本發(fā)明涉及一種水產(chǎn)品中恩諾沙星的檢測方法，特別涉及一種水產(chǎn)品中恩諾沙星殘留的免疫層析毛細管快速檢測方法。

背景技術(shù)：

近年來，隨著人們生活水平的不斷升高，人們對海鮮食品的消費逐漸攀升，水產(chǎn)品養(yǎng)殖及生產(chǎn)加工市場逐漸擴大，因此在水產(chǎn)養(yǎng)殖中會添加一些有益于水產(chǎn)生物存活的抗生素等藥物。但食物鏈富集現(xiàn)象而影響了人體健康，農(nóng)獸藥殘留、食物過敏等食品安全事件不斷發(fā)生，因此，受到人們的廣泛重視。

恩諾沙星(enrofloxacin)是人工合成的第三代呋喹諾酮類藥物，由于它具有抑菌范圍廣、吸收快、藥物在體內(nèi)存留時間長、藥效好的優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖和獸醫(yī)臨診中。目前有研究表明恩諾沙星在鯉魚、蝦、中華絨螯蟹等水產(chǎn)中均有殘留，且證明恩諾沙星具有低毒特性；其他研究也證明了其潛在的危害，如腸胃道不良反應(yīng)、致幼年動物關(guān)節(jié)病變等。

目前，針對恩諾沙星的檢測包括高效液相色譜、液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用、毛細管電泳、酶聯(lián)免疫吸附法及膠體金試紙條等，但是均存在一定的不足，如靈敏度、重復(fù)性等問題。尋找一種靈敏、可靠、快速的恩諾沙星檢測方法成為大家關(guān)注的焦點。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種水產(chǎn)品中恩諾沙星殘留的免疫層析毛細管快速檢測方法，操作簡單，靈敏度好，重復(fù)性高，檢測速度快，試劑用量少，穩(wěn)定性好，對檢測人員無要求，不需要大型儀器，適合用于現(xiàn)場快速檢測。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：

一種水產(chǎn)品中恩諾沙星殘留的免疫層析毛細管快速檢測方法，包括如下步驟：

一、待測樣品處理：取1.0g樣品與2mL 2％磺基水楊酸溶液勻漿1～2min后，離心，取上清液用2M NaOH調(diào)pH為8.0～8.5，并過0.45μm濾膜制成待測樣品溶液；本步驟主要目的是從水產(chǎn)品中提取恩諾沙星，常規(guī)的恩諾沙星的提取一般要經(jīng)過組織勻漿，有機萃取，抽提濃縮等一系列步驟才能得到較純的恩諾沙星提取液。這樣的提取方法復(fù)雜、耗時，不適合現(xiàn)場的快速檢測，因此本發(fā)明為滿足快速高效的要求，采用了恩諾沙星的酸提取方法。

二、樣品檢測：檢測時將待測樣品溶液與金標一抗按1：3的體積比均勻混合得混合液，取3～15μL混合液用移液槍注入免疫層析毛細管的檢測區(qū)端，靜置8～15min，然后用移液槍推動混合液至免疫層析毛細管另一端的質(zhì)控區(qū)，靜置8～15min，將多余的混合液排出免疫層析毛細管，將免疫層析毛細管在PBST緩沖液中抽洗3次，最后以裸眼定性或以掃描儀半定量讀取檢測結(jié)果。

本發(fā)明基于現(xiàn)有檢測方法中操作簡單、靈敏度高的酶聯(lián)免疫吸附法與膠體金試紙條法的原理，采用玻璃毛細管為基底的免疫層析毛細管新技術(shù)檢測方法，建立了一種針對水產(chǎn)品中恩諾沙星殘留的免疫層析毛細管檢測方法。具有表面光滑、視覺易分析、檢測快速、操作簡單及試劑用量少的優(yōu)點，為藥物殘留的檢測技術(shù)提供了新的思路方法。

作為優(yōu)選，所述免疫層析毛細管的組裝方法包括如下步驟：

(1)毛細管的處理：將玻璃毛細管浸沒于熱的piranha溶液中，超聲清洗15～20min，超純水清洗至pH＝7，干燥、冷卻后，將毛細管依次浸入KOH溶液、超純水、HCl溶液、超純水及丙酮中分別超聲清洗10-15min，105℃高溫烘干后，冷卻備用；

