一種具有趨骨性的去鐵敏衍生化合物及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明開發(fā)了一種具有趨骨性的去鐵敏衍生物及其制備方法和應(yīng)用。更具體來說，本發(fā)明提供了一種具有式(1)的結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、酰胺、酰鹵、水合物或溶劑合物。本發(fā)明還提供了該式(1)的化合物的制備方法及其在制備用于治療骨質(zhì)疏松、骨壞死、骨折延遲性愈或不愈合和骨缺損的藥物中的應(yīng)用。
【專利說明】
一種具有趨骨性的去鐵敏衍生化合物及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及一種去鐵敏衍生化合物，通過對該化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)改性，使得該化合 物同時具有優(yōu)良的鐵絡(luò)合能力和骨親和性。本發(fā)明還提供了該去鐵敏衍生化合物的制備方 法及其在制備用于治療骨質(zhì)疏松、骨壞死、骨折延遲性愈合或不愈合和骨缺損的藥物中的 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 骨質(zhì)疏松癥(〇ste〇p〇r〇Sis，0P)是以骨量進(jìn)行性降低、骨微結(jié)構(gòu)破壞、骨脆性增加 為主要病理特征的骨代謝性疾病，易發(fā)骨折是骨質(zhì)疏松導(dǎo)致的最嚴(yán)重后果之一。骨質(zhì)疏松 不僅是危害老年人尤其是絕經(jīng)后婦女健康及影響其生活質(zhì)量的醫(yī)學(xué)問題，而且已成為當(dāng)今 老齡社會的嚴(yán)重社會問題，為此，世界各國都傾注大量的人力、物力，以期在闡明其發(fā)生機(jī) 理的基礎(chǔ)上，提出合理、強(qiáng)效的防治策略。
[0003] 骨質(zhì)疏松的藥物治療，除應(yīng)用鈣制劑和促進(jìn)鈣吸收的基礎(chǔ)干預(yù)外，還包括雌激素 類、選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑、降鈣素類、二磷酸鹽類、甲狀旁腺素、鍶鹽等。目前，針對骨轉(zhuǎn) 換過程中，成骨細(xì)胞性骨形成與破骨細(xì)胞性骨吸收功能間"耦聯(lián)"因子，正在研制或正在進(jìn) 行臨床試驗(yàn)RANKL蛋白和骨硬化蛋白可溶性抗體等治療骨質(zhì)疏松的生物制劑。
[0004] 缺血性骨壞死尤其是缺血性股骨頭壞死(Osteonecrosis of the femoral head, 0NFH)，分創(chuàng)傷性與非創(chuàng)傷性兩類，皆以骨進(jìn)行性壞死、骨吸收為主要病理特征。在關(guān)節(jié)部位 (如0NFH)，因軟骨下骨壞死、吸收，可造成關(guān)節(jié)軟骨塌陷，致殘率高。老年人骨質(zhì)疏松性髖部 骨折，是創(chuàng)傷性O(shè)NFH的主要病因。迄今，有關(guān)缺血性骨壞死的發(fā)病機(jī)制不清，其有效的治療 藥物缺乏，目前嘗試性應(yīng)用低分子肝素、二膦酸鹽、普伐他汀等藥物治療的有效性有待確定 或難以湊效。
[0005] 盡管骨質(zhì)疏松與骨壞死間的關(guān)聯(lián)性尚待闡明，但越來越多的研究表明，骨質(zhì)疏松 的發(fā)生和發(fā)展與體內(nèi)鐵過載和骨組織供血不足(尤其在老年人)密切相關(guān)，并且已被認(rèn)為是 骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生和發(fā)展的獨(dú)立因素;不明原因所致骨組織血供障礙是骨壞死發(fā)生發(fā)展的 始動因素，亦為現(xiàn)在共識的觀點(diǎn)。因此，改善和恢復(fù)骨組織血供，不僅具有保護(hù)骨組織構(gòu)筑、 防治骨質(zhì)疏松和骨壞死的功效，而且因骨質(zhì)疏松性骨折的減少，將使骨壞死的發(fā)病率減低。
[0006] 去鐵敏，又名去鐵胺(deferoxamine，DF0)，具有式(3)所示的結(jié)構(gòu)，其可以1:1比例 與Fe 3+結(jié)合。
[0007]
[0008] DFO作為鐵離子絡(luò)合劑，于1970年代開始應(yīng)用于臨床，主要用于治療血色素沉著病 和地中海貧血、鐮狀細(xì)胞貧血等由于輸血引起的慢性鐵負(fù)荷過重的疾病。近年來申請者的 研究發(fā)現(xiàn)，DFO絡(luò)合鐵離子的特性，可激活成骨細(xì)胞細(xì)胞低氧/低氧誘導(dǎo)因子(HIF)-a通路， 而刺激骨組織血管新生，進(jìn)而促進(jìn)骨形成和骨修復(fù)，DFO激活低氧/HIF-α通路可促進(jìn)骨形成 的有益作用，正在引導(dǎo)藥用低氧模擬化合物的研發(fā)及骨病損的防治，并呈熱點(diǎn)研究內(nèi)容的 發(fā)展趨勢。因此，DFO可至少通過直接絡(luò)合骨組織中過載鐵離子和間接誘生骨組織血管的二 種途徑，而發(fā)揮骨保護(hù)作用。雖然，DFO使用相對安全，但半衰期短，需緩慢皮下或靜脈輸注， 并因 DFO水溶性的特點(diǎn)和骨血流量、代謝相對低下的特征，使DFO在骨組織中的分布率較低； 加大DFO劑量和用藥時間，可引起聽力或視力障礙、生長發(fā)育遲緩、骨骼變形等不良反應(yīng)，從 而限制了DFO的骨作用效果，目前還難以適用于進(jìn)行性骨丟失疾病的系統(tǒng)性藥物治療。
[0009] 為了解決以上問題，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過對DFO進(jìn)行特殊的結(jié)構(gòu)改性，可以 使其呈現(xiàn)對骨組織具有親和性的特點(diǎn)，同時不影響DFO絡(luò)合鐵離子的活性，由此得到具有趨 骨性的DFO衍生化合物，使用該化合物能夠?qū)崿F(xiàn)將DFO導(dǎo)入并濃集于骨組織中，以期特異性 地增加 DFO在骨組織中的濃度，提高其防治骨質(zhì)疏松、骨壞死等骨代謝性疾病藥效，減少藥 物系統(tǒng)性不良作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的第一個方面提供了一種式（1)所示的化合物，及其藥學(xué)上可接受的鹽、 酯、酰胺、酰鹵、水合物或溶劑合物：
[0011]
[0012] 其中R1選自以下基團(tuán)：取代或未取代的C1-C1O烷基、取代或未取代的C 1-C1O烯基、取 代或未取代的C1-Ciq烷氧基、取代或未取代的C 1-Ciq烯氧基、氟、氯、溴和碘；
[0013] R2-R4各自獨(dú)立地選自各自獨(dú)立地以下基團(tuán)：羥基、取代或未取代的C1-C 1Q烷基、取 代或未取代的C1-Ciq烯基、取代或未取代的C 1-Ciq烷氧基、取代或未取代的C1-Ciq烯氧基、氟、 氯、溴和碘；
