灰樹花多糖的提取工藝及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及了灰樹花多糖的提取工藝及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 胃黏膜具有防止胃液自身消化與各種損傷因子的刺激，保護(hù)胃黏膜細(xì)胞的生理功 能的組織結(jié)構(gòu)，該屏障的完整性是胃黏膜得W保護(hù)的重要基礎(chǔ)。胃黏膜常因化學(xué)因素（喝 酒、濃茶、咖啡、吸煙及刺激性藥品如阿司匹林、消炎痛等）、物理因素(過冷、過燙、過于粗糖 的食物或暴飲暴食）、細(xì)菌或其毒素刺激的原因造成損傷。臨床多表現(xiàn)為胃腕部疼痛不適、 飽脹、曖氣、反酸、胃燒灼感、惡屯、、嘔吐等一系列癥狀。胃鏡檢查多出現(xiàn)不同程度的胃黏膜 改變，如粘膜水腫、糜爛、滲出、充血、或由淺表潰瘍，并有可能有出血或滲血等。胃黏膜損傷 在臨床上十分常見，是引發(fā)多數(shù)胃病的主要原因，目前尚無有效的防治手段。
[0003] 灰樹花Grifola f;rondosa(Dicks. )Gray隸屬真菌界，擔(dān)子菌口，傘菌綱，多孔菌 目，蓋孔菌科，又名貝葉多孔菌，是一種食、藥兼用葦菌。大量的藥理研究證明，灰樹花多糖 (GFP)具有顯著的抗腫瘤、降血糖、降血脂、抑制B型肝炎DNA復(fù)制、抗HIV病毒、抗氧化W及改 善免疫系統(tǒng)功能等功效，但暫未有其在修復(fù)胃粘膜創(chuàng)傷方面應(yīng)用的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供了灰樹花多糖的提取工藝及其 應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之一是：
[0006] -種灰樹花多糖的提取工藝，取灰樹花子實(shí)體干品，粉碎后過10目篩，加入8~12 倍量水微沸提取1~化;過濾，濾渣用5~10倍量的1~3 %的化0田容液進(jìn)行浸提1~化;過濾， 濾液濃縮至化ix含15%，離屯、，上清液先后累入Ξ個(gè)截留分子量依次減小的超濾分離組件， 上一個(gè)超濾分離組件的濾出液繼續(xù)累入下一個(gè)超濾分離組件，分別收集每個(gè)超濾分離組件 的截留液和最終的濾出液，得到分子量〉100kDa的第一截留液、30W)a<分子量<100kDa的第 二截留液、5kDa<分子量<30kDa的第Ξ截留液和分子量巧kDa的濾出液;上述第一截留液、第 二截留液、第Ξ截留液和濾出液分別按照1:2~4的體積比加入95%的乙醇進(jìn)行醇沉2~化， 過濾，濾渣復(fù)溶于水，離屯、，收集上清液，分別制得第一堿提物，為分子量〉lOOkDa、多糖含量 28~34%的灰樹花多糖，第二堿提物，為30kDa<分子量<100kDa、多糖含量23~27%的灰樹 花多糖，第Ξ堿提物，為化Da<分子量<301d)a、多糖含量20~26%的灰樹花多糖，第四堿提 物，為分子量巧kDa、多糖含量9~13%的灰樹花多糖。
[0007] -實(shí)施例中：所述超濾膜經(jīng)W下步驟清洗后再行超濾:去離子水清洗^化0H回流 清洗^去離子水清洗^HCl清洗^去離子水清洗至超濾膜干凈。
[000引一實(shí)施例中:所述超濾步驟中，通過透過液的折光率變化判斷超濾進(jìn)度。
[0009] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之二是：
[0010] 灰樹花多糖在制備修復(fù)人胃粘膜創(chuàng)傷的藥物上的用途。
[0011] -實(shí)施例中：所述灰樹花多糖為多糖含量9~34 %的灰樹花多糖，該多糖含量9~ 34%的灰樹花多糖的臨床上可接受的鹽、臨床上可接受的制劑;含有該多糖含量9~34%的 灰樹花多糖的復(fù)方藥物組合物，該復(fù)方藥物組合物的臨床上可接受的鹽、臨床上可接受的 制劑;所述多糖含量9~34%的灰樹花多糖例如為多糖含量28~34%的灰樹花多糖，多糖含 量23~27 %的灰樹花多糖，多糖含量20~26 %的灰樹花多糖，多糖含量9~13 %的灰樹花多 糖，最好是多糖含量31 %的灰樹花多糖，多糖含量25%的灰樹花多糖，多糖含量23%的灰樹 花多糖，多糖含量11 %的灰樹花多糖。
[0012] -實(shí)施例中：所述灰樹花多糖為根據(jù)技術(shù)方案之一的提取工藝得到的第一堿提物 和/或第二堿提物和/或第Ξ堿提物和/或第四堿提物，或該第一堿提物和/或第二堿提物 和/或第Ξ堿提物和/或第四堿提物的臨床上可接受的鹽、臨床上可接受的制劑，或含有該 第一堿提物和/或第二堿提物和/或第Ξ堿提物和/或第四堿提物的復(fù)方藥物組合物，或該 復(fù)方藥物組合物的臨床上可接受的鹽、臨床上可接受的制劑。
