專利名稱：替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性固定相填料及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是涉及一種替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性固定相填料及其制備方法，屬于分析化學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
手性是人類賴以生存的自然界的本質(zhì)屬性之一，生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖、核酸等全具有手性。具有光學(xué)活性的手性物質(zhì)廣泛存在于動植物體內(nèi)，這種生物立體選擇性和旋光物質(zhì)的立體合成，是生物系統(tǒng)特有的本能。互為對映異構(gòu)體的兩個手性化合物，在生物活性、藥理動力學(xué)、藥物潛在的毒副作用等方面往往有較大的差別，目前市場上出售的西藥有半數(shù)左右含手性中心，這其中又有大約一半是以外消旋體的形式出售，為此美國、歐共體及日本、加拿大等國衛(wèi)生管理部門對新的外消旋藥提出了極為嚴(yán)格的要求，要求對其對映體的代謝和藥動力學(xué)有明確的說明，規(guī)定今后凡是發(fā)展具有不對稱中心的藥物，必須給出手性拆分結(jié)果。
用液相色譜解決立體化學(xué)問題，分離光學(xué)異構(gòu)體，由于具有快速、簡單、高效的優(yōu)點而受到廣泛重視。具有不對稱手性中心或手性識別能力的手性固定相(CSP)的研制，是手性色譜發(fā)展的前沿領(lǐng)域，也是手性色譜發(fā)展的關(guān)鍵和核心。CSP的研制始于七十年代后期，發(fā)展異常迅速。大量各種類型的CSP(如Pirkle型CSP，蛋白質(zhì)型CSP，環(huán)糊精型CSP，纖維素和多糖型CSP，手性冠醚及電荷轉(zhuǎn)移型CSP等)相繼研制成功，部分類型的CSP已作為商品出售。
自1994年Armstrong等首次將糖肽類抗生素作為手性選擇劑應(yīng)用于高效液相色譜手性固定相以來，由于這類抗生素的對映體選擇性高，具有較廣泛的手性識別能力，被稱之為新一代的手性選擇劑，成為目前最具發(fā)展?jié)摿Φ囊活愋滦褪中怨潭ㄏ唷?br> 替考拉寧是由Actinoplanes teichomyceticus菌產(chǎn)生的大環(huán)糖肽類抗生素，它被用來治療由格蘭氏陽性菌引起的嚴(yán)重感染?，F(xiàn)在已經(jīng)證實，替考拉寧中的五個主要的成分，他們彼此的區(qū)別就在于N-葡萄糖胺上連著的烷基鏈的長度不同[Ilaria D’Acquarica，F(xiàn)rancesco Gasparrini，Domenico Misiti，Claudio Villani，Angelo Carotti，Saverio Cellamare，Sandra Muck.Direct chromatographicresolution of carnitine and O-acylcarnitine enantiomers on a teicoplanin-bondedchiral stationary phase.Journal of Chromatography A，857(1999)145-155]。替考拉寧手性固定相的對氯苯基異氰酸酯衍生物作為手性選擇劑用于色譜分離，目前國內(nèi)外尚無報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性固定相填料及其制備方法。
它是將糖肽類大環(huán)抗生素化學(xué)鍵合到硅膠載體上，再與對氯苯基異氰酸酯進(jìn)行衍生化反應(yīng)制成的手性色譜固定相填料。
所述糖肽類大環(huán)抗生素為替考拉寧、以及替考拉寧的對氯苯基異氰酸酯衍生物。硅膠為色譜用球形硅膠或色譜用無定形硅膠。
化學(xué)鍵合所用的間隔臂是指3-氨丙基三乙氧基硅烷，1，6-二異氰酸酯正己烷或1，3-二異氰酸酯苯化學(xué)鍵合用的硅烷化試劑，方法的步驟如下1、載體硅膠的硅烷化硅膠載體用3～5mol L-1鹽酸回流4～6小時后水洗至中性，真空干燥，以無水甲苯做溶劑，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反應(yīng)8～10小時，冷卻至室溫過濾，依次用甲苯、甲醇洗滌，真空干燥得3-氨丙基硅膠；2、鍵合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅膠，加入無水甲苯，在冰浴及氮氣保護(hù)下滴加2～4ml的1，6-二異氰酸酯正己烷或1，3-二異氰酸酯苯，混合物加熱至65-75℃反應(yīng)2～3小時，冷卻至室溫后除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷或1，3-二異氰酸酯苯，加入100ml含1g替考拉寧無水吡啶溶液，氮氣保護(hù)下65～75℃攪拌反應(yīng)10～12小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓干燥后與對氯苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中110～120℃反應(yīng)2～3小時，過濾后，依次用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌干燥，得替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性色譜固定相填料。