[0014] R5-R7各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：氫、羥基、取代或未取代的C1-C 1Q烷基、取代或未取 代的C1-Ciq烯基、取代或未取代的C 1-Ciq烷氧基、取代或未取代的C1-Ciq烯氧基、氟、氯、溴和 碘；
[0015] R8-R45各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：氫、羥基、取代或未取代的C1-C 1Q烷基、取代或未 取代的C1-Ciq烯基、取代或未取代的C 1-Ciq烷氧基、取代或未取代的C1-Ciq烯氧基、氟、氯、溴 和碘；
[0016] m是選自以下的整數(shù)：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12;
[0017] A是源自包含1-8個氮原子和2-6個羧基的有機(jī)多元酸的基團(tuán)，通過其中的一個氮 原子與式(1)所示化合物的其它部分相連。
[0018] 根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施方式，所述A基團(tuán)是選自以下的基團(tuán)，通過所示氮原子的單 鍵與式（1)所示化合物的其它部分相連：
[0019]
[0020] 在以上基團(tuán)中，η是選自以下的整數(shù)：1、2、3、4、5和6。
[0021] 根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方式，在式（1)所示的化合物中，R1選自以下基團(tuán)： 取代或未取代的(^-〇 4烷基、取代或未取代的C1-C4烯基、取代或未取代的C1-C 4烷氧基、取代 或未取代的C1-C4烯氧基、氟、氯、溴和碘；
[0022] R2-R4各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：羥基、取代或未取代的C1-C 4烷基、取代或未取代 的&_〇4烯基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C 4烯氧基、氟、氯、溴和碘； [0023] R5-R7各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：氫、羥基、取代或未取代的C1-C 4烷基、取代或未取 代的C1-C4烯基、取代或未取代的&-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C 4烯氧基、氟、氯、溴和碘； [0024] R8-R45各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：氫、羥基、取代或未取代的C1-C 4烷基、取代或未取 代的C1-C4烯基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C 1-C4烯氧基、氟、氯、溴和碘。
[0025] 本發(fā)明的第二個方面提供了一種用來制備所述式（1)的化合物的方法，該方法包 括以下步驟：
[0026] (i)使得包含1-8個氮原子和2-6個羧基的有機(jī)多元酸與醇反應(yīng)，以對所述有機(jī)多 元酸所有的羧基進(jìn)行保護(hù)；
[0027] (ii)使得步驟(i)制得的羧基收到保護(hù)的有機(jī)多元酸與C3-C14二酸的酸酐反應(yīng)；
[0028] (i i i)使得步驟(i i)的產(chǎn)物與具有式(2)的去鐵敏或去鐵敏衍生物反應(yīng)；
[0029] (iv)對步驟（iii)制得的產(chǎn)物的受到保護(hù)的羧基進(jìn)行脫保護(hù)，得到式（1)的化合 物：
[0030]
[0031] 其中在式(2)所示的結(jié)構(gòu)中，R1選自以下基團(tuán)：取代或未取代的心^^)烷基、取代或 未取代的&-&〇烯基、取代或未取代的C 1-C1Q烷氧基、取代或未取代的C1-C1Q烯氧基、氟、氯、 溴和碘;優(yōu)選取代或未取代的C 1-C4烷基、取代或未取代的C1-C4烯基、取代或未取代的C 1-C4 烷氧基、取代或未取代的C1-C4烯氧基、氟、氯、溴和碘；
[0032] R2-R4各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：羥基、取代或未取代的C 1-Ciq烷基、取代或未取代 的&-&〇烯基、取代或未取代的C1-C 1Q烷氧基、取代或未取代的C1-C1Q烯氧基、氟、氯、溴和碘； 優(yōu)選羥基、取代或未取代的C 1-C4烷基、取代或未取代的C1-C4烯基、取代或未取代的C 1-C4烷 氧基、取代或未取代的C1-C4烯氧基、氟、氯、溴和碘；
[0033] R5-R7各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：氫、羥基、取代或未取代的C 1-Ciq烷基、取代或未取 代的C1-C1Q烯基、取代或未取代的C1-C1Q烷氧基、取代或未取代的C 1-C1Q烯氧基、氟、氯、溴和 碘;優(yōu)選氫、羥基、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C1-C 4烯基、取代或未取代的 &-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C4烯氧基、氟、氯、溴和碘；
[0034] R8-R45各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：氫、羥基、取代或未取代的C 1-Ciq烷基、取代或未 取代的C1-C1Q烯基、取代或未取代的C 1-C1Q烷氧基、取代或未取代的C1-C1Q烯氧基、氟、氯、溴 和碘;氫、羥基、取代或未取代的C 1-C4烷基、取代或未取代的C1-C4烯基、取代或未取代的C 1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C4烯氧基、氟、氯、溴和碘。
[0037] 根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施方式，所述步驟(i)的反應(yīng)在溶劑中，在存在催化劑的情況 下進(jìn)行，
[0035] 根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施方式，在用來制備式（1)的化合物的方法中，所述包含1 -8 個氮原子和2-6個羧基的有機(jī)多元酸選自以下結(jié)構(gòu)式中的一種或多種所示的含氮有機(jī)多元 酸： 1
[0038] 所述醇選自：C1-Ciq烷基醇和C7-C16#基醇;優(yōu)選是苯甲醇；
[0039] 所述溶劑選自：苯、甲苯、環(huán)己烷、丙酮、乙醚、二甲醚、二丙醚、以及它們當(dāng)中任意 兩種或更多種的混合物；