(2)毛細管的修飾：將清洗干凈的毛細管浸沒于修飾液中，37℃干燥環(huán)境中反應(yīng)過夜，置于大平皿中，先用無水甲苯振蕩清洗3次，每次5min，再用丙酮振蕩清洗3次，每次5min，氮氣氣氛下干燥；

(3)免疫層析毛細管的組裝：將作為檢測區(qū)的抗原和作為質(zhì)控區(qū)的二抗分別注入步驟(2)處理得到的毛細管的兩端，37℃下固定40min，用PBST緩沖液抽洗3次，每次用PBST緩沖液5mL；再將毛細管全部浸入2wt％BSA溶液中，37℃封閉2h，用PBST緩沖液洗凈并室溫吹干，4℃保存?zhèn)溆?，獲得免疫層析毛細管。

檢測區(qū)的抗原與金標一抗進行特異性結(jié)合，當與含有恩諾沙星的待測樣品存在時，抗原與待測樣品中的恩諾沙星競爭結(jié)合金標一抗，因而出現(xiàn)顏色差異；質(zhì)控區(qū)的二抗也能與金標一抗特異性結(jié)合，但不進行競爭反應(yīng)，主要是金標一抗活性的鑒定。BSA溶液的注入式保證封閉毛細管上沒有連接抗原、二抗的非特異性結(jié)合位點，起到排除干擾的作用。玻璃毛細管具有表面光滑、耐高溫、耐酸堿、背景值低、易觀察等優(yōu)點，且價格低廉、易生產(chǎn)，在市場推廣上具有可觀競爭力。

本發(fā)明克服傳統(tǒng)免疫層析材料的局限并結(jié)合玻璃的優(yōu)點，實現(xiàn)了恩諾沙星在免疫層析毛細管檢測方面的應(yīng)用。

作為優(yōu)選，步驟(2)中，修飾液按體積百分比計組成為：10％GPTMS、1％三乙胺及89％無水甲苯。

作為優(yōu)選，步驟(1)中的KOH溶液濃度為0.8-1.2mol/L，HCl溶液濃度為0.8-1.2mol/L。

作為優(yōu)選，步驟(1)中所述piranha溶液的制備方法如下：濃度為95wt％以上的濃硫酸與雙氧水以3:1體積比混合，冰浴條件混合，混合時將雙氧水溶液緩慢加入濃硫酸中，不斷攪拌使混合液溫度保持在80℃以下。

作為優(yōu)選，步驟(3)中，所述抗原為恩諾沙星與BSA偶聯(lián)的抗原，二抗為羊抗鼠二抗?？乖倪x擇非常關(guān)鍵，單獨的恩諾沙星屬于半抗原，具備免疫反應(yīng)性，而不具備免疫原性。將恩諾沙星與蛋白質(zhì)載體BSA結(jié)合，使其可以非特異結(jié)合在已修飾的玻璃毛細管壁上。同時，本發(fā)明采用蛋白質(zhì)載體BSA制備包被抗原EF-BSA，保證了抗體的較強特異性，使其保持較高的檢測靈敏性，可與樣品中的EF競爭金標抗體而產(chǎn)生顏色差異，便于準確性分析，對于檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性提高有幫助。

恩諾沙星與BSA偶聯(lián)的抗原其制備方法如下：

1、BSA溶液封閉：將200μL乙二胺(EDA)，236mg/BSA，256mgEDC依次溶于10mL PBS中，恒溫震蕩過夜(20℃、110r/min)后，經(jīng)PBS(0.01M，pH7.4)完全透析，備用。

2、制備包被抗原：取30mgEF，10.4mgNHS，18.6mgEDC溶于500μL DMF中，室溫振蕩24h，得a液。將a液逐滴加入50mg封閉好的BSA溶液中，室溫避光振蕩反應(yīng)3h，取出進行透析3天后，用紫外分光光度計進行紫外吸收光譜全波長掃描(200nm～400nm)，檢驗偶聯(lián)情況，反應(yīng)液冷凍干燥，-80℃?zhèn)溆谩?/p>

作為優(yōu)選，恩諾沙星與BSA偶聯(lián)的抗原與PBS緩沖液配制成濃度0.075mg/mL的抗原溶液后注入毛細管，羊抗鼠二抗與PBS緩沖液配制成濃度0.69mg/mL的羊抗鼠二抗溶液后注入毛細管。

