.03(d，J＝11.1Hz，1H)，5.35(s，1H)，5.01(s，1H)，4.44(m，1H)，4.24(m，1H)，3.66(m，1H)，3.43(m，1H)，3.02(m，1H)，2.83(d，J＝12.8Hz，1H)，2.60(m，3H)，2.32(dd，J＝6.4，13.3Hz，1H)，2.27(dd，J＝6.4，12.8Hz，1H)，2.08-1.06(m，21H)，1.81(dd，J＝7.3，12.8Hz，1H)，1.33(s，3H)，1.00(d，J＝6.4Hz，3H)，0.54(s，3H)。
實(shí)施例41α，25-二羥基維生素D3-26，23-內(nèi)酰胺-N-(4-苯基)丁基(化合物81)的制備 (1)使用化合物(2)112.0mg(0.19mmol)和參考例3所得的4-苯基丁羥胺63.0mg(0.38mmol)按照與實(shí)施例1(1)同樣的方法得到無(wú)色透明的油狀化合物(3)(R1＝Ph(CH2)4)(143mg，100％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.29-7.15(m，5H)，6.66(m，1H)，6.23(d，J＝11.2Hz，1H)，6.01(d，J＝11.2Hz，1H)，5.18(d，J＝1.5Hz，1H)，4.86(d，J＝2.2Hz，1H)，4.37(m，1H)，4.19(m，1H)，3.76(t，J＝6.8Hz，2H)，2.83(d，J＝11.7Hz，1H)，2.66(t，J＝7.7Hz，2H)，2.55(d，J＝18.3Hz，1H)，2.45(d，J＝12.9Hz，1H)，2.35(m，1H)，2.22(dd，J＝7.8，13.2Hz，1H)，1.97(m，2H)，1.91-1.30(m，14H)，1.66(m，2H)，0.99(d，J＝6.6Hz，3H)，0.89(s，9H)，0.88(s，9H)，0.55(s，3H)，0.06(s，12H)。
(2)使用如上得到的化合物(3)(R1＝Ph(CH2)4)143.0mg(0.19mmol)按照與實(shí)施例1(2)同樣的方法得到無(wú)色透明的油狀化合物(5)(R1＝Ph(CH2)4，R2＝R＝Me)(113.8mg，72％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.29-7.16(m)，6.24(d，J＝11.0Hz)，6.02(d，J＝11.0Hz)，5.18(s)，4.87(s)，4.38(m)，4.19(m)，3.73(m)，3.00-1.26(m)，0.95-0.88(m)，0.54(s)，0.06(s)。
(3)使用如上得到的化合物(5)(R1＝Ph(CH2)4，R2＝R＝Me)113.8mg(0.14mmol)按照與實(shí)施例1(3)相同的方法得到無(wú)色透明的油狀內(nèi)酰胺環(huán)化物(93.6mg，85％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.31-7.16(m)，6.24(d，J＝11.2Hz)，6.03(d，J＝10.8Hz)，5.20(m)，4.89(m)，4.39(m)，4.20(m)，3.66-2.94(m)，2.85(d，J＝11.2Hz)，2.67-2.61(m)，2.46(d，J＝9.9Hz)，2.37-1.27(m)，0.99-0.89(m)，0.57-0.54(m)，0.08(m)。
使用如上得到的內(nèi)酰胺環(huán)化物93.6mg(0.12mmol)按照與實(shí)施例1(3)同樣的方法(非對(duì)映異構(gòu)體分離用正相HPLC(硅膠柱，流動(dòng)相己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝30/60/10，或者己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝15/82/3)進(jìn)行)，分別得到化合物81a(23S，25S體)11.3mg(17％)，化合物81b(23R，25R體)11.5mg(17％)，化合物81c(23S，25R體)8.3mg(12％)，化合物81d(23R，25S體)6.9mg(10％)。
化合物81a[α]24D＝+12.89(c0.94，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.27(m，2H)，7.17(m，3H)，6.37(d，J＝11.1Hz，1H)，6.02(d，J＝11.5Hz，1H)，5.33(s，1H)，4.99(s，1H)，4.43(m，1H)，4.23(m，1H)，3.64-3.56(m，2H)，2.96(m，1H)，2.84(d，J＝12.8Hz，1H)，2.69-2.59(m，3H)，2.32(dd，J＝6.8，14.5Hz，1H)，2.29(m，1H)，2.01-1.25(m，24H)，1.42(s，3H)，0.92(brs，3H)，0.57(s，3H)。
化合物81b[α]24D＝+24.27(c1.05，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.26(m，2H)，7.16(m，3H)，6.37(d，J＝11.5Hz，1H)，6.03(d，J＝11.5Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.00(s，1H)，4.44(m，1H)，4.23(m，1H)，3.63(m，1H)，3.58(m，1H)，3.00(m，1H)，2.96(m，1H)，2.83(d，J＝12.4Hz，1H)，2.62(m，3H)，2.36(dd，J＝7.7，13.3Hz，1H)，2.32(dd，J＝6.4，13.3Hz，1H)，2.05-1.17(m，23H)，1.70(dd，J＝5.6，13.3Hz，1H)，1.42(s，3H)，0.97(d，J＝6.4Hz，3H)，0.54(s，3H)。