[0040] 所述催化劑是選自以下的酸催化劑:硫酸、鹽酸、磷酸、硝酸J1-C6烷基磺酸、苯磺 酸、甲苯磺酸;優(yōu)選是對甲苯磺酸。
[0041] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實(shí)施方式，所述步驟（ii)在選自以下的溶劑中進(jìn)行:包含一 個或多個鹵原子的液態(tài)烷烴，所述鹵原子選自氟、氯、溴、碘;優(yōu)選地，步驟(ii)使用的溶劑 選自一氯甲烷、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、及其任意混合物。
[0042] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實(shí)施方式，所述步驟(iii)在溶劑中、在使用催化劑的條件下 進(jìn)行進(jìn)行，
[0043] 所述溶劑選自：苯、甲苯、環(huán)己烷、丙酮、乙醚、二甲醚、二丙醚、N，N_二甲基甲酰胺 以及它們當(dāng)中任意兩種或更多種的混合物；
[0044]所述催化劑選自：六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)、IH-苯并 三唑-1-基氧代三(二甲氨基)磷鑰六氟磷酸鹽(BOP)U-羥基苯并三氮唑(HOBT)和N，N'_二 環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，優(yōu)選六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)。
[0045] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實(shí)施方式，所述步驟(iv)的羧基脫保護(hù)反應(yīng)是在催化劑存在 的情況下通過氫化反應(yīng)進(jìn)行的，
[0046] 所述催化劑選自負(fù)載型貴金屬催化劑，優(yōu)選是負(fù)載型鈀、鉑、銠催化劑，更優(yōu)選是 鈀碳。
[0047]根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方式，當(dāng)以上所述式（1)和式(2)中的取代基R^R45是 取代的基團(tuán)的時候，表示這些基團(tuán)上的任意一個或多個氫原子被選自以下的一種或多種基 團(tuán)取代:Cl-ClQ烷基、Cl-C4烷基、Cl -ClQ烯基、Cl-C4烯基、Cl-ClQ烷氧基、Cl-C4烷氧基、氛基、氣、 氯、溴、碘、羥基、酯基、醚基、酰胺基、亞酰胺基。
[0048] 本發(fā)明的第三個方面提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包含：
[0049] 以上所述式（1)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、酰胺、酰鹵、水合物或溶劑合 物；
[0050] (ii)藥學(xué)上可接受的任選的賦形劑、填料、載體和稀釋劑中的一種或多種；以及
[0051] (iii)任選的不同于組分（i)的藥學(xué)活性組分，所述藥學(xué)活性組分選自：阿侖膦酸 鈉片、唑侖膦酸鈉、帕米膦酸二鈉、維生素 D、利塞膦酸鈉、特立帕肽、雷尼酸鍶、雷洛昔芬、降 鈣素、雌激素、尼爾雌醇、雌孕激、他莫昔芬、依普黃酮、氯屈膦酸二鈉片、骨松寶顆粒、倍美 力、紫竹愛維、固蘇桉、依替膦酸二鈉片、邦特林、特樂定、葡萄糖酸鈣片、葡萄糖酸鈣鋅口服 溶液、倍美盈、利巴韋林片、益鈣寧、易維特、貝邦、密蓋息、腎骨片、牡蠣碳酸鈣、媽爾奇碳酸 鈣D3片、維D2果糖酸鈣注射液、蓋瑞寧、氯屈膦酸二鈉膠囊、阿法迪三、注射用骨肽、鹿瓜多 肽注射劑、丹紅注射液、紅花注射液、頭孢拉定、克林霉素、萬古霉素、低分子右旋糖酐氨基 酸、羥乙基淀粉注射液、低分子肝素鈉注射液、乳酸鈉林格注射液、甘油果糖氯化鈉注射液。
[0052] 本發(fā)明的第四個方面提供了所示式（1)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、酰 胺、酰鹵、水合物或溶劑合物在制備用于治療骨質(zhì)疏松、骨壞死、骨折延遲性愈合或不愈合 和骨缺損的藥物中的應(yīng)用。
【附圖說明】
[0053] 在本發(fā)明中結(jié)合附圖對本發(fā)明的原理和實(shí)施方式進(jìn)行描述。
[0054] 圖1是根據(jù)本發(fā)明一個實(shí)施方式的合成式(1)的化合物的方法的流程圖；
[0055] 圖2是根據(jù)本發(fā)明一個實(shí)施方式化合物對三價鐵離子絡(luò)合能力的表征結(jié)果；
[0056]圖3顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實(shí)施方式的化合物刺激成骨細(xì)胞表達(dá)HIF-Ia蛋白的表 征結(jié)果；
[0057]圖4顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實(shí)施方式的化合物刺激成骨細(xì)胞表達(dá)VEGF、H〇-lmRNA 的表征結(jié)果(實(shí)時-PCR);
[0058]圖5顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實(shí)施方式的化合物親骨性能的表征結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0059] 在以下內(nèi)容中將會對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述。但是需要指出的是，以下的
【具體實(shí)施方式】僅僅以示例性的方式給出本發(fā)明的具體操作實(shí)例，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍不 僅限于此。本發(fā)明的保護(hù)范圍僅僅由權(quán)利要求書所限定。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠顯而易見地 想到，可以在本發(fā)明權(quán)利要求書限定的保護(hù)范圍之內(nèi)對本發(fā)明所述的實(shí)施方式進(jìn)行各種其 它的改良和替換，并且仍然能夠?qū)崿F(xiàn)相同的技術(shù)效果，達(dá)到本發(fā)明的最終技術(shù)目的。
