本發(fā)明涉及一種檢測卡，具體是一種檢測餐具中阿維菌素的檢測卡及其檢測方法。
背景技術：
阿維菌素作為一種十六元大環(huán)內(nèi)酯新型殺蟲劑，由鏈霉菌中阿維鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)生，因化學結(jié)構(gòu)新穎、作用機制獨特（干擾蟲體的神經(jīng)生理活動，刺激釋放γ-氨基丁酸，從而抑制節(jié)肢動物的神經(jīng)傳導）、殺蟲活性強，具有廣譜、高效、持效、相對安全等特點，符合現(xiàn)代生態(tài)農(nóng)藥要求，被廣泛用于體內(nèi)外各種線蟲，節(jié)肢動物類寄生蟲和昆蟲等的驅(qū)殺。目前全球正大面積推廣使用阿維菌素產(chǎn)品。但隨著害蟲抗性提高，阿維菌素用藥量不斷增加，對環(huán)境及人類、動植物危害也日益顯現(xiàn)，主要表現(xiàn)為田間土壤的藥物殘留、人和動物中樞和外周神經(jīng)癥狀，如震顫、共濟失調(diào)、精神抑郁、高度昏迷乃至死亡，并產(chǎn)生胚胎毒性。按世界衛(wèi)生組織（WTO）5級分類標準，將其列為高毒化合物。
鑒于此，食品及餐具產(chǎn)品中阿維菌素藥物殘留檢測成為國家重點監(jiān)控指標，阿維菌素殘留檢測方法也成為重點研究內(nèi)容。目前，關于阿維菌素殘留檢測方法主要為色譜檢測法和免疫檢測法，色譜檢測法有薄層色譜法、液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等，這些檢測方法存在樣品前處理復雜、需要專業(yè)操作人員、需要昂貴儀器花費較高等不足，常用于阿維菌素藥物殘留的確證分析；在現(xiàn)有技術中，對于阿維菌素的檢測已經(jīng)做出了大量的研究，包括有檢測阿維菌素的試劑盒、試劑盒的制備方法以及采用試劑盒進行檢測阿維菌素的方法。但是，在現(xiàn)有技術中，普遍采用的阿維菌素的檢測方法有：薄層色譜法(TLC)，氣相色譜法(GC)，高效液相色譜法(HPLC)，氣-質(zhì)聯(lián)機(GC/MS)，液-質(zhì)聯(lián)機(HPLC/MS)，毛細管電泳(CE)等。用上述方法檢測存在著儀器設備復雜、樣本前處理和測定操作煩瑣的缺陷，不適合現(xiàn)場監(jiān)控和大量樣本篩查，而且費用高昂，使其推廣使用受到限制。
阿維菌素檢測卡即是在膠體金免疫層析技術基礎上融合現(xiàn)代單克隆抗體技術、新材料技術建立的一種簡單、快速、經(jīng)濟的免疫檢測方法，該檢測試紙條操作較酶聯(lián)免疫法更簡單、快速、更易判斷結(jié)果，是又一種新型、經(jīng)濟、環(huán)保的檢測阿維菌素的技術方法。目前阿維菌素膠體金檢測試紙條在國內(nèi)外尚為空白。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種檢測餐具中阿維菌素的檢測卡及其檢測方法，以解決上述背景技術中提出的問題。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：
一種檢測餐具中阿維菌素的檢測卡，包括底板、吸水墊、置物層、引水層和硝酸纖維層，所述底板放置于最下邊，底板上的最左邊設有吸水墊，吸水墊的右邊設有置物層，置物層的右邊設有引水層，所述硝酸纖維層設置了底板上的最右端，引水層和硝酸纖維層的中點位置覆蓋有右部覆膜，吸水墊、置物層和硝酸纖維層的中點位置覆蓋有左部覆膜，硝酸纖維層上自上而下包被有一條抗鼠免疫球蛋白抗體的質(zhì)控線、一條阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測線，置物層上吸附包被有膠體金標記物。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述底板的材質(zhì)為PVC板，所述吸水墊的材質(zhì)為引水玻璃纖維，所述置物層的材質(zhì)為載體玻璃纖維，所述引水層的材質(zhì)為吸水棉漿板。
作為本發(fā)明進一步的方案：檢測方法是：首先將待檢測的餐具浸泡在蒸餾水溶液中60min，水樣經(jīng)0.22μm的濾膜過濾，取5.0mL過濾水樣置于15mL帶塞的錐形離心管中，將含有70.0μL三氯甲烷的1.0mL丙酮通過微量進樣器快速注入離心試管中，然后渦旋10s，混合液從水相被萃取到氯仿溶液中，靜置10min，分散在水相中的萃取溶劑氯仿沉積到試管底部，用微量進樣器吸取萃取溶劑至10mL離心管中，再向過濾水樣中加入含有70μL三氯甲烷的1mL丙酮，渦旋10s，靜置10min，取下層萃取溶劑，合并萃取溶液，氮氣吹干，再用50μL甲醇溶解，渦旋30s，作為待檢測溶液，將檢測卡的吸水墊浸沒在上述溶液中5min，取出觀察。
