本發(fā)明涉及茵陳配方顆粒的質(zhì)量檢測領(lǐng)域，具體而言，涉及一種茵陳配方顆粒的指紋圖譜檢測方法以及質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
：茵陳是菊科植物濱蒿或茵陳蒿的干燥地上部分，其具有清濕熱、退黃疸的功能，用于黃疸尿少，濕瘡瘙療、傳染性黃疸型肝炎。目前，茵陳藥材及其制劑的液相色譜質(zhì)量控制方法多以一個或幾個有效成分的含量測定為主。指紋圖譜是一種以現(xiàn)代分析為依托的新的中藥質(zhì)量控制模式，是目前國際上公認(rèn)的控制中藥質(zhì)量的最理想的技術(shù)。但現(xiàn)有的茵陳指紋圖譜檢測方法主要集中在檢測茵陳藥材的產(chǎn)品質(zhì)量，而對不同廠家的茵陳配方顆粒及其在生產(chǎn)過程中的各個階段的產(chǎn)品質(zhì)量無法得到控制，導(dǎo)致最終產(chǎn)品的質(zhì)量及均一性不佳且無法究其原因。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種茵陳配方顆粒的指紋圖譜檢測方法，建立茵陳配方顆粒各個階段的產(chǎn)品的指紋圖譜，更好地控制茵陳配方顆粒的質(zhì)量。本發(fā)明的另一目的在于提供一種上述茵陳配方顆粒的質(zhì)量控制方法，通過上述茵陳配方顆粒的指紋圖譜檢測方法對茵陳配方顆粒的各個階段的產(chǎn)品進行質(zhì)量控制，從而更好地控制茵陳配方顆粒的質(zhì)量。本發(fā)明的實施例是這樣實現(xiàn)的：一種茵陳配方顆粒的指紋圖譜檢測方法，其包括：取綠原酸配制對照品溶液，分別取多種茵陳藥材配制多個供試品溶液，將對照品溶液和供試品溶液進行高效液相色譜分析；其中，色譜條件包括：以甲醇和冰乙酸的水溶液作為流動相分別將對照品溶液和供試品過色譜柱并進行梯度洗脫，并且在梯度洗脫的過程中控制甲醇的體積，使得甲醇的體積占流動相總量的百分比由4～6％增加至40～50％，接著降低至4～6％。一種茵陳配方顆粒的質(zhì)量控制方法，其包括上述茵陳配方顆粒的指紋圖譜檢測方法。本發(fā)明實施例的茵陳配方顆粒的指紋圖譜檢測方法以及質(zhì)量控制方法的有益效果是：本發(fā)明實施例的茵陳配方顆粒的指紋圖譜檢測方法在梯度洗脫的過程中控制甲醇的體積，使得甲醇的體積占流動相總量的百分比由4～6％增加至40～50％，接著降低至4～6％。通過合理梯度洗脫參數(shù)，來分析茵陳配方顆粒的化學(xué)成分，建立峰型明顯、分離程度均勻的茵陳配方顆粒的指紋圖譜，系統(tǒng)地反映了茵陳配方顆粒化學(xué)成分的全貌，并且按照本發(fā)明實施例的檢測方法獲得共有峰相對保留時間較為穩(wěn)定，可為評價或控制茵陳配方顆粒的質(zhì)量提供依據(jù)。并且，本發(fā)明實施例的指紋圖譜色譜峰的分離度好，色譜峰之間明顯分離，能夠準(zhǔn)確地得到茵陳配方顆粒中主要化學(xué)成分的色譜峰，檢測方法具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，利用該指紋圖譜檢測在茵陳配方顆粒生產(chǎn)過程中各個節(jié)點的產(chǎn)品的質(zhì)量，確保各個節(jié)點的產(chǎn)品的質(zhì)量及穩(wěn)定性。附圖說明為了更清楚地說明本發(fā)明實施例的技術(shù)方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應(yīng)當(dāng)理解，以下附圖僅示出了本發(fā)明的某些實施例，因此不應(yīng)被看作是對范圍的限定，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。圖1為本發(fā)明實施例1提供的對照品溶液-綠原酸的高效液相圖譜；圖2為本發(fā)明實施例1提供的供試品溶液-茵陳飲片的高效液相圖譜；圖3為本發(fā)明實施例1提供的供試品溶液-茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎的高效液相圖譜；圖4為本發(fā)明實施例1提供的供試品溶液-茵陳提取物的高效液相圖譜；圖5為本發(fā)明實施例1提供的供試品溶液-茵陳提取物噴干粉的高效液相圖譜；圖6為本發(fā)明實施例1提供的供試品溶液-茵陳配方顆粒1的高效液相圖譜；圖7為本發(fā)明實施例1提供的供試品溶液-茵陳配方顆粒2的高效液相圖譜；圖8為本發(