[0060] 在本發(fā)明中，除非有相反的說明，所有的比例均為重量比，所有的百分?jǐn)?shù)均為重量 百分?jǐn)?shù)，溫度的單位為°(：，壓力的單位為帕。室溫指實(shí)驗(yàn)室內(nèi)常規(guī)的環(huán)境溫度，隨季節(jié)和位 置變化，通常為25°C。另外，本發(fā)明描述的所有數(shù)值范圍均包括端值并且可以包括將公開的 范圍的上限和下限互相任意組合得到的新的數(shù)值范圍。例如，如果公開了某種組分的重量 百分含量為10~30重量％，優(yōu)選15~25重量％，更優(yōu)選20~23重量％，則相當(dāng)于同時公開了 以下的數(shù)值范圍：10~15重量％、10~25重量％、10~20重量％、10~23重量％、15~30重 量％、15~20重量％、15~23重量％、20~25重量％、23~25重量％。
[0061] 本發(fā)明的式（1)的化合物是通過對式(3)所示的去鐵敏(DFO)或式(2)所示的去鐵 敏衍生化合物進(jìn)行進(jìn)一步結(jié)構(gòu)改性而制得的?？梢钥吹剑?3)所示的去鐵敏結(jié)構(gòu)實(shí)際上包 括在式(2)所示結(jié)構(gòu)的范圍之內(nèi)。在本發(fā)明的合成步驟中使用的式(2)所示的去鐵敏衍生化 合物以及式(3)所示的去鐵敏均屬于本領(lǐng)域公知的商業(yè)產(chǎn)品，均可購自Sigma、國藥集團(tuán)和 阿拉丁公司。在本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)中具體使用的去鐵敏、去鐵敏衍生化合物a、去鐵敏衍生化合 物b、去鐵敏衍生化合物c均購自Sigma公司。另外，本領(lǐng)域技術(shù)人員也可以根據(jù)所需的最終 產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)，在去鐵敏的分子上進(jìn)行任意的取代和修飾。
[0062] 為了制備本發(fā)明式（1)所示的化合物，發(fā)明人使用包含3-14個碳、優(yōu)選3-8個碳、更 優(yōu)選3-6個碳的二?；B接基團(tuán)將改性基團(tuán)A與去鐵敏中的端部氮原子共價連接。根據(jù)本發(fā) 明的一個實(shí)施方式，所述基團(tuán)A是由包含至少一個氮原子和至少兩個羧基的有機(jī)多元羧酸 脫去其氮原子上的一個氫原子而得到的。通過此種結(jié)構(gòu)改性，使得式（1)的化合物總體上表 現(xiàn)出極佳的骨親和性，同時鐵絡(luò)合能力基本上不受影響。
[0063]圖1顯示了以式(3)所示的去鐵敏、丁二酸酐和亞氨基二乙酸為例描述了本發(fā)明的 趨骨性化合物(DFO-SF)的合成歷程。但是需要指出的是，本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此， 可以根據(jù)目標(biāo)產(chǎn)物的具體結(jié)構(gòu)對所用原料的種類、反應(yīng)條件和操作步驟進(jìn)行調(diào)整。
[0064] 如圖1所示，使用的亞氨基二乙酸的結(jié)構(gòu)如下所示：
[0065]
[0066] 在圖1所示的第一個步驟中，使用苯甲醇作為保護(hù)劑，在對甲苯磺酸的催化作用下 發(fā)生反應(yīng)，使得亞氨基二乙酸的兩個羧基均與苯甲醇發(fā)生酯化反應(yīng)而被保護(hù)。
[0067] 在圖1所示的第二個步驟中，使得第一個步驟的產(chǎn)物與丁二酸酸酐在氯仿溶劑中 反應(yīng)，從而生成酰胺結(jié)構(gòu)。
[0068]在圖1所示的第三個步驟中，使得第二個步驟的產(chǎn)物去鐵敏(DFO)在溶劑N，N-二甲 基甲酰胺中，在存在PyBOP催化劑的條件下進(jìn)行反應(yīng)，從而將酯化的亞氨基二乙酸通過丁二 ?；c去鐵敏端部的氮原子相連。
[0069] 在圖1所示的第四個步驟中，使用鈀碳催化劑對第三個步驟的產(chǎn)物進(jìn)行脫芐(脫保 護(hù)反應(yīng)），制得最終的目標(biāo)化合物。
[0070] 本發(fā)明的化合物可以用于藥物組合物，該藥物組合物包含治療有效量的本發(fā)明化 合物和藥用賦形劑。
[0071] 所述的"治療有效量"指本發(fā)明化合物的含量就其下限而言應(yīng)足以提供所需的骨 病治療效果，同時，就其上限而言尚不至于引起嚴(yán)重的不良副作用，即在本領(lǐng)域廣泛認(rèn)可的 效險比范圍之內(nèi)。該有效量取決于多種因素，例如但不限于:所治療的適應(yīng)癥，嚴(yán)重程度，同 期治療，療程以及患者年齡，健康狀況，醫(yī)療史等公眾因素。基于所選的骨病藥物即上述因 素，本領(lǐng)域技術(shù)人員不難確定或通過常規(guī)試驗(yàn)取定所述有效量。
[0072] 本發(fā)明藥物組合物的劑型至少可以是固體劑，如片劑;或液體劑，如注射劑，主要 是全身即系統(tǒng)性用藥。例如，可以口服、注射，包括肌肉注射和靜脈注射給藥等。
[0073] 所述的藥用賦形劑為本領(lǐng)域所熟知。根據(jù)活性成分，劑型，所需的制劑特性，在不 影響本發(fā)明化合物療效的前提下，本領(lǐng)域技術(shù)人員不難直接或通過常規(guī)試驗(yàn)做出合適的選 擇。所述賦形劑例如但不限于:稀釋劑，填充劑，崩解劑，粘合劑，增稠劑，矯味劑，抗微生物 劑，抗氧化劑，潤滑劑等。
[0074] 本發(fā)明還提供了本發(fā)明化合物在制備治療骨質(zhì)疏松、骨壞死及其相關(guān)疾病的藥物 中的用途。
[0075] 下面將結(jié)合實(shí)施例具體描述本發(fā)明的技術(shù)方案。
[0076] 實(shí)施例
[0077] 以下合成實(shí)施例1-4所使用的去鐵敏、去鐵敏衍生化合物a、去鐵敏衍生化合物b、 去鐵敏衍生化合物c均購自Sigma公司；亞氨基二乙酸和2，2 肼-1，2-二基二乙酸，2，2 亞 甲基-雙脲二基二乙酸，2，2 丙基-1，3-雙脲二基二乙酸均購自阿拉丁公司；丁二酸酐和己 二酸酐分別購自國藥集團(tuán)和阿拉丁公司；PyBOP購自Sigma公司；Pd/C購自Sigma公司，其Pd 摻雜量為10%;其余的化學(xué)試劑均為購自Sigma公司的分析級試劑;所使用的水為去離子雙 蒸餾水。反應(yīng)在常溫常壓條件下進(jìn)行。化合物熔點(diǎn)用Fisher-John熔點(diǎn)儀測定。核磁共振譜 用Bruker AM-400型光譜儀測定。質(zhì)譜用VG-707E質(zhì)譜儀測定。元素分析用CarIo Erbal 106 型元素分析儀測定。
[0078]合成實(shí)施例1
[0079] 本實(shí)施例中合成得到了式(4)所示的DFO-SF化合物，即按照圖1所示的反應(yīng)歷程所 示的最終化合物。
[0080]
[0081] 1.化合物(a)的制備
[0082] 向一個250ml的三頸燒瓶中加入60ml甲苯、95ml苯甲醇、6g亞氨基二乙酸和10.3g 甲苯-4-磺酸，反應(yīng)混合物于80 °C下反應(yīng)18h，溶液由乳白色渾濁變?yōu)槌吻?，令卻后析出白色 固體，過濾后將白色固體溶于100mL三氯甲烷，在攪拌條件下向其中滴加三乙胺直至溶液澄 清，該溶液使用500mL飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌一次，使用無水硫酸鎂進(jìn)行干燥，真空旋干 后得無色透明油狀物13.6g，產(chǎn)率為96wt %。
