剪接的形式。Fc受體在Ravetch和 Kinet, Annu. Rev. Tmmunol 9:457-92, 1991 ;Capel 等人，Immunomethods 4:25-34, 1994 ;和 de Haas等人，J. Lab. Clin. Med. 126:330-41，1995中回顧，將這些文獻(xiàn)各自完整引入本文 作為參考。
[0075] 僅作為一個(gè)非限制性實(shí)例，可以根據(jù)本教導(dǎo)產(chǎn)生的抗體是抗ABeta抗體?？?ABeta抗體是阿爾茨海默氏病的治療中尤其有希望的潛在治療途徑。阿爾茨海默氏病 (AD)是導(dǎo)致老年性癡呆的進(jìn)行性疾?。ㄒ话阋姡篠elkoe，TINS 16:403, 1993 ;Hardy等 人，WO 92/13069 ;Selkoe，J. Neuropathol. Exp. Neurol. 53:438, 1994 ;Duff 等人，Nature 373:476, 1995 ;Games等人，Nature 373:523, 1995,各自引入本文作為參考）。一般地說，該 疾病落入兩個(gè)類別：遲發(fā)型，其發(fā)生在老年（65歲以上），和早發(fā)型，其發(fā)生在老年期之前， SP，35到60歲之間。在兩種類型的疾病中，病理是相同的但是在較早年齡開始的病例中，異 常傾向于更嚴(yán)重和廣泛。該疾病的特征是腦中至少兩種類型的病變：神經(jīng)原纖維纏結(jié)和衰 老斑。神經(jīng)原纖維纏結(jié)是與tau蛋白相關(guān)的微管的細(xì)胞內(nèi)沉積，由成對(duì)的相互纏繞的兩條 絲組成。衰老斑（即，淀粉狀蛋白斑）是直徑長(zhǎng)達(dá)150 μπι的紊亂的神經(jīng)氈區(qū)域，在中心具 有細(xì)胞外淀粉狀蛋白沉積物，通過腦組織切片的顯微鏡分析可以看到所述區(qū)域。腦中淀粉 狀蛋白斑的積累也與唐氏綜合征和其他認(rèn)知病癥有關(guān)。
[0076] 所述斑的主要成分是稱作ABeta或β -淀粉狀蛋白肽的肽。ABeta肽是稱作淀 粉狀蛋白前體蛋白（APP)的較大的跨膜糖蛋白的39-43個(gè)氨基酸的4-kDa內(nèi)部片段。作 為不同的分泌酶對(duì)APP的蛋白酶解加工的結(jié)果，ABeta主要以長(zhǎng)40個(gè)氨基酸的短形式和長(zhǎng) 42-43個(gè)氨基酸的長(zhǎng)形式被發(fā)現(xiàn)。APP的疏水跨膜結(jié)構(gòu)域的部分被發(fā)現(xiàn)于ABeta的羧基末 端，并且可以是ABeta聚集成斑塊的原因，尤其對(duì)于長(zhǎng)形式的情況。腦中淀粉狀蛋白斑的積 累最終導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞死亡。與該類型的神經(jīng)衰退相關(guān)的身體癥狀是阿爾茨海默氏病的特 征。
[0077] APP蛋白內(nèi)的一些突變與阿爾茨海默氏病的存在相關(guān)（見例如，Goate等 人，Nature 349:704,1991 (繳氨酸 717 突變成異亮氨酸）；Chartier Harlan 等人 Nature 353:844, 1991 (纈氨酸 717 突變成甘氨酸）；Murrell 等人，Science 254:97, 1991 (纈氨 酸717突變成苯丙氨酸）；Mullan等人，Nature Genet. 1:345, 1992(雙突變，將賴氨酸 595-甲硫氨酸596改變成天冬酰胺595 -亮氨酸596)，將這些文獻(xiàn)各自完整引入本文作 為參考）。認(rèn)為此類突變通過APP向ABeta的增加或改變的加工，尤其APP向增加量的長(zhǎng) 形式ABeta(即，ABetal-42和ABetal43)的加工而引起阿爾茨海默氏病。認(rèn)為其他基因如 衰老蛋白基因 PSl和PS2中的突變間接影響APP的加工而產(chǎn)生增加量的長(zhǎng)形式ABeta(見 Hardy，TINS 20:154,1997,將其完整引入本文作為參考）。
[0078] 已經(jīng)成功地用小鼠模型確定淀粉狀蛋白斑在阿爾茨海默氏病中的重要性（Games 等人，同上；Johnson-Wood 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA94:1550, 1997，將其完整引入 本文作為參考）。具體地，當(dāng)用長(zhǎng)形式ABeta注射PDAPP轉(zhuǎn)基因小鼠（其表達(dá)突變形式的 人APP并且在幼年發(fā)生阿爾茨海默氏病）時(shí)，它們顯示出阿爾茨海默氏病進(jìn)展的減慢和抗 ABeta肽的抗體效價(jià)的升高（Schenk等人，Nature 400, 173, 1999,將其完整引入本文作為 參考）。上面討論的觀察表明ABeta，尤其其長(zhǎng)形式是阿爾茨海默氏病的成因。