fā)明實施例1提供的對照品溶液和供試品溶液堆疊形成的茵陳指紋圖譜；圖9為圖8所示的茵陳指紋圖譜的3d掃描圖；圖10為本發(fā)明試驗例1在色譜條件1得到的高效液相圖譜；圖11為本發(fā)明試驗例1在色譜條件2得到的高效液相圖譜；圖12為本發(fā)明試驗例1在色譜條件3得到的高效液相圖譜；圖13為本發(fā)明試驗例1在色譜條件4得到的高效液相圖譜；圖14為本發(fā)明試驗例1在色譜條件5得到的高效液相圖譜；圖15為本發(fā)明試驗例1在色譜條件6得到的高效液相圖譜；圖16為本發(fā)明試驗例1在色譜條件7得到的高效液相圖譜；圖17為本發(fā)明試驗例1在色譜條件8得到的高效液相圖譜；圖18為本發(fā)明試驗例1在色譜條件9得到的高效液相圖譜。具體實施方式下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。下面對本發(fā)明實施例的茵陳配方顆粒的指紋圖譜檢測方法進行具體說明。本發(fā)明實施例采用的實驗儀器與試藥見表1。表1實驗儀器與試藥統(tǒng)計表實驗儀器與試藥型號茵陳飲片哈爾濱珍寶制藥有限公司：160106茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎哈爾濱珍寶制藥有限公司：yc-20160909茵陳提取物哈爾濱珍寶制藥有限公司：yc-20160826-3茵陳提取物噴干粉哈爾濱珍寶制藥有限公司：yc-20160830茵陳配方顆粒1市售購買：yc-1511065茵陳配方顆粒2市售購買：yc-a1501397綠原酸對照品中國食品藥品檢定研究院：110753-201415甲醇hplc，merck冰乙酸hplc，merck甲醇hplc，科密歐液相系統(tǒng)waters1525色譜柱watersx-brigec18(4.6×250mm，5μm)色譜柱agilentzorbaxeclipsexdb-c18(4.6×250mm，5μm)本發(fā)明實施例的茵陳配方顆粒的指紋圖譜檢測方法包括以下步驟：步驟s1.1：配制對照品溶液取綠原酸配制對照品溶液，具體地，取綠原酸對照品適量，精密稱定，加45～55％甲醇制成每1ml含0.1～0.3mg的溶液，即得。也即是，對照品溶液中綠原酸的濃度為0.1～0.3mg/ml，優(yōu)選地，對照品溶液中綠原酸的濃度為0.2mg/ml。步驟s1.2：配制供試品溶液分別取茵陳藥材制成多個節(jié)點供試品，并由多個節(jié)點供試品配制多個節(jié)點供試品溶液。具體地，取茵陳藥材，按《中國藥典》2015版一部茵陳項下炮制方法進行炮制，也即是，除去殘根和雜質(zhì)，切碎，篩去灰屑，制得茵陳飲片。其中，茵陳藥材可直接于市面上進行采購。向茵陳飲片中加入8～12倍體積的純化水，置標(biāo)準(zhǔn)煎煎煮器具中浸泡10～50分鐘，第一次煎煮20～40分鐘，再加入9～11倍體積的純凈水，第二次煎煮10～30min，合并兩次煎煮液，作為茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎。將上述茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎于60～80℃濃縮至相對密度1.02～1.10，作為茵陳提取物。將上述茵陳提取物于140～180℃條件下噴霧干燥，作為茵陳提取物噴干粉。茵陳配方顆?？梢宰灾疲磳⑸鲜鲆痍愄崛∥飮姼煞劢?jīng)過制粒，作為茵陳配方顆粒。茵陳配方顆粒也可以購買，本實施例中，優(yōu)選采用的茵陳配方顆粒是直接于市面上進行采購的。優(yōu)選地，茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎制備工藝為一煎加入12倍純化水，浸泡30min，煎煮20min，二煎加入10倍純化水，煎煮10分鐘，合并煎液。優(yōu)選地，茵陳煎液80℃濃縮至相對密度1.05。優(yōu)選地，茵陳提取物噴霧干燥溫度為150℃。需要說明的是，在配制對照品溶液和供試品溶液時，采用相同的甲醇溶液進行配制。由于在制備茵陳配方顆粒的過程中，會產(chǎn)生不同節(jié)點的產(chǎn)品，本實施例中，選擇不同節(jié)點的產(chǎn)品作為節(jié)點供試品，具體地，多個節(jié)點供試品包括上述由茵陳藥材制備得到的茵陳飲片、茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎、茵陳提取物和茵陳提取物噴干粉，以及于市面上采購的不同廠家的茵陳配方顆粒，分別標(biāo)記為茵陳配方顆粒1以及茵陳配方顆粒2。