專利名稱：：用于標(biāo)記巰基的試劑、其制備以及用其進行標(biāo)記的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種使用含馬來酰亞胺基團的吖啶化合物來標(biāo)記巰基(SH)的試劑。更具體地說，本發(fā)明涉及以吖啶化合物作為標(biāo)記物質(zhì)的一種巰基標(biāo)記試劑、其生產(chǎn)方法以及用其進行標(biāo)記的方法。吖啶化合物中含有馬來酰亞胺基團，它能與諸如氨基酸、蛋白質(zhì)之類(被)分析物中含有的或易于引入的巰基結(jié)合，并能產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。
背景技術(shù)：
：吖啶鎓酯、吖啶化合物由于具有高發(fā)光效率，可用作化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物質(zhì)。這種吖啶鎓酯作為一種化學(xué)發(fā)光標(biāo)記在臨床試驗的免疫發(fā)光分析中的應(yīng)用可見諸于，例如歐洲專利公報82636及美國專利4,745,181。已知的吖啶鎓酯包括那些含有親水性結(jié)構(gòu)的，例如鏈端含有锍離子的(日本專利申請公開(Kokai)平5-255264)、那些間隔部分中含有離子的(日本專利申請公報(Kokai)平5-255263)以及那些以羧基取代吖啶鎓中甲基之類而獲得的化合物(日本專利申請公開(kokai)平6-228102)。這些含親水結(jié)構(gòu)的吖啶鎓酯實際上是打算用來標(biāo)記氨基的，因此被認為適合用于標(biāo)記氨基酸、蛋白質(zhì)之類，故而用于臨床試驗的免疫發(fā)光分析。順便指出，臨床試驗的免疫發(fā)光分析中的分析物大多是氨基酸及蛋白質(zhì)。由于這些物質(zhì)含有許多氨基，上述已知的吖啶鎓化合物具有標(biāo)記操作容易的顯著優(yōu)點。然而，它們標(biāo)記的是大量存在于氨基酸及蛋白質(zhì)中的氨基。結(jié)果，有許多位置要標(biāo)記。這就給標(biāo)記工作帶來一致性及可重復(fù)性方面的問題、諸如抗體蛋白之類分析物不溶化的問題，以及當(dāng)對抗體實施標(biāo)記時，標(biāo)記化合物與位于抗原識別部位的氨基相結(jié)合，從而使其作為抗體的功能減弱或喪失的問題。當(dāng)分析物為低分子物質(zhì)時，即只含有有限數(shù)目的氨基時，尚有可能控制標(biāo)記反應(yīng)并以恒定的摩爾比方便地進行標(biāo)記。但是，當(dāng)分析物為高分子物質(zhì)時，例如抗體蛋白，則氨基的數(shù)目就無法準(zhǔn)確地測定，其中存在一個缺點允許采用恒定摩爾比進行標(biāo)記的條件不得不通過反復(fù)試差的辦法臨時做些假定。順便指出，要提供一種用于實際使用的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記試劑的化合物，重要的是，該化合物應(yīng)保證標(biāo)記反應(yīng)容易進行并且在標(biāo)記條件下不產(chǎn)生發(fā)光或分解。吖啶鎓酯的標(biāo)記對象范圍很廣，首先是低分子化合物，例如氨基酸，甚至也包括高分子化合物，例如酶及抗體。當(dāng)分析物的氨基作為上述那樣的基準(zhǔn)時，常常在吖啶鎓酯中引入亞胺基，使之與氨基結(jié)合起來，正如上面提到的文獻中所公開的那樣。當(dāng)利用這種亞胺基對氨基進行結(jié)合反應(yīng)時，該反應(yīng)在堿性條件下進行得很順利。但是，吖啶鎓化合物是一種不穩(wěn)定的化合物，它在堿性條件下能產(chǎn)生發(fā)光或分解。因此，既要保持發(fā)光活性，又要保證標(biāo)記的有效進行，勢必要求彼此矛盾的反應(yīng)條件，因而不易辦到。有鑒于此，一直希望找到一種標(biāo)記化合物，它能在用于免疫發(fā)光分析之類的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記方法中在溫和的條件下與諸如氨基酸或蛋白質(zhì)相結(jié)合，并在具備高度專一性的同時具有足夠的結(jié)合力，還希望提供一種借助該標(biāo)記化合物來穩(wěn)定而精確地檢出分析物的方法。
發(fā)明內(nèi)容為解決上面提到的問題，本發(fā)明人首先想到，作為被標(biāo)記基團采用巰基來替代目前使用的氨基，因為巰基具有良好的反應(yīng)性，盡管它們通常在氨基酸、蛋白質(zhì)之類物質(zhì)中的含量并不多。于是，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，用分子中引入了馬來酰亞胺基團的吖啶鎓化合物作為標(biāo)記此種巰基的巰基標(biāo)記試劑是有利的，結(jié)果使得本發(fā)明終獲成功。據(jù)此，本發(fā)明的一個目的是提供一種含有以下式(I)代表的吖啶化合物的巰基標(biāo)記試劑其中，A代表如下基團-(CH2)m1-或者-(CH2)m2-Q-(CH2)n-其中Q代表基團-S+RX--、基團-N+RR1X--，其中R1代表含有1～6個碳原子的烷基或芳基、基團其中R2及R3可以相同或不同并且每一個獨立地是基團-(CH2)k-(k1～3的數(shù))或者是-O(CH2CH2O)l-(l1～3的數(shù))，m1代表1～6的數(shù)，m2表示0～2的數(shù)，n表示1～2的數(shù)；R代表含有1～6個碳原子的烷基或芳基；以及X-代表陰離子。本發(fā)明的另一個目的是提供一種含有作為上述吖啶化合物的中間體的巰基標(biāo)記試劑，該中間體即用下式(II)代表的吖啶化合物其中A’代表如下基團-(CH2)m1-或者-(CH2)m2-Q’-(CH2)n-其中Q’代表基團-S-、基團-NR1-，其中R1代表含有1～6個碳原子的烷基、基團其中R2及R3可以相同或不同并且每一個獨立地是基團-(CH2)k-(k1～3的數(shù))或者是-O(CH2CH2O)l-(l1～3的數(shù))，以及m1、m2及n的含義同上面的規(guī)定。