作為優(yōu)選，抗原溶液注入毛細管的用量為2μL，羊抗鼠二抗溶液注入毛細管的用量為2μL。

作為優(yōu)選，一抗為鼠抗恩諾沙星。

本發(fā)明的有益效果是：

1、本發(fā)明的前處理方法相對簡單，根據(jù)恩諾沙星為酸穩(wěn)定性，干擾蛋白可以通過該途徑除去，獲得了純度較高的恩諾沙星提取溶液，即防止雜蛋白交叉干擾，提高檢測準確度。

2、檢測用時短，整個過程最多25min，實驗結(jié)果易觀察。同時可采用掃描儀進行灰度掃描，實現(xiàn)其結(jié)果的半定量檢測，全程不需要大型儀器，操作簡便，對操作人員無要求。

3、以毛細管為免疫層析基底，避免了硝酸纖維素膜等傳統(tǒng)基底的檢測結(jié)果不明顯、重復(fù)性差等缺點，有利于檢測結(jié)果的分辨。

4、玻璃毛細管具有表面光滑、背景值低、耐酸堿、基質(zhì)無滲透等優(yōu)點，作為免疫層析的反應(yīng)基底，使結(jié)果易觀察，提高了檢測靈敏度與重復(fù)性，延長了貯藏期。

5、毛細管直徑較小，在通常情況下，只需微量待檢溶液即可完成檢測。

6、市面所售的玻璃毛細管價格低廉且銷售廣泛，作為檢測材料，降低了整個檢測過程的成本，因此使其在檢測方法領(lǐng)域具有極大的競爭潛力。

附圖說明

圖1是免疫層析毛細管對恩諾沙星檢測結(jié)果的掃描圖片，兩端分別為控制區(qū)和檢測區(qū)，恩諾沙星的濃度為從0到15ng/mL。

圖2是檢測區(qū)的相對灰度對恩諾沙星濃度繪制的擬合曲線，恩諾沙星的濃度為從0到50ng/mL。

圖3是對免疫層析毛細管不同批次組內(nèi)與組間的檢測區(qū)結(jié)果掃描圖。

具體實施方式

下面通過具體實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步的具體說明。

本發(fā)明中，若非特指，所采用的原料和設(shè)備等均可從市場購得或是本領(lǐng)域常用的。下述實施例中的方法，如無特別說明，均為本領(lǐng)域的常規(guī)方法。

1、儀器和試劑

恩諾沙星與BSA偶聯(lián)的抗原(EF-BSA)：其制備方法如下：

1、BSA溶液封閉：將200μL乙二胺(EDA)，236mg/BSA，256mgEDC依次溶于10mL PBS中，恒溫震蕩過夜(20℃、110r/min)后，經(jīng)PBS(0.01M，pH7.4)完全透析，備用。

2、制備包被抗原：取30mgEF，10.4mgNHS，18.6mgEDC溶于500μL DMF中，室溫振蕩24h，得a液。將a液逐滴加入50mg封閉好的BSA溶液中，室溫避光振蕩反應(yīng)3h，取出進行透析3天后，用紫外分光光度計進行紫外吸收光譜全波長掃描(200nm～400nm)，檢驗偶聯(lián)情況，反應(yīng)液冷凍干燥，-80℃?zhèn)溆谩?/p>

2、免疫層析毛細管的組裝

(1)毛細管的處理：

piranha溶液的制備方法如下：濃度為95wt％以上的濃硫酸與雙氧水以3:1體積比混合，冰浴條件混合，即將雙氧水溶液緩慢加入濃硫酸中，不斷攪拌使混合液溫度保持在80℃以下，盡量保持無氣泡產(chǎn)生的加入速度即可。

將毛細管迅速浸入上述熱的piranha溶液中超聲清洗15min，超純水清洗至中性，105℃的烘箱中干燥2h，冷卻，然后將毛細管依次浸入濃度為0.8mol/L的KOH溶液(200mL)、超純水(200mL，中間更換兩次)、濃度為0.8mol/L的HCl溶液(200mL)、超純水(200mL，中間更換兩次)及丙酮(200mL)中分別超聲清洗15min，然后在105℃的烘箱中干燥1h以上，以完全除去水分。