其中，茵陳飲片、茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎、茵陳提取物和茵陳提取物噴干粉是在制備茵陳配方顆粒的過程中，不同節(jié)點的產(chǎn)品，而茵陳配方顆粒1以及茵陳配方顆粒2是不同廠家的兩個終產(chǎn)品。下面依次將多個節(jié)點供試品配制成節(jié)點供試品溶液，具體如下：所得不同節(jié)點茵陳樣品均加入體積百分比50％的甲醇溶劑5～50ml(根據(jù)樣品濃度不同予以變更)，超聲30～50min，濾過，作為供試品溶液。s1.2.1茵陳飲片的供試品溶液的制備：取茵陳飲片粉末(過24目篩)約1g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇15～25ml，稱定重量，超聲30～50min，放冷至室溫，再稱定重量，用50％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。s1.2.2茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎的供試品溶液的制備：精密量取茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎20ml，置25ml容量瓶中，超聲30～50min，放冷至室溫，再稱定重量，加50％甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。s1.2.3茵陳提取物的供試品溶液的制備：精密稱取約4g茵陳提取物，置50ml容量瓶中，超聲30～50min，放冷至室溫，再稱定重量，用50％甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。s1.2.4茵陳提取物噴干粉的供試品溶液的制備：精密稱取約0.3～0.5g茵陳提取物噴干粉，置50ml容量瓶中，超聲30～50min，放冷至室溫，再稱定重量，用50％甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。s1.2.5茵陳配方顆粒的供試品溶液的制備：精密稱取約0.3～0.5g茵陳配方顆粒(研細(xì))，置50ml容量瓶中，超聲30～50min，放冷至室溫，再稱定重量，用50％甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。步驟s1.3：高效液相色譜分析將對照品溶液和供試品溶液進行高效液相色譜分析。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定。色譜條件為：以甲醇和冰乙酸的水溶液作為流動相分別將對照品溶液和供試品過色譜柱并進行梯度洗脫，并且在梯度洗脫的過程中控制甲醇的體積，使得甲醇的體積占流動相總量的百分比由4～6％增加至40～50％，接著降低至4～6％。具體地，色譜條件還包括：以watersx-brigec18或agilentzorbaxeclipsexdb-c18為色譜柱，并于檢測波長為327-340nm；流速為0.8～1.2ml/min；色譜柱的溫度為25℃-35℃下進行。優(yōu)選地，色譜柱為agilentzorbaxeclipsexdb-c18，檢測波長優(yōu)選為326nm；流速為1ml/min；色譜柱的溫度優(yōu)選為30℃。在梯度洗脫對照品和供試品時：t＝0min～10min時，甲醇占所述流動相總量的百分比為4％-6％，冰乙酸的水溶液占流動相總量的百分比為94％-96％；t＝10min～80min時，甲醇占流動相總量的百分比由4％-6％變化為8％-12％，冰乙酸的水溶液占流動相總量的百分比由94％-96％變化為88％-92％；t＝80min～82min時，甲醇占流動相總量的百分比由8％-12％變化為40％-50％，冰乙酸的水溶液占流動相總量的百分比由88％-92％變化為50％-60％；t＝82min～100min時，甲醇占流動相總量的百分比由40％-50％變化為4％-6％，冰乙酸的水溶液占流動相總量的百分比由50％-60％變化為94％-96％。