[0013] -實(shí)施例中：所述修復(fù)人胃粘膜創(chuàng)傷是指促進(jìn)人胃粘膜上皮細(xì)胞增殖和/或促進(jìn) 人胃粘膜上皮細(xì)胞向胃粘膜創(chuàng)傷區(qū)域遷移。
[0014] -實(shí)施例中：所述修復(fù)人胃粘膜創(chuàng)傷是指調(diào)節(jié)人胃粘膜上皮細(xì)胞中的攻擊因子和 防御因子的表達(dá)水平平衡。
[0015] -實(shí)施例中：所述促進(jìn)人胃粘膜上皮細(xì)胞增殖和/或促進(jìn)人胃粘膜上皮細(xì)胞向胃 粘膜創(chuàng)傷區(qū)域遷移是指上調(diào)人胃粘膜上皮細(xì)胞的表皮生長因子EGF表達(dá)，和/或上調(diào)人胃粘 膜上皮細(xì)胞的Ξ葉因子2TFF2表達(dá)，和/或下調(diào)人胃粘膜上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)移生長因子TGF-βι表 達(dá)。
[0016] -實(shí)施例中：其特征在于:還包括預(yù)防和/或治療慢性胃炎。
[0017] 本發(fā)明所指的臨床上可接受的鹽意指能保留藥物本身性質(zhì)和生物學(xué)有效性的鹽， 包括與無機(jī)酸或有機(jī)酸形成的酸加成鹽;所述無機(jī)酸例如鹽酸、氨漠酸、硝酸、憐酸、硫酸、 高氯酸等;所述有機(jī)酸例如乙酸、抗壞血酸、Ξ氣乙酸、丙酸、徑乙酸、（D)或化)乳酸、（D)或 (L)蘋果酸、草酸、富馬酸、馬來酸、甲橫酸、乙橫酸、苯甲酸、對甲苯橫酸、水楊酸、肉桂酸、扁 桃酸、酒石酸、巧樣酸、班巧酸、徑乙橫酸和丙二酸等。
[0018] 本發(fā)明所指的臨床上可接受的制劑，包括但不限于片劑、膠囊劑、口服液、顆粒劑、 丸劑、散劑、滴丸劑、注射劑等。
[0019] 本發(fā)明所設(shè)及的儀器、試劑等，除有特別說明外，均可從市面上購得;本發(fā)明所設(shè) 及的各實(shí)驗(yàn)方法，除有特別說明外，均為本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)。
[0020] 本技術(shù)方案與【背景技術(shù)】相比，它具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0021] 1.本發(fā)明采用的水提^堿提^超濾^醇沉的方式能夠有效避免灰樹花多糖在提 取過程中的水解損失，還能有效去除雜質(zhì)，提高提取效率。
[0022] 2.本發(fā)明的結(jié)果表明，灰樹花多糖可W調(diào)節(jié)人胃粘膜上皮細(xì)胞中重要的防御性細(xì) 胞因子TFF2、EGF、TGF-βι的表達(dá)水平，通過上調(diào)TFF2的mRNA和蛋白表達(dá)水平、EGF的蛋白表 達(dá)水平，下調(diào)TGF-βι的mRNA和蛋白表達(dá)水平等方面，促進(jìn)人胃粘膜上皮細(xì)胞增殖和向胃粘 膜創(chuàng)傷區(qū)域遷移，從而達(dá)到促進(jìn)人胃粘膜愈合修復(fù)的目的。本發(fā)明提供了灰樹花多糖在制 備修復(fù)胃粘膜創(chuàng)傷的藥物上的用途，為灰樹花開發(fā)利用及防治胃病難題提供了依據(jù)。
【附圖說明】
[0023] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0024] 圖1為實(shí)施例2中不同溶度GFP作用下GES-1增殖率的變化(y±s,n = 6)，與對照組比 較沖 <0.05，*沖 <0.01。
[0025] 圖2為實(shí)施例2中不同溶度GFP作用下GES-1細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量變化（100X)，A:對照 組24h;B:0.4mg/mL GPF作用24h;C:0.08mg/mL GPF作用24h;D:對照組4她;E:0.4mg/mL GPF 作用4她;F: 0.08mg/mL GPF作用4她;G:對照組72h; Η: 0.4mg/mL GPF作用72h; 1:0.08mg/mL GPF作用72h; J:對照組96h; Κ: 0.4mg/mL GPF作用96h; L 0.08mg/mL GPF作用96h。
[0026] 圖3為實(shí)施例3中不同溶度GFP作用下GES-1的愈合率變化（X±s，n = 6),與對照組比 較沖 <0.05，*沖 <0.01。
[0027] 圖4為實(shí)施例3中GPF作用下的胃粘膜創(chuàng)傷修復(fù)情況（100 X ) eA:對照組化;B: 2mg/ mL GPF作用0h;C:0.08mg/血 GPF作用0h;D:對照組化；E:2mg/血 GPF作用化;F:0.08mg/mL GPF作用6h; G:對照組12h; Η: 2