專利名稱：一種檢測(cè)巰基化合物的熒光探針及其制備方法與使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測(cè)巰基化合物的熒光探針及其制備方法與使用方法。
背景技術(shù)：
巰基是是生物體中許多蛋白質(zhì)和小分子的重要組成部分，它們是與酶活性有關(guān)最具反應(yīng)性的官能團(tuán)。大量的生物現(xiàn)象被認(rèn)為依賴于這些包含巰基的硫醇類物質(zhì)，如氧化還原反應(yīng)、甲基轉(zhuǎn)移反應(yīng)、二氧化碳固定反應(yīng)以及輔酶A參與的反應(yīng)等。體內(nèi)某些巰基分子的含量直接與多種疾病相關(guān)，如癌癥，帕金森癥，心血管疾病等。因而發(fā)展快速，靈敏，簡(jiǎn)便的檢測(cè)巰基的方法在生物化學(xué)和臨床化學(xué)中具有重要意義。傳統(tǒng)的檢測(cè)方法有質(zhì)譜法，高效液相色譜法，電化學(xué)法，分光光度法、比色法等，而這些方法靈敏度低，不能適應(yīng)有些生物樣品中巰基化合物的測(cè)定。熒光法由于其探針特殊的光物理和光化學(xué)特性而具有靈敏度高、動(dòng)態(tài)響應(yīng)范圍寬的特點(diǎn)，更重要的是能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)活體甚至單個(gè)細(xì)胞的實(shí)時(shí)可視化示蹤，成為目前廣泛采用的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)硫醇類物質(zhì)的一種重要手段。鑒于此，近年來巰基熒光探針成為了研究的焦點(diǎn)，并取得了較大的進(jìn)展。如發(fā)展的芳基鹵化物、丹磺酰氮丙啶類、芘類等，它們具有好的選擇性和靈敏度，對(duì)巰基的檢測(cè)限一般在納摩爾(nmol)左右，但這些探針自身都有較強(qiáng)的熒光，用于活體細(xì)胞成像時(shí)會(huì)造成較低的信噪比；苯并呋喃磺酰鹵類探針，雖然自身熒光較弱但是需要在堿性及高溫條件下與巰基反應(yīng)，也無法應(yīng)用于活體細(xì)胞的熒光成像；而乙酰鹵衍生物類巰基衍生試劑，能夠在室溫和生理PH下與巰基迅速反應(yīng)，但是光穩(wěn)定性較差，尤其是處于溶液中時(shí)不穩(wěn)定，容易失去熒光團(tuán)，因而也難以滿足生物檢測(cè)和熒光成像的要求。到目前為止，能夠真正用于巰基化合物檢測(cè)的高靈敏，高響應(yīng)的探針還比較少見。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種基于2，4- 二硝基苯磺?；揎椀牡せ酋Ｂ妊苌锟捎糜趲€基化合物檢測(cè)的熒光探針及其制備與使用方法。檢測(cè)生物巰基的熒光探針有兩部分組成2，4- 二硝基苯磺?；鶠樽R(shí)別基團(tuán)，丹磺酰氯衍生物為信息報(bào)告功能團(tuán)，其結(jié)構(gòu)如式I。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)巰基化合物的熒光探針制備方法，其特征在于該檢測(cè)生物巰基的熒光探針有兩部分組成2，4- 二硝基苯磺?；鶠樽R(shí)別基團(tuán)，丹磺酰氯衍生物為信息報(bào)告功能團(tuán)，其結(jié)構(gòu)如式I ;
2.一種檢測(cè)生物巰基的熒光探針的使用方法包括以下步驟 步驟一，測(cè)量探針分子的核磁共振波譜 步驟二，測(cè)定探針分子對(duì)巰基的選擇性 將探針分子以少量DMSO溶解，再用無水乙醇配置成溶液；分別加入以無水乙醇溶解的待測(cè)樣品，使最終探針分子的濃度為0.1 mM，而待測(cè)樣品的濃度為5 mM ;反應(yīng)2小時(shí)后在熒光光譜儀上進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)而確定探針分子對(duì)巰基的選擇性； 步驟三，測(cè)定探針分子對(duì)硫代乙醇酸的熒光-濃度曲線將探針分子以少量DMSO溶解，再用無水乙醇配置成溶液；分別加入不同濃度的硫代乙醇酸，使最終探針分子的濃度為0. I mM;反應(yīng)2小時(shí)后在熒光光譜儀上進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)而得到熒光強(qiáng)度對(duì)濃度變化的曲線； 步驟四，測(cè)定探針分子對(duì)硫代乙醇酸的熒光-時(shí)間曲線 將探針分子以少量DMSO溶解，再用無水乙醇配置成溶液；加入硫代乙醇酸，使最 終探針分子的濃度為0.1 mM，而硫代乙醇酸的濃度為5 mM;反應(yīng)一定時(shí)間，檢測(cè)熒光強(qiáng)度，進(jìn)而得到熒光強(qiáng)度對(duì)時(shí)間變化的曲線。
全文摘要
本發(fā)明公布了一種檢測(cè)巰基化合物的熒光探針及其制備方法與使用方法，現(xiàn)有技術(shù)難以滿足生物檢測(cè)和熒光成像的要求。本發(fā)明由兩部分組成，其中2,4-二硝基苯磺酰基為識(shí)別基團(tuán)，而丹磺酰氯衍生物為信息報(bào)告功能團(tuán)，當(dāng)體系內(nèi)存在巰基時(shí)，巰基能與2,4-二硝基苯磺酰基發(fā)生特異性反應(yīng)，使信息報(bào)告功能團(tuán)的熒光發(fā)生變化，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)巰基的特異性檢測(cè)。本發(fā)明探針分子合成簡(jiǎn)便，穩(wěn)定性好，能夠長(zhǎng)期保存使用，具有較高的巰基檢測(cè)靈敏度，具有優(yōu)秀的選擇性，與其它常見干擾分子無作用，具有長(zhǎng)的熒光發(fā)射波長(zhǎng)(>500nm)，能夠有效地避免來自生物大分子小于500nm背景熒光的干擾，可應(yīng)用于生物體系的檢測(cè)。
文檔編號(hào)C09K11/06GK102633694SQ20121009177
公開日2012年8月15日 申請(qǐng)日期2012年3月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月30日
發(fā)明者劉靜, 韓益豐 申請(qǐng)人:浙江理工大學(xué)