(2)毛細管的修飾：

將清洗干凈的毛細管浸沒于含有10％GPTMS和1％三乙胺的無水甲苯的修飾液中，37℃干燥環(huán)境中反應(yīng)過夜，置于大平皿中，先用無水甲苯振蕩清洗3次，每次約5min，再用丙酮振蕩清洗3次，每次約5min，氮氣氣氛下干燥。

(3)免疫層析毛細管的組裝：

作為檢測區(qū)的抗原和作為質(zhì)控區(qū)的二抗分別注入步驟(2)處理得到的毛細管的兩端，37℃下固定40min，用PBST抽洗3次，每次用洗滌液PBST約5mL。再將毛細管全部浸入2wt％BSA溶液中，37℃封閉2h，用PBST洗凈并室溫吹干，4℃保存?zhèn)溆?，獲得免疫層析毛細管。

將作為檢測區(qū)的抗原濃度0.075mg/mL的EF-BSA溶液(PH7.4，0.01mol/L PBS配制)，作為質(zhì)控區(qū)的二抗為濃度0.69mg/mL的羊抗鼠二抗溶液(PH7.4，0.01mol/L PBS配制)。分別取2μL兩種溶液注入毛細管的兩端，37℃下固定40min，用PBST抽洗3次，每次用洗滌液PBST約5mL。再將毛細管全部浸入2wt％BSA溶液中，37℃封閉2h，用PBST洗凈并室溫吹干，4℃保存?zhèn)溆茫@得免疫層析毛細管。

毛細管的質(zhì)控區(qū)和檢測區(qū)的組裝原理簡述如下：經(jīng)強酸、強堿、有機試劑清洗等處理使毛細管暴露羥基基團，通過硅烷試劑的修飾，可結(jié)合環(huán)氧基團共價連接目的蛋白質(zhì)，將包被原(EF-BSA)和羊抗鼠二抗分別固定在玻璃毛細管兩端，作為檢測區(qū)(TZ)和質(zhì)控區(qū)(CZ)。當含有目標藥物恩諾沙星(EF)與金標一抗以一定比例混合注入到檢測區(qū)，此時溶液中的EF與毛細管上的EF-BSA同時競爭結(jié)合金標一抗，使金標一抗結(jié)合在檢測區(qū)的顏色隨恩諾沙星含量的增大而逐漸變淺甚至消失，即檢測結(jié)果判定為陽性；同樣，顏色未變淺表現(xiàn)為酒紅色的混合液，即判定結(jié)果為陰性。而質(zhì)控區(qū)的二抗與金標一抗的結(jié)合顯色均為酒紅色，與EF含量無關(guān)，用以證明金標一抗的結(jié)合活性，且質(zhì)控區(qū)顯色，結(jié)果判定才有效，否則會出現(xiàn)假陽性假陰性的現(xiàn)象，影響檢測結(jié)果。

3、毛細管檢測條件的優(yōu)化

檢測區(qū)與質(zhì)控區(qū)的抗原與二抗的濃度選擇，通過將抗原與二抗分別配制成0～0.25mg/mL、0～1.2mg/mL，選取陰性樣品使檢測區(qū)與質(zhì)控區(qū)顏色相近且肉眼易區(qū)分的稀釋濃度為最優(yōu)，以保證靈敏度與肉眼檢測達到較好的效果。因此，因此根據(jù)實驗結(jié)果確定包被抗原EF-BSA濃度為0.075mg/ml，羊抗鼠二抗?jié)舛葹?.69mg/ml。

固定時間與封閉時間的優(yōu)化，將已確定的濃度進一步固定時間的優(yōu)化，分別在37℃固定10、20、30、40、50、60min，經(jīng)確定保持穩(wěn)定的最短時間為40min。以2wt％BSA對已固定的抗原、二抗進行封閉，以1、1.5、2、2.5h進行不同時間的封閉。最終確定2h為BSA封閉時間。

按照已經(jīng)確定好的抗原和二抗的包被量進行毛細管的組裝，進一步確定一抗的檢測比例。本實驗通過1：1～1：6的一抗稀釋比例確定保證肉眼易觀察的稀釋比例為最優(yōu)。因此確定1：3為膠體金標記抗體稀釋液體積比。