本發(fā)明的又一個目的是提供制備分別用上面的式(I)及式(II)代表的吖啶化合物的方法。本發(fā)明的再一個目的是提供分別用上面的式(I)及式(II)代表的吖啶化合物來標(biāo)記分析物的方法。實施本發(fā)明的最佳方式用式(I)代表的化合物，即按照本發(fā)明的化合物，可按照例如下述的方法1或方法2中之一來制備。方法1在按照本發(fā)明的吖啶化合物當(dāng)中，每一個化合物(Ia)，其中A是基團-(CH2)m1-，其中m1的含義如上面所規(guī)定，可通過烷基化試劑(III)與用式(IIa)代表的化合物(以下稱“中間體(IIa)”)采用本身為技術(shù)上已知的方式按照下列反應(yīng)式進行反應(yīng)制成，(插入第8頁的反應(yīng)式)其中X代表易于轉(zhuǎn)化為陰離子的消去基團，R及m1的含義同上面的規(guī)定。上述反應(yīng)中使用的烷基化試劑(R-X)的例子是鹵代烷基，例如碘甲烷、溴乙烷及碘乙烷、三氟甲烷磺酸甲酯、氟代磺酸甲酯、甲烷磺酸甲酯及對甲苯磺酸甲酯。因此，式(Ia)中的X-最典型地是鹵素離子，例如I-或Br-、CF3SO3-、FSO3-或P-CH3C6H4SO3-，R含有1～6個碳原子的烷基，例如甲基或乙基或者芳基。作為可用于上述反應(yīng)的溶劑，可舉出乙醚、甲苯、乙腈等例子。中間體(IIa)，即用于制備化合物(Ia)的原料，可通過ω-氨基亞烷基苯基9-吖啶羧化物(IV)與馬來酐(V)在堿的存在下按照下列反應(yīng)式進行反應(yīng)制得，其中m1的含義同上面的規(guī)定。具體地說，化合物(II)例如可這樣制備根據(jù)《臨床化學(xué)》31(10)，1664～1668頁，1985，在以乙酸鈉、碳酸鉀等作為堿，以乙酸、丙酸等作為溶劑的條件下，在大約80～140℃的溫度下，讓化合物(IV)與化合物(V)進行反應(yīng)。順便指出，上述中間體(IIa)以通式的形式公開在日本專利申請公開(Kokai)昭62-61969中。但是，該專利公開并未公開任何內(nèi)容，更不用說可為制備該化合物提供線索的工作實例了。因此，據(jù)信該化合物實際上是一種新化合物。方法2在按照本發(fā)明的吖啶化合物當(dāng)中，每一化合物(Ib)，其中A是基團-(CH2)m2-Q’-(CH2)n-，其中Q’、m2及n的含義如上面所規(guī)定，是一種新化合物，而作為此種化合物的特定例子可舉出如下結(jié)構(gòu)式的化合物?；衔?Ib)例如可通過烷基化試劑(III)與用式(IIb)代表的化合物(以下稱“中間體(IIb)”)采用本身為技術(shù)上已知的方式按照下列反應(yīng)式進行反應(yīng)制成。其中Q、Q’、R、X-、m2及n的含義同上面的規(guī)定。關(guān)于上述反應(yīng)中使用的烷基化試劑(R-X)的例子，可舉出方法1中所使用的烷基化試劑。因此，式(Ib)中的X-最典型的是鹵素離子，例如I-或Br-、CF3SO3-、FSO3-、CH3SO3-或P-CH3C6H4SO3-，R是含有1～6個碳原子的烷基，例如甲基或乙基或者芳基。作為可用于上述反應(yīng)的溶劑，可舉出乙醚、甲苯、乙腈等例子。再有，中間體(IIb)，即用于制備化合物(Ib)的原料，是一種新化合物。作為此種化合物的特定例子，可舉出用下式代表的化合物。中間體(IIb)可通過下述的方法之一制備。(i)按照下述反應(yīng)路線，含消去基團的苯酚化合物(VI)與9-吖啶羧酸的活性衍生物(VII)進行反應(yīng)，制成在分子一端帶有消去基團的吖啶酯衍生物(VIII)；一端含有可能已根據(jù)需要用一種保護基團保護起來的伯氨基而在其相反的一端帶有伯或仲氨基的多胺(IX)在合適的堿的存在下與上述吖啶酯進行反應(yīng)，制成一端含有可能已根據(jù)需要用一種保護基團保護起來的伯氨基的吖啶酯(X)；當(dāng)有端伯氨基的保護基團時，消去該保護基團，然后以馬來酐(V)與該伯氨基反應(yīng)生成馬來酰亞胺基團，于是就得到了化合物(IIb’)。其中Ra每一個獨立地是氫原子或氨基保護基團，Y1及Y2代表消去基團，而Q1代表基團-NR1-或基團其中R2及R3的含義同上面的規(guī)定，m2及n的含義也同上面的規(guī)定。(ii)按照如下反應(yīng)方案，一端鍵合著用保護基團保護起來的伯氨基的、含有硫醚或聚醚的苯酚衍生物(XI)與9-吖啶羧酸的活性衍生物(VII)進行反應(yīng)，制成吖啶鎓酯(XII)，解除端氨基的保護之后，讓馬來酐(V)與該端伯氨基反應(yīng)，使之轉(zhuǎn)化為馬來酰亞胺基團，于是就得到了化合物(IIb”)。其中Q2代表-S-基或基團-O(CH2CH2O)l-，Ra、Y2、m2及n的含義同上面的規(guī)定。在方法(i)中，含消去基團的苯酚化合物(VI)中的苯酚化合物的例子可包括4-(甲苯磺酰氧甲基)苯酚、4-(3-氯丙基)苯酚及4-(2-甲苯磺酰氧乙基)苯酚，而其消去基團的例子可包括甲苯磺酰氧基、甲磺酰氧基以及鹵素原子(氯、溴、碘)。另一方面，9-吖啶羧酸的活性衍生物(VII)的例子是?；u，例如氯化物及溴化物，酸酐及活性酸酯。而，多胺(IX)的例子可包括N-(2-氨乙基)哌嗪、1，3-二氨基丙烷以及4-(氨乙基)哌啶，其保護基團的例子可包括叔丁氧羰基(Boc)、芐氧羰基(Cbz)以及苯鄰二甲酰亞胺。另外，在化合物(VI)與(VII)的反應(yīng)中以及在化合物(VIII)與(IX)的反應(yīng)中使用的堿的例子是三乙胺和吡啶。適用于上述反應(yīng)的溶劑的例子可包括二氯甲烷、氯仿(氯仿)、乙醚、甲苯及吡啶。為了消去化合物(IX)中的伯氨基的保護基團，脫保護反應(yīng)可按照本身為技術(shù)上已知的方式采用酸催化還原條件或在堿的存在下，在無溶劑或合適的溶劑中進行?？捎玫乃岬睦涌砂ㄈ?BF3)、三氟乙酸及鹽酸。用于催化還原的溶劑的例子可包括鈀-碳、鈀黑及鉑黑。堿的例子是肼、氫氧化鈉及氫氧化鉀。