產灰樹花多糖的菌株及其應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品生物技術領域，具體涉及一種生產灰樹花多糖的菌株及其應用。
【背景技術】
[0002] 灰樹花(Grifola frondosa)是擔子菌亞門，層菌綱，無隔擔子菌亞綱，非裙菌目， 多孔菌屬中的一種大型真菌，又名貝葉多孔菌、栗子蘑、重菇等，日本稱之為舞茸。
[0003] 近20年來，國內外深入開展了作為生物反應調節(jié)劑的真菌多糖的研究，灰樹花多 糖顯著的療效也逐漸被人們所認識。經過大量的化學和藥理分析發(fā)現(xiàn)，灰樹花多糖具有明 顯的抗腫瘤，抗HIV病毒，改善免疫系統(tǒng)功能，調節(jié)血糖、血脂及膽固醇水平，降血壓等作用， 對防止癌細胞的生成和轉移、艾滋病、高血壓、肥胖癥、糖尿病以及免疫系統(tǒng)功能的紊亂都 有一定的療效，且無任何毒副作用。大野尚仁（1986)比較了液體培養(yǎng)的菌絲體多糖與子實 體多糖的抗腫瘤活性，發(fā)現(xiàn)二者十分相似。深層發(fā)酵得到的灰樹花菌絲體不但具有固體栽 培子實體相當?shù)臓I養(yǎng)及藥用效果，還可得到胞外多糖等子實體所不具備的營養(yǎng)保健成分。 最近，美國食品和藥物管理局(FDA)證實了灰樹花提取物治療晚期乳腺癌和前列腺癌的研 究結果，并允許灰樹花提取物作為癌癥的有效抑制劑，直接進行Π 期臨床試驗。因此，灰樹 花是一種極具開發(fā)價值的珍貴食、藥用真菌。
[0004] 灰樹花多糖主要以灰樹花子實體為原料提取。多年來灰樹花生產主要以人工固體 栽培為主，但固體栽培存在占地面積大、生產周期長、產量不穩(wěn)定、易受氣候、環(huán)境因素影響 等諸多缺點，使灰樹花多糖的開發(fā)生產受到極大限制；而利用液體深層發(fā)酵法可使灰樹花 多糖生產工業(yè)化，周期縮短，產量增加，質量更穩(wěn)定。因此灰樹花深層發(fā)酵可以替代子實體 作為產品深度開發(fā)的原料。當前，常規(guī)的產灰樹花多糖菌株存在多糖含量低，菌絲體產量低 的問題，尤其是適合大規(guī)模發(fā)酵生產的灰樹花菌株很難獲得。因此通過現(xiàn)有的技術手段對 自然界的灰樹花菌株資源篩選，以期獲得高產多糖的灰樹花菌株，為其應用奠定堅實基礎。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明目的之一在于提供一株生產灰樹花多糖的菌株，本發(fā)明所涉及的灰樹花菌 株采自京東地區(qū)板栗產區(qū)，是從野生天然菌株中分離篩選得到。可以在最適條件下高效的 合成灰樹花多糖。
[0006] 本發(fā)明目的之二在于提供一株生產灰樹花多糖的菌株的應用，即將篩選出的 Griflola frondosa GrT.01菌株用于灰樹花多糖的制備，從而高效的生產灰樹花多糖。
[0007] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術方案為： 產灰樹花多糖的菌株，保藏號為:CGMCC No. 10116,保藏日期為:2014年12月9日，所述 菌株分類命名為:灰樹花GrT· 01 (Griflola frondosa) 〇
[0008] 利用前面所述的菌種生產灰樹花多糖的方法，是將CGMCC No. 10116菌種制成種 子，接種于含有碳源、氮源、無機鹽和水的培養(yǎng)基(pH為4~8)中，在23~28°C條件下連續(xù)發(fā)酵6 ~14天。
[0009] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案在于，具體包括以下步驟:在灰樹花多糖生產階段， 生產發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源為葡萄糖和土豆汁或玉米粉，氮源為麩皮汁和酵母粉，無機鹽的磷 酸二氫鉀和硫酸鎂的配比為2:1，生長因子VBi在生產發(fā)酵培養(yǎng)基中的質量百分比濃度為8-10mg/L 〇