[0079] ABeta肽可以存在于溶液中并且可以在CNS (例如，CSF)和血漿中檢測(cè)到。在一些 條件下，可溶性ABeta被轉(zhuǎn)化為在AD患者的神經(jīng)突斑塊和腦血管中發(fā)現(xiàn)的纖絲狀毒性β 折疊形式。已經(jīng)研宄了涉及用抗ABeta的單克隆抗體進(jìn)行免疫的治療。已經(jīng)在AD的小鼠 模型中測(cè)試了主動(dòng)和被動(dòng)免疫。主動(dòng)免疫導(dǎo)致腦中斑塊負(fù)荷的一定減少，但是僅僅通過經(jīng) 鼻施用進(jìn)行了主動(dòng)免疫。也已經(jīng)研宄了 PDAPP轉(zhuǎn)基因小鼠的被動(dòng)免疫（Bard，等人，Nat. Med. 6:916-19, 2000,將其完整引入本文作為參考）。發(fā)現(xiàn)識(shí)別ABeta的氨基末端和中心結(jié) 構(gòu)域的抗體刺激ABeta沉積物的吞噬作用，而抗羧基末端結(jié)構(gòu)域附近結(jié)構(gòu)域的抗體不刺激 ABeta沉積物的吞噬作用。
[0080] 被動(dòng)或主動(dòng)免疫后ABeta的清除機(jī)理正在持續(xù)的研宄中。已經(jīng)為有效清除提出了 兩種機(jī)理，即中樞降解和外周降解。中樞降解機(jī)理依賴于能夠穿過血腦屏障、結(jié)合斑塊并誘 導(dǎo)現(xiàn)有斑塊清除的抗體。已經(jīng)表明通過Fc-受體介導(dǎo)的吞噬作用促進(jìn)清除（Bard，等人， 同上）。ABeta清除的外周降解機(jī)理依賴于施用抗體時(shí)腦、CSF和血衆(zhòng)之間ABeta的動(dòng)態(tài)平 衡的破壞，導(dǎo)致ABeta從一個(gè)隔室轉(zhuǎn)移到另一隔室。中樞來源的ABeta被轉(zhuǎn)運(yùn)到CSF和血 漿，在這里它被降解。最近的研宄已經(jīng)斷定可溶性和未結(jié)合的ABeta涉及與AD相關(guān)的記憶 缺陷，甚至腦中淀粉狀蛋白沉積沒有減少。需要進(jìn)一步的研宄來確定用于ABeta清除的這 些途徑的作用和/或相互影響（Dodel，等人，The Lancet Vol. 2:215, 2003,將其完整引入 本文作為參考）。
[0081] 抗ABeta抗體是AD治療的潛在有希望的途徑，因?yàn)樗鼈兛梢越Y(jié)合并清除ABeta或 包含淀粉狀蛋白斑的其他組分。根據(jù)本公開的教導(dǎo)產(chǎn)生的抗ABeta可以用于更好地治療阿 爾茨海默氏病或其他相關(guān)疾病，例如，通過更有效地結(jié)合并清除淀粉狀蛋白斑的組分，通過 以更少或更低的嚴(yán)重副作用清除淀粉狀蛋白斑，或者通過防止淀粉狀蛋白斑的形成或積累 實(shí)現(xiàn)所述治療。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本教導(dǎo)產(chǎn)生的抗ABeta抗體是單克隆抗體。
[0082] 在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本教導(dǎo)產(chǎn)生的抗ABeta抗體特異結(jié)合ABeta的聚集形式 而不結(jié)合可溶形式。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本教導(dǎo)產(chǎn)生的抗ABeta抗體在它們不結(jié)合聚 集形式的條件下特異結(jié)合抗ABeta的可溶形式。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本教導(dǎo)產(chǎn)生的抗 ABeta抗體結(jié)合聚集和可溶形式兩者。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本教導(dǎo)產(chǎn)生的抗ABeta抗體 結(jié)合斑塊中的ABeta。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本教導(dǎo)產(chǎn)生的抗ABeta抗體穿過血腦屏障。 在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本教導(dǎo)產(chǎn)生的抗ABeta抗體減輕受試者中的淀粉狀蛋白負(fù)擔(dān)。在 一些實(shí)施方案中，根據(jù)本教導(dǎo)產(chǎn)生的抗ABeta抗體減輕受試者中的神經(jīng)突營(yíng)養(yǎng)不良。在一 些實(shí)施方案中，抗ABeta抗體可以保持突觸結(jié)構(gòu)體系（例如，突觸泡蛋白）。