溶劑的例子可包括乙醚、二噁烷、甲醇、乙醇、水、乙腈及乙酸。而對在化合物(X)中已根據(jù)需要消去保護基團的伯氨基進行的馬來酰亞胺化反應(yīng)(maleimidation)，可通過在馬來酐及堿的存在下以及在溶劑中加熱的條件下將該化合物加熱，以馬來酐與該伯氨基反應(yīng)來實現(xiàn)。適用的堿的例子可包括乙酸鈉和碳酸鉀。溶劑的例子可包括乙酸及丙酸。另一方面，在說到方法(ii)時提到的含端氨基并具有硫醚或聚醚結(jié)構(gòu)的苯酚衍生物中，該具有硫醚的苯酚衍生物的例子可包括4-(2-氨乙硫代)苯酚及4-(3-氨丙硫代)苯酚，而具有聚醚結(jié)構(gòu)的苯酚衍生物的例子可包括4-(3-(2-氨乙氧基)丙氧基)苯酚及4-(2-(2-氨乙氧基)乙氧基)苯酚。作為上述氨基的保護基團的范例，可舉出Boc、Cbz、苯鄰二甲酰亞胺等基團。另外，可用的堿的例子可包括三乙胺及吡啶，而溶劑的范例是二氯甲烷、乙醚、甲苯及吡啶。伯氨基的脫保護及馬來酰亞胺化反應(yīng)可按照類似于上面關(guān)于方法(i)中所述方法進行。下面，將講述用本發(fā)明的化合物(I)與氨基酸或蛋白質(zhì)中的巰基進行反應(yīng)來標(biāo)記該物質(zhì)的方法。例如，要用本發(fā)明的化合物(I)來標(biāo)記抗體，首先用胃蛋白酶消化該抗體，得到F(ab’)2，然后在溫和的還原條件下將其還原，制備成Fab’。然后，本發(fā)明化合物(I)中的馬來酰亞胺基團與溶液中的Fab’的巰基發(fā)生反應(yīng)，從而完成了標(biāo)記。Fab’與本發(fā)明化合物(I)之間的反應(yīng)進行的條件為Fab’與本發(fā)明化合物(I)按1∶1～1∶10的摩爾比進行反應(yīng)，在pH5～7的，優(yōu)選地在pH6～6.5的、1～37℃，優(yōu)選地4～10℃的溫度的含水溶液中，反應(yīng)時間為10分鐘～72小時，優(yōu)選地約48小時，同時使用大約1～5毫摩爾的EDTA保護巰基免遭反應(yīng)溶液中的溶解氧的氧化。采用本發(fā)明化合物(I)的標(biāo)記反應(yīng)通常是在pH等于或低于7的含水介質(zhì)中進行的。如果分析物微溶或不溶于水，則標(biāo)記反應(yīng)可按照下述的方式進行。即，向分析物在少量能與水充分混溶的惰性溶劑(以下稱“惰性溶劑”)中的溶液內(nèi)加入水，從而制備成分析物的含水溶液。在該溶液中，混入化合物(I)的含水溶液以便使馬來酰亞胺與巰基間的反應(yīng)在pH值等于或小于7之下進行。該反應(yīng)是由于分析物對本發(fā)明化合物(I)中的馬來酰亞胺基團的不飽和鍵發(fā)生親核加成而進行的。即使在分析物中除了巰基外還含有氨基，但氨基的親核性受到了抑制，因而不會生成與氨基的反應(yīng)產(chǎn)物，因為該反應(yīng)是在pH等于或小于7之下進行的。正因為如此，本發(fā)明的化合物可當(dāng)作一種對巰基有選擇性的試劑。標(biāo)記反應(yīng)中使用的惰性溶劑，例如是N，N-二甲基乙酰胺、二甲亞砜、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、1，4-二噁烷以及吡啶。標(biāo)記之后，被標(biāo)記的分析物可借助例如凝膠色譜法、離子交換色譜法、親合色譜法或高性能液體色譜法等分離方法分離出來。就是說，采用上述方法，在恒定摩爾比的條件下進行標(biāo)記是可行的。即使當(dāng)分析物不含巰基時，本發(fā)明的標(biāo)記方法仍然適用，此時可在溫和的條件下利用S-乙?；鶐€基琥珀酐或類似的試劑將巰基引入到分析物的羥基、氨基和/或類似基團上既可。在這種情況下，引入巰基的數(shù)量應(yīng)使得能夠?qū)Ψ治鑫锱c巰基之間的比例作出估計。因此，適用于本發(fā)明的標(biāo)記方法的分析物可以是任何物質(zhì)，只要該物質(zhì)含有巰基或者可以引入巰基既可。即使如氨基酸這樣的低分子物質(zhì)也可以采用本發(fā)明的化合物(I)以類似于上述的方式在溫和的條件下進行標(biāo)記。象上面那樣獲得的被標(biāo)記物質(zhì)能夠在已知的吖啶鎓酯發(fā)光的條件下，例如通過在堿性條件下加入過氧化氫等，而被導(dǎo)致發(fā)光。利用化學(xué)發(fā)光檢測劑探測到所發(fā)出的這種光，就可判定該物質(zhì)的存在。而且，根據(jù)化學(xué)發(fā)光的數(shù)量，可測出被標(biāo)記物質(zhì)的數(shù)量。因此本發(fā)明的標(biāo)記方法可應(yīng)用于藥物在活體內(nèi)分布的示蹤，以及用于諸如診斷之類的各種要求痕量檢測的領(lǐng)域中的定性分析及定量分析。下面，講述有關(guān)利用本發(fā)明的化合物(I)的標(biāo)記方法的具體應(yīng)用實例。作為本發(fā)明標(biāo)記方法的一個應(yīng)用，例如有一種測定樣品中某種分析物的方法，該方法包括利用分析物與一種已被結(jié)合在載體上的某物質(zhì)之間的結(jié)合反應(yīng)從而專一地與分析物結(jié)合在一起將分析物捕獲，正如所謂化學(xué)發(fā)光免疫檢驗夾心(immunoassaysandwich)方法中那樣；繼而使得一種也能專一地與該分析物結(jié)合并且以本發(fā)明的化合物(I)做過標(biāo)記的物質(zhì)與上面被捕獲的分析物相結(jié)合；然后測定其發(fā)光強度。還有一種測定樣品中分析物的方法，正如在所謂化學(xué)發(fā)光競爭免疫檢驗中所使用的那樣，包括用本發(fā)明的化合物(I)來標(biāo)記分析物；預(yù)先加入規(guī)定濃度的該被標(biāo)記分析物；然后在利用一種反應(yīng)，即樣品中分析物及被標(biāo)記分析物同時與一種同這兩種分析物都能專一結(jié)合的物質(zhì)競相結(jié)合的反應(yīng)的情況下測定發(fā)自被標(biāo)記分析物的發(fā)光強度。