[0010] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案在于，具體包括以下步驟： 1) 種子液制備階段:利用如權利要求1或2所述的菌株制備種子液； 2) 菌種繁殖階段:將所述種子液接種于一次發(fā)酵培養(yǎng)基后，所述一次發(fā)酵培養(yǎng)基在pH 為4~8和溫度為23~28°C的條件下進行連續(xù)發(fā)酵； 3) 灰樹花多糖生產階段：向所述一次發(fā)酵培養(yǎng)基中添加玉米粉和麩皮汁，配制成生產 發(fā)酵培養(yǎng)基，在23~28°C條件下連續(xù)發(fā)酵6~14天。
[0011]前面所述的方法，優(yōu)選的方案在于，所述一次發(fā)酵培養(yǎng)基成分為:碳源、氮源、無機 鹽和生長因子。
[0012] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案在于，所述一次發(fā)酵培養(yǎng)基中碳源為葡萄糖或玉米 粉，所述氮源為麩皮汁和酵母粉。
[0013] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案在于，所述一次發(fā)酵培養(yǎng)基中葡萄糖和玉米粉的質 量百分比濃度各為1~6%。
[0014] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案在于，所述步驟3)中，生長因子在生產發(fā)酵培養(yǎng)基中 的濃度為8-10mg/L，無機鹽在生產發(fā)酵培養(yǎng)基中的質量百分比濃度為0.01-0.5%。
[0015] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案在于，所述一次發(fā)酵培養(yǎng)基和所述生產發(fā)酵培養(yǎng)基 pH均為4~8。
[0016] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案在于，所述一次發(fā)酵培養(yǎng)基和所述生產發(fā)酵培養(yǎng)基 pH均為6。
[0017] 本發(fā)明提供的一株產灰樹花多糖的菌株，所述菌株在中國微生物菌種保藏管理委 員會普通微生物中心的保藏號為:CGMCC No. 10116,保藏日期為:2014年12月9日，所述菌 株分類命名為：灰樹花GrT.01(Griflola frondosa)。優(yōu)選的是，所述菌株篩選自京東地區(qū) 板栗產區(qū)。
[0018] -種產灰樹花多糖的方法，其特征在于，應用如權利要求1或2所述的菌株生產灰 樹花多糖。優(yōu)選的是，所述的方法具體包括以下步驟:在灰樹花多糖生產階段，生產發(fā)酵培 養(yǎng)基的碳源為葡萄糖和玉米粉，葡萄糖和玉米粉在生產發(fā)酵培養(yǎng)基中的質量百分比濃度為 1~6%，氮源為麩皮汁和酵母粉。優(yōu)選的是，所述的方法具體包括以下步驟:種子液制備階段： 利用如權利要求1或2所述的菌株制備種子液;菌種繁殖階段:將所述種子液接種于一次發(fā) 酵培養(yǎng)基后，所述一次發(fā)酵培養(yǎng)基在pH為4~8和溫度為23~28°C的條件下進行連續(xù)發(fā)酵;灰 樹花多糖生產階段：向所述一次發(fā)酵培養(yǎng)基中添加玉米粉和麩皮汁，配制成生產發(fā)酵培養(yǎng) 基，生產發(fā)酵培養(yǎng)基中的葡萄糖和玉米粉的濃度各為1~6%，所述生產發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為4.5 ~8,在23~28°C條件下連續(xù)發(fā)酵6~14天。