[0083] 根據(jù)一些實(shí)施方案，根據(jù)本教導(dǎo)產(chǎn)生的抗ABeta抗體結(jié)合ABeta的殘基13-28內(nèi) 的表位（天然ABeta的第一個(gè)N-末端殘基標(biāo)為1)。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本教導(dǎo)產(chǎn)生 的抗ABeta抗體結(jié)合ABeta的殘基19-22內(nèi)的表位。在一些實(shí)施方案中，使用對(duì)不同的抗 ABeta表位具有結(jié)合特異性的多種單克隆抗體。例如，在一些實(shí)施方案中，對(duì)ABeta的殘基 19-22內(nèi)的表位特異的抗體與對(duì)ABeta的殘基19-22外的表位特異的抗體共同施用。此類 抗體可以順序或同時(shí)施用。也可以施用抗除了 ABeta之外的淀粉狀蛋白組分的抗體（例如， 施用或共同施用）。
[0084] 在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本教導(dǎo)產(chǎn)生的抗ABeta抗體比其他方式產(chǎn)生的抗ABeta 抗體更強(qiáng)烈或者以更高特異性結(jié)合到ABeta表位。通過已知的技術(shù)，例如，通過形成噬菌體 展示文庫可以確定抗體的表位特異性，在噬菌體展示文庫中，不同的成員展示ABeta的不 同的子序列。然后選擇噬菌體展示文庫中特異結(jié)合所測(cè)試抗體的成員。分離序列家族。典 型地，此類家族含有共同的核心序列，和不同成員中不同長(zhǎng)度的側(cè)翼序列。顯示出對(duì)抗體特 異結(jié)合的最短的核心序列通常確定了抗體結(jié)合的表位。備選或額外地，可以在競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定 法中用已經(jīng)確定了表位特異性的抗體測(cè)試抗體的表位特異性。例如，認(rèn)為與15C11抗體競(jìng) 爭(zhēng)結(jié)合ABeta的抗體與15C11結(jié)合相同或相似的表位，即在殘基ABeta 19-22內(nèi)。在一些 實(shí)施方案中，篩選抗體的表位特異性是治療功效的有用的預(yù)測(cè)子。例如，根據(jù)本發(fā)明的方法 學(xué)，被確定結(jié)合ABeta的殘基13-28內(nèi)的表位（例如，結(jié)合到A β 19-22)的抗體可能在預(yù)防 和治療阿爾茨海默氏病中是有效的。
[0085] 特異結(jié)合ABeta的優(yōu)選區(qū)段而不結(jié)合ABeta的其他區(qū)域的抗體相對(duì)于結(jié)合其他區(qū) 域的單克隆抗體或相對(duì)于結(jié)合完整ABeta的多克隆血清有許多優(yōu)點(diǎn)。其中，對(duì)于相等的質(zhì) 量劑量，特異結(jié)合優(yōu)選區(qū)段的抗體的劑量含有更高摩爾劑量的有效清除淀粉狀蛋白斑的抗 體。而且，特異結(jié)合優(yōu)選區(qū)段的抗體可以誘導(dǎo)針對(duì)淀粉狀蛋白沉積物的清除應(yīng)答而不誘導(dǎo) 針對(duì)完整APP多肽的清除應(yīng)答，從而降低潛在的副作用。
[0086] 在一些實(shí)施方案中，上述單克隆抗體、嵌合抗體、單鏈抗體或人源化抗體可以含有 不天然存在于自然界中任何物種中任何抗體內(nèi)的氨基酸殘基。此類外源殘基可以用于例如 賦予單克隆抗體、嵌合抗體、單鏈抗體或人源化抗體新的或改良的特異性、親和力或效應(yīng)子 功能。
[0087]酶
[0088] 已經(jīng)表明有效作為藥學(xué)和/或商業(yè)活性劑的另一類糖蛋白包括酶。酶可以是糖蛋 白，其糖基化模式影響酶活性。從而，根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生具有希望的糖基化模式的酶也是尤其 重要的。
[0089] 僅僅作為非限制性實(shí)例，葡糖腦苷脂酶（GCR)的缺乏導(dǎo)致稱作戈謝病的狀況，其 由某些細(xì)胞的溶酶體中葡糖腦苷脂酶的積累引起?；加懈曛x病的受試者顯示出一系列癥 狀，包括脾腫大、肝腫大、骨骼病癥、血小板減少癥和貧血。Friedman和Hayes表明在一級(jí)氨 基酸序列中含有單個(gè)替代的重組CR(rGCR)與天然存在的GCR相比顯示出改變的糖基化模 式，特別是巖藻糖和N-乙酰葡糖胺殘基的增加（見美國(guó)專利號(hào)5, 549, 892)。