在這些情況下，有專一結(jié)合能力的物質(zhì)的組合的例子可包括抗原與抗體、核酸與其互補的順序、效應(yīng)物(分子)與受體分子、酶與抑制劑、抗生物素蛋白與生物素，以及含糖鏈的物質(zhì)與其對應(yīng)的外源凝集素。作為另一種應(yīng)用，例如在所謂柱后(post-column)高性能液相色譜法中的分析物測定方法中的應(yīng)用，包括采用本發(fā)明化合物(I)來標(biāo)記分析物；用上述的例如色譜法等分離方法分離出被標(biāo)記分析物；然后利用化學(xué)發(fā)光檢測器測定該分析物。在上述諸標(biāo)記方法中，本發(fā)明的化合物(I)能克服傳統(tǒng)上已知的吖啶鎓酯的種種缺點，這些缺點是例如被標(biāo)記分析物不溶化的問題、氨基所潛在的失活，甚至對分析物在生物活性方面的要求，恒定結(jié)合摩爾比之下結(jié)合困難、難以在結(jié)合反應(yīng)中確立可重復(fù)性以及在結(jié)合反應(yīng)條件下就過早發(fā)光及分解。作為本發(fā)明進一步的應(yīng)用實例，可提及下述方法。即，同時也用于本發(fā)明化合物(I)的合成的中間體(II)，預(yù)先與一種含巰基的分析物進行反應(yīng)(以下稱“預(yù)標(biāo)記”)。然后讓一種適當(dāng)?shù)腘-烷基化試劑反應(yīng)，繼而在堿性條件下，令足夠量的化學(xué)發(fā)光劑，例如過氧化氫，發(fā)生作用。用化學(xué)發(fā)光檢測器檢測造成的化學(xué)發(fā)光以測定該分析物。在式(II)代表的吖啶酯中，馬來酰亞胺端基具有對巰基的結(jié)合活性。而且，它可作為穩(wěn)定的化合物分離出來。因此，可使之預(yù)先結(jié)合到含巰基的物質(zhì)上。上述的用中間體(II)對分析物進行預(yù)標(biāo)記反應(yīng)中的結(jié)合方法、預(yù)標(biāo)記分析物的分離方法等等，可按照與使用化合物(I)基本上相同的方式來進行。上述的預(yù)標(biāo)記分析物可通過它與烷基化試劑(III)在適當(dāng)溶劑中的反應(yīng)，進一步轉(zhuǎn)化為吖啶鎓酯標(biāo)記的分析物。烷基化試劑(III)的可用例子包括鹵代烷，例如碘甲烷、碘乙烷及溴乙烷、三氟甲烷磺酸甲酯、氟代磺酸甲酯、甲烷磺酸甲酯以及對甲苯磺酸甲酯，正如上面也提到的。而，可用溶劑的例子除上述標(biāo)記反應(yīng)中所使用的溶劑之外還有四氫呋喃及乙腈。當(dāng)反應(yīng)后吖啶鎓酯標(biāo)記的分析物以晶體形式從所使用的溶劑中沉淀出來時，可用過濾將其分離出來。當(dāng)它不沉淀時，可用柱色譜將其分離出來。以中間體(II)進行預(yù)標(biāo)記反應(yīng)之后，反應(yīng)產(chǎn)物用烷基化試劑(III)進一步進行N-烷基化處理。如此標(biāo)記的分析物產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光及其應(yīng)用等等與有關(guān)化合物(I)所述內(nèi)容相近。順便指出，采用中間體(II)的標(biāo)記方法，考慮到在結(jié)合反應(yīng)之后要用烷基化試劑(III)進行標(biāo)記，故不適用于那些除了巰基之外還含有其他對烷基化試劑具有活性的基團的分析物。在這種情況下，需要采取諸如用保護基團等措施將這些活性基團保護起來。下面，將結(jié)合以下的實施例更具體地說明本發(fā)明。但是，應(yīng)當(dāng)記住，本發(fā)明既不限于，也不受這些實施例的限制。實例14-(2-甲苯磺酰氧乙基)苯酚(1)的合成4-羥苯乙醇(3.2克)溶于50毫升吡啶中，在冰的冷卻下向其中徐徐加入4.0克甲苯磺酰氯。讓反應(yīng)混合物的溫度升至室溫，然后在此溫度下攪拌2小時。接著，濾除不溶物并在減壓下蒸出吡啶。借助硅膠柱上的色譜法(洗脫液氯仿)分離并提純殘余物，于是獲得3.4克化合物(1)(收率59％)。實例29-吖啶羧酸氯化物的合成(2)亞硫酰氯(20毫升)加入到2.2克9-吖啶羧酸中，隨后在回流下加熱5小時。在減壓下蒸除亞硫酰氯之后，再加入20毫升二氯甲烷。在減壓下反復(fù)蒸餾兩次，于是得到2.4克化合物(2)(收率化學(xué)計算值)。實例34-(2-甲苯磺酰氧乙基)苯基9-吖啶基羧化物(3)的合成在30毫升吡啶中，溶入2.4克從實例2中得到的化合物(2)。在水冷卻及攪拌下，徐徐加入2.9克從實例1得到的化合物(1)。室溫下攪拌2小時后，減壓下蒸除吡啶。再加入氯仿，然后在減壓下反復(fù)蒸餾兩次。借助硅膠柱上的色譜法(洗脫液氯仿)分離并提純殘余物，于是獲得2.7克化合物(3)(收率54％)。實例44-(2-(4-氨甲基哌啶-1-基)乙基)苯基9-吖啶羧化物(4)的合成在30毫升DMF中，溶入2.9克從實例3得到的化合物(3)，然后加入0.59克4-氨甲基吡啶。獲得的混合物在室溫下攪拌，在冰冷卻下向其中加入0.60克叔丁醇(t-Buok)。得到的混合物在室溫下攪拌5小時。減壓下蒸除DMF，將殘余物溶解在氯仿中。用水洗滌如此得到的溶液，然后在無水硫酸鎂上空干燥。減壓下蒸除溶劑。借助硅膠柱上的色譜法(洗脫液氯仿/甲醇＝7/3)分離并提純殘余物，于是獲得0.41克化合物(4)(收率18％)。實例54-(2-(4-((馬來酰亞胺-1-基)甲基)哌啶-1-基)乙基)苯基9-吖啶羧化物(5)的合成在20毫升乙酸中，加入0.41克從實例4得到的化合物(4)、0.30克馬來酐及0.30克乙酸鈉，接著在回流下加熱3小時。然后，在減壓下蒸除乙酸。向殘余物中加入水，再用氯仿萃取。萃取液置于硫酸鎂上空干燥，在減壓下蒸除氯仿。借助硅膠柱上的色譜法(洗脫液氯仿)分離并提純殘余物，于是獲得0.22克化合物(5)(收率43％)。該物質(zhì)的分析數(shù)據(jù)如下NMR(核磁共振)(CDCl3)δ8.3(m，4H)，8.0-7.6(m，4H)，7.3(s-狀，4H)，6.7(s，2H)，3.4(d，J＝7，2H)，3.1-2.5(m，6H)，2.2-1.5(m，7H)。