[0083] 2.化合物(b)的制備
[0084] 取一個50ml圓底燒瓶，加入6.28g上述化合物(a)，再加入30ml三氯甲烷，攪拌得到 澄清溶液后向其中加入2.2g 丁二酸酐，于50°C下反應(yīng)3h，真空旋干，得無色透明油狀物 8.41g，過柱(硅膠柱色譜)后得7.19g產(chǎn)物，產(chǎn)率為86wt %。
[0085] 3.化合物（c)的制備
[0086] 取一個50ml圓底燒瓶，加入0.7g化合物(b)、5ml DMF和0.45g PyBOP，在冰浴條件 下攪拌lOmin，再加入3g NMM后繼續(xù)攪拌。取一 15ml試管，稱取0.5g去鐵敏，加入5ml DMF，滴 加5M KOH水溶液至澄清后將該澄清溶液加入上述圓底燒瓶，常溫下反應(yīng)96h，白色固體析 出，濾出該白色沉淀，使用30mLDMF洗二次，使用30mLTHF洗一次，真空旋干得白色固體 〇.38 8，產(chǎn)率為58￥七％。
[0087] 4.化合物(d)的制備
[0088] 取一個25ml圓底燒瓶，加入0.38g上一步的反應(yīng)產(chǎn)物（即化合物（C))，向其中加入 15ml DMF，0.04g Pd/C，將該圓底燒瓶置于氫化釜中，在壓力為l.IMPa、溫度為50°C的條件 下下反應(yīng)3h，過濾后真空旋干DMF，加入20毫升乙醇，攪拌Ih后過濾，真空旋干得白色固體 〇. 31g，測得該產(chǎn)物的熔點(diǎn)為141.8-147.7°C，產(chǎn)率為99wt %。元素分析C33H57N7Oi4，理論值 (%):C 51·09，Η 7·41，Ν 12.64;實(shí)際值（％):C 51.05，H 7.44，N W.egc/H-NMlKd-DMSOM ppm:9.55(m，2H，ES:-CH2ra〇-)，6.69-7.71(m，3H，ES :-NH-)，3.95-4.15(m，4H，ES:-CH2-)， 3.44-3.47(m，6H，ES:-CH2-)，2.98-3.03(m，6H，ES :-CH2-)，2.5h2.59(m，4H，ES:-CH2-)，2.5 (m，2H，ES:-CH2-)，2.45-2.49(m，4H，ES :-CH2-)，1.97(m，2H，ES:-CH2-)，1.49-1.54(m，3H， ES:-OH)，1.47(m，3H，ES:-CH2〈），1.35-1.42(m，12H，ES :-CH2-)，1.2-1.26(m，6H，ES:-CH2-)。 MS(EI)m/z:776.4。
[0089] 合成實(shí)施例2
[0090] 在該實(shí)施例中完全重復(fù)以上實(shí)施例1的步驟，區(qū)別在于，使用以下結(jié)構(gòu)式a所示的 去鐵敏衍生物a，該去鐵敏衍生物a的分子式為C26H50N609，分子量為590.71，使用的連接基 團(tuán)是戊二酸酐，使用的亞二氨基二羧酸是2，2'_肼-I，2-二基二乙酸。所得產(chǎn)物的質(zhì)譜表征 結(jié)果如下:MS(ESI )m/z : 836.2(理論值834.91)，其分子式為C35H62N8015，結(jié)果證明該產(chǎn)物 具有以下式(5)所示的結(jié)構(gòu)：
[0091]
[0092]合成實(shí)施例3
[0093] 在該實(shí)施例中完全重復(fù)以上實(shí)施例1的步驟，區(qū)別在于，使用具有以下結(jié)構(gòu)式b所 示結(jié)構(gòu)的去鐵敏衍生物b，其分子式為C27H52N609,分子量為604.74,使用的連接基團(tuán)是己 二酸酐，使用的亞氨基二羧酸是2,2'_亞甲基-雙脲二基二乙酸。所得產(chǎn)物的理論分子式為 C38H68N8015,質(zhì)譜表征結(jié)果如下:MS(ESI)m/z :878.2(理論值876.99)，證明制得了具有式 (6)所示結(jié)構(gòu)的產(chǎn)物。
[0094]
[0095]合成實(shí)施例4
[0096]在該實(shí)施例中完全重復(fù)以上實(shí)施例1的步驟，區(qū)別在于，使用具有以下結(jié)構(gòu)式c所 示結(jié)構(gòu)的去鐵敏衍生物c，其分子式為C28H54N609,分子量為618.76,使用的連接基團(tuán)是辛 二酸酐，使用的亞氨基二羧酸是2，2丙基-1，3-雙脲二基二乙酸。所得產(chǎn)物的理論分子式 為〇43!178_015，質(zhì)譜表征結(jié)果如下 :13"31)111/2:948.2(理論值947.12)，結(jié)果證明該實(shí)施 例制得的產(chǎn)物具有下式(7)所示的結(jié)構(gòu)。
[0097:
[0098]實(shí)施例5鐵離子絡(luò)合性能測試
[0099] 在本實(shí)施例中表征了以上實(shí)施例中制得的化合物對三價鐵離子的絡(luò)合能力。具體 來說，將枸橡酸鐵銨(ferric ammoniumcitrate，F(xiàn)AC)作為三價鐵離子供體，溶解于雙蒸水 形成溶液，分別向其中加入相同摩爾量的以上合成實(shí)施例1-4制備的化合物以及未進(jìn)行本 發(fā)明所述取代改性的去鐵敏，應(yīng)用貝克曼DXC600全自動生化分析儀檢測溶液中游離鐵離子 含量，以了解本發(fā)明的化合物是否具有良好的絡(luò)合鐵離子的特性。圖2顯示了實(shí)施例1制備 的DFO-SF和未取代的DFO對鐵離子的絡(luò)合情況，圖2中的對照是僅使用雙蒸水而不添加 FAC 的情況下測得的鐵離子含量。本發(fā)明實(shí)施例2-4制得的化合物也得到了與實(shí)施例1的化合物 基本相同的效果。
[0100] 該體外實(shí)驗(yàn)表明，在取代改性之后，本發(fā)明的化合物仍然可以實(shí)現(xiàn)令人滿意的鐵 離子絡(luò)合性能。
[0101] 實(shí)施例6刺激細(xì)胞表達(dá)低氧誘導(dǎo)因子(HIF)-a及其下游靶基因的性能
[0102] 在該實(shí)施例中研究了本發(fā)明的化合物刺激細(xì)胞表達(dá)低氧誘導(dǎo)因子(HIF)-a及其下 游靶基因的性能。具體來說，取出生后48小時的小鼠顱蓋骨，剪成1X1 Xlmm3小塊、胰蛋白 酶和I型膠原酶消化，分離、純化新生小鼠顱蓋骨成骨細(xì)胞;以2X104/cm 2的細(xì)胞密度接種至 6孔培養(yǎng)板;細(xì)胞在培養(yǎng)板底貼壁生長至80%混合時，分別使用本發(fā)明實(shí)施例1-4的化合物 濃度為200yM(DF0凈濃度）的條件培養(yǎng)液對以上所述的新生小鼠顱蓋骨成骨細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)， 使用未取代改性的DFO濃度為200μΜ的條件培養(yǎng)液作為對照實(shí)驗(yàn)。培養(yǎng)液干預(yù)培養(yǎng)成骨細(xì)胞 48小時后，收獲細(xì)胞，按照以下具體描述的步驟分別檢測HIF-Ia蛋白表達(dá)狀況和HIF-Ia及 其下游靶基因 mRNA表達(dá)狀況，以了解DFO的性能是否因被SF修飾而改變。