優(yōu)選地，在梯度洗脫對照品和供試品時：t＝0min～10min時，甲醇占流動相總量的百分比為5％，冰乙酸的水溶液占流動相總量的百分比為95％；t＝10min～80min時，甲醇占流動相總量的百分比由5％變化為10％，冰乙酸的水溶液占流動相總量的百分比由95％變化為90％；t＝80min～82min時，甲醇占流動相總量的百分比由10％變化為45％，冰乙酸的水溶液占流動相總量的百分比由90％變化為55％；t＝82min～100min時，甲醇占流動相總量的百分比由45％變化為5％，冰乙酸的水溶液占流動相總量的百分比由55％變化為95％。需要說明的是，t＝0min～10min，本實施例中，表示為t＝[0，10)，其中，t為時間范圍值，也即是，該時間段的最小值可取端點值，而最大值不包含t＝10這一端點值，以下梯度的時間范圍相同，這里不再贅述。此外，本發(fā)明實施例提供的茵陳配方顆粒的質(zhì)量控制方法，其包括本發(fā)明實施例的茵陳配方顆粒的指紋圖譜檢測方法。具體地：步驟s2.1：按照本發(fā)明實施的檢測方法建立茵陳配方顆粒的標(biāo)準(zhǔn)圖譜。步驟s2.2：建立待檢測顆粒樣品的指紋圖譜。具體地：將待檢測的顆粒樣品按照本發(fā)明實施例的檢測方法進行檢測，獲得液相圖譜。步驟s2.3：將顆粒樣品的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜進行對比，通過圖譜中的色譜峰出峰時間、峰數(shù)量、峰值等參數(shù)來評價或控制茵陳配方顆粒的各個節(jié)點的產(chǎn)品的質(zhì)量。下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進一步說明。實施例1s1.1：配制對照品溶液取綠原酸對照品適量，精密稱定，加50％甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。s1.2：配制供試品溶液分別取多個節(jié)點供試品(茵陳飲片、茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎、茵陳提取物、茵陳提取物噴干粉、茵陳配方顆粒1和茵陳配方顆粒2)，將多個節(jié)點供試品分別配制成多種節(jié)點供試品溶液。其中，取茵陳藥材，按《中國藥典》2015版一部茵陳項下炮制方法進行炮制，除去殘根和雜質(zhì)，切碎，篩去灰屑，制得茵陳飲片。向茵陳飲片中加入12倍體積的純化水，置標(biāo)準(zhǔn)煎煎煮器具中浸泡30分鐘，第一次煎煮20分鐘，再加入10倍體積的純凈水，第二次煎煮10min，合并兩次煎煮液，作為茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎；將茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎于80℃濃縮至相對密度1.05，作為茵陳提取物；將茵陳提取物于150℃條件下噴霧干燥，作為茵陳提取物噴干粉；茵陳配方顆粒直接于市面上采購得來。具體如下：s1.2.1茵陳飲片的供試品溶液的制備：取茵陳飲片粉末(過24目篩)約1g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇20ml，稱定重量，超聲30min，放冷至室溫，再稱定重量，用50％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。s1.2.2茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎的供試品溶液的制備：精密量取茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎20ml，置25ml容量瓶中，超聲30～50min，放冷至室溫，再稱定重量，加50％甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。s1.2.3茵陳提取物的供試品溶液的制備：精密稱取約4g茵陳提取物，置50ml容量瓶中，超聲30min，放冷至室溫，再稱定重量，用50％甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。s1.2.4茵陳提取物噴干粉的供試品溶液的制備：精密稱取約0.4g茵陳提取物噴干粉，置50ml容量瓶中，超聲30min，放冷至室溫，再稱定重量，用50％甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。