所述糖肽類大環(huán)抗生素為替考拉寧、以及替考拉寧的對氯苯基異氰酸酯衍生物。硅膠為色譜用球形硅膠或色譜用無定形硅膠。
本發(fā)明通過化學(xué)鍵合的方法制備的替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性固定相，在反相體系中分離了谷氨酸，在極性流動相中分離了沙丁胺醇等藥物。
該手性固定相制備方法簡單，并可在正相、反相和極性有機(jī)相等色譜模式下使用，而色譜柱的手性識別能力不受影響。在反相體系中分離了谷氨酸，在極性流動相中分離了沙丁胺醇，能滿足日常藥物分析和生產(chǎn)質(zhì)量控制的需要。


圖1是谷氨酸(Glutamic acid)在替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性固定相上的拆分色譜圖；流動相乙醇/水＝60/40(v/v)；流速為0.5ml/min；柱溫25℃；檢測波長207nm。
圖2是沙丁胺醇(Salbutamol)β-受體阻滯劑在替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性固定相上的拆分色譜圖；流動相甲醇/冰醋酸/三乙胺＝100/0.1/0.1(v/v/v)；流速為1.0ml/min；柱溫25℃；檢測波長225nm。
具體實施例方式
替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性色譜固定相填料，可對多種結(jié)構(gòu)類型的手性藥物或者氨基酸進(jìn)行分離。同時，所制得的固定相具有很好的穩(wěn)定性能，適合用作高效液相色譜填料。
替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性色譜固定相填料是將糖肽類大環(huán)抗生素-替考拉寧化學(xué)鍵合到硅膠載體上，再與對氯苯基異氰酸酯進(jìn)行衍生化反應(yīng)制成。
下面通過實例對本發(fā)明進(jìn)行具體闡述，但并不局限于此。
本發(fā)明以糖肽類大環(huán)抗生素-替考拉寧為原料，通過間隔臂化學(xué)鍵合至用3-(氨丙基)-三乙氧基硅烷進(jìn)行硅烷化的硅膠載體上，再與苯異氰酸酯進(jìn)行衍生化反應(yīng)制成。
1、載體硅膠的硅烷化硅膠載體用3～5mol L-1鹽酸回流4～6小時后水洗至中性，真空干燥，以無水甲苯做溶劑，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反應(yīng)8～10小時，冷卻至室溫過濾，依次用甲苯、甲醇洗滌，真空干燥得3-氨丙基硅膠；2、鍵合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅膠，加入無水甲苯，在冰浴及氮氣保護(hù)下滴加2～4ml的1，6-二異氰酸酯正己烷或1，3-二異氰酸酯苯，混合物加熱至65-75℃反應(yīng)2～3小時，冷卻至室溫后除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷或1，3-二異氰酸酯苯，加入100ml含1g替考拉寧無水吡啶溶液，氮氣保護(hù)下65～75℃攪拌反應(yīng)10～12小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓干燥后與對氯苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中110～120℃反應(yīng)2～3小時，過濾后，依次用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌干燥，得替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性色譜固定相填料。
3、谷氨酸對映體在反相體系中的分離流動相組成為乙醇/水＝60/40(v/v)，手性分離因子α＝1.69，分離度Rs＝1.59，色譜圖見圖1。
4、沙丁胺醇對映體在極性有機(jī)相中的分離流動相組成為甲醇/冰醋酸/三乙胺(100/0.1/0.1，v/v/v)，手性分離因子α＝1.24，分離度Rs＝1.87，此條件下的分離色譜圖見圖2。
實施例11)載體硅膠的硅烷化稱取10克Kromasil球形硅膠載體(粒徑5μm，孔徑10nm)用3mol L-1鹽酸回流4小時后水洗至中性，真空干燥，以無水甲苯做溶劑，加入10ml的3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反應(yīng)8小時，冷卻至室溫過濾，用甲苯和甲醇洗滌，真空干燥得3-氨丙基硅膠；2)鍵合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅膠，加入無水甲苯中，在冰浴及氮氣保護(hù)下滴加2ml的1，6-二異氰酸酯正己烷，混合物加熱至65℃反應(yīng)2小時，冷卻至室溫后除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷，加入100ml含1g替考拉寧無水吡啶溶液，氮氣保護(hù)下65℃攪拌反應(yīng)10小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓干燥后與苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中110℃反應(yīng)2小時，過濾后，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌干燥，得替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性色譜固定相填料。