MASS(質(zhì)譜)(FAB)520(M+1)。實例64-(2-(4-(馬來酰亞胺-1-基)甲基-1-甲基-哌啶鎓(piperidinium)-1-基)乙基)苯基10-甲基吖啶鎓-9-羧化物(6)的合成在20毫升甲苯中，溶入0.22克從實例5得到的化合物(5)，在室溫及攪拌下向其中加入0.30克三氟甲烷磺酸甲酯。得到的混合物在室溫下攪拌1小時后，放置過夜。過濾后得到的紅色沉淀物用甲苯洗滌并在空氣中干燥，于是得到30毫克化合物(6)(收率9.2％)。該物質(zhì)的分析數(shù)據(jù)如下NMR(核磁共振)(DMSO(二甲基亞砜)-d6)δ8.8-8.0(m，8H)，7.5(s-狀，4H)，6.8(s，2H)，5.1(s，3H)，3.3(s，3H)，3.7-3.0(m，10H)，2.0-1.6(m，5H)。MASS(質(zhì)譜)(FAB)550(M+1)。實例74-(2-氨乙基硫基)苯酚(7)的合成在30毫升乙醇中，加入1.2克4-巰基苯酚、2.1克2-溴乙胺鹽酸化物及1.4克碳酸鉀，接著在室溫下攪拌3小時。加水，得到的混合物用乙醚萃取。萃取液在硫酸鎂上空干燥，然后在減壓下蒸除乙醚，于是得到1.7克混合物(7)(收率化學(xué)計算值)。實例84-(2-N-Boc-氨乙基硫基)苯酚(8)的合成在30毫升乙腈中，溶入1.7克從實例7得到的化合物(7)。加入無水Boc(2.4克)，繼而攪拌1小時。減壓下蒸除溶劑后，加入吡啶。然后，在減壓下蒸除吡啶，于是得到2.7克化合物(8)(收率化學(xué)計算值)。實例94-(2-N-Boc-氨乙基硫基)苯基9-吖啶羧化物(9)的合成在30毫升吡啶中，溶入2.4克從實例2得到的化合物(2)，在水冷卻及攪拌下向其中徐徐加入2.7克從實例8得到的化合物(8)。得到的混合物在室溫下攪拌2小時后，減壓下蒸除吡啶。再加氯仿，并在減壓下蒸餾兩次。借助硅膠柱上的色譜法(洗脫液氯仿)分離并提純殘余物，于是獲得3.2克化合物(9)(收率68％)。實例104-(2-氨乙基硫基)苯基9-吖啶羧化物(9)的合成向1.9克從實例9得到的化合物(9)中加入20毫升三氟乙酸，繼而在室溫下攪拌30分鐘。減壓下蒸除三氟乙酸，于是得到1.4克化合物(10)(收率化學(xué)計算值)。實例114-(2-(馬來酰亞胺-1-基)乙基硫基)苯基9-吖啶羧化物(11)的合成在20毫升乙酸中，加入1.4克從實例10得到的化合物(10)、1.0克馬來酐及1.0克乙酸鈉，然后在回流下加熱3小時。減壓下蒸除乙酸。殘余物中加水。用氯仿萃取得到的混合物。萃取液在硫酸鎂上空干燥，并在減壓下蒸除氯仿。借助硅膠柱上的色譜法(洗脫液氯仿)提純殘余物，于是獲得1.1克化合物(11)(收率63％)。該物質(zhì)的分析數(shù)據(jù)如下NMR(核磁共振)(CDCl3)δ8.3(m，4H)，8.0-7.6(m，4H)，7.3(s-狀，4H)，6.7(s，2H)，3.8(t，J＝7，2Hz)，3.2(t，J＝7，2Hz)。MASS(質(zhì)譜)(FAB)455(M+1)。實例124-((2-(馬來酰亞胺-1-基)乙基)甲基锍)苯基10-甲基吖啶鎓-9-羧化物(12)的合成在20毫升甲苯中，溶入0.90克從實例11得到的化合物(11)。在室溫下攪拌的情況下，加入1.0克三氟甲烷磺酸甲酯，接著在室溫下攪拌1小時。隨后讓反應(yīng)混合物靜置過夜。過濾后收集紅色沉淀物，用甲苯洗滌并在空氣中干燥，于是得到1.1克化合物(12)(收率71％)。該物質(zhì)的分析數(shù)據(jù)如下NMR(核磁共振)(DMSO(二甲基亞砜)-d6)δ9.0-8.0(m，8H)，7.6(d，J＝7，2H)，7.4(d，J＝7，2H)，6.7(s，2H)，5.1(s，3H)，3.8(t，J＝7，2H)，3.7(s，3H)，3.2(t，J＝7，2H)。MASS(質(zhì)譜)(FAB)467(M+1)。實例132-(2-N-Boc-氨乙氧基)乙醇(13)的合成在30毫升乙腈中，溶入2.1克2-氨乙氧基乙醇.加入無水Boc(4.8克)，接著攪拌1小時。減壓下蒸除溶劑后，加入吡啶。繼而在減壓下蒸除吡啶，于是得到3.7克化合物(13)(收率化學(xué)計算值)。實例142-(2-甲苯磺?；跻已趸?-N-Boc-乙胺(14)的合成在50毫升吡啶中，溶入3.7克從實例13得到的化合物(13)，在冰冷卻及攪拌下向其中徐徐加入4.0克甲苯磺酰氯。讓得到的混合物溫度升至室溫，在此溫度下混合物攪拌2小時。濾除不溶物，并在減壓下蒸除吡啶。借助硅膠柱上的色譜法(洗脫液氯仿)分離并提純殘余物，于是獲得5.5克化合物(14)(收率76％)。實例154-(2-(2-N-Boc-氨乙氧基)乙氧基)苯基芐基醚(15)的合成在30毫升DMF中，溶入2.0克對芐基氧苯酚，向其中加入1.2克叔丁醇鉀。得到的混合物在室溫下攪拌30分鐘后，加入3.9克從實例14得到的化合物(14)。如此得到的混合物在室溫下攪拌3小時。減壓下蒸除DMF之后，將殘余物溶解在乙醚中。得到的溶液用稀鹽酸洗滌一遍、水洗滌兩遍，然后再用氯化鈉飽和水溶液洗滌一遍。該溶液在硫酸鎂上空干燥之后，在減壓下蒸除乙醚。借助硅膠柱上的色譜法(洗脫液氯仿)提純殘余物，于是獲得3.2克化合物(15)(收率83％)。實例164-(2-(2-N-Boc-氨乙氧基)乙基氧)苯酚(16)的合成在40毫升乙酸中，溶入3.0克從實例15得到的化合物(15)，向其中加入2.0克鈀黑。隨后，得到的混合物在氫氣氛及室溫下攪拌2小時。濾除鈀，在減壓下蒸除濾液。借助硅膠柱上的色譜法(洗脫液氯仿/甲醇＝9/1)分離并提純殘余物，于是獲得2.4克化合物(16)(收率化學(xué)計算值)。實例174-(2-(2-N-Boc-氨乙氧基)乙氧基)苯基9-吖啶羧化物(17)的合成在30毫升吡啶中，溶入2.4克從實例2得到的化合物(2)。在水冷卻及攪拌下，徐徐加入從實例16得到的化合物(16)。如此得到的混合物在室溫下攪拌2小時后，減壓下蒸除吡啶。再加氯仿，并在減壓下進行兩次蒸餾。借助硅膠柱上的色譜法(洗脫液氯仿)分離并提純殘余物，于是獲得2.1克化合物(17)(收率47％)。