化合物81c1H NMR(CDCl3)δ7.27(m，2H)，7.17(m，3H)，6.37(d，J＝11.1Hz，1H)，6.02(d，J＝11.1Hz，1H)，5.33(s，1H)，4.99(s，1H)，4.44(m，1H)，4.23(m，1H)，3.62(m，1H)，3.41(m，1H)，2.97(m，1H)，2.83(d，J＝12.5Hz，1H)，2.70-2.57(m，3H)，2.31(dd，J＝6.4，13.3Hz，1H)，2.22(dd，J＝6.4，12.4Hz，1H)，2.01-1.20(m，25H)，1.68(dd，J＝7.7，12.4Hz，1H)，1.33(s，3H)，0.91(d，J＝6.0Hz，3H)，0.55(s，3H)。
化合物81d 24D＝-5.87(c0.41，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.28(m，2H)，7.17(m，3H)，6.38(d，J＝11.5Hz，1H)，6.03(d，J＝11.1Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.01(s，1H)，4.44(m，1H)，4.23(m，1H)，3.68(m，1H)，3.37(m1H)，2.98(m，1H)，2.83(d，J＝12.8Hz，1H)，2.68-2.59(m，3H)，2.33(m，1H)，2.27(dd，J＝6.4，12.4Hz，1H)，2.04-1.25(m，23H)，1.81(dd，J＝7.7，12.4Hz，1H)，1.33(s，3H)，0.98(d，J＝6.4Hz，3H)，0.55(s，3H)。
實(shí)施例51α，25-二羥基維生素D3-26，23-內(nèi)酰胺-N-(4-甲氧基)芐基(化合物101)的制備 (1)使用化合物(2)107.6mg(0.18mmol)和參考例4所得的4-甲氧基芐羥胺56.0mg(0.37mmol)按照與實(shí)施例1(1)同樣的方法得到無(wú)色透明的油狀化合物(3)(R1＝4-MeO(C6H4)CH2)(164.6mg，100％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.32(d，J＝8.8Hz，2H)，6.91(d，J＝8.8Hz，2H)，6.60(t，J＝5.5Hz，1H)，6.22(d，J＝11.2Hz，1H)，6.00(d，J＝11.2Hz，1H)，5.17(d，J＝1.7Hz，1H)，4.85(s，1H)，4.36(dd，J＝3.4，6.6Hz，1H)，4.19(m，1H)，3.81(m，3H)，2.82(d，J＝12.0Hz，1H)，2.55(d，J＝17.1Hz，1H)，2.44(d，J＝13.1Hz，1H)，2.35(m，1H)，2.22(dd，J＝7.6，13.1Hz，1H)，1.98-1.28(m，16H)，0.92(d，J＝6.6Hz，3H)，0.87(s，18H)，0.52(s，3H)，0.06(m，12H)。
(2)使用如上得到的化合物(3)(R1＝4-MeO(C6H4)CH2)164.6mg(0.23mmol)按照與實(shí)施例1(2)同樣的方法得到無(wú)色透明的油狀化合物(5)(R1＝4-MeO(C6H4)CH2，R2＝R＝Me)(103.0mg，68％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.35-7.28(m)，6.86-6.82(m)，6.23(d，J＝11.0Hz)，6.01(d，J＝11.0Hz)，5.18(s)，4.86(s)，4.37(dd，J＝3.2，6.3Hz)，4.19(m)，4.13-3.87(m)，3.80-3.76(m)，3.13-2.89(m)，2.82(d，J＝12.4Hz)，2.61-1.19(m)，2.45(d，J＝13.4Hz)，0.91-0.88(m)，0.54-0.50(m)，0.07(m)。
(3)使用如上得到的化合物(5)(R1＝4-MeO(C6H4)CH2，R2＝R＝Me)103.0mg(0.13mmol)按照與實(shí)施例1(3)相同的方法得到無(wú)色透明的油狀內(nèi)酰胺環(huán)化物(65.9mg，66％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.17-7.08(m)，6.84(d，J＝8.5Hz)，6.23(d，J＝11.2Hz)，6.02(d，J＝11.2Hz)，5.19(s)，4.98-4.87(m)，4.38(m)，4.20(m)，4.01-3.86(m)，3.81-3.79(m)，3.51(m)，3.26(m)，2.82(d，J＝12.7Hz)，2.45(d，J＝12.9Hz)，2.35-1.27(m)，0.90-0.89(m)，0.54-0.50(m)，0.08(m)。
使用如上得到的內(nèi)酰胺環(huán)化物65.9mg(0.083mmol)按照與實(shí)施例1(3)同樣的方法(非對(duì)映異構(gòu)體分離用正相HPLC(硅膠柱，流動(dòng)相己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝35/52/13，或者己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝15/82/3)進(jìn)行)，分別得到化合物101a(23S，25S體)8.2mg(17％)，化合物101b(23R，25R體)11.9mg(25％)，化合物101c(23S，25R體)6.4mg(14％)，化合物101d(23R，25S體)6.6mg(14％)。
化合物101a[α]24D＝-11.68(c0.68，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.15(d，J＝8.6Hz，2H)，6.84(d，J＝8.6Hz，2H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.32(s，1H)，4.99(s，1H)，4.92(d，J＝15.0Hz，1H)，4.43(m，1H)，4.23(m，1H)，3.90(d，J＝15.0Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.48(m，1H)，2.82(d，J＝12.4Hz，1H)，2.59(d，J＝13.7Hz，1H)，2.32(m，1H)，2.25(dd，J＝7.7，13.3Hz，1H)，2.08-1.25(m，15H)，1.48(s，3H)，0.89-0.84(m，5H)，0.79(d，J＝6.4Hz，3H)，0.53(s，3H)。