實施例21)載體硅膠的硅烷化稱取10克Lichrosorb無定形硅膠載體(粒徑5μm，孔徑10nm)用5mol L-1鹽酸回流6小時后水洗至中性，真空干燥，以無水甲苯做溶劑，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反應(yīng)10小時，冷卻至室溫過濾，用甲苯和甲醇洗滌，真空干燥得3-氨丙基硅膠；2)鍵合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅膠，加入無水甲苯中，在冰浴及氮氣保護(hù)下滴加3ml的1，6-二異氰酸酯正己烷，混合物加熱至70℃反應(yīng)3小時，冷卻至室溫后除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷，加入100ml含2g替考拉寧無水吡啶溶液，氮氣保護(hù)下70℃攪拌反應(yīng)10小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓干燥后與苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中110℃反應(yīng)3小時，過濾后，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌干燥，得替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性色譜固定相填料。
實施例31)載體硅膠的硅烷化稱取10克Lichrospher球形硅膠載體(粒徑5μm，孔徑10nm)用5mol L-1鹽酸回流4小時后水洗至中性，真空干燥，以無水甲苯做溶劑，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反應(yīng)8小時，冷卻至室溫過濾，用甲苯和甲醇洗滌，真空干燥得3-氨丙基硅膠；2)鍵合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅膠，加入無水甲苯中，在冰浴及氮氣保護(hù)下滴加4ml的1，6-二異氰酸酯正己烷，混合物加熱至75℃反應(yīng)3小時，冷卻至室溫后除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷，加入100ml含2g替考拉寧無水吡啶溶液，氮氣保護(hù)下75℃攪拌反應(yīng)12小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓干燥后與苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中120℃反應(yīng)3小時，過濾后，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌干燥，得替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性色譜固定相填料。
實施例41)載體硅膠的硅烷化稱取10克Kromasil球形硅膠載體(粒徑5μm，孔徑20nm)用5mol L-1鹽酸回流4小時后水洗至中性，真空干燥，以無水甲苯做溶劑，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反應(yīng)8小時，冷卻至室溫過濾，用甲苯和甲醇洗滌，真空干燥得3-氨丙基硅膠；2)鍵合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅膠，加入無水甲苯中，在冰浴及氮氣保護(hù)下滴加4ml的1，6-二異氰酸酯正己烷，混合物加熱至75℃反應(yīng)3小時，冷卻至室溫后除溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷，加入100ml含2g替考拉寧無水吡啶溶液，氮氣保護(hù)下 75℃攪拌反應(yīng)12小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓干燥后與苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中120℃反應(yīng)3小時，過濾后，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌干燥，得替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性色譜固定相填料。
實施例5鍵合手性固定相的合成稱取3克干燥的Kromasil-NH2球形硅膠載體(粒徑5μm，孔徑10nm)，加入無水甲苯中，在冰浴及氮氣保護(hù)下滴加4ml的1，6-二異氰酸酯正己烷，混合物加熱至75℃反應(yīng)3小時，冷卻至室溫后除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷，加入100ml含2g替考拉寧無水吡啶溶液，氮氣保護(hù)下75℃攪拌反應(yīng)12小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓干燥后與苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中120℃反應(yīng)3小時，過濾后，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌干燥，得替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性色譜固定相填料。