實例184-(2-(2-氨乙氧基)乙氧基)苯基9-吖啶羧化物(18)的合成在2.1克從實例17得到的化合物(17)中加入三氟乙酸(20毫升)，接著在室溫下攪拌30分鐘。減壓下蒸除三氟乙酸，然后加水。得到的混合物用碳酸氫鈉中和，然后借過濾收集沉淀物。借助硅膠柱上的色譜法(洗脫液氯仿/甲醇＝9/1)分離并提純?yōu)V液，于是獲得1.7克化合物(18)(收率化學(xué)計算值)。實例194-(2-(2-(馬來酰亞胺-1-基)乙氧基)乙氧基)苯基9-吖啶羧化物(19)的合成在40毫升乙酸中，加入1.7克從實例18得到的化合物(18)、1.2克馬來酐及1.2克乙酸鈉，繼而在回流下加熱3小時。反應(yīng)混合物冷卻后，在減壓下蒸除乙酸。向殘余物中加水，得到的混合物用氯仿萃取。萃取液置于硫酸鎂上空干燥，然后在減壓下蒸除氯仿。借助硅膠柱上的色譜法(洗脫液氯仿)提純殘余物，于是獲得0.81克化合物(19)(收率42％)。該物質(zhì)的分析數(shù)據(jù)如下NMR(核磁共振)(CDCl3)δ8.3(m，8H)，7.4-7.0(m，4H)，6.8(s，2H)，4.2(m，2H)，3.9(m，2H)，3.8(s-狀，4H)。MASS(質(zhì)譜)(FAB)483(M+1)。實例204-(2-(2-(馬來酰亞胺-1-基)乙氧基)乙氧基)苯基10-甲基吖啶鎓-9-羧化物(20)的合成在50毫升甲苯中，溶入0.81克從實例19得到的化合物(19)，在室溫及攪拌下向其中加入0.60克三氟甲烷磺酸甲酯。得到的混合物在室溫下攪拌1小時，然后靜置過夜。借過濾收集到黃色沉淀物，用甲苯洗滌，然后在空氣中干燥，于是得到0.39克化合物(22)(收率37％)。該物質(zhì)的分析數(shù)據(jù)如下NMR(核磁共振)(DMSO(二甲基亞砜)-d6)δ9.0-8.0(m，8H)，7.4(d，J＝7，2H)，7.1(d，J＝7，2H)，6.8(s，2H)，5.1(s，3H)，4.2(m，2H)，3.9(m，2H)，3.8(s-狀，4H).MASS(質(zhì)譜)(FAB)497(M+1)。實例214-(2-(馬來酰亞胺-1-基)乙基)苯基9-吖啶羧化物(22)的合成在20毫升乙酸中，加入0.71克4-(2-氨乙基)苯基9-吖啶羧化物(21)、0.60克馬來酐及0.60克乙酸鈉，接著在回流下加熱3小時。反應(yīng)混合物冷卻后，在減壓下蒸除乙酸。向殘余物中加水，然后得到的混合物用氯仿萃取。萃取液在無水硫酸鎂上空干燥，然后在減壓下蒸除氯仿。借助硅膠柱上的色譜法(洗脫液氯仿)提純殘余物，于是獲得0.14克化合物(22)(收率95％)。該物質(zhì)的分析數(shù)據(jù)如下NMR(核磁共振)(CD3OD)δ8.2-7.6(m，8H)，7.4(s，4H)，6.8(s，2H)，3.8(t，J＝8，2H)，3.0(t，J＝8，2H)。MASS(質(zhì)譜)(FAB)423(M+1)。實例224-(2-(馬來酰亞胺-1-基)乙基)苯基10-甲基吖啶鎓-9-羧化物(23)的合成在20毫升甲苯中，溶入0.17克上述的馬來酰亞胺(22)。在室溫及攪拌下向該溶液中加入0.10克三氟甲烷磺酸甲酯。得到的混合物在室溫下攪拌1小時后靜置過夜。然后，過濾收集析出的黃色沉淀物，再用甲苯洗滌。沉淀物在空氣中干燥，于是得到0.12克化合物(23)(收率51％)。該物質(zhì)的分析數(shù)據(jù)如下NMR(核磁共振)(CD3OD)δ8.9-8.0(m，8H)，7.4(s，4H)，6.8(s，2H)，5.1(s，2H)，3.8(t，J＝8，2H)，3.0(t，J＝8，2H)。MASS(質(zhì)譜)(FAB)437(M+)。實例23抗人體血紅蛋白抗體的標(biāo)記(1)向3毫升含有0.1摩爾氯化鈉的0.1摩爾乙酸鈉緩沖溶液(pH4.5)中加入10毫克提純的抗人體血紅蛋白兔多克隆抗體。向該溶液中加入并溶解0.4克由豬胃液轉(zhuǎn)化而來的提純胃蛋白酶粉末。溶液在37℃下恒溫48小時，于是，兔IgG的Fc部分便被消化了。通過采用0.1摩爾含有5毫摩爾EDTA、作為洗脫液的磷酸鈉緩沖溶液(pH6；以下稱“pH6緩沖液”)以及“Superdex200Column(分離色譜柱)”(Pharmacia公司產(chǎn)品)進行凝膠過濾，消化混合物被分級，于是就得到含5毫克F(ab’)2在3毫升pH6緩沖液中的溶液。向溶液中加入2-巰基乙胺(24毫克)，得到的混合物在37℃下恒溫24小時，F(xiàn)(ab’)2便還原為Fab’。通過“SephadexG25Column(分離色譜柱)”(Pharmacia公司產(chǎn)品；洗脫液pH6緩沖液)進行凝膠過濾，于是就得到含2毫克Fab’在3毫升pH6緩沖液中的溶液。使用一部分該溶液，通過測定4-巰基吡啶的數(shù)量對巰基進行了定量，該物質(zhì)是通過4，4’-二硫吡啶與Fab’的巰基之間的化學(xué)計量反應(yīng)而獲得的，定量是利用324納米波長處的吸收作出的。結(jié)果，據(jù)發(fā)現(xiàn)每分子Fab’含有一個巰基。(2)接著，將0.5毫升含有0.04毫克實例6中合成的化合物(6)的pH6緩沖液加入到0.75毫升含有0.5毫克Fab’的pH6緩沖液中。換句話說，將二者合在一起，使得Fab’與化合物(6)在二者的結(jié)合反應(yīng)中的摩爾比為1∶5。得到的混合物在4℃下恒溫48小時，于是Fab’便用化合物(6)標(biāo)記好了。反應(yīng)后，通過“SephadexG25Column”(Pharmacia公司產(chǎn)品；洗脫液pH6緩沖液)將過量加入的化合物(6)分離掉，于是得到0.5毫克溶于3毫升pH6緩沖液的標(biāo)記抗體(標(biāo)記抗體A)。根據(jù)Fab’的E280摩爾吸收系數(shù)及化合物(6)的E260摩爾吸收系數(shù)對標(biāo)記抗體進行了定量。據(jù)發(fā)現(xiàn)，在如此得到的標(biāo)記抗體A中Fab’與化合物(6)按1∶1的摩爾比彼此結(jié)合在一起。