化合物101b[α]24D＝+17.00(c1.10，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.12(d，J＝8.6Hz，2H)，6.85(d，J＝8.6Hz，2H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.00(s，1H)，4.93(d，J＝15.0Hz，1H)，4.44(dd，J＝4.3，7.7Hz，1H)，4.23(m，1H)，3.97(d，J＝15.4Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.47(m，1H)，2.82(d，J＝12.4Hz，1H)，2.59(d，J＝13.3Hz，1H)，2.34(dd，J＝8.1，13.7Hz，1H)，2.32(dd，J＝6.4，12.8Hz，1H)，2.08-1.89(m，5H)，1.76(dd，J＝5.1，13.3Hz，1H)，1.69-0.99(m，14H)，1.49(s，3H)，0.87(d，J＝6.9Hz，3H)，0.50(s，3H)。
化合物101c[α]24D＝+15.58(c0.46，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.11(d，J＝8.6Hz，2H)，6.84(d，J＝8.6Hz，2H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.33(s，1H)，4.99(s，1H)，4.94(d，J＝14.5Hz，1H)，4.43(dd，J＝4.3，7.7Hz，1H)，4.23(m，1H)，3.90(d，J＝15.0Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.26(m，1H)，2.82(d，J＝12.4Hz，1H)，2.59(dd，J＝3.0，13.7Hz，1H)，2.31(m，1H)，2.19(dd，J＝6.4，12.8Hz，1H)，2.02-1.14(m，20H)，1.71(dd，J＝7.8，12.8Hz，1H)，1.33(s，3H)，0.88(m，1H)，0.78(d，J＝6.4Hz，3H)，0.52(s，3H)。
化合物101d 24D＝+3.49(c0.53，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.08(d，J＝8.6Hz，2H)，6.85(d，J＝8.6Hz，2H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.33(s，1H)，4.99(s，1H)，4.95(d，J＝15.0Hz，1H)，4.44(m 1H)，4.22(m，1H)，3.98(d，J＝15.0Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.25(m，1H)，2.82(d，J＝12.4Hz，1H)，2.59(d，J＝14.1Hz，1H)，2.32(m，1H)，2.24(dd，J＝6.4，12.4Hz，1H)，2.13-1.22(m，21H)，1.86(dd，J＝7.7，12.4Hz，1H)，1.36(s，3H)，1.09(m，2H)，0.88(d，J＝6.5Hz，3H)，0.50(s，3H)。
實(shí)施例61α，25-二羥基維生素D3-27-高(homo)-26，23-內(nèi)酰胺-N-(2-苯乙基)(化合物62)的制備 (1)使用按照文獻(xiàn)記載的方法(例如國(guó)際公開(kāi)WO95/33716號(hào)說(shuō)明書(shū))得到的化合物(5)788.2mg(2.64mmol)和按照參考例1得到的2-苯乙基羥胺722.0mg(5.26mmol)，按照與實(shí)施例1(1)同樣的方法得到無(wú)色透明的油狀化合物(7)(R1＝Ph(CH2)2)(1.28g，100％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.31-7.20(m，5H)，6.38(t，J＝5.7Hz，1H)，5.64(s，1H)，3.97(t，J＝6.7Hz，2H)，3.23-3.19(m，2H)，2.88-2.86(m，1H)，2.46(dt，J＝17.2，4.4Hz，1H)，2.28-2.19(m，1H)，1.97-1.13(m，12H)，0.79(d，J＝6.6Hz，3H)，0.53(s，3H)。
(2)將如上得到的化合物(7)(R1＝Ph(CH2)2)577.0mg(1.43mmol)溶于10.0mL的無(wú)水甲苯中，向其中加入按照參考例5得到化合物(4)(R2＝Et，R＝Pim(鄰苯二甲酰亞氨基甲基(phthalimidemethyl)))463.1mg(1.79mmol)的無(wú)水甲苯溶液5.0mL。在氮?dú)夥諊小?0℃下攪拌12小時(shí)。減壓濃縮所得的殘?jiān)霉枘z柱色譜(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)粗純化。所得的化合物用25.0mL正丁醇溶解，加入3.3mL乙二胺，在90℃下攪拌1小時(shí)。向反應(yīng)液中加入30mL水，減壓濃縮。所得殘?jiān)靡宜嵋阴ハ♂尯?，?M鹽酸洗滌，有機(jī)層用硫酸鎂干燥。減壓濃縮所得的殘?jiān)霉枘z柱色譜(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)粗純化。所得化合物溶于4.5mL苯與0.5mL甲醇的混合溶劑中，加入1.0mL三甲基甲硅烷基重氮甲烷1.0mL(0.59mmol)，室溫?cái)嚢?5分鐘。減壓濃縮得到化合物(8)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Et，R＝Me)(269.1mg，41％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.32-7.15(m，5H)，5.64(brs，1H)，3.79-3.75(m，3H)，3.10-0.72(m，30H)，0.57-0.52(m，3H)。