4、對恩諾沙星的檢測

4.1膠體金標記的一抗(金標一抗)的制備

膠體金的制備：將實驗用到的玻璃儀器等在新配置的王水中浸泡20min后，用大量超純水沖洗干凈，放置于100℃以上進行干燥，待用。

向雙頸瓶中加入100ml HAuCl4(1mM)在冷凝條件下使用磁力加熱攪拌器均勻加熱，充分沸騰后，快速加入10ml 38.8mM檸檬酸三鈉溶液，待顏色由淡黃變?yōu)樯罴t色，繼續(xù)回流15mins后停止加熱，繼續(xù)攪拌冷卻至室溫。將冷卻的膠體金溶液過0.22μm水系膜，置于4℃條件避光保存。

膠體金標記的一抗的制備：10mL膠體金溶液中加入0.1M的K₂CO₃溶液，并緩慢加入適量的的鼠抗恩諾沙星IgG抗體，使溶液保持約pH 8.0，緩慢均勻攪拌1h后，加入5％BSA和1％的聚乙二醇(PEG 20000)至最終體積的1/10，繼續(xù)攪拌1h后，3500r/min、4℃離心15min除去暗紅色沉淀，取上清液以10000r/min、4℃離心65min收集沉淀，將沉淀溶于1mL、pH 8.2含有1％BSA、0.02％NaN₃、5％蔗糖、0.1％Tween-20的Tris-HCl緩沖液，重復(fù)離心收集沉淀，復(fù)溶于1mL的復(fù)溶液中，置于-20℃保存。

4.2具體實施

實施例1

一、待測樣品處理：將1±0.1g魚肉(從青島家樂福超市中購買的大菱鲆)與2mL 2％磺基水楊酸溶液進行混合勻漿1～2min后，4500g、4℃離心15min，取上清液用2M NaOH調(diào)PH為8.0～8.5，并過0.45μm膜制成待測溶液，置于4℃避光保存，作為測試樣品。

二、樣品檢測：將4.1節(jié)制備的膠體金標記的一抗(金標鼠抗恩諾沙星)與測試樣品按1:3的體積比混合均勻得混合液，吸取混合液3μL注入檢測區(qū)。靜置10min后，用移液槍推入質(zhì)控區(qū)，停留10min，用PBST緩沖液(PH7.4)洗凈吹干，即可通過肉眼定性觀測結(jié)果或通過掃描儀半定量計算檢測結(jié)果。

實施例2

一、待測樣品處理：將1±0.1g蝦肉(從青島家樂福超市中購買的南美白對蝦)與2mL 2％磺基水楊酸溶液進行混合勻漿1～2min后，4500g、4℃離心15min，取上清液用2M NaOH調(diào)PH為8.0～8.5，并過0.45μm膜制成待測溶液，置于4℃避光保存，作為測試樣品。

二、樣品檢測：將4.1節(jié)制備的膠體金標記的一抗(金標鼠抗恩諾沙星)與測試樣品按1:3的體積比混合均勻得混合液，吸取混合液3μL注入檢測區(qū)。靜置10min后，用移液槍推入質(zhì)控區(qū)，停留10min，用PBST緩沖液(PH7.4)洗凈吹干，即可通過肉眼定性觀測結(jié)果或通過掃描儀半定量計算檢測結(jié)果。

實施例3

一、待測樣品處理：將1±0.1g魚肉(從青島家樂福超市購買的鲅魚)與2mL2％磺基水楊酸溶液進行混合勻漿1～2min后，4500g、4℃離心15min，取上清液用2M NaOH調(diào)PH為8.0～8.5，并過0.45μm膜制成待測溶液，置于4℃避光保存，作為測試樣品。

二、樣品檢測：將4.1節(jié)制備的膠體金標記的一抗(金標鼠抗恩諾沙星)與測試樣品按1:3的體積比混合均勻得混合液，吸取混合液3μL注入檢測區(qū)。靜置10min后，用移液槍推入質(zhì)控區(qū)，停留10min，用PBST緩沖液(PH7.4)洗凈吹干，即可通過肉眼定性觀測結(jié)果或通過掃描儀半定量計算檢測結(jié)果。

當含有目標藥物恩諾沙星(EF)待測溶液與金標一抗混合液注入到檢測區(qū)，此時溶液中的EF與毛細管上的EF-BSA同時競爭結(jié)合金標一抗，使金標一抗結(jié)合在檢測區(qū)的顏色隨恩諾沙星含量的增大而逐漸變淺甚至消失，即檢測結(jié)果判定為陽性；同樣，顏色未變淺表現(xiàn)為酒紅色的混合液，即判定結(jié)果為陰性。若出現(xiàn)質(zhì)控區(qū)不顯色，即為檢測結(jié)果失效。顯色后的免疫層析毛細管可通過掃描儀進行灰度掃描，分析色度。通過色度與恩諾沙星濃度進行四參數(shù)擬合，進一步確定半定量檢測限。

