積雪草酸衍生物及其制備方法及其在制備降糖藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種化合物，尤其涉及一種積雪草酸衍生物 及其制備方法及其在制備降糖藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 積雪草酸，又名亞細(xì)亞酸，是從藥用傘形科植物積雪草（Centella asiatica(L.) Urban)中提取的烏蘇烷型五環(huán)三萜類化合物，其結(jié)構(gòu)式為：
[0003]
[0004] 由于積雪草酸具有廣泛的生物學(xué)活性，因此被廣泛應(yīng)用于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，對(duì) 抗腫瘤、改善認(rèn)知、抗糖尿病、抗炎、抑菌、促進(jìn)傷口愈合等方面具有很好的效果。
[0005] 除此以外，自1971年，人們又發(fā)現(xiàn)了積雪草酸具有治療皮膚創(chuàng)傷的作用，可見，積 雪草酸及其衍生物的藥理作用及結(jié)構(gòu)修飾研宄成為了關(guān)注的熱點(diǎn)是不言而喻的。
[0006] 目前來看，現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)于有關(guān)積雪草酸及其衍生物的研宄已經(jīng)取得了相當(dāng)大的 突破，例如：W096/17819 Al公開了一種積雪草酸及其衍生物，對(duì)于皮膚損傷方面的作用具 有一定的治療效果，為現(xiàn)代的淡痕、祛疤等美容領(lǐng)域提供了有一種新方法；CN101991578A 公開了一種積雪草酸及其對(duì)于α-葡萄糖苷酶的抑制作用，雖然具有一定的治療效果，但 是制備工序繁瑣，而且制備過程中的殘留有毒試劑毒副作用大，在實(shí)際治療方面具有一定 的限制，并不利于大規(guī)模的生產(chǎn)和推廣。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)中積雪草酸及其衍生物在實(shí)際應(yīng)用及生產(chǎn)中的不足，實(shí)現(xiàn)積雪 草酸及其衍生物在制備方法及其在制備降糖藥物中的應(yīng)用的進(jìn)一步突破，本發(fā)明提供了一 種積雪草酸衍生物及其制備方法及其在制備降糖藥物中的應(yīng)用，其中，制備方法采用的是 微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)制備，適合大規(guī)模生產(chǎn)，得到的積雪草酸衍生物在制備降糖藥物的應(yīng)用中， 具有突出效果。
[0008] 本發(fā)明的目的是提供一種積雪草酸衍生物。
[0009] 本發(fā)明另外一個(gè)目的是一種積雪草酸衍生物的制備方法。
[0010] 本發(fā)明的目的還包括一種積雪草酸衍生物在制備降糖藥物中的應(yīng)用，另一方面為 一種積雪草酸衍生物的在藥學(xué)上可接受的鹽或酯作為降糖藥物組分，在降糖方面的應(yīng)用。 [0011] 本發(fā)明的第一方面的主題是一種符合通式（I)的積雪草酸衍生物，包括其化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，或其任何光學(xué)異構(gòu)體，或任何互變異構(gòu)體：
[0012]
[0013] 其中，Rp R2、R3、R4、R5、R6、R 7、R8、R9、Rltl可獨(dú)立地相同或不同地為氫，羥基，羧基、 Cp6燒羥基、C K燒幾基、C K烷氧基，未取代或由C K烷基、鹵素、羥基或C K烷氧基一取代或 多取代的c3_6環(huán)烷基，或未取代或由鹵素一取代或多取代的C H烷基、C 2_6鏈烯基或C 2_6鏈 炔基。
[0014] 本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例，其中，R6為甲羥基，！^為-COOM，Rltl為羥基，為式（II) 化合物：
[0015]
[0016] 其中，
[0017] Rp R2、R3、R4、R5、R7、R 8可獨(dú)立地相同或不同地為氫，羥基，羧基、C η烷羥基、C η烷 幾基、CV6烷氧基，未取代或由C i_6烷基、鹵素、羥基或C i_6烷氧基一取代或多取代的C 3_6環(huán) 烷基，或未取代或由鹵素一取代或多取代的Cp6烷基、C 2_6鏈烯基或C 2_6鏈炔基；
[0018] M為氫或堿金屬。
[0019] 一種更優(yōu)選積雪草酸衍生物，其特征在于，具有化學(xué)通式（1)所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)：
[0020]
[0021] 其中，R1= α羥基，R 2 =羰基為化合物1 ;或R i =羰基，R 2= β羥基為化合物2 ;
[0022] 具體地，化合物1的化學(xué)結(jié)構(gòu)為：2 α，15 α，23-三羥基-3氧代-12-烯-28-烏蘇 酸；化合物2的化學(xué)結(jié)構(gòu)為：2_氧代-3 β，15 α，23-三羥基-12-烯-28-烏蘇酸；其結(jié)構(gòu)分 別為：
[0023]
[0024] -種如第一方面所述具有R1= α羥基，R2 =羰基的積雪草酸衍生物的化合物1 的制備方法，其特征在于，通過微生物酶對(duì)積雪草酸進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾得到的。
[0025] -種如第一方面所述具有R1 =羰基，R2= β羥基的積雪草酸衍生物的化合物2 的制備方法，其特征在于，通過微生物酶對(duì)積雪草酸進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾得到的。
[0026] 其中，所述對(duì)積雪草酸進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾的微生物為黑曲霉。
