尿液中巰基類化合物檢測試劑盒及制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域的尿液檢測試劑，具體設(shè)及一種尿液中琉基類化合物檢 測試劑盒及制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 在全世界危害女性健康的惡性腫瘤中，宮頸癌是全球女性中僅次于乳腺癌的最常 見的婦科惡性腫瘤之一。在一些發(fā)展中國家其發(fā)病率居首位，據(jù)國際癌癥研究中屯、估計，每 年大約有371200的宮頸癌新發(fā)病例，占所有腫瘤的9. 8%，占女性新發(fā)病例的15%，其中 78 %的病例發(fā)生在發(fā)展中國家，發(fā)達國家僅占4. 4 %。我國地域廣闊、人口眾多，根據(jù)90年 代衛(wèi)生部全國腫瘤防治研究辦公室組織的大規(guī)模全國人口死亡原因調(diào)查顯示，每年有新 發(fā)病例約10萬，占世界宮頸癌新發(fā)病例總數(shù)的四分之一。經(jīng)過幾十年廣泛開展婦科普查， 宮頸癌的發(fā)病率及死亡率降低了近68%，但從全國范圍來看，宮頸癌的患病率仍居婦科惡 性腫瘤的第一位。
[0003] 宮頸癌前病變和宮頸癌發(fā)病過程中（早中晚期）整個琉基分子將不可逆的脫落并 從尿液中排出體外，而機體正常情況下并無琉基分子脫落，因此檢測尿液中的琉基化合物 可用于宮頸癌的篩查和輔助診斷。臨床數(shù)據(jù)及多篇文獻表明：尿液琉基化合物濃度顯著增 高常見于子宮頸組織癌變過程。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)中存在利用琉基可將憐鶴酸還原成鶴藍而呈藍色的特性制備出用于提 示宮頸癌病變的尿液中琉基類代謝物檢測試劑盒，比如CN104181155A中就公開了一種相 關(guān)試劑盒及其制備方法，但由于尿液中除了琉基類代謝物具有還原性外，尿液中的尿酸和 Vc同樣具有還原性，同樣可W與憐鶴酸反應(yīng)而顯色，該文獻中采用對照試劑中添加隸離子 排除琉基代謝物的方法，通過對照組和檢測組的顏色深淺的比對來排除尿酸和Vc的干擾， 雖然運種方法可W排除假陽性的問題，但是肉眼分辨深淺，很容易造成誤判，特別是在琉基 類代謝物含量較低時對照組和檢測組的顯色非常接近，分辨誤差大，容易造成假陰性誤判， 從而大大降低了該檢測試劑的準確性和精確性，限制該產(chǎn)品的實際應(yīng)用，且尿液中含有蛋 白會對試劑的準確性產(chǎn)生干擾

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供了一種尿液中琉基類化合物檢測試劑盒及制備方法和應(yīng)用，用W解決 目前琉基檢測試劑假陰性誤判突出，檢測準確性和精確度低的問題。
[0006] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：所述尿液中琉基類化合物檢測試 劑盒，包括檢測試劑、對照試劑和顯色試劑；
[0007] 其中，所述檢測試劑為包含亞隸離子化合物和=氯乙酸的水溶液；
[0008] 所述對照試劑為包含隸離子化合物、亞隸離子化合物和=氯乙酸的水溶液；
[0009] 所述顯色試劑為包含憐鶴酸、娃鶴酸和裡離子化合物的緩沖溶液。