表1本發(fā)明的方法檢測水產(chǎn)品中不同濃度的恩諾沙星(EF)與環(huán)丙沙星(CIP)

a:無紅色條帶

b:明顯的紅色條帶

4.3不同濃度恩諾沙星的檢測分析

以一系列濃度梯度的標準恩諾沙星溶液(0.01M PH7.4的PBS溶液配制)與金標一抗等體積比混合后，吸取混合液3μL注入檢測區(qū)。靜置10min后，用移液槍推入質(zhì)控區(qū)，停留10min，用PBST緩沖液(PH7.4)洗凈吹干，即可通過肉眼定性觀測結(jié)果或通過掃描儀半定量計算檢測結(jié)果如圖1。當恩諾沙星達到5ppb時，檢測區(qū)顏色開始降低，隨濃度增加，顏色繼續(xù)降低甚至消限，因此本發(fā)明確定免疫層析毛細管檢測技術(shù)的恩諾沙星視覺檢測限為5ppb。

本發(fā)明將已檢測的免疫層析毛細管用HP平板掃描儀進行高質(zhì)量的圖片掃描。將掃描的圖片轉(zhuǎn)化為灰度圖像進行相對灰度的計算，運用相對灰度比值與恩諾沙星濃度可形成四元擬合確定其半定量檢測限如圖2所示，并計算其半定量檢測限為1.29ppb。當恩諾沙星在0～15ppb間表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，其關(guān)系式為：y＝-0.0636x+0.99869，R²＝0.9734。說明本發(fā)明在此范圍內(nèi)可實現(xiàn)準確檢測。

4.4毛細層析管的特異性

膠體金免疫層析毛細管檢測法對恩諾沙星檢測的特異性是通過檢測不同濃度梯度的恩諾沙星類似物:環(huán)丙沙星、諾氟沙星、沙拉沙星、氯霉素、土霉素等類似物進行驗證。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：該方法也可檢測環(huán)丙沙星，并根據(jù)上述4.3的檢測方法進行視覺檢測限與半定量檢測限的確定，即該方法的環(huán)丙沙星視覺檢測限為10ppb，半定量檢測限為4.37ppb；針對諾氟沙星在中高濃度有所檢出，而其他類似物均無交叉。因此，本發(fā)明可準確檢測恩諾沙星與環(huán)丙沙星的藥物殘留，符合中華人名共和國農(nóng)業(yè)部公告(第235號)恩諾沙星檢測指標(含環(huán)丙沙星共同檢測)小于100ppb。

4.5毛細層析管的穩(wěn)定性和重復(fù)性

對5個批次制備的免疫層析毛細管，每個批次3個平行進行驗證。對低中濃度的樣品進行檢測如圖3，其檢測結(jié)果進行掃描并進行色度分析，發(fā)現(xiàn)批間差異相對偏差均小于2％，說檢測結(jié)果比較穩(wěn)定。

將同一批次制備的免疫層析毛細管4℃干燥、4℃抑菌溶液中分別儲存40天，進行陰性樣本檢測檢測區(qū)和控制區(qū)的顏色均沒有顯著變化，說明儲存穩(wěn)定性良好。免疫層析毛細管的穩(wěn)定性可能受環(huán)境溫度、濕度、光及微生物的潛在影響，破壞了以環(huán)氧基團連接的共價鍵橋，因此進一步針對其保藏情況，以嚴格無菌條件及紫外光照條件下常溫貯藏，其穩(wěn)定性可長達4個月以上，增強了其貯藏穩(wěn)定性。

6、與現(xiàn)有方法的比較

本發(fā)明的方法對恩諾沙星檢測的效果與其他快速檢方法的最新研究進行比較，結(jié)果見表2可知，本發(fā)明的方法具有較低的檢測限、用時較短，具備方法的優(yōu)越性和快速檢測競爭力。

表2恩諾沙星快速檢測方法最新研究的比較

以上所述的實施例只是本發(fā)明的一種較佳的方案，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，在不超出權(quán)利要求所記載的技術(shù)方案的前提下還有其它的變體及改型。