s1.2.5茵陳配方顆粒1和茵陳配方顆粒2的供試品溶液的制備：分別精密稱取約0.3～0.5g茵陳配方顆粒1和2(研細(xì))，分別置50ml容量瓶中，超聲30min，放冷至室溫，再稱定重量，用50％甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。分別將上述六種節(jié)點供試品配制的六種節(jié)點供試品溶液按下列色譜條件進行高效液相色譜分析。本實施例的圖譜是按照高效液相色譜法(《中國藥典》2015年版四部通則0512)測定的。色譜柱：agilentzorbaxeclipsexdb-c18(4.6×250mm，5μm)流動相a：甲醇；流動相b：1％冰乙酸的水溶液檢測波長：326nm；流速1.0ml/min，進樣量10μl；柱溫30℃按下表2進行梯度洗脫。表2.實施例1的梯度洗脫參數(shù)根據(jù)本實施例提供的檢測方法，獲得的對照品以及供試品的高效液相圖譜可參見圖1～圖7，具體如下：獲得的對照品的高效液相圖譜如圖1所示，獲得的茵陳飲片的高效液相圖譜如圖2所示，獲得的茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎的高效液相圖譜如圖3所示，獲得的茵陳提取物的高效液相圖譜如圖4所示，獲得的茵陳提取物噴干粉的高效液相圖譜如圖5所示，獲得的茵陳配方顆粒1的高效液相圖譜如圖6所示，獲得的茵陳配方顆粒2的高效液相圖譜如圖7所示。然后將圖1～圖7得到的高效液相圖譜堆疊，形成圖8的不同樣品的指紋圖譜堆積圖，其中；高效液相圖譜中101表示綠原酸對照品的圖譜(即圖1)；102表示yc-a1501397(即圖6)；103表示yc-1511065(即圖7)；104表示yc-20160830(即圖5)；105表示yc-20160826-3(即圖4)；106表示yc-20160909(即圖3)；107表示茵陳飲片160106(即圖2)。從圖8和圖9得到的指紋圖譜可以看出，茵陳飲片、茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎、茵陳提取物、茵陳提取物噴干粉、茵陳配方顆粒1以及茵陳配方顆粒2的色譜圖中共有峰為9個。將所得色譜圖導(dǎo)入指紋圖譜比對軟件，以茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎為對照圖譜，對比不同節(jié)點樣品指紋圖譜相似度，結(jié)果見下表：表3.不同節(jié)點樣品指紋圖譜相似度比較樣品名稱相似度(參照)相似度(對照)茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎1.0000.973茵陳飲片0.7980.882茵陳提取物0.9820.993茵陳噴干粉0.9770.992茵陳配方顆粒10.8170.891茵陳配方顆粒20.8100.889不同節(jié)點樣品指紋圖譜相似度均不低于0.85。不同廠家的配方顆粒(茵陳配方顆粒1和茵陳配方顆粒2)指紋圖譜相似度類似，且不低于0.85。因此本實施例提供的可以作為控制茵陳不同節(jié)點樣品、不同批次產(chǎn)品質(zhì)量的控制方法。且滿足在茵陳配方顆粒生產(chǎn)過程中各節(jié)點指紋圖譜相似度對比應(yīng)不低于0.85。并且不同廠家茵陳配方顆粒間指紋圖譜相似度應(yīng)不低于0.85。實施例2本實施例提供的茵陳配方顆粒的指紋圖譜檢測方法與實施例1基本相同，區(qū)別在于，本實施例中色譜條件不同：色譜柱：agilentzorbaxeclipsexdb-c18(4.6×250mm，5μm)流動相a：甲醇；流動相b：1％冰乙酸的水溶液檢測波長：330nm；流速1.2ml/min，進樣量10μl；柱溫35℃按下表3的梯度洗脫參數(shù)進行梯度洗脫。表4.實施例2的梯度洗脫參數(shù)實施例3本實施例提供的茵陳配方顆粒的指紋圖譜檢測方法與實施例1基本相同，區(qū)別在于，本實施例中色譜條件不同：色譜柱：agilentzorbaxeclipsexdb-c18(4.6×250mm，5μm)流動相a：甲醇；流動相b：1％冰乙酸的水溶液檢測波長：327nm；流速0.8ml/min，進樣量10μl；柱溫25℃按下表4進行梯度洗脫。表5實施例3的梯度洗脫參數(shù)實施例4～5實施例4～5提供的茵陳配方顆粒的指紋圖譜檢測方法與實施例1基本相同，區(qū)別在于，實施例4中配制的對照品溶液中綠原酸的濃度為0.1mg/ml，實施例5中配制的對照品溶液中綠原酸的濃度為0.3mg/ml。