1.一種檢測奶牛乳房炎中金黃色葡萄球菌的膠體金試紙,該膠體金試紙包括膠體金免疫層析反應(yīng)體系,其特征在于:其中金標(biāo)蛋白是重組的金黃色葡萄球菌A蛋白,包被抗原是金黃色葡萄球菌β-溶血素,質(zhì)控線是羊抗牛IgG。
2.一種權(quán)利要求1所述膠體金試紙的制備方法,其特征在于包括以下步驟:
1)取金黃色葡萄球菌β-溶血素包被于硝酸纖維膜形成檢測線,取羊抗牛IgG包被所述硝酸纖維素膜形成質(zhì)控線,即得到分析膜;
2)制備膠體金溶液,并采用膠體金標(biāo)記體系標(biāo)記SPA,將所得的金標(biāo)蛋白在支持膜上固相化,即得到膠體金-SPA復(fù)合物結(jié)合墊;
3)取步驟1)所得的分析膜、步驟2)所得的膠體金-SPA復(fù)合物結(jié)合墊、吸水紙、樣品墊、底板,組裝試紙,即得到所述檢測奶牛乳房炎中金黃色葡萄球菌的膠體金試紙。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟1)所述金黃色葡萄球菌β-溶血素是通過以下方法制備的:金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)株接種于THB培養(yǎng)基中,搖床培養(yǎng)48小時(shí),離心,取上清,經(jīng)過濾除菌、超濾、柱層析純化后,得到濃度為1~2mg/mL的金黃色葡萄球菌β-溶血素溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟2)所述膠體金溶液是通過檸檬酸鈉還原法制備的。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟2)所述膠體金標(biāo)記體系中:膠體金顆粒的粒徑為20~30nm。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟2)所述膠體金標(biāo)記體系中:蛋白與膠體金的結(jié)合反應(yīng)pH為5.9~6.2。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟2)所述膠體金標(biāo)記體系中:膠體金上結(jié)合的蛋白量為20~60μg/mL。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟2)所述膠體金標(biāo)記體系中:穩(wěn)定劑為PEG。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟3)中組裝試紙前先對步驟1)所得的分析膜執(zhí)行以下操作:取步驟1)所得的分析膜經(jīng)0.4%(v/v)濃度的甘油浸泡0.5h,再在37℃下烘干2h,而后取脫脂奶粉溶液和BSA溶液在4℃條件下封閉分析膜1h,而后洗滌、干燥。
10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟3)所述組裝試紙,具體包括以下操作:
A)取粘性底板;
B)將分析膜黏于底板4~10cm位置,檢測線在前,質(zhì)控線在后;
C)將膠體金-SPA復(fù)合物結(jié)合墊貼于底板2cm位置,上端壓于分析膜上端,重疊0.5cm;
D)將樣品墊黏貼于底板上,下端壓于膠體金-SPA復(fù)合物結(jié)合墊上端,重疊1cm;
E)吸水墊黏于底板上,上端壓于分析膜的下端,重疊1cm。