本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種嘌呤生物堿及其作為抗rsv病毒藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus，簡稱合胞病毒，rsv，也屬副粘病毒科)，是一種rna病毒，屬副粘病毒科。rsv感染會(huì)引發(fā)肺炎和多種下呼吸道疾病，每年全世界至少有300萬嬰幼兒因?yàn)閞sv病毒感染而入院，其中至少有16萬人死亡，因此rsv也被稱為兒童殺手(science,2013,342,546-547)。目前沒有可應(yīng)用于臨床的疫苗，利巴韋林(三氮唑核苷)是唯一應(yīng)用于臨床的化學(xué)治療藥物(j.med.chem.2008,51,875–896)。綜上所述，開發(fā)預(yù)防和/或治療rsv感染引起的疾病的藥物成為當(dāng)務(wù)之急。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供一種嘌呤生物堿、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽，其特征在于所述嘌呤生物堿具有式i所示的結(jié)構(gòu)：
本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供上述式i結(jié)構(gòu)的嘌呤生物堿的制備方法，其特征在于包括如下步驟：
(1)粉碎：取整株連翹葉黃芩，避光陰干5-10天后，粉碎20-100目，得細(xì)粉備用；
(2)提?。簩⒉襟E(1)得到的細(xì)粉用體積分?jǐn)?shù)95％的乙醇超聲提取2-3次，提取液冷凍干燥得醇提物，將醇提物懸浮于適量的水中，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取2次，分別合并石油醚相和乙酸乙酯相濃縮，得石油醚部位浸膏、乙酸乙酯部位浸膏，備用；
(3)純化：步驟(2)得到的乙酸乙酯部位浸膏，依次經(jīng)正相硅膠柱色譜分離、高效液相色譜分離得式i結(jié)構(gòu)的嘌呤生物堿。
上述制備方法步驟(2)中石油醚和乙酸乙酯的體積用量與水的體積用量相同；步驟(3)中所述的正相硅膠柱色譜分離中固定相為200～300目硅膠，流動(dòng)相為20％–40％的乙酸乙酯/石油醚混合溶劑，洗脫體積優(yōu)選為2-3個(gè)柱體積；高效液相色譜分離中采用的色譜柱為半制備c18色譜柱，kromasil,7μm,10×250mm，以40％的甲醇/水混合溶劑作為流動(dòng)相；上述混合溶劑百分比均為體積百分比。
本發(fā)明上述制備方法步驟(2)中適量的水，是本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)醇提物的量，合理進(jìn)行選擇水的用量，采用石油醚和乙酸乙酯萃取時(shí)，每次使用的石油醚或乙酸乙酯的體積與上述水的體積用量相同。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供一種藥物組合物，其特征在于該藥物組合物以上述式i結(jié)構(gòu)的嘌呤生物堿、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽作為有效成分。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供一種藥物組合物，其特征在于該藥物組合物以上述式i結(jié)構(gòu)的嘌呤生物堿、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽作為有效成分；該藥物組合物還包括其他抗病毒藥物。進(jìn)一步還包括藥用輔料(例如藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑)。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供上述式i結(jié)構(gòu)的嘌呤生物堿、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗病毒藥物中的用途。所述抗病毒藥物用于預(yù)防和/或治療由呼吸道合胞病毒(rsv)引起的疾病。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供上述式i結(jié)構(gòu)的嘌呤生物堿、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗rsv藥物中的用途。
本發(fā)明中術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指非毒性的無機(jī)或有機(jī)酸和/或堿的加成鹽，可參見“saltselectionforbasicdrugs”,int.j.pharm.(1986),33,201–217。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：(1)首次從連翹葉黃芩中分離得到式i結(jié)構(gòu)的嘌呤生物堿，本發(fā)明分離純化方法簡便、易行；(2)本發(fā)明分離得到的式i結(jié)構(gòu)的嘌呤生物堿，對(duì)呼吸道合胞病毒(rsv)具有很強(qiáng)的抑制活性，優(yōu)于陽性對(duì)照藥利巴韋林的活性。
具體實(shí)施方式
為了便于對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，下面提供的實(shí)施例對(duì)其做了更詳細(xì)的說明。但是這些實(shí)施例僅供更好的理解發(fā)明而并非用來限定本發(fā)明的范圍或?qū)嵤┰瓌t，本發(fā)明的實(shí)施方式不限于以下內(nèi)容。
實(shí)施例1
(1)粉碎：取整株連翹葉黃芩(3kg)，避光陰干5天后，粉碎20-100目，得細(xì)粉備用；
(2)提取：將步驟(1)得到的細(xì)粉用體積分?jǐn)?shù)95％的乙醇超聲提取2次，每次提取20-40min，合并提取液冷凍干燥得醇提物，將醇提物懸浮于適量的水(3l)中，依次用石油醚(3l)、乙酸乙酯(3l)各萃取2次，分別合并石油醚相和乙酸乙酯相濃縮，得石油醚部位浸膏、乙酸乙酯部位浸膏，備用；
(3)純化：取步驟(2)得到的乙酸乙酯部位浸膏，先進(jìn)行正相硅膠柱色譜分離，固定相：200～300目硅膠，流動(dòng)相為20％–40％的乙酸乙酯/石油醚混合溶劑，洗脫3個(gè)柱體積，洗脫液濃縮后進(jìn)行高效液相色譜分離，固定相：半制備c18色譜柱(kromasil,7μm,10×250mm)，以40％的甲醇/水混合溶劑作為流動(dòng)相，得式i結(jié)構(gòu)的嘌呤生物堿，hplc純度為98.9％。結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)：
式i：1hnmr(cdcl3,400mhz)和13cnmr(cdcl3,100mhz),見表1；hresimsm/z235.1205[m+h]+(calcdforc11h15n4o2,235.1195).
表1
實(shí)施例2
本發(fā)明式ⅰ結(jié)構(gòu)的嘌呤生物堿的抗病毒活性
本發(fā)明式ⅰ結(jié)構(gòu)的嘌呤生物堿對(duì)呼吸道合胞病毒(rsv)的抑制活性按照文獻(xiàn)：zhang,y.j.；stein,d.a.；fan,s.m.；wang,k.y.；kroeker,a.d.；meng,x.j.；iversen,p.l.；matson,d.o.vet.microbiol.2006,117(2-4),117-129或者grassauer,a.；weinmuellner,r.；meier,c.；pretsch,a.；prieschl-grassauer,e.；unger,h.,virol.j.2008,5,107.中記載的方法進(jìn)行測試，或者可按照現(xiàn)有技術(shù)中其他類似文獻(xiàn)中報(bào)道的方法進(jìn)行測試。
結(jié)果顯示，式ⅰ結(jié)構(gòu)的嘌呤生物堿對(duì)rsv均具有顯著的抑制作用，其半數(shù)有效濃度(ec50)小于1μm，且半數(shù)中毒濃度(tc50)大于100μm，抑毒指數(shù)(ti)＝tc50/ec50大于100，而陽性對(duì)照藥利巴韋林的半數(shù)有效濃度(ec50)約為20μm，抑毒指數(shù)(ti)＝tc50/ec50大于100，可見本發(fā)明式i結(jié)構(gòu)的嘌呤生物堿對(duì)rsv的抑制活性顯著優(yōu)于利巴韋林。