實施例6本實施例提供的茵陳配方顆粒的指紋圖譜檢測方法與實施例1基本相同，區(qū)別在于，由茵陳飲片制成多個節(jié)點供試品的工藝參數(shù)不同：其中，向茵陳飲片中加入8倍體積的純化水，置標(biāo)準(zhǔn)煎煎煮器具中浸泡10分鐘，第一次煎煮30分鐘，再加入9倍體積的純化水，第二次煎煮20min，合并兩次煎煮液，作為茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎；將茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎于60℃濃縮至密度1.02，作為茵陳提取物；將茵陳提取物于140℃條件下噴霧干燥，作為茵陳提取物噴干粉。實施例7本實施例提供的茵陳配方顆粒的指紋圖譜檢測方法與實施例1基本相同，區(qū)別在于，由茵陳飲片制成多個節(jié)點供試品的工藝參數(shù)不同：其中，向茵陳飲片中加入10倍體積的純化水，置標(biāo)準(zhǔn)煎煎煮器具中浸泡50分鐘，第一次煎煮40分鐘，再加入11倍體積的純化水第二次煎煮30min，合并兩次煎煮液，作為茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎；將茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎于70℃濃縮至密度1.10，作為茵陳提取物；將茵陳提取物于180℃條件下噴霧干燥，作為茵陳提取物噴干粉。試驗例1色譜條件的優(yōu)化選擇以綠原酸作為對照品，以茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎作為供試品，按照實施例1的方法分別配制對照品溶液和節(jié)點供試品溶液，然后分別于7個不同的色譜條件下進行高效液相色譜，并分析所得圖譜的峰型及分離度，從而選擇最優(yōu)的色譜條件。色譜條件1色譜柱：watersx-brigec18(4.6×250mm，5μm)流動相a：甲醇；流動相b：1％冰乙酸的水溶液檢測波長：326nm；進樣量10μl；柱溫30℃表6.色譜條件1的梯度洗脫參數(shù)按照色譜條件1得出的茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎在色譜條件1下的色譜圖，如圖10所示。色譜條件2色譜柱：watersx-brigec18(4.6×250mm，5μm)流動相a：甲醇；流動相b：1％冰乙酸的水溶液檢測波長：326nm；進樣量10μl；柱溫30℃表7.色譜條件2的梯度洗脫參數(shù)按照色譜條件2得出的茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎在色譜條件1下的色譜圖，如圖11所示。色譜條件3色譜柱：watersx-brigec18(4.6×250mm，5μm)流動相a：甲醇；流動相b：1％冰乙酸的水溶液檢測波長：326nm；進樣量10μl；柱溫30℃表8.色譜條件3的梯度洗脫參數(shù)按照色譜條件3得出的茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎在色譜條件1下的色譜圖，如圖12所示。色譜條件4：色譜柱：watersx-brigec18(4.6×250mm，5μm)流動相a：甲醇；流動相b：1％冰乙酸的水溶液檢測波長：326nm；進樣量10μl；柱溫30℃表9.色譜條件4的梯度洗脫參數(shù)按照色譜條件4得出的茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎在色譜條件1下的色譜圖，如圖13所示。色譜條件5：色譜柱：watersx-brigec18(4.6×250mm，5μm)流動相a：甲醇；流動相b：1％冰乙酸的水溶液檢測波長：326nm；進樣量10μl；柱溫30℃表10.色譜條件5的梯度洗脫參數(shù)按照色譜條件5得出的茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎在色譜條件1下的色譜圖，如圖14所示。色譜條件6：色譜柱：watersx-brigec18(4.6×250mm，5μm)流動相a：甲醇；流動相b：1％冰乙酸的水溶液檢測波長：326nm；進樣量10μl；柱溫30℃表11.色譜條件6的梯度洗脫參數(shù)按照色譜條件6得出的茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎在色譜條件1下的色譜圖，如圖15所示。