[0103] I.HIF-Ia蛋白表達(dá)狀況的檢測(Westernblot法）
[0104] (1)提取細(xì)胞總蛋白細(xì)胞培養(yǎng)孔板中加入100μΙ蛋白裂解液RIPA(Bey〇time， China)和ΙμL蛋白酶抑制劑PMSF(Beyotime ,China)，放置于冰上；用細(xì)胞刮仔細(xì)刮取細(xì)胞， 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至〇 . 5ml離心管中，冰上放置30分鐘;4°C，12000g離心15分鐘，將上清小心轉(zhuǎn)移 至無菌離心管中，_80°C保存?zhèn)溆?，此即為?xì)胞總蛋白。（2)采用蛋白定量試劑盒(Beyotime China)測定蛋白濃度主要步驟為:取1.2ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入30mg BSA標(biāo)準(zhǔn)蛋白中，充分 溶解后配制成25mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液(配制后可立即使用，也可以-20°C長期保存）；取適 量25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，稀釋至終濃度為0.5mg/ml;根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積 BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻;將標(biāo)準(zhǔn)品按0，1，2，4，8，12，16，20μ1加到96 孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20μ1;加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中，加 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液到20μ1;各孔加入200μ1 BCA工作液，37 °C放置30分鐘；測定Α562，540-595nm 之間的波長也可接受;根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品的蛋白濃度。（3)蛋白電泳（電泳儀，Bio-Rad ， USA) 安裝玻璃板 、灌膠 ，按順序 ，每加樣孔加入蛋 白量為 30yg; 未加樣的上樣孔 中加入 30μ1上樣緩沖液平衡；120V電壓條件下電泳約75-90min，溴酚藍(lán)到達(dá)膠底部時停止電泳。 (4)切膠、轉(zhuǎn)膜按預(yù)染的蛋白Marker (Thermo，USA)切取所需目的條帶，將膠浸入事先準(zhǔn)備好 的轉(zhuǎn)膜緩沖液中；剪取PVDF膜(Mi 11 ipore，Germany )，并在右角上做標(biāo)記，用甲醇浸潤激活， 浸入轉(zhuǎn)膜緩沖液中。安裝轉(zhuǎn)移裝置"三明治結(jié)構(gòu)"從下到上依次為濾紙-膜-膠-濾紙，每 層均需確保無氣泡;將轉(zhuǎn)膜盒(Bio-Rad，USA)用冰覆蓋，200mA恒流轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜時間約2h左右 (分子量小的蛋白轉(zhuǎn)膜時間可適當(dāng)縮短）。（5)免疫反應(yīng)將膜浸入5%脫脂奶粉中，置搖床于 室溫?fù)u動1小時；取出膜并另裝入一適中的塑料袋，加入用2%BSA按1:500稀釋的HIF-Ia抗 體(N 〇vus，USA)(-抗），封袋后，置于搖床，4°C條件下?lián)u動過夜;棄一抗，洗膜3次;將膜另裝 入一適中的塑料袋，加入用2%BSA按1:5000稀釋的抗小鼠二抗(Abbkine，USA)，室溫孵育1-2h;棄二抗，洗膜3次。（6)顯影于Image Quant LAS 4000mini機(jī)器內(nèi)顯影，顯影液 (Millipore Germany)為Millipore A、B液按1:1比例配制;保存條帶圖像。
[0105] 2. HIF-Ia及其下游靶基因 mRNA表達(dá)狀況的檢測
[0106] 按試劑盒（Sigma，USA)說明的"一步法"抽提細(xì)胞總RNA，主要步驟為：每毫升 Trizol液中加0.2ml氯仿，劇烈振動15秒，室溫下靜置3分鐘；于4°C，12000g離心15分鐘，取 上層無色液相，移入新的滅菌的無 RNA酶試管;按最初Trizol液的量，每毫升加入0.5ml異丙 醇沉淀RNA，置室溫下10分鐘;4°C，12000g離心10分鐘，在試管底和側(cè)壁可見白色膠樣小滴； 按最初Trizol液的量，加入等量的75%乙醇洗滌;輕輕振蕩，4°C，7500g離心5分鐘；晾干RNA (切勿完全晾干，一般室溫下晾5miη )，把RNA溶解于DEPC水中；56~60 °C，孵育IOmiη;分光光 度計(jì)檢測RNA含量和濃度，RNA鑒定和初定量。應(yīng)用PCR逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Takara，Japan )，RNA反 轉(zhuǎn)錄獲cDNA，主要步驟為：取Iyg總RNA，隨機(jī)引物ΙμL，補(bǔ)加 DEPC處理的雙蒸水至12μ1，70°C 孵育5分鐘；隨后置于冰上，依次加入5x反應(yīng)緩沖液4μ1，IOnM dNTP2yl，RNA酶抑制劑0.5μ1， 加 DEPC處理的雙蒸水至19μ1，25Γ孵育5分鐘后加入逆轉(zhuǎn)錄酶(M-MLV)lyl，使總體積為20μ 1;按照25 °C 10分鐘，42 °C 60分鐘，70 °C 10分鐘PCR孵育器上孵育，完成后置于冰上終止反應(yīng)； 逆轉(zhuǎn)錄的cDNA直接PCR或者-20°C保存。分別設(shè)計(jì)并合成低氧誘導(dǎo)因子(HIF)-Ia及其下游靶 基因一血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和血紅素加氧酶(HO)-I的基因序列引物(HIF-Ια引物序 列：上游-GGTATTATTCAGCACGAC，下游-GAGGGAAACATTACATC ; VEGF 引物序列：上游-AGTCCCATGAAGTGATCAAGTTCA，下游-ATCCGCATGATCTGCATGG ; HO-I 引物序列：上游-AAGCCGAGAATGCTGAGTTCA，下游-GCCGTGTAGATATGGTACAAGGA);按PCR熒光定量試劑盒 (Takara，Japan)說明，形成反應(yīng)體系（SYBR :<Green，10yl;R0X Reference Dye ΙΙ，0·4μ1; 上下游引物，各〇 . 8μ1; cDNA，2 . ΟμL;雙蒸水，補(bǔ)足至20μ1。）；定時定量PCR儀(AB Appl ied Biosystems，7500Real Time PCR System)定量檢測并比較分析SF-DF0刺激細(xì)胞表達(dá)HIF-1 α及其下游靶基因（VEGF、H0-1)的狀況（反應(yīng)條件如下：94°C5分鐘，94°C30s，55°C30s，72°C 30s，如此循環(huán)35次后，72°C 5分鐘結(jié)束反應(yīng)）。