[0010] 其中對照試劑與檢測試劑中=氯醋酸可破壞尿液中蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)，使得干擾 蛋白質(zhì)沉淀，避免假陽性產(chǎn)生，在=氯醋酸和憐鶴酸的分步作用下，近100%的蛋白質(zhì)可W被除去，提高測定結(jié)果的準確性，試劑中亞隸離子可與尿液中的無機鹽結(jié)合，防止其干擾整 個反應(yīng)過程，加強試劑測定的穩(wěn)定性。對照試劑中隸離子可選擇性與尿液中琉基代謝物反 應(yīng)，與檢測試劑比對后排出假陽性問題。顯色試劑中的娃鶴酸可優(yōu)先與尿液中的還原性物 質(zhì)如尿酸、Vc等反應(yīng)，避免其與憐鶴酸發(fā)生還原反應(yīng)，從而有效避免了因尿酸、Vc顯色干擾 對照組和檢測組的顯色比對，導(dǎo)致假陰性誤判。
[0011] 進一步的，所述亞隸離子化合物選自硝酸亞隸或氯化亞隸，所述隸離子化合物選 自硫酸隸、硝酸隸或氯化隸，所述裡離子化合物選自硫酸裡或碳酸裡。
[0012] 進一步的，所述亞隸離子化合物為氯化亞隸，所述隸離子化合物為氯化隸，所述裡 離子化合物為碳酸裡。
[0013] 進一步的，所述檢測試劑中，亞隸離子的濃度為0. 001mo1/LS氯醋酸的質(zhì) 量濃度為lOwt%;所述對照試劑中，亞隸離子的濃度為0.OOlmol/l，隸離子的濃度為 0. 04-0. 045mol/l，S氯醋酸質(zhì)量濃度為lOwt%;所述顯色試劑中，憐鶴酸的濃度為36-57g/ 以娃鶴酸的濃度為8. 5-20邑/1，裡離子的濃度為1-2. 7mmol/L。所述離子濃度是指W亞隸 離子、隸離子或裡離子的濃度，相應(yīng)亞隸離子化合物、隸離子化合物或裡離子化合物的濃度 要根據(jù)上述離子濃度進行換算，比如亞隸離子的濃度為0.OOlmol/l，則氯化亞隸的濃度為 0.OOlmol/l，隸離子濃度為0. 04-0. 045mol/l，則氯化隸的濃度為0. 04-0. 045mol/l，裡離 子的濃度為1-2. 7mmol/l，則碳酸裡的濃度為0. 5-1. 35mmol/L。所述隸離子的濃度如果低 于0. 04mol/L時，則在琉基代謝物濃度較高時，存在不能完全反應(yīng)的情況，則之后還是會與 憐鶴酸反應(yīng)顯色，則會做出陰性的誤判。
[0014] 進一步的，所述緩沖溶液為乙酸鋼/乙酸緩沖體系，抑值為4. 8-5. 6。在此區(qū)間憐 鶴酸試劑有良好的顯色反應(yīng)。
[0015] 進一步的，所述檢測試劑的量為1ml，對照試劑的量為1ml，顯色試劑的量為4ml。
[0016] 本發(fā)明還提供了上述尿液中琉基類化合物檢測試劑盒的制備方法，包括如下步 驟：
[0017] 1)檢測試劑的制備：將亞隸離子化合物和S氯醋酸溶于蒸饋水中，保持無菌環(huán)境 將其分裝入5ml安飯瓶并拉絲灌封；
[0018] 2)對照試劑的制備：將隸離子化合物、亞隸離子化合物和=氯醋酸溶于蒸饋水 中，而后在無菌環(huán)境下將其分裝入5ml安飯瓶中并拉絲灌封；
[0019] 扣顯色試劑制備：
[0020] a、稱取憐鶴酸溶于蒸饋水中，然后加入裡離子化合物；
[0021] b、稱取娃鶴酸溶于蒸饋水中；
[0022] C、配置乙酸鋼/乙酸緩沖體系的緩沖溶液，所述緩沖溶液中乙酸鋼濃度為 0. 2mol/l，乙酸濃度為 0. 3mol/L;
[0023] t將a、b、C步驟所制備的試劑案按1: (1~1. 5) : (1. 5~2. 0)的體積比混合均 勻，并分裝入5ml安飯瓶并拉絲灌封。
[0024] 進一步的，所述顯色試劑制備中步驟a配置的試劑中，所述憐鶴酸的濃度為 160g-200g/l，所述裡離子化合物的濃度為2. 3-4. 7mmol/L。
[00巧]進一步的，所述顯色試劑制備中步驟b配置的試劑中，所述娃鶴酸的濃度為 30g-60g/L〇