(3)將如上得到的化合物(8)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Et，R＝Me)269.1mg(0.50mmol)溶于7.0mL乙腈與1.0mL水的混合溶劑中，加入六羰基鉬205.0mg(0.78mmol)，在90℃下攪拌12小時(shí)。反應(yīng)液用硅藻土過(guò)濾后減壓濃縮。所得的殘?jiān)霉枘z柱色譜(正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)純化，得到內(nèi)酰胺環(huán)化物(132.2mg，53％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.33-7.16(m，5H)，5.66(brs，1H)，3.85-3.73(m，1H)，3.55-3.46(m，1H)，3.32-3.16(m，1H)，2.94-2.64(m，3H)，2.28-0.82(m，24H)，0.61-0.56(m，3H)。
將所得內(nèi)酰胺環(huán)化物(132.2mg，0.26mmol)溶于5.0mL無(wú)水二氯甲烷，加入三甲基甲硅烷基咪唑0.2mL(1.30mmol)，在氮?dú)夥諊惺覝叵聰嚢?2小時(shí)。在0℃下向反應(yīng)液中加水?dāng)嚢韬笥枚燃淄檩腿?，有機(jī)層用硫酸鎂干燥。減壓濃縮所得的殘?jiān)霉枘z薄層色譜(正己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)純化，得到化合物(9)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Et)(133.3mg，89％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.33-7.16(m，5H)，5.68-5.64(m，1H)，3.77-3.50(m，2H)，3.28-3.10(m，1H)，2.92-2.75(m，3H)，2.23-0.75(m，24H)，0.58(d，J＝4.6Hz，3H)，0.16-0.10(m，9H)。
(4)將三苯基膦37.0mg(0.14mmol)與三(二亞芐基酮)二鈀(O)-氯仿加合物22.0mg(0.021mmol)溶于1.8mL無(wú)水甲苯與1.8mL三乙胺的混合溶劑中，室溫下攪拌10分鐘。向反應(yīng)液中加入如上所得的化合物(9)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Et)67.0mg(0.12mmol)以及按照Trost等的方法(Tetrahedron Lett.，1994年，35卷，44號(hào)，8119-8122頁(yè))合成的化合物(10)52.0mg(0.14mmol)的無(wú)水甲苯溶液1.8mL。在氬氣氛圍中，120℃下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)液中加入飽和氯化銨水溶液后用乙酸乙酯洗滌。在水層中加入飽和碳酸氫鈉水溶液使其為弱堿性后，用乙酸乙酯萃取。合并有機(jī)層并用飽和食鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥。減壓濃縮所得的殘?jiān)霉枘z薄層色譜(正己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)粗純化，將所得的殘?jiān)?2.5mg溶于3.0mL無(wú)水四氫呋喃，加入氯化四丁基銨的四氫呋喃溶液0.44mL(1M，0.44mmol)，在氮?dú)夥諊小?0℃下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)液中加入飽和氯化銨水溶液后用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用飽和食鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥。減壓濃縮所得的殘?jiān)霉枘z薄層色譜(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)純化，得到22.5mg的化合物62。所得化合物62用正相HPLC(CHIRALPAK AD柱，流動(dòng)相30％乙醇/正己烷)和反相HPLC(ODS柱，流動(dòng)相A＝95％H2O/CH3CN，B＝CH3CN/MeOH＝6/4(0.5％H2O)，B＝70％)以及正相HPLC(CHIRALPAK AD柱，流動(dòng)相15％乙醇/正己烷)純化，分別得到化合物62a(23S，25S體)1.2mg(2％)，化合物62b(23R，25R體)2.2mg(3％)，化合物62d(23R，25S體)0.6mg(1％)。
化合物62a1H-NMR(CDCl3)δ7.33-7.18(m，5H)，6.38(d，J＝11.5Hz，1H)，6.02(d，J＝11.0Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.00(s，1H)，4.43(brs，1H)，4.23(brs，1H)，3.80-3.70(m，1H)，3.55-3.45(m，1H)，3.25-3.15(m，1H)，2.93-2.75(m，3H)，2.63-2.55(m，1H)，2.32(dd，J＝13.7，6.7Hz，1H)，2.11(dd，J＝13.7，7.3Hz，1H)，2.04-1.10(m，19H)，0.96(t，J＝7.4Hz，3H)，0.88(d，J＝5.6Hz，3H)，0.56(s，3H)。