[0090] Friedman和Hayes還表明該rGCR與天然存在的rGCR相比顯示出改善的藥物代謝 動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。例如，比天然存在的GCR高約兩倍的rGCR靶向肝臟肝巨噬細(xì)胞。盡管這兩種 蛋白質(zhì)的一級(jí)氨基酸序列僅在一個(gè)殘基處不同，但是Friedman和Hayes假定rGCR的改變 的糖基化模式也影響向肝巨噬細(xì)胞的靶向。
[0091] 本領(lǐng)域技術(shù)人員將知道由于糖基化模式的改變而顯示出改變的酶學(xué)、藥物代謝動(dòng) 力學(xué)和/或藥物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的酶的其他已知的實(shí)例。
[0092] 生長(zhǎng)因子和其他信號(hào)分子
[0093] 已經(jīng)表明有效作為藥學(xué)和/或商業(yè)活性劑的另一類糖蛋白包括生長(zhǎng)因子和其他 信號(hào)分子。從而，根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生具有希望的糖基化模式的受體也是尤其重要的。生長(zhǎng)因 子通常是糖蛋白，其被細(xì)胞分泌并結(jié)合和活化其他細(xì)胞上的受體，啟動(dòng)受體細(xì)胞中的代謝 或發(fā)育改變。
[0094] 哺乳動(dòng)物生長(zhǎng)因子和其他信號(hào)分子的非限制性實(shí)例包括細(xì)胞因子；表皮生長(zhǎng)因 子（EGF);血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF);成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGFs)如FGF-5 ;胰島素樣 生長(zhǎng)因子-I和-IUIGF-I和IGF-II) ;des(l-3)-IGF-I (腦IGF-I)，胰島素樣生長(zhǎng)因子 結(jié)合蛋白；CD蛋白，如CD-3, CD-4, CD-8,和CD-19 ;紅細(xì)胞生成素；骨誘導(dǎo)因子；免疫毒素； 骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMPs);干擾素，如α、β和γ干擾素；集落刺激因子（CSFs)，例如， M-CSF，GM-CSF和G-CSF ;多數(shù)白介素；腫瘤壞死因子（TNF) β ;促卵泡激素；降鈣素；黃體生 成素；抗凝血因子，如蛋白C ;心房鈉尿肽；肺表面活性物質(zhì)；纖溶酶原激活物，如尿激酶或 人尿或組織型纖溶酶原激活物（t-PA);造血生長(zhǎng)因子；和腦啡肽酶。本領(lǐng)域技術(shù)人員將知 道可以根據(jù)本發(fā)明表達(dá)的其他生長(zhǎng)因子或信號(hào)分子。
[0095] 生長(zhǎng)因子或其他信號(hào)分子的糖基化模式的特定改變已經(jīng)表明對(duì)它們的治療性質(zhì) 具有顯著影響。僅作為非限制性實(shí)例，治療患有慢性貧血的患者的一種常見方法是為他 們提供經(jīng)常注射重組人紅細(xì)胞生成素（rHuEPO)以便加強(qiáng)他們的紅細(xì)胞產(chǎn)生。已經(jīng)開發(fā) 了 rHuEPO的類似物促紅血球生成素（darb印oetin) a (Aranesp?),其在身體中比正常 rHuEPO有更長(zhǎng)的持續(xù)時(shí)間。促紅血球生成素 α和rHuEPO之間的主要差別是存在兩個(gè)額外 的含有唾液酸的N-連接的寡糖鏈。使用體外糖工程已經(jīng)完成了促紅血球生成素 α的產(chǎn)生 (見 Elliott 等人，Nature Biotechnology 21 (4) :414-21, 2003)。Elliott 等人使用體外 誘變向rHuEPO多肽主鏈中導(dǎo)入額外的糖基化位點(diǎn)，導(dǎo)致促紅血球生成素 α類似物的表達(dá)。 該額外的寡糖鏈位于EPO受體結(jié)合位點(diǎn)遠(yuǎn)端并且表面上不干擾受體結(jié)合。然而，促紅血球 生成素 α的半壽期比rHuEPO高達(dá)3倍，導(dǎo)致更有效的治療劑。