以類似的方式，將0.5毫升含有0.04毫克實例12中合成的化合物(12)的pH6緩沖液加入到0.75毫升含有0.5毫克Fab’的pH6緩沖液中，反應(yīng)后，進行了凝膠過濾，于是得到0.5毫克溶于3毫升pH6緩沖液的標(biāo)記抗體(標(biāo)記抗體B)。同樣地，將0.5毫升含有0.03毫克實例20中合成的化合物(20)的pH6緩沖液加入到0.75毫升含有0.5毫克Fab’的pH6緩沖液中，反應(yīng)后，進行了凝膠過濾，于是得到0.5毫克溶于3毫升pH6緩沖液的標(biāo)記抗體(標(biāo)記抗體C)。又是象上面一樣，將0.5毫升含有0.04毫克實例23中合成的化合物(23)的pH6緩沖液加入到0.75毫升含有0.5毫克Fab’的pH6緩沖液中，反應(yīng)后，進行了凝膠過濾，于是得到0.5毫克溶于3毫升pH6緩沖液的標(biāo)記抗體(標(biāo)記抗體D)。據(jù)發(fā)現(xiàn)，在如此得到的標(biāo)記抗體B、標(biāo)記抗體C及標(biāo)記抗體D中，F(xiàn)ab’與化合物(12)、Fab’與化合物(20)及Fab’與化合物(23)都是按1∶1的摩爾比彼此結(jié)合在一起的。實例24用標(biāo)記抗體對人體血紅蛋白的檢驗制備了含0.15摩爾氯化鈉的、每0.1毫升pH7的0.05M磷酸鹽緩沖液(以下簡稱“PBS”)含5微克提純抗人體血紅蛋白小鼠單克隆抗體的溶液。將該溶液按每次0.1毫升的量逐一轉(zhuǎn)移到微滴板的一個個孔中。溶液在4℃下放置24小時，于是該單克隆抗體就以固相形式被吸收到孔內(nèi)表面上。該固相抗體板接受以0.1毫升含有1毫克牛血清清蛋白的PBS的阻斷(blocking)處理。另外，提純的人體血紅蛋白溶解在PBS中，分別得到每毫升溶液含0、0.2、1、5、25及125微克/毫升濃度的溶液。取0.1毫升等量的上述溶液的等分試樣分別倒入微滴板的一個個孔中。溶液在4℃下放置24小時，于是樣品中的人體血紅蛋白就被固相抗體俘獲。用PBS洗滌每一個孔以去除未結(jié)合的人體血紅蛋白之后，向每一個孔中傾入0.1毫升含有5微克在實例23中制備的標(biāo)記抗體A的PBS。讓PBS溶液在4℃下放置24小時，以便讓反應(yīng)進行。用PBS洗滌每一個孔，在去除未結(jié)合的標(biāo)記抗體A之后，加入0.05毫升0.1N氫氧化鈉及0.04毫升0.5％過氧化氫，使之發(fā)光。用“LuminusCT-9000D”(Dia-Iatron公司制造)測定發(fā)光，這是一種用于測定化學(xué)發(fā)光的微滴板讀取器。發(fā)光的數(shù)量按2秒鐘間隔內(nèi)的積分值衡量。以同樣的方式用標(biāo)記抗體B、標(biāo)記抗體C及標(biāo)記抗體D分別進行了人體血紅蛋白的檢驗。上述檢驗的結(jié)果一并載于下面的表1中。表1</tables>從表1明顯可見，標(biāo)記抗體A、標(biāo)記抗體B、標(biāo)記抗體C及標(biāo)記抗體D所產(chǎn)生的發(fā)光量都隨著人體血紅蛋白的濃度提高而增加，因此，這些標(biāo)記抗體可用于人體血紅蛋白的定量。工業(yè)拓展前景本發(fā)明的化合物(I)及(II)對分析物的標(biāo)記依靠的都是巰基與馬來酰亞胺基團之間的穩(wěn)定結(jié)合并且是在溫和條件下進行的。由于標(biāo)記是在這樣的溫和條件下進行的，標(biāo)記抗體等的抗原識別部位等不會受到損害，而且，吖啶酯既不會因發(fā)光而消耗，也不會因分解而失活。此外，本發(fā)明的標(biāo)記方法依靠在氨基酸或蛋白質(zhì)中的含量頗少的巰基。這就使得有可能對分析物進行特定的標(biāo)記，它帶來的突出優(yōu)點就是可以做到在分析物與化學(xué)發(fā)光物質(zhì)之間以恒定的結(jié)合摩爾比進行結(jié)合。當(dāng)本發(fā)明的標(biāo)記方法應(yīng)用于，例如抗體Fab’時，以本發(fā)明的化合物(I)(或中間體(II))對整個Fab’進行標(biāo)記，即使加入的該化合物有些過量，仍舊得到按1∶1摩爾比的標(biāo)記結(jié)果，因為Fab’只含有一個巰基。況且，參與結(jié)合反應(yīng)的巰基與Fab’的生物活性部位無關(guān)，故而Fab’抗原識別部位不會受到損害。因此，分析物的定性或定量分析根據(jù)化學(xué)發(fā)光的數(shù)量就能很容易做到。本發(fā)明的標(biāo)記方法尤其適用于藥物在活體內(nèi)分布的示蹤以及各種診斷領(lǐng)域，這些領(lǐng)域都要求對痕量物質(zhì)進行檢測。權(quán)利要求1.一種巰基標(biāo)記試劑，含有用下式(I)表示的吖啶化合物其中A代表如下基團-(CH2)m1-或者-(CH2)m2-Q-(CH2)n-其中Q代表基團-S+RX--、基團-N+RR1X--，其中R1代表含有1～6個碳原子的烷基或芳基、基團其中R2及R3可以相同或不同并且每一個獨立地是基團-(CH2)k-(k1～3的數(shù))或者是-O(CH2CH2O)l-(l1～3的數(shù))，m1代表1～6的數(shù)，m2表示0～2的數(shù)，n表示1～2的數(shù)；R代表含有1～6個碳原子的烷基或芳基；以及X-代表陰離子。2.一種巰基標(biāo)記試劑，含有用下式(II)表示的吖啶化合物其中A’代表如下基團-(CH2)m1-或者-(CH2)m2-Q’-(CH2)n-其中Q’代表基團-S-、基團-NR1-，其中R1代表含有1～6個碳原子的烷基、基團其中R2及R3可以相同或不同并且每一個獨立地是基團-(CH2)k-(k1～3的數(shù))或者是-O(CH2CH2O)l-(l1～3的數(shù))，以及m1、m2及n的含義同上面的規(guī)定。3.一種制備下式(Ia)所代表的吖啶化合物的方法其中X-代表陰離子，R代表含有1～6個碳原子的烷基或芳基，m1代表1～6的整數(shù)，它包括使下式(III)代表的烷基化試劑R-X(III)其中R的含義同上面的規(guī)定，X代表易于轉(zhuǎn)化為陰離子的消去基團，作用于下式(IIa)代表的吖啶化合物其中m1的含義同上面的規(guī)定。