本發(fā)明涉及用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀直接測定出尼羅替尼中3-(4-甲基-1h-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(以下簡稱化合物i)的含量。此方法能較好的控制原料藥及制劑中痕量化合物i含量，為患者的健康安全用藥提供保障，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。技術(shù)背景尼羅替尼，化學(xué)名nilotinib。為一種治療對既往治療耐藥或不耐受的費城染色體陽性的慢性髓性白血病(ph+cml)慢性期或加速期成人患者的藥物。尼羅替尼結(jié)構(gòu)如下：尼羅替尼中含有反應(yīng)殘留的化合物i，結(jié)構(gòu)如下：準確定量地測定尼羅替尼中痕量的化合物i含量極具挑戰(zhàn)性。很難采用氣相、液相色譜等對其進行痕量直接測定。目前，只有測定尼羅替尼中常量3-(4-甲基-1h-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺含量的方法采用經(jīng)典的色譜法,其專一性、靈敏度、方法精密度和重復(fù)性都存在很大的缺陷，不能提供可靠的痕量分析結(jié)果。為了克服原方法的缺陷，本發(fā)明采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀直接測定尼羅替尼中化合物i的含量。該分析方法 具有操作簡單、專一性好、靈敏極高、重現(xiàn)性好等特點。技術(shù)實現(xiàn)要素：如上所述，直接準確定量測定痕量化合物i存在各種缺陷。然而,利用化合物i具有穩(wěn)定性強和非常適合反相液相色譜分離的特征，以及在質(zhì)譜檢測器中很容易離子化并具有穩(wěn)定的適合定量分析的分子結(jié)構(gòu)的特點，可以采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀直接測定。除此之外,化合物i在質(zhì)譜檢測器有靈敏的吸收這一特征使本方法的靈敏度和專一性大大提高。通過試驗發(fā)現(xiàn)尼羅替尼在乙腈中有非常好的溶解性。本發(fā)明將用乙腈作為稀釋劑。本發(fā)明涉及一種尼羅替尼中化合物i含量的測定分析方法，該方法為直接用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定尼羅替尼中化合物i的含量。上述樣品配制中用乙腈作為稀釋液。上述采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，正離子選擇離子模式。該方法包括以下幾個步驟：(1)取尼羅替尼原料或制劑粉末，以乙腈溶液作為稀釋液制備得到樣品溶液；(2)采用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，流動相為0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液和乙腈，進行梯度洗脫。(3)設(shè)置流動相流速為0.3-1.2ml/ml，柱溫控制在25℃-40℃之間。(4)取步驟(1)的樣品溶液5ul，進樣，記錄質(zhì)譜總離子流圖。(5)采用質(zhì)譜檢測器，離子模式選擇正離子，取(1)的樣品溶液進樣，記錄化合物i質(zhì)譜離子流圖。本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：樣品前處理：稀釋液：采用色譜級的乙腈?；衔飅標準溶液：用稀釋液精密配制5.7ng/ml的化合物i溶液。樣品溶液：精密稱取30mg樣品于10ml的容量瓶中，用稀釋液溶解并定容至刻度，進樣。本發(fā)明使用色譜柱為：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱。流速0.3-1.2ml/ml。柱溫25℃-40℃。流動相a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液，流動相b：乙腈，梯度如下：ab0min90％10％8min10％90％質(zhì)譜檢測器：正離子模式，[m+h]+:242附圖說明：附圖1：根據(jù)本發(fā)明實施例1得到的化合物i質(zhì)譜棒圖；附圖2：根據(jù)本發(fā)明實施例1得到的化合物i標準品質(zhì)譜總離子流圖；附圖3：根據(jù)本發(fā)明實施例2得到的尼羅替尼樣品質(zhì)譜總離子流圖；附圖4：根據(jù)本發(fā)明實施例3得到的尼羅替尼樣品加樣回收率質(zhì)譜總離子流圖。具體實施方式為了更好的理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合本發(fā)明的具體實施例作進一步說明，但其不限制于本發(fā)明。實施例一儀器與條件：高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀：agilent1260infinity，ms檢測器。色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱流動相：a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液b:乙腈。等度如下：0～8.0min，有機相比例由10％變?yōu)?0％。柱溫：35℃。流速：1.0ml/min選擇正離子：242進樣體積：5ul。實驗步驟：1)流動相a配制：精密量取1.0ml三氟乙酸溶于1000ml水中，混勻。2)稀釋液b：乙腈3)標準溶液c：精密稱取約28.5mg化合物i于100ml容量瓶中，加b溶解定容，搖勻，精密量取2.0ml置于另一100ml容量瓶中，加b定容，即得標準溶液c，進樣，記錄質(zhì)譜棒圖，見典型圖1。記錄化合物i質(zhì)譜總離子流圖，見典型圖2。實施例二儀器與條件：高效液相色譜儀：agilent1260infinity，ms檢測器。色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱流動相：a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液b:乙腈。等度如下：0～8.0min，有機相比例由10％變?yōu)?0％。柱溫：35℃。流速：1.0ml/min選擇正離子：242進樣體積：5ul。實驗步驟：1)流動相a配制：精密量取1.0ml三氟乙酸溶于1000ml水中，混勻。2)稀釋液b：乙腈3)標準溶液c：精密稱取約28.5mg化合物i于100ml容量瓶中，加b溶解定容，搖勻，精密量取2.0ml置于另一100ml容量瓶中，加b定容，即得標準溶液c。4)樣品溶液d:精密稱取約30mg尼羅替尼樣品置于10ml容量瓶中，加b定容，即得樣品溶液d，進樣。記錄化合物i質(zhì)譜總離子流圖，見典型圖3。實施例三儀器與條件：高效液相色譜儀：agilent1260infinity，ms檢測器。色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱流動相：a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液b:乙腈。等度如下：0～8.0min，有機相比例由10％變?yōu)?0％。柱溫：35℃。流速：1.0ml/min選擇正離子：242進樣體積：5ul。實驗步驟：1)流動相a配制：精密量取1.0ml三氟乙酸溶于1000ml水中，混勻。2)稀釋液b：乙腈3)標準溶液c：精密稱取約28.5mg化合物i于100ml容量瓶中，加b溶解定容，搖勻，精密量取2.0ml置于另一100ml容量瓶中，加b定容，即得標準溶液c。4)樣品溶液e:精密稱取約30.0mg尼羅替尼樣品，用標準溶液c溶解并滴定至刻度，混勻，進樣。記錄化合物i質(zhì)譜總離子流圖，見典型圖4。當前第1頁12