化合物62b1H-NMR(CDCl3)δ7.34-7.19(m，5H)，6.38(d，J＝11.2Hz，1H)，6.03(d，J＝11.2Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.01(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.25(brs，1H)，3.85-3.77(m，1H)，3.55-3.47(m，1H)，3.25-3.15(m，1H)，2.95-2.74(m，3H)，2.61(dd，J＝13.7，3.4Hz，1H)，2.32(dd，J＝13.4，6.7Hz，1H)，2.20(dd，J＝13.5，7.7Hz，1H)，2.12-1.15(m，19H)，1.05-0.91(m，6H)，0.56(s，3H)。
化合物62d1H-NMR(CDCl3)δ7.32-7.16(m，5H)，6.38(d，J＝11.0Hz，1H)，6.03(d，J＝11.2Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.01(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.24(brs，1H)，4.06-3.95(m，1H)，3.35-3.27(m，1H)，3.24-3.14(m，1H)，2.95-2.69(m，3H)，2.64-2.57(m，1H)，2.42(s，1H)，2.36-2.23(m，2H)，2.04-1.06(m，18H)，1.00(d，J＝6.3Hz，3H)，0.85(t，J＝7.4Hz，3H)，0.58(s，3H)。
實(shí)施例71α，25-二羥基維生素D3-27-二高(bishomo)-26，23-內(nèi)酰胺-N-(2-苯乙基)(化合物63)的制備
(1)使用實(shí)施例7中得到的化合物(7)700.0mg(1.74mmol)與參考例6得到化合物(4)(R2＝Pr，R＝Pim(鄰苯二甲酰亞氨基甲基))643.2mg(2.35mmol)，按照與實(shí)施例6(2)同樣的方法得到化合物(8)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Pr，R＝Me)(269.0mg，34％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.32-7.16(m，5H)，5.64(brs，1H)，3.78-3.74(m，3H)，3.10-0.80(m，32H)，0.57-0.51(m，3H)。
(2)使用如上得到的化合物(8)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Pr，R＝Me)307.3mg(0.56mmol)按照與實(shí)施例6(3)同樣的方法得到內(nèi)酰胺環(huán)化物(170.6mg，59％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.33-7.17(m，5H)，5.66(brs，1H)，3.84-3.72(m，1H))，3.55-3.47(m，1H)，3.25-3.15(m，1H)，2.95-2.73(m，3H)，2.29-0.83(m，26H)，0.60-0.55(m，3H)。
所得內(nèi)酰胺環(huán)化物170.6mg(0.33mmol)按照與實(shí)施例5(3)同樣的方法得到化合物(9)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Pr)(73.8mg，90％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.33-7.17(m，5H)，5.68-5.64(m，1H)，3.76-3.52(m，2H)，3.26-3.10(m，1H)，2.92-2.73(m，3H)，2.23-0.86(m，26H)，0.58(d，J＝5.1Hz，3H)，0.15-0.11(m，9H)。
(3)使用如上得到的化合物(9)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Pr)86.9mg(0.15mmol)按照與實(shí)施例6(4)同樣的方法得到29.0mg化合物63。用反相HPLC(ODS柱，流動(dòng)相A＝95％H2O/CH3CN，B＝CH3CN/MeOH＝6/4(0.5％H2O)，B＝70％)以及正相HPLC(CHIRALPAK AD柱，流動(dòng)相30％乙醇/正己烷)純化該化合物63，分別得到化合物63a(23S，25S體)4.5mg(5％)，化合物63b(23R，25R體)5.1mg(6％)，化合物63c(23S，25R體)1.6mg(2％)，化合物63d(23R，25S體)2.7mg(3％)。
化合物63a1H-NMR(CDCl3)δ7.33-7.18(m，5H)，6.38(d，J＝11.0Hz，1H)，6.02(d，J＝11.2Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.00(s，1H)，4.43(brs，1H)，4.23(brs，1H)，3.81-3.70(m，1H)，3.55-3.45(m，1H)，3.25-3.16(m，1H)，2.93-2.75(m，3H)，2.63-2.56(m，1H)，2.32(dd，J＝13.4，6.6Hz，1H)，2.20-1.10(m，22H)，0.96(t，J＝7.0Hz，3H)，0.88(d，J＝5.6Hz，3H)，0.56(s，3H)。
化合物63b1H-NMR(CDCl3)δ7.34-7.19(m，5H)，6.38(d，J＝11.2Hz，1H)，6.03(d，J＝11.2Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.01(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.24(brs，1H)，3.85-3.75(m，1H)，3.54-3.46(m，1H)，3.25-3.14(m，1H)，2.94-2.72(m，3H)，2.61(dd，J＝13.5，3.3Hz，1H)，2.32(dd，J＝13.4，6.7Hz，1H)，2.25-2.15(m，2H)，2.06-1.11(m，20H)，1.00-0.93(m，6H)，0.56(s，3H)。