作為本發(fā)明再進一步的方案：所述的大環(huán)內(nèi)脂類抗生素檢測線與所述的β-內(nèi)酰胺抗生素檢測線并排、所述的氧氟沙星類抗生素檢測線與所述的喹諾酮類抗生素檢測線并排、所述的磺胺類抗生素檢測線與所述的頭孢類抗生素檢測線并排。
作為本發(fā)明再進一步的方案：制備方法是，A制備單克隆抗體膠體金標記物：將以體積計的2：1份含有抗阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體的小鼠腹水與2份60mM醋酸緩沖液混合，室溫攪拌下逐滴加入辛酸，每1ml小鼠腹水加入33μl辛酸，混勻，室溫放置30分鐘，15000轉(zhuǎn)/分4℃離心20分鐘，得上清液，上清液用玻璃棉過濾，棄沉淀，過濾后的上清液用NaOH調(diào)pH值至7.2，加入硫酸銨，每1mlpH7.2上清液加入0.277g硫酸銨，快速使硫酸銨溶解，室溫攪拌30分鐘，15000轉(zhuǎn)/分4℃離心20分鐘，棄上清液，得沉淀物，沉淀物用原小鼠腹水1/2體積的0.01M磷酸鹽緩沖液溶液溶解，再用0.01M磷酸鹽緩沖液4℃透析48小時，成單克隆抗體膠體金標記物；B制備膠體金溶液：將蒸餾水煮沸4～6分鐘，每1000mL蒸餾水中加入質(zhì)量濃度1%的氯金酸溶液10ml和質(zhì)量濃度1%的檸檬酸三鈉溶液15～20ml，攪拌至溶液呈深紅色，冷至室溫，調(diào)pH值至抗阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體的等電點或弱堿性，成抗阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體預標記的膠體金溶液；C制備膠體金標記物：取步驟B制備的膠體金溶液100ml，加入步驟A制備的單克隆抗體膠體金標記物1～10μg/ml，攪拌反應2分鐘，加入質(zhì)量濃度10%的牛血清白蛋白，每1ml膠體金溶液中加入15μl質(zhì)量濃度10%的牛血清白蛋白，4℃下15000轉(zhuǎn)/分離心40分鐘，棄上清，得沉淀，沉淀用PBS稀釋至原膠體金溶液體積的30%～40%，成膠體金標記物，D、固化膠體金標記物：在載體玻璃纖維層上吸附包被膠體金標記物，干燥，將膠體金標記物固化在載體玻璃纖維層上，E、包被膜制備：取抗鼠免疫球蛋白抗體、阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，分別包被于硝酸纖維層上，自上而下形成包被的一條抗鼠免疫球蛋白抗體的質(zhì)控線、一條阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測線，其中，抗鼠免疫球蛋白抗體包被濃度為0.5～5mg/ml，阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物包被濃度為0.05～2mg/ml；F、切割：將包括吸附有膠體金標記物的載體玻璃纖維層、包被抗鼠免疫球蛋白抗體、阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的硝酸纖維層后的試紙條載體切割成長條，即成本發(fā)明試紙條。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明不僅能夠快速的檢測餐具中的阿維菌素殘信息，而且具有色譜檢測方法無法比擬的簡單、快速、便于篩查大量樣品等優(yōu)點，是一種在動植物食品或餐具中簡單、快速檢測阿維菌素藥物殘留的新型技術，適用于相關檢疫檢測部門、進出口檢疫檢測部門及實驗室中阿維菌素藥物殘留的快速檢測或大規(guī)模篩查，簡單、快速、準確，準確率達99%以上，表明本發(fā)明檢測卡具有很強的實際應用價值，經(jīng)濟和社會效益巨大。
附圖說明
圖1是本發(fā)明的整體結(jié)構(gòu)圖。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施方式對本專利的技術方案作進一步詳細地說明。
請參閱圖1，一種檢測餐具中阿維菌素的檢測卡，包括底板、吸水墊、置物層、引水層和硝酸纖維層，所述底板放置于最下邊，底板上的最左邊設有吸水墊，吸水墊的右邊設有置物層，置物層的右邊設有引水層，所述硝酸纖維層設置了底板上的最右端，引水層和硝酸纖維層的中點位置覆蓋有右部覆膜，吸水墊、置物層和硝酸纖維層的中點位置覆蓋有左部覆膜，硝酸纖維層上自上而下包被有一條抗鼠免疫球蛋白抗體的質(zhì)控線、一條阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測線，置物層上吸附包被有膠體金標記物。
底板的材質(zhì)為PVC板，所述吸水墊的材質(zhì)為引水玻璃纖維，所述置物層的材質(zhì)為載體玻璃纖維，所述引水層的材質(zhì)為吸水棉漿板。