4.一種制備下式(IIa)所代表的吖啶化合物的方法其中m1代表1～6的整數(shù)，它包括使下式(IV)代表的ω-氨基亞烷基苯基9-吖啶羧化物其中m1的含義同上面的規(guī)定，與馬來酐在堿的存在下發(fā)生反應(yīng)。5.一種由下式(Ib)代表的吖啶化合物其中Q代表基團-S+RX--、基團-N+RR1X--，其中R1代表含有1～6個碳原子的烷基或芳基、基團其中R2及R3可以相同或不同并且每一個獨立地是基團-(CH2)k-(k1～3的數(shù))或者是-O(CH2CH2O)l-(l1～3的數(shù))；R代表1～6個碳原子的烷基或芳基；X-代表陰離子；m2表示0～2的數(shù)；以及n表示1～2的數(shù)。6.一種作為式(Ib)代表的吖啶化合物的中間體的吖啶化合物，以下式(IIb)代表其中Q’代表基團-S-、基團-NR1-，其中R1代表含有1～6個碳原子的烷基、基團其中R2及R3可以相同或不同并且每一個獨立地是基團-(CH2)k-(k1～3的數(shù))或者是-O(CH2CH2O)l-(l1～3的數(shù))，m2代表0～2的數(shù)；以及n代表1～2的數(shù)。7.一種制備下式(Ib)所代表的吖啶化合物的方法其中Q代表基團-S+RX--、基團-N+RR1-，其中R1代表含有1～6個碳原子的烷基或芳基、基團其中R2及R3可以相同或不同并且每一個獨立地是基團-(CH2)k-(k1～3的數(shù))或者是-O(CH2CH2O)l-(l1～3的數(shù))；R代表含有1～6個碳原子的烷基或芳基；X代表易轉(zhuǎn)換成陰離子的消去基團；m2表示0～2的數(shù)；以及n表示1～2的數(shù)，它包括使下式(III)代表的烷基化試劑R-X(III)其中R及X的含義同上面的規(guī)定，作用于下式(IIb)代表的吖啶化合物其中Q’代表基團-S-、基團-NR1-，其中R1代表含有1～6個碳原子的烷基或基團其中R2及R3可以相同或不同并且每一個獨立地是基團-(CH2)k-(k1～3的數(shù))或者是-O(CH2CH2O)l-(l1～3的數(shù))；m2及n的含義同上面的規(guī)定。8.一種制備下式(IIb’)所代表的吖啶化合物的方法其中Q1代基團-NR1-，其中R1代表含有1～6個碳原子的烷基或基團其中R2及R3可以相同或不同并且每一個獨立地是基團-(CH2)k-(k1～3的數(shù))；m2代表0～2的數(shù)；以及n代表1～2的數(shù)，它包括使一種下式(VI)代表的含消去基團的苯酚化合物其中Y1代表消去基團，m2的含義同上面的規(guī)定，與9-吖啶羧酸衍生物發(fā)生反應(yīng)，該羧酸衍生物可用下式(VII)代表其中Y2代表消去基團，結(jié)果獲得用下式(VIII)代表的化合物其中Y1及m2的含義同上面的規(guī)定；然后讓如此得到的化合物與下式(IX)代表的多胺在適當(dāng)?shù)膲A存在下進行反應(yīng)H-Q1-(CH2)n-N(Ra)2(IX)其中Q1及n的含義同上面的規(guī)定，Ra中每一個獨立地是氫原子或氨基保護基團，而且化合物式(IX)的一端含有伯氨基，所述伯氨基任選的由一個或兩個保護基團保護著，伯氨基或仲氨基在其相反端，結(jié)果獲得由下式(X)代表的9-吖啶酯其中Q1、Ra、m2及n的含義同上面的規(guī)定；然后，當(dāng)一個或兩個端伯氨基的保護基團存在時，消去該一個或兩個保護基團；最后，使馬來酐作用與之發(fā)生反應(yīng)。9.一種制備由下式(IIb”)代表的吖啶化合物的方法其中Q2代表基團-S-或基團-O(CH2CH2O)l-(l1～3的數(shù))，m2表示0～2的數(shù)，n代表1～2的數(shù)，該方法包括使下式(XI)代表的苯酚衍生物其中Q2、m2及n的含義同上面的規(guī)定；Ra中每一個獨立地是氫原子或氨基保護基團，而且該衍生物含有硫醚或聚醚結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)的一端含有由一個或兩個保護基團保護起來的伯氨基，與下式(VII)代表的9-吖啶羧酸衍生物進行反應(yīng)其中Y2代表消去基團，結(jié)果獲得下式(XII)代表的吖啶酯其中Q2、Ra、m2及n的含義同上面的規(guī)定；在脫去端氨基的保護以后，使馬來酐與之發(fā)生反應(yīng)。10.一種分析物的標(biāo)記方法，它包括使下式(I)代表的吖啶化合物其中A代表如下基團-(CH2)m1-或者-(CH2)m2-Q-(CH2)n-其中Q代表基團-S+RX--、基團-N+RR1X--，其中R1代表含有1～6個碳原子的烷基或芳基、基團其中R2及R3可以相同或不同并且每一個獨立地是基團-(CH2)k-(k1～3的數(shù))或者是-O(CH2CH2O)l-(l1～3的數(shù))，m1代表1～6的數(shù)，m2表示0～2的數(shù)，n表示1～2的數(shù)；R代表含有1～6個碳原子的烷基或芳基；以及X-代表陰離子，與所述分析物中的巰基起反應(yīng)。11.一種分析物的預(yù)標(biāo)記方法，它包括使下式(II)代表的吖啶化合物其中A’代表如下基團-(CH2)m1-或者-(CH2)m2-Q’-(CH2)n-其中Q’代表基團-S-、基團-NR1-，其中R1代表含有1～6個碳原子的烷基、基團其中R2及R3可以相同或不同并且每一個獨立地是基團-(CH2)k-(k1～3的數(shù))或者是-O(CH2CH2O)l-(l1～3的數(shù))；以及m1、m2及n的含義同上面的規(guī)定，與所述分析物中的巰基起反應(yīng)。全文摘要包含通式為(Ⅰ)的吖啶化合物或其中間體的用于標(biāo)記巰基的試劑;制備吖啶化合物的方法;以及用它們標(biāo)記分析物的方法;其中A是－(CH文檔編號C07D401/14GK1194642SQ97190552公開日1998年9月30日申請日期1997年3月14日優(yōu)先權(quán)日1997年3月14日發(fā)明者今井一洋,江藤博通,小番健志,成田雅申請人:愛詩愛詩制藥株式會社