[0107]本發(fā)明實(shí)施例1制得的DFO-SF與未取代改性的DFO測得的結(jié)果示于圖3和圖4。從圖 3和圖4的結(jié)果可以看到，與未取代改性的DFO相比，本發(fā)明實(shí)施例1制得的DFO-SF具有類似 的刺激成骨細(xì)胞表達(dá)HIF-Ια及其靶基因一血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、氧合酶(HO)-I的性 能。本發(fā)明實(shí)施例2-4制備的化合物也表現(xiàn)出了與實(shí)施例1的化合物相同的效果。
[0108] 實(shí)施例7驅(qū)骨特性表征
[0109] 在該實(shí)施例中，使用同位素14C標(biāo)記本發(fā)明實(shí)施例1-4的化合物中的DFO或DFO衍生 化合物結(jié)構(gòu)之后，將該化合物配制成水溶液對小鼠進(jìn)行腹腔注射或尾靜脈注射，于不同時 相眼眶取血后處死，收集腎臟、股骨、脾臟、肺、肝臟和肌肉組織，采用液體閃爍計(jì)數(shù)儀 (WALLAC公司，Trilux 1450Micro Beta)測定各臟器中放射性強(qiáng)度，并將測得的cpm/mg組織 換算成dpm/mg組織。圖5顯示了本發(fā)明實(shí)施例1的DFO-SF化合物的表征結(jié)果，顯示該化合物 在小鼠體內(nèi)結(jié)構(gòu)性能穩(wěn)定，且通過本發(fā)明的取代改性能夠驅(qū)動DFO在骨組織中濃集。本發(fā)明 實(shí)施例2-4制備的化合物也表現(xiàn)出了相與實(shí)施例1同的效果。
[0110] 綜上所述，本發(fā)明實(shí)施例1-4合成得到的化合物對骨骼無不良影響，并且對骨代謝 有較高的活性，能促進(jìn)骨基質(zhì)的形成，可以用來將去鐵敏(DFO)靶向?qū)氩饩塾诠墙M織 中，進(jìn)而發(fā)揮絡(luò)合鐵離子、刺激骨組織血管新生的防治骨破壞的作用。本發(fā)明的趨骨性化合 物能特異性地增加藥物在骨組織中的濃度，提高其改善骨質(zhì)疏松成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞功 能、維持細(xì)胞特征性表型的有效作用。同時，由于改性基團(tuán)與去鐵敏結(jié)合后，對各自活性的 影響較小，對機(jī)體無毒副作用，所以可以提高骨病藥物符合化合物的穩(wěn)定性，并減少藥物的 系統(tǒng)性不良作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種式（1)所示的化合物，及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、酰胺、酰鹵、水合物或溶劑合 物-其中R1選自以下基團(tuán)：取代或未取代的心^^)烷基、取代或未取代的C1-C1O烯基、取代或 未取代的&^^)烷氧基、取代或未取代的C1-Ciq烯氧基、氟、氯、溴和碘； R2-R4各自獨(dú)立地選自各自獨(dú)立地以下基團(tuán)：羥基、取代或未取代的C1-C iq烷基、取代或 未取代的&^^)烯基、取代或未取代的C1-Ciq烷氧基、取代或未取代的C1-C iq烯氧基、氟、氯、 溴和碘； R5-R7各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：氫、羥基、取代或未取代的C1-C iq烷基、取代或未取代的 C1-Ciq烯基、取代或未取代的C1-Ciq烷氧基、取代或未取代的C 1-Ciq烯氧基、氟、氯、溴和碘； R8-R45各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：氫、羥基、取代或未取代的C1-C iq烷基、取代或未取代 的&^^)烯基、取代或未取代的C1-Ciq烷氧基、取代或未取代的C 1-Ciq烯氧基、氟、氯、溴和碘； m 是選自以下的整數(shù)：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12; A是源自包含1-8個氮原子和2-6個羧基的有機(jī)多元酸的基團(tuán)，通過其中的一個氮原子 與式(1)所示化合物的其它部分相連。2. 如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述A基團(tuán)是選自以下的基團(tuán)，通過所示氮 原子的單鍵與式（1)所示化合物的其它部分相連： 在以上基團(tuán)中，η是選自以下的整數(shù)：1、2、3、4、5和6。3. 如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其特征在于， Ri選自以下基團(tuán)：取代或未取代的&-〇4烷基、取代或未取代的C1-C4烯基、取代或未取代 的&-〇4烷氧基、取代或未取代的C1-C4稀氧基、氟、氯、溴和碘； R2-R4各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：羥基、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C 1-C4烯基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C 4烯氧基、氟、氯、溴和碘； R5-R7各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：氫、羥基、取代或未取代的C1-C 4烷基、取代或未取代的 C1-C4烯基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C 1-C4烯氧基、氟、氯、溴和碘； R8-R45各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：氫、羥基、取代或未取代的C1-C 4烷基、取代或未取代的 C1-C4烯基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C 1-C4烯氧基、氟、氯、溴和碘。4. 