[0027] 本發(fā)明的第二方面的主題是一種如第一方面所述積雪草酸衍生物的制備方法，其 特征在于，通過黑曲霉的微生物酶對(duì)積雪草酸進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，具體為包括：
[0028] 步驟1 :積雪草酸的微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)
[0029] 將積雪草酸溶解于有機(jī)溶劑中，配成濃度為10_30g/l的底物溶液，加入到經(jīng)培養(yǎng) 的微生物菌液中進(jìn)行微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)；
[0030] 步驟2 :產(chǎn)物的提取分離純化
[0031] 用有機(jī)萃取劑對(duì)步驟1得到的產(chǎn)物進(jìn)行過濾、萃取，然后濃縮、分離純化得到所述 化合物1和化合物2。
[0032] 步驟3:產(chǎn)物的鑒定
[0033] 對(duì)所得到的化合物1和化合物2進(jìn)行鑒定。
[0034] 根據(jù)本發(fā)明的第二方面的主題的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，其中，所述制備方法采用積雪 草酸的微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)，通過對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行提取分離及結(jié)構(gòu)鑒定。
[0035] 根據(jù)本發(fā)明的第二方面的主題的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，其中，所述步驟1中，所述微生 物菌液是指通過將黑曲霉菌種接種到培養(yǎng)基中，并置于恒溫振蕩器中，在20-30°C，優(yōu)選在 25-28°C，150-250rpm/min條件下培養(yǎng)至少3天，優(yōu)選為3天得到的。
[0036] 進(jìn)一步地，所述黑曲霉菌種優(yōu)選為Aspergillus niger CGMCC 3. 739。
[0037] 進(jìn)一步地，所述培養(yǎng)條件優(yōu)選為27°C，180rpm/min，培養(yǎng)3天。
[0038] 進(jìn)一步地，所述接種量為所述培養(yǎng)基總重量的2%。
[0039] 所述底物溶液的濃度為10_30g/L。
[0040] 所述有機(jī)溶劑優(yōu)選為乙醇。
[0041] 所述微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)優(yōu)選為在20-30 °C，優(yōu)選為25-28 °C，150-250rpm/min的轉(zhuǎn)化 反應(yīng)條件下培養(yǎng)7-10天。
[0042] 根據(jù)本發(fā)明的第二方面的主題的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，其中，所述步驟2中，所述過 濾、萃取操作具體地，優(yōu)選為包括過濾菌絲體，濾液用等體積的乙酸乙酯萃取至少三次，菌 絲體干燥后粉碎，用乙酸乙酯超聲提取至少三次，每次至少30min，合并乙酸乙酯萃取液與 提取液。
[0043] 所述萃取采用的是有機(jī)溶劑，優(yōu)選為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知或認(rèn)為可行的有機(jī)溶 劑，更優(yōu)選為乙酸乙酯。
[0044] 所述濃縮優(yōu)選為減壓濃縮。
[0045] 所述分離純化是指通過硅膠柱色譜、凝膠柱色譜和半制備型高效液相色譜進(jìn)行操 作。
[0046] 進(jìn)一步地，關(guān)于半制備型高效液相色譜是指通過使用半制備型高效液相色譜儀， 具體地，流動(dòng)相：甲醇/水/甲酸（60:40:0. 05, V/V/V)，流速3ml/min，檢測波長：210nm。
[0047] 根據(jù)本發(fā)明的第二方面的主題的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，其中，所述步驟3中，所述鑒定 優(yōu)選為是指通過HR-ESI-MS給出分子量，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR推斷分子式，并依據(jù)HSQC、 HMBC譜可以對(duì)化合物的碳?xì)渥鬟M(jìn)一步的歸屬。
[0048] 本發(fā)明的第三方面的主題是一種如第一方面或第二方面任意一方面所述的積雪 草酸衍生物在制備降糖藥物中的應(yīng)用，尤其是用于制備抑制α-葡萄糖苷酶的藥物的應(yīng) 用；還包括所述的積雪草酸衍生物的在藥學(xué)上可接受的鹽或酯作為降糖藥物組分，在降糖 方面的應(yīng)用。
[0049] 具體地，針對(duì)所述的積雪草酸衍生物對(duì)于α -葡萄糖苷酶的抑制活性進(jìn)行篩選， 包括：
[0050] 步驟1 :在孔板的每孔中加入緩沖液，并加入α -葡萄糖苷酶和所述積雪草酸衍生 物，在恒溫條件下孵育；
[0051] 步驟2 :然后加入葡萄糖苷，恒溫條件下反應(yīng)；
[0052] 步驟3 :最后加入鹽溶液，并于特定波長下測吸光度A值，計(jì)算IC5Q。
[0053] 根據(jù)本發(fā)明的第三方面的主題的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，其中，所述步驟1中，所述緩沖 液優(yōu)選為pH為6-8,更優(yōu)選為pH為6. 8的磷酸鉀緩沖液。
[0054] 所述加入積雪草酸衍生物是作為抑制劑。
[0055] 所述恒溫條件下孵育優(yōu)選為是指在37°C下恒溫孵育15min。
[0