色譜條件7：參照實施例1提供的色譜條件得出的色譜圖，如圖16所示。色譜條件8：參照實施例2提供的色譜條件得出的色譜圖，如圖17所示。色譜條件9：參照實施例3提供的色譜條件得出的色譜圖，如圖18所示。表12不同色譜條件下的色譜峰分布情況在條件7～9下檢測的色譜峰均勻性佳，色譜峰完全分離，因而選擇條件7～9作為色譜條件。需注意：色譜條件6下的色譜圖的峰型和分離度較佳，但色譜峰未完全分離，色譜條件6和色譜條件7的梯度洗脫的參數(shù)相同，色譜柱不同，即色譜柱優(yōu)選采用agilentzorbaxeclipsexdb-c18(4.6×250mm，5μm)。試驗例2節(jié)點對照品溶液的配制工藝選擇工藝1：向茵陳飲片中加體積百分比為45％的甲醇溶劑15ml，70℃條件下回流提取1h，過濾得回流提取液，再用甲醇溶劑定容。工藝2：向茵陳飲片中加體積百分比為45％的甲醇溶劑15ml，于40℃條件下超聲提取1次，每次25min；過濾得超聲提取液再用甲醇溶劑定容。工藝3：向茵陳飲片中加體積百分比為45％的甲醇溶劑15ml，先于70℃條件下回流提取1h，接著于40℃條件下超聲提取1次，每次25min；過濾得超聲提取液再用甲醇溶劑定容。工藝4：向茵陳飲片中加體積百分比為45％的甲醇溶劑15ml，先40℃條件下超聲提取1次，每次25min；過濾得到超聲提取液，再對超聲提取液于70℃條件下回流提取1h，接著于過濾得超聲提取液再用甲醇溶劑定容。工藝5：如實施例1所示工藝6：如實施例6所示工藝7：如實施例7所示表13.不同工藝條件下的色譜峰分布情況試驗對象工藝色譜峰分布情況試驗例2-1工藝1色譜峰個數(shù)少、小部分顯現(xiàn)，成分提取不完全，雜質(zhì)多試驗例2-2工藝2色譜峰重合、部分顯現(xiàn)，成分提取不完全、雜質(zhì)多試驗例2-3工藝3色譜峰完全呈現(xiàn)，但部分重合、分離度差，雜質(zhì)較多試驗例2-4工藝4色譜峰完全呈現(xiàn)，但部分重合、分離度差，雜質(zhì)較多實施例1工藝5色譜峰完全呈現(xiàn)，均勻性最佳，色譜峰完全分離，雜質(zhì)少實施例6工藝6色譜峰完全呈現(xiàn)，均勻性佳，色譜峰完全分離，雜質(zhì)少實施例7工藝7色譜峰完全呈現(xiàn)，均勻性佳，色譜峰完全分離，雜質(zhì)少試驗例3本發(fā)明實施例的檢測方法的精密度試驗對茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎按照實施例1提供的檢測方法進行色譜分析，每次進樣體積為10μl，記錄80min內(nèi)的色譜圖，并記錄各特征峰的相對保留時間以及特征峰的相對峰面積，計算得出各特征峰的相對保留時間rsd均小于0.3％，特征峰的相對峰面積rsd均小于2.0％，說明本發(fā)明實施例的檢測方法精密度好。試驗例4本發(fā)明實施例的檢測方法的重復(fù)性試驗取6份茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎按照實施例1提供的檢測方法進行色譜分析，進樣體積10μl，記錄80min內(nèi)的色譜圖，檢測結(jié)果見表12和表13。如表12和表13所記錄的結(jié)果，所得各特征峰的相對保留時間rsd均小于0.3％，特征峰的相對峰面積rsd均小于2.0％，說明本實發(fā)明實施例的檢測方法重復(fù)性好。試驗例5本發(fā)明實施例的檢測方法的穩(wěn)定性試驗取茵陳標(biāo)準(zhǔn)煎按照實施例1提供的檢測方法進行色譜分析，分別于0，4，8，12，24h測定，記錄80min內(nèi)的色譜圖，相對應(yīng)的色譜峰相對保留時間rsd均小于0.3％，特征峰的相對峰面積rsd均小于2.0％，結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。由此，建立茵陳配方顆粒的指紋圖譜如圖8和圖9所示，以其作為標(biāo)準(zhǔn)圖譜，對后續(xù)各個節(jié)點的待檢測顆粒進行質(zhì)量檢測及控制。綜上所述，本發(fā)明的茵陳配方顆粒的指紋圖譜的檢測方法，其建立的指紋圖譜系統(tǒng)地反映了茵陳配方顆粒的化學(xué)成分全貌，共有峰相對保留時間較為穩(wěn)定，并且該檢測方法精密度高、重復(fù)性好、穩(wěn)定性好，可為評價或控制茵陳配方顆粒的質(zhì)量提供依據(jù)。當(dāng)前第1頁12