一種用來制備如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的化合物的方法，該方法包括以下步驟： (i) 使得包含1-8個氮原子和2-6個羧基的有機(jī)多元酸與醇反應(yīng)，以對所述有機(jī)多元酸 所有的羧基進(jìn)行保護(hù)； (ii) 使得步驟(i)制得的羧基受到保護(hù)的有機(jī)多元酸與C3-C14二酸的酸酐反應(yīng)； (i i i)使得步驟(i i)的產(chǎn)物與具有式(2)的去鐵敏或去鐵敏衍生物反應(yīng)； (iv)對步驟(iii)制得的產(chǎn)物的受到保護(hù)的羧基進(jìn)行脫保護(hù)，得到式(1)的化合物：其中R1選自以下基團(tuán)：取代或未取代的心^^)烷基、取代或未取代的C1-Ciq烯基、取代或 未取代的&^^)烷氧基、取代或未取代的C1-Ciq烯氧基、氟、氯、溴和碘;優(yōu)選取代或未取代的 C1-C4烷基、取代或未取代的C1-C4烯基、取代或未取代的C 1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C4 烯氧基、氟、氯、溴和碘； R2-R4各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：羥基、取代或未取代的C1-C iq烷基、取代或未取代的C1-C10烯基、取代或未取代的C1-C iq烷氧基、取代或未取代的C1-Ciq烯氧基、氟、氯、溴和碘;優(yōu)選 羥基、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C1-C4烯基、取代或未取代的C 1-C4烷氧基、 取代或未取代的&_〇4烯氧基、氟、氯、溴和碘； R5-R7各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：氫、羥基、取代或未取代的C1-C iq烷基、取代或未取代的 C1-Ciq烯基、取代或未取代的C1-Ciq烷氧基、取代或未取代的C 1-Ciq烯氧基、氟、氯、溴和碘;優(yōu) 選氫、羥基、取代或未取代的C1-C 4烷基、取代或未取代的C1-C4烯基、取代或未取代的&-C4烷 氧基、取代或未取代的C 1-C4烯氧基、氟、氯、溴和碘； R8-R45各自獨(dú)立地選自以下基團(tuán)：氫、羥基、取代或未取代的C1-C iq烷基、取代或未取代 的&-&〇烯基、取代或未取代的C1-C1Q烷氧基、取代或未取代的C 1-C1Q烯氧基、氟、氯、溴和碘； 氫、羥基、取代或未取代的C1-C 4烷基、取代或未取代的C1-C4烯基、取代或未取代的C1-C 4燒氧 基、取代或未取代的Cl_C4烯氧基、氟、氯、溴和碘。5. 如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟(i)的反應(yīng)在溶劑中，在存在催化劑 的情況下進(jìn)行， 所述醇選自：C1-Ciq烷基醇和&-&6芳基醇;優(yōu)選是苯甲醇； 所述溶劑選自：苯、甲苯、環(huán)己烷、丙酮、乙醚、二甲醚、二丙醚、以及它們當(dāng)中任意兩種 或更多種的混合物； 所述催化劑是選自以下的酸催化劑:硫酸、鹽酸、磷酸、硝酸、C1-C6烷基磺酸、苯磺酸、甲 苯磺酸;優(yōu)選是對甲苯磺酸； 包含1-8個氮原子和2-6個羧基的有機(jī)多元酸選自以下化合物中的一種或多種：6. 如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟（ii)在選自以下的溶劑中進(jìn)行:包 含一個或多個鹵原子的液態(tài)烷烴，所述鹵原子選自氟、氯、溴、碘;優(yōu)選地，步驟(ii)使用的 溶劑選自一氯甲烷、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、及其任意混合物。7. 如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟(iii)在溶劑中、在使用催化劑的條 件下進(jìn)行進(jìn)行， 所述溶劑選自：苯、甲苯、環(huán)己烷、丙酮、乙醚、二甲醚、二丙醚、N，N-二甲基甲酰胺以及 它們當(dāng)中任意兩種或更多種的混合物； 所述催化劑選自：六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)、IH-苯并三唑-1-基氧代三(二甲氨基)磷鑰六氟磷酸鹽(BOP)、1_羥基苯并三氮唑(HOBT)和N，N'_二環(huán)己基 碳二亞胺(DCC)，優(yōu)選六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)。8. 如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟(iv)的羧基脫保護(hù)反應(yīng)是在催化劑 存在的情況下通過氫化反應(yīng)進(jìn)行的， 所述催化劑選自負(fù)載型貴金屬催化劑，優(yōu)選是負(fù)載型鈀、鉑、銠催化劑，更優(yōu)選是鈀碳。9. 一種藥物組合物，該藥物組合物包含： (i) 權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的式（1)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、酰胺、酰 鹵、水合物或溶劑合物； (ii) 藥學(xué)上可接受的任選的賦形劑、填料、載體和稀釋劑中的一種或多種； (iii) 任選的不同于組分（i)的藥學(xué)活性組分，所述藥學(xué)活性組分選自：阿侖膦酸鈉片、 唑侖膦酸鈉、帕米膦酸二鈉、維生素 D、利塞膦酸鈉、特立帕肽、雷尼酸鍶、雷洛昔芬、降鈣素、 雌激素、尼爾雌醇、雌孕激、他莫昔芬、依普黃酮、氯屈膦酸二鈉片、骨松寶顆粒、倍美力、紫 竹愛維、固蘇桉、依替膦酸二鈉片、邦特林、特樂定、葡萄糖酸鈣片、葡萄糖酸鈣鋅口服溶液、 倍美盈、利巴韋林片、益鈣寧、易維特、貝邦、密蓋息、腎骨片、牡蠣碳酸鈣、鈣爾奇碳酸鈣D3 片、維D2果糖酸鈣注射液、蓋瑞寧、氯屈膦酸二鈉膠囊、阿法迪三、注射用骨肽、鹿瓜多肽注 射劑、丹紅注射液、紅花注射液、頭孢拉定、克林霉素、萬古霉素、低分子右旋糖酐氨基酸、羥 乙基淀粉注射液、低分子肝素鈉注射液、乳酸鈉林格注射液、甘油果糖氯化鈉注射液。10.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的式（1)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、酰胺、酰 鹵、水合物或溶劑合物在制備用于治療骨質(zhì)疏松、骨壞死、骨折延遲性愈合或不愈合和骨缺 損的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P19/10GK106008256SQ201610380476
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月1日
【發(fā)明人】鄧廉夫, 陸俊, 齊進(jìn), 江敏
【申請人】上海市傷骨科研究所