[0096] 該實(shí)例闡明生長(zhǎng)因子或其他信號(hào)分子的糖基化模式的改變可以對(duì)治療性糖蛋白 的體內(nèi)穩(wěn)定性和/或活性具有顯著影響。從而，根據(jù)本發(fā)明的目的生長(zhǎng)因子或其他信號(hào)分 子的表達(dá)可以導(dǎo)致所表達(dá)的生長(zhǎng)因子或信號(hào)分子具有改進(jìn)的糖基化模式和改進(jìn)的治療性 質(zhì)。
[0097] 受體
[0098] 已經(jīng)表明有效作為藥學(xué)和/或商業(yè)活性劑的另一類糖蛋白是受體。從而，根據(jù)本 發(fā)明產(chǎn)生具有希望的糖基化模式的受體也是尤其重要的。受體通常是跨膜糖蛋白，其通過 識(shí)別細(xì)胞外信號(hào)配體而發(fā)揮功能。除了識(shí)別配體的結(jié)構(gòu)域之外，受體通常還具有蛋白激酶 結(jié)構(gòu)域，其通過結(jié)合配體時(shí)磷酸化目標(biāo)細(xì)胞內(nèi)分子而啟動(dòng)信號(hào)途徑，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)育或代 謝改變。
[0099] 在一些實(shí)施方案中，將根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生的糖蛋白受體是受體酪氨酸激酶（RTK)。 RTK家族包括對(duì)于多種細(xì)胞類型的多種功能關(guān)鍵的受體（見例如，Yarden和Ullrich，Ann. Rev. Biochem. 57:433-478, 1988 ;Ullrich 和 Schlessinger，Cell 61:243-254,1990， 引入本文作為參考）。RTK的非限制性實(shí)例包括成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF)受體家 族成員、表皮生長(zhǎng)因子（EGF)受體家族成員、血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF)受體、具有 免疫球蛋白和EGF同源性結(jié)構(gòu)域一 1的酪氨酸激酶（TIE-I)和TIE-2受體（Sato等 人，Nature376(6535) :70-74, 1995)和c-Met受體，其一些已經(jīng)被提出直接或間接促進(jìn)血 管發(fā)生（Mustonen 和 Alitalo, J. Cell Biol. 129:895-898, 1995)。RTK 的其他非限制性實(shí) 例包括胎兒肝臟激酶I (FLK-I)(有時(shí)稱作含有激酶插入結(jié)構(gòu)域的受體（KDR) (Terman等 人，Oncogene 6:1677-83,1991)或血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2 (VEGFR-2))、fms樣酪氨 酸激酶一 I (Flt-1) (DeVries 等人 Science 255 ;989_991，1992 ;Shibuya 等人，Oncogene 5:519-524,1990)，有時(shí)被稱作血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體I (VEGFR-I)、神經(jīng)氈蛋白一 1、 內(nèi)皮糖蛋白、內(nèi)皮唾液酸蛋白和Axl。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明表達(dá)腫瘤壞死因子α 和β受體（TNFR-1 ;1991年3月20日公布的EP 417, 563 ;和TNFR-2, 1991年3月20日公 布的 EP 417, 014)(回顧見 Naismith 和 Sprang, J Inflamm. 47 (1-2) :1-7,1995-96,引入本 文作為參考）。
[0100] 在一些實(shí)施方案中，待根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生的糖蛋白受體是G-蛋白偶聯(lián)受體（GPCR)。 GPCR是具有7跨膜結(jié)構(gòu)域的糖蛋白。當(dāng)配體結(jié)合到GPCR時(shí)，在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)，其導(dǎo)致 細(xì)胞的生物學(xué)或生理學(xué)性質(zhì)改變。GPCR是藥物作用和開發(fā)的主要靶標(biāo)。實(shí)際上，受體已 經(jīng)導(dǎo)致半數(shù)以上的當(dāng)前已知的藥物（Drews, Nature Biotechnology, 14:1516, 1996)并且 G