實施例61)載體硅膠的硅烷化稱取10克蘭化所球形硅膠載體(粒徑5μm，孔徑9nm)用5mol L-1鹽酸回流4小時后水洗至中性，真空干燥，以無水甲苯做溶劑，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反應(yīng)8小時，冷卻至室溫過濾，用甲苯和甲醇洗滌，真空干燥得3-氨丙基硅膠；2)鍵合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅膠，加入無水甲苯中，在冰浴及氮氣保護(hù)下滴加4ml的1，6-二異氰酸酯正己烷，混合物加熱至75℃反應(yīng)3小時，冷卻至室溫后除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷，加入100ml含2g替考拉寧無水吡啶溶液，氮氣保護(hù)下75℃攪拌反應(yīng)12小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓干燥后與苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中120℃反應(yīng)3小時，過濾后，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌干燥，得替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性色譜固定相填料。
權(quán)利要求
1.一種替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性色譜固定相填料，其特征在于它是將糖肽類大環(huán)抗生素化學(xué)鍵合到硅膠載體上，再與對氯苯基異氰酸酯進(jìn)行衍生化反應(yīng)制成的手性色譜固定相填料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性固定相填料，其特征在于所述糖肽類大環(huán)抗生素為替考拉寧、以及替考拉寧的對氯苯基異氰酸酯衍生物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性色譜固定相填料，其特征在于所述硅膠為色譜用球形硅膠或色譜用無定形硅膠。
4.一種替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性色譜固定相填料的制備方法，其特征在于所述化學(xué)鍵合所用的間隔臂是指3-氨丙基三乙氧基硅烷，1，6-二異氰酸酯正己烷或1，3-二異氰酸酯苯化學(xué)鍵合用的硅烷化試劑，方法的步驟如下1)載體硅膠的硅烷化硅膠載體用3～5mol L-1鹽酸回流4～6小時后水洗至中性，真空干燥，以無水甲苯做溶劑，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反應(yīng)8～10小時，冷卻至室溫過濾，依次用甲苯、甲醇洗滌，真空干燥得3-氨丙基硅膠；2)鍵合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅膠，加入無水甲苯，在冰浴及氮氣保護(hù)下滴加2～4ml的1，6-二異氰酸酯正己烷或1，3-二異氰酸酯苯，混合物加熱至65-75℃反應(yīng)2～3小時，冷卻至室溫后除去溶劑及1，6-二異氰酸酯正己烷或1，3-二異氰酸酯苯，加入100ml含1g替考拉寧無水吡啶溶液，氮氣保護(hù)下65～75℃攪拌反應(yīng)10～12小時，過濾，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗滌，減壓干燥后與對氯苯基異氰酸酯在無水吡啶溶液中110～120℃反應(yīng)2～3小時，過濾后，依次用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗滌干燥，得替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性色譜固定相填料。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性固定相填料的制備方法，其特征在于所述糖肽類大環(huán)抗生素為替考拉寧、以及替考拉寧的對氯苯基異氰酸酯衍生物。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性固定相填料的制備方法，其特征在于所述硅膠為色譜用球形硅膠或色譜用無定形硅膠。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性固定相填料及其制備方法。采用硅膠為載體，載體與3－氨丙基三乙氧基硅烷進(jìn)行硅烷化反應(yīng)；硅烷化后的載體與間隔臂進(jìn)行活化，活化后的硅膠載體與糖肽類大環(huán)抗生素替考拉寧鍵合，再與對氯苯基異氰酸酯進(jìn)行衍生化反應(yīng)完成。用這種方法合成的替考拉寧對氯苯基異氰酸酯手性色譜固定相填料裝柱后，具有很強(qiáng)的手性識別能力和限好的穩(wěn)定性能，可以在正相、反相及極性有機(jī)相色譜條件下使用，對多種不同類型的手性藥物實現(xiàn)手性分離。本發(fā)明在反相流動相中分離了谷氨酸，用極性流動相分離了沙丁胺醇等對映體。
文檔編號B01J20/29GK1994557SQ20061015501
公開日2007年7月11日 申請日期2006年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月4日
發(fā)明者沈報春, 徐秀珠 申請人:浙江大學(xué)