化合物63c1H-NMR(CDCl3)δ7.32-7.17(m，5H)，6.37(d，J＝11.2Hz，1H)，6.01(d，J＝11.5Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.00(s，1H)，4.43(brs，1H)，4.23(brs，1H)，4.06-3.96(m，1H)，3.33-3.25(m，1H)，3.22-3.13(m，1H)，2.93-2.70(m，3H)，2.64-2.56(m，1H)，2.49(s，1H)，2.32(dd，J＝13.3，7.0Hz，1H)，2.21(dd，J＝13.1，6.4Hz，1H)，2.04-1.10(m，19H)，0.91(d，J＝6.3Hz，3H)，0.86(t，J＝7.0Hz，3H)，0.55(s，3H)。
化合物63d1H-NMR(CDCl3)δ7.31-7.15(m，5H)，6.38(d，J＝11.0Hz，1H)，6.03(d，J＝11.2Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.01(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.24(brs，1H)，4.07-3.97(m，1H)，3.35-3.28(m，1H)，3.23-3.14(m，1H)，2.95-2.69(m，3H)，2.64-2.57(m，1H)，2.49(s，1H)，2.36-2.23(m，2H)，2.06-1.05(m，19H)，1.00(d，J＝6.6Hz，3H)，0.87(t，J＝7.0Hz，3H)，0.58(s，3H)。
實(shí)施例81α，25-二羥基維生素D3-27-苯基-26，23-內(nèi)酰胺-N-(2-苯乙基)(化合物64)的制備
(1)將實(shí)施例7中得到的化合物(7)239.7mg(0.93mmol)溶于5.0mL脫水甲苯中，向其中加入按照Basavaiah等的方法(Tetrahedron Lett.，2001年，42卷，477～479頁(yè))合成的化合物(4)(R2＝Bn，R＝Me)530mg(3.0mmol)，在氮?dú)夥諊小?0℃下攪拌12小時(shí)后，再在90℃攪拌2小時(shí)。減壓濃縮反應(yīng)液所得的殘?jiān)霉枘z柱色譜(正己烷∶乙酸乙酯＝20∶1)純化，得到粗制化合物(8)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Bn，R＝Me)。
(2)將所得的粗制化合物(8)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Bn，R＝Me)溶于10.5mL乙腈與1.5mL水的混合溶劑中，往其中加入六羰基鉬240mg(0.91mmol)，在90℃下攪拌12小時(shí)。反應(yīng)液用硅藻土過(guò)濾后減壓濃縮。所得的殘?jiān)霉枘z柱色譜(正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)純化得到內(nèi)酰胺環(huán)化物(178.1mg，52％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.31-7.18(m，10H)，5.65(s，1H)，3.80-3.68(m，1H)，3.44-3.43(m，1H)，3.20-3.16(m，1H)，3.05-2.73(m，5H)，2.17-1.00(m，16H)，0.86-0.82(m，3H)，0.54-0.50(m，3H)。
將所得內(nèi)酰胺環(huán)化物178.1mg(0.315mmol)溶于3.5mL脫水二氯甲烷中，在氮?dú)夥諊小?℃下加入2，6-二甲基吡啶55μL(0.473mmol)和三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯70μL(0.388mmol)，相同溫度下攪拌1小時(shí)。往反應(yīng)液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液、攪拌后，用二氯甲烷萃取。有機(jī)層用硫酸鎂干燥。減壓濃縮所得的殘?jiān)霉枘z柱色譜(正己烷∶乙酸乙酯＝20∶1)純化，得到化合物(9)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Bn)(189.9mg，95％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.33-7.15(m，10H)，5.65(brs，1H)，3.75-3.44(m，2H)，3.30-3.18(m，1H)，3.14-2.54(m，5H)，2.12-1.02(m，16H)，0.94-0.82(m，3H)，0.55-0.43(m，3H)，0.26-0.15(m，9H)。
(3)使用如上得到的化合物(9)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Bn)99.1mg(0.16mmol)按照與實(shí)施例6(4)同樣的方法得到28.4mg化合物64。用正相HPLC(CHIRALPAK AD柱，流動(dòng)相20％乙醇/正己烷)以及反相HPLC(ODS柱，流動(dòng)相A＝95％H2O/CH3CN，B＝CH3CN/MeOH＝6/4(0.5％H2O)，B＝75％)純化該化合物64，分別得到化合物64a(23S，25S體)3.0mg(4％)，化合物64b(23R，25R體)4.4mg(5％)。
化合物64a1H-NMR(CDCl3)δ7.32-7.17(m，10H)，6.38(d，J＝11.2Hz，1H)，6.02(d，J＝11.2Hz，1H)，5.35(s，1H)，5.01(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.24(brs，1H)，3.76-3.66(m，1H)，3.50-3.40(m，1H)，3.24-3.16(m，1H)，3.05-2.58(m，6H)，2.38-1.12(m，19H)，0.80(d，J＝5.1Hz，3H)，0.51(s，3H)。