檢測方法是：首先將待檢測的餐具浸泡在蒸餾水溶液中60min，水樣經(jīng)0.22μm的濾膜過濾，取5.0mL過濾水樣置于15mL帶塞的錐形離心管中，將含有70.0μL三氯甲烷的1.0mL丙酮通過微量進樣器快速注入離心試管中，然后渦旋10s，混合液從水相被萃取到氯仿溶液中，靜置10min，分散在水相中的萃取溶劑氯仿沉積到試管底部，用微量進樣器吸取萃取溶劑至10mL離心管中，再向過濾水樣中加入含有70μL三氯甲烷的1mL丙酮，渦旋10s，靜置10min，取下層萃取溶劑，合并萃取溶液，氮氣吹干，再用50μL甲醇溶解，渦旋30s，作為待檢測溶液，將檢測卡的吸水墊浸沒在上述溶液中5min，取出觀察。
大環(huán)內(nèi)脂類抗生素檢測線與所述的β-內(nèi)酰胺抗生素檢測線并排、所述的氧氟沙星類抗生素檢測線與所述的喹諾酮類抗生素檢測線并排、所述的磺胺類抗生素檢測線與所述的頭孢類抗生素檢測線并排。
制備方法是，A制備單克隆抗體膠體金標記物：將以體積計的2：1份含有抗阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體的小鼠腹水與2份60mM醋酸緩沖液混合，室溫攪拌下逐滴加入辛酸，每1ml小鼠腹水加入33μl辛酸，混勻，室溫放置30分鐘，15000轉(zhuǎn)/分4℃離心20分鐘，得上清液，上清液用玻璃棉過濾，棄沉淀，過濾后的上清液用NaOH調(diào)pH值至7.2，加入硫酸銨，每1mlpH7.2上清液加入0.277g硫酸銨，快速使硫酸銨溶解，室溫攪拌30分鐘，15000轉(zhuǎn)/分4℃離心20分鐘，棄上清液，得沉淀物，沉淀物用原小鼠腹水1/2體積的0.01M磷酸鹽緩沖液溶液溶解，再用0.01M磷酸鹽緩沖液4℃透析48小時，成單克隆抗體膠體金標記物；B制備膠體金溶液：將蒸餾水煮沸4～6分鐘，每1000mL蒸餾水中加入質(zhì)量濃度1%的氯金酸溶液10ml和質(zhì)量濃度1%的檸檬酸三鈉溶液15～20ml，攪拌至溶液呈深紅色，冷至室溫，調(diào)pH值至抗阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體的等電點或弱堿性，成抗阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體預標記的膠體金溶液；C制備膠體金標記物：取步驟B制備的膠體金溶液100ml，加入步驟A制備的單克隆抗體膠體金標記物1～10μg/ml，攪拌反應2分鐘，加入質(zhì)量濃度10%的牛血清白蛋白，每1ml膠體金溶液中加入15μl質(zhì)量濃度10%的牛血清白蛋白，4℃下15000轉(zhuǎn)/分離心40分鐘，棄上清，得沉淀，沉淀用PBS稀釋至原膠體金溶液體積的30%～40%，成膠體金標記物，D、固化膠體金標記物：在載體玻璃纖維層上吸附包被膠體金標記物，干燥，將膠體金標記物固化在載體玻璃纖維層上，E、包被膜制備：取抗鼠免疫球蛋白抗體、阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，分別包被于硝酸纖維層上，自上而下形成包被的一條抗鼠免疫球蛋白抗體的質(zhì)控線、一條阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測線，其中，抗鼠免疫球蛋白抗體包被濃度為0.5～5mg/ml，阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物包被濃度為0.05～2mg/ml；F、切割：將包括吸附有膠體金標記物的載體玻璃纖維層、包被抗鼠免疫球蛋白抗體、阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的硝酸纖維層后的試紙條載體切割成長條，即成本發(fā)明試紙條。
本發(fā)明的工作原理是：本發(fā)明不僅能夠快速的檢測餐具中的阿維菌素殘信息，而且具有色譜檢測方法無法比擬的簡單、快速、便于篩查大量樣品等優(yōu)點，是一種在動植物食品或土壤中簡單、快速檢測阿維菌素藥物殘留的新型技術，適用于相關檢疫檢測部門、進出口檢疫檢測部門及實驗室中阿維菌素藥物殘留的快速檢測或大規(guī)模篩查，簡單、快速、準確，經(jīng)對58批殺蟲藥物和38處田地土壤進行檢測，準確率達99%以上，表明本發(fā)明試紙條具有很強的實際應用價值，經(jīng)濟和社會效益巨大。
對于本領域技術人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。不應將權利要求中的任何附圖標記視為限制所涉及的權利要求。
此外，應當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領域技術人員應當將說明書作為一個整體，各實施例中的技術方案也可以經(jīng)適當組合，形成本領域技術人員可以理解的其他實施方式。