優(yōu)選的是，所述一次發(fā)酵培養(yǎng)基成分為:碳源、氮源、 無機鹽和生長因子。優(yōu)選的是，所述一次發(fā)酵培養(yǎng)基中碳源為葡萄糖或/玉米粉，所述氮源 為麩皮汁。優(yōu)選的是，所述一次發(fā)酵培養(yǎng)基中葡萄糖和玉米粉的質量百分比濃度各為1~6%， 麩皮汁的質量百分比濃度為1-6%。優(yōu)選的是，所述步驟3)中，葡萄糖在生產發(fā)酵培養(yǎng)基中的 質量百分比濃度為3%，玉米粉在生產發(fā)酵培養(yǎng)基中的質量百分比濃度為3%，麩皮汁在生產 發(fā)酵培養(yǎng)基中的質量百分比濃度為5%。優(yōu)選的是，所述一次發(fā)酵培養(yǎng)基和所述生產發(fā)酵培 養(yǎng)基pH均為5.5~6.5。優(yōu)選的是，所述一次發(fā)酵培養(yǎng)基和所述生產發(fā)酵培養(yǎng)基pH均為6。
[0019] 本發(fā)明公開了 一株產灰樹花多糖的菌株及其應用，所述菌株在中國微生物菌種保 藏管理委員會普通微生物中心的保藏號為:CGMCC No. 10116,保藏日期為：2014年12月9 日，所述菌株分類命名為:灰樹花GrT.01(Griflola frondosa)。本發(fā)明所述菌株GrT.01是 從野生環(huán)境天然子實體中分離篩選獲得，菌絲體和多糖含量高，可應用于高效生產灰樹花 多糖。本發(fā)明所述菌株GrT.01的發(fā)酵培養(yǎng)基配料簡單，價格低廉，是工業(yè)生產中中非常普遍 容易獲得的，發(fā)酵效果顯著，使灰樹花多糖的生產成本大大降低，可應用于大規(guī)模液體深層 發(fā)酵生產。
[0020] 本發(fā)明的有益效果本發(fā)明所述菌株GrT.01是從京東地區(qū)板栗產區(qū)十余株菌株中 篩選出來，在比較適宜的生長條件下，可應用于高效生產灰樹花多糖，本發(fā)明還對所述菌株 GrT.01高效表達灰樹花多糖的發(fā)酵條件進行了探索，獲得了所述菌株表達灰樹花多糖的發(fā) 酵培養(yǎng)中最優(yōu)碳源、最優(yōu)氮源、最優(yōu)無機鹽濃度、生長因子濃度等生活條件，本發(fā)明所述菌 株GrT.01的發(fā)酵培養(yǎng)基配料簡單，都是工業(yè)生產中非常普遍容易獲得的，發(fā)酵效果顯著，使 灰樹花多糖的生產成本大大降低，可應用于大規(guī)模生產。
【附圖說明】
[0021 ]本發(fā)明公開了 一株產灰樹花多糖的菌株及其應用，所述菌株在中國微生物菌種保 藏管理委員會普通微生物中心的保藏號為:CGMCC No. 10116,保藏日期為：2014年12月9 日，所述菌株分類命名為:灰樹花GrT.01(Griflola frondosa)。
[0022] 圖1是菌種系統(tǒng)發(fā)育樹。
[0023] 圖2為本發(fā)明所述菌株在不同碳源的發(fā)酵培養(yǎng)基中時的生物量比較圖。
[0024] 圖3為本發(fā)明所述菌株在不同氮源的發(fā)酵培養(yǎng)基中時的生物量比較圖。
[0025] 圖4為本發(fā)明所述菌株在不同濃度無機鹽的發(fā)酵培養(yǎng)基中時的生物量比較圖。
[0026] 圖5為本發(fā)明所述菌株在不同誘導劑誘導下發(fā)酵培養(yǎng)基中的生物量比較圖。
[0027] 圖6為本發(fā)明所述采集菌株不同多糖含量的對比測定圖。
[0028]圖7是灰樹花菌種的平板型態(tài)和發(fā)酵菌球形態(tài)圖。
【具體實施方式】
[0029] 下面結合附圖對本發(fā)明做進一步的詳細說明，以令本領域技術人員參照說明書文 字能夠據(jù)以實施。
[0030] 本發(fā)明篩選的GrT.01(Griflola frondosa)菌株在中國微生物菌種保藏管理委員 會普通微生物中心的保藏號為:CGMCC No. 10116,保藏日期為:201