化合物64b1H-NMR(CDCl3)δ7.32-7.18(m，10H)，6.37(d，J＝11.2Hz，1H)，6.01(d，J＝11.0Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.00(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.23(brs，1H)，3.80-3.69(m，1H)，3.50-3.40(m，1H)，3.23-3.12(m，1H)，3.05-2.70(m，5H)，2.64-2.55(m，1H)，2.45(s，1H)，2.36-2.27(m，1H)，2.15-1.05(m，17H)，0.84(d，J＝6.6Hz，3H)，0.51(s，3H)。
實(shí)施例9對(duì)雞小腸粘膜細(xì)胞內(nèi)1α，25-二羥基維生素D3受體(VDR)的結(jié)合親和性按照石塚等在Steroids，37卷，33～43頁(yè)，1982年中記載的方法進(jìn)行。即在12×75mm的聚丙烯試管中加入15000dpm的[26、27-甲基-3H]1α，25-二羥基維生素D3(180Ci/mmol)的10μl乙醇溶液，以及本發(fā)明化合物的40μl乙醇溶液。向其中加入溶有0.2mg雞小腸粘膜細(xì)胞內(nèi)1α，25-二羥基維生素D3受體蛋白和1mg凝膠的1ml磷酸緩沖液(pH7.4)，在25℃下反應(yīng)1小時(shí)。向試管中加入40％聚乙二醇6000溶液1ml，激烈攪拌后，在4℃、2260×g下離心分離60分鐘。用切刀切取包含沉淀部分的試管放入液體閃爍用管形瓶中，加入10ml二烷閃光劑，然后用液體閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定放射能力。通過(guò)測(cè)定值求得使受體與[26、27-甲基-3H]1α，25-二羥基維生素D3的結(jié)合被抑制50％的本發(fā)明化合物的濃度，該濃度以1α，25-二羥基維生素D3的50％抑制濃度為1的相對(duì)強(qiáng)度表示。結(jié)果如下表所示。
本發(fā)明化合物對(duì)雞小腸粘膜細(xì)胞內(nèi)1α，25-二羥基維生素D3受體的結(jié)合親和性

(*)1α，25-二羥基維生素D3＝1由上述結(jié)果可知，本發(fā)明的化合物明顯具有很高的與VDR的結(jié)合親和性。因此，考慮到下述的本發(fā)明化合物的抗體作用，可以期待其具有高的維生素D3拮抗作用，并且表現(xiàn)出作為骨Peget病、高鈣血癥或骨質(zhì)疏松癥的治療劑是有效的。
實(shí)施例10以1α，25-二羥基維生素D3引起的HL-60細(xì)胞分化誘導(dǎo)作用為指標(biāo)的維生素D3拮抗作用(1)HL-60細(xì)胞由細(xì)胞庫(kù)(Japanese Cancer Research ResourceBank，細(xì)胞編號(hào)JCRB0085)購(gòu)入使用。為了防止由繼代培養(yǎng)引起的細(xì)胞特性的變化，將細(xì)胞冷凍保存，在實(shí)驗(yàn)前解凍進(jìn)行繼代培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)中使用繼代培養(yǎng)一個(gè)月到約半年的細(xì)胞。繼代培養(yǎng)通過(guò)離心分離回收懸浮培養(yǎng)狀態(tài)的細(xì)胞，并用新鮮的培養(yǎng)液稀釋到1/100左右的濃度(1～2×104個(gè)細(xì)胞/ml)而實(shí)現(xiàn)。使用含有10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基作為培養(yǎng)液。
(2)離心分離回收由(1)繼代培養(yǎng)了的細(xì)胞，并以2×104個(gè)細(xì)胞/ml分散到培養(yǎng)液中，在24孔培養(yǎng)板上以1ml/孔接種。向該體系中以1μl/孔加入1×10-5M的1α，25-二羥基維生素D3的乙醇溶液、1×10-4M～3×10-3M的本發(fā)明化合物的乙醇溶液(最終濃度1α，25-二羥基維生素D31×10-8M，本發(fā)明化合物1×10-7M～3×10-6M)。作為對(duì)照組每孔加入1μL乙醇。在37℃、5％CO2存在下培養(yǎng)4天后，離心分離回收細(xì)胞。
(3)使用氮藍(lán)四唑(下稱(chēng)NBT)還原活性的誘導(dǎo)作為HL-60細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用的指標(biāo)。按照下面的步驟測(cè)定NBT還原活性。即將離心分離得到的細(xì)胞懸浮在新鮮的培養(yǎng)液中后，依次加入0.1％NBT、100ng/ml的12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯，在37℃下培養(yǎng)25分鐘后制成cytospin標(biāo)本。風(fēng)干后，用Kernechrot染色，在光學(xué)顯微鏡下測(cè)定NBT還原活性陽(yáng)性細(xì)胞的比率。由1×10-8M的1α，25-二羥基維生素D3和1×10-7M～3×10-6M的本發(fā)明化合物同時(shí)處理得到的陽(yáng)性細(xì)胞的比率相對(duì)于由1×10-8M的1α，25-二羥基維生素D3單獨(dú)處理的陽(yáng)性細(xì)胞比率獲得百分比，用該百分比對(duì)本發(fā)明化合物的處理濃度作圖，計(jì)算出百分比為50％的本發(fā)明化合物的處理濃度作為IC50值(nM)。結(jié)果如下表所示。
對(duì)HL-60細(xì)胞的NBT還原活性誘導(dǎo)效果(本發(fā)明化合物對(duì)1α，25-二羥基維生素D3引起的細(xì)胞分化誘導(dǎo)的抑制效果)

由上述結(jié)果可知，本發(fā)明的化合物可以抑制1α，25-二羥基維生素D3引起的細(xì)胞分化誘導(dǎo)作用。即本發(fā)明的化合物顯示出對(duì)于1α，25-二羥基維生素D3的拮抗作用。