[00%] 本發(fā)明還提供了上述尿液中琉基類化合物檢測試劑盒在宮頸癌的篩查和輔助診 斷方面的應(yīng)用。
[0027] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案利用琉基能將憐鶴酸還原成鶴藍而呈現(xiàn)藍色的特性來檢 測尿液中琉基，但憐鶴酸能夠破壞了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生蛋白質(zhì)沉淀，干擾檢測結(jié)果，出現(xiàn) 假陽性現(xiàn)象，在=氯醋酸和憐鶴酸的分步作用下，近100%的蛋白質(zhì)可W被除去，提高測定 結(jié)果的準確性；；試劑中的碳酸裡或硫酸裡對憐鶴酸的還原反應(yīng)有很好的催化作用；對照 試劑與檢測試劑中的亞隸離子可先與尿液中的無機鹽結(jié)合，防止其干擾整個反應(yīng)過程，加 強試劑測定的穩(wěn)定性；對照試劑中隸離子能與尿液中琉基結(jié)合，而檢測試劑中不含隸離子 故尿液中若含琉基將還原憐鶴酸從而使其變藍；最為重要的是顯色試劑中的娃鶴酸可與尿 液中的還原性物質(zhì)如尿酸、Vc等優(yōu)先反應(yīng)，從而排除因尿酸、Vc的干擾導(dǎo)致的假陰性問題， 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的技術(shù)方案工藝簡單、穩(wěn)定性高，檢測結(jié)果假陽性率和假陰性 率低等特點，適合用于宮頸癌的篩查和輔助診斷。
【具體實施方式】
[0028] 本發(fā)明中所用試劑和器皿均為市購商品。 陽〇29] 實施例1
[0030] 制作1000個尿液中琉基類化合物檢測試劑盒，過程如下：
[0031] 一、檢測試劑的制備：將氯化亞隸和=氯醋酸分別溶于蒸饋水，配置亞氯化亞隸濃 度為0.OOlmol/l，=氯醋酸質(zhì)量濃度為lOwt%，保持無菌環(huán)境將其分裝入5ml安飯瓶并拉 絲灌封，每個安飯瓶裝量1ml，據(jù)此制備檢測試劑1000支；
[0032] 二、對照試劑的制備：將氯化隸、氯化亞隸和=氯醋酸溶于蒸饋水，配置氯化隸的 濃度為0. 〇4mol/l，氯化亞隸的濃度為0. 001mol/l，S氯醋酸質(zhì)量濃度為lOwt%，在無菌環(huán) 境下將其分裝入5ml安飯瓶中并拉絲灌封，每個安飯瓶裝量1ml，據(jù)此制備對照試劑1000 支；
[0033] S、顯色試劑的制備：其中憐鶴酸的濃度為38旨/1，碳酸裡的濃度為1. 13mmol/l， 娃鶴酸的濃度為11.4g/L。
[0034]a、稱取適量憐鶴酸充分溶于蒸饋水中，最后加入碳酸裡，其中憐鶴酸濃度為160g/ 以碳酸裡的濃度為350mg/l，4°C冷藏備用；
[0035] b、稱取適量娃鶴酸充分溶于蒸饋水中，其中娃鶴酸濃度為40g/l，4°C冷藏備用；
[0036] C、緩沖溶液的制備：將0. 2mol/L乙酸鋼水溶液與0. 3mol/L乙酸水溶液按 5. 9:4. 1的體積比混合，pH值為4. 8,置2°C- 8°C冷藏保存?zhèn)溆茫?br>[0037] t將a、b、c步驟所制備的試劑按1:1. 2:2. 0混合，并將混合均勻的試劑分裝入5ml 安飯瓶并拉絲灌封，每個安飯瓶裝量為4ml，制備1000支。
[003引四、將一、二、S制備好的安飯瓶分別按檢測試劑1支、對照試劑1支，顯色試劑1 支，即可制作試劑盒1000盒。
[0039] 實施例2
[0040] 制作1000個尿液中琉基類化合物檢測試劑盒，過程如下：
[0041] 一、檢測試