由于骨Peget病、高鈣血癥是活性維生素D3的作用亢進(jìn)引起的，因此本發(fā)明的化合物可以作為這種疾病的治療劑。此外，由于PTH隨著活性維生素D3在活體內(nèi)濃度的下降而上升，并且PTH有骨形成作用，因此本發(fā)明的化合物可以作為骨質(zhì)疏松癥的治療劑。
產(chǎn)業(yè)應(yīng)用領(lǐng)域本發(fā)明化合物可以作為藥物的有效成分。以本發(fā)明化合物作為有效成分的藥物組合物可以作為治療選自骨Peget病、高鈣血癥和骨質(zhì)疏松癥中的一種或多種疾病的治療劑。
權(quán)利要求
1.下式(1)表示的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物 式(1)中，R1為C2～C10的烷基，或者芳環(huán)上可以被C1～C6的烷基、C1～C6的烷氧基、羥基、鹵素原子、或三氟甲基取代的C7～C15的芳烷基；R2為C1～C10的烷基，或者芳環(huán)上可以被C1～C6的烷基、C1～C6的烷氧基、羥基、鹵素原子、或三氟甲基取代的C7～C15的芳烷基；但是，R1為芐基并且R2為甲基的上述式(1)表示的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物除外。
2.權(quán)利要求1所述的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物，其中R1為異丙基、丁基、己基、辛基、芐基、苯乙基、3-苯基丙基、4-苯基丁基、2-萘基甲基或者4-甲氧基芐基。
3.權(quán)利要求1所述的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物，其中R1為芐基、苯乙基、4-苯基丁基或者4-甲氧基芐基。
4.權(quán)利要求1～3中中任一項(xiàng)所述的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物，其中R2為甲基、乙基、丙基或者芐基。
5.權(quán)利要求1所述的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物，其中R1為苯乙基并且R2為甲基。
6.權(quán)利要求1所述的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物，其中R1為4-苯基丁基并且R2為甲基。
7.權(quán)利要求1所述的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物，其中R1為4-甲氧基芐基并且R2為甲基。
8.權(quán)利要求1所述的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物，其中R1為苯乙基并且R2為乙基。
9.權(quán)利要求1所述的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物，其中R1為苯乙基并且R2為丙基。
10.權(quán)利要求1～9中任一項(xiàng)所述的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物，其中上述式(1)中23位和25位的立體構(gòu)型分別為23(R)和25(R)。
11.權(quán)利要求1～9中任一項(xiàng)所述的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物，其中上述式(1)中23位和25位的立體構(gòu)型分別為23(S)和25(S)。
12.權(quán)利要求1～11中任一項(xiàng)所述的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物，其具有維生素D3拮抗活性。
13.一種治療選自高鈣血癥、骨Peget病和骨質(zhì)疏松癥中的一種或多種疾病的治療劑，其含有權(quán)利要求1～12中任一項(xiàng)所述的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物，或者上述式(1)中R1為芐基并且R2為甲基的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物作為有效成分。
14.一種治療高鈣血癥的治療劑，其含有權(quán)利要求1～12中任一項(xiàng)所述的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物，或者上述式(1)中R1為芐基并且R2為甲基的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物作為有效成分。
15.一種治療骨Peget病的治療劑，其含有權(quán)利要求1～12中任一項(xiàng)所述的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物，或者上述式(1)中R1為芐基并且R2為甲基的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物作為有效成分。
16.一種治療骨質(zhì)疏松癥的治療劑，其含有權(quán)利要求1～12中任一項(xiàng)所述的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物，或者上述式(1)中R1為芐基并且R2為甲基的維生素D3衍生物或其可藥用溶劑化物作為有效成分。
全文摘要
下式(1)表示的化合物或其可藥用溶劑化物，其對(duì)骨Peget病、高鈣血癥或骨質(zhì)疏松癥的治療有效。式中，R
文檔編號(hào)A61P19/00GK1902173SQ20048003983
公開(kāi)日2007年1月24日 申請(qǐng)日期2004年11月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月4日
發(fā)明者長(zhǎng)澤和夫, 橋本祐一, 加藤優(yōu)子 申請(qǐng)人:帝人制藥株式會(huì)社