本發(fā)明涉一種快速分離抗凍蛋白的方法，屬分子生物學研究技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
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抗凍蛋白以其獨特的功能與特性和潛在的商業(yè)價值引起了廣泛的關(guān)注，抗凍蛋白的異源表達可以提高動植物體的抗凍能力。此外，抗凍蛋白還可以作為食品添加劑提高食品質(zhì)量；作為冰凍保護劑用于冰凍和低溫貯存生物體、器官、組織和細胞系；作為化學佐劑以保護癌癥冷凍手術(shù)中的目標組織以及作為新型的除冰劑，抗凍蛋白均具有廣闊的應(yīng)用前景。發(fā)掘具有更高熱滯活性的抗凍蛋白具有重要的實際意義。

本技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域主要針對抗凍蛋白在不同物種間不但抗凍活性差異很大，其序列特征也呈現(xiàn)多樣性，因此，基于序列相似性比對的抗凍蛋白預測經(jīng)常失敗?；诮Y(jié)構(gòu)特征的抗凍蛋白預測由于對已知抗凍蛋白的序列和結(jié)構(gòu)特征依賴較大，并未達到預期的效果。目前昆蟲抗凍蛋白的分離大多是采用越冬過程中的昆蟲或者是經(jīng)過低溫馴化的昆蟲，進行提取純化，然后采用乙醇抽提、凝膠過濾層析、離子交換柱色譜分析、聚丙烯酰胺凝膠電泳以及高效液相色譜等方法，但是這些方法在實際操作中存在很多問題，對樣品和技術(shù)的要求較高，很多時候并不能得到理想的結(jié)果。

為克服抗凍蛋白分離存在的困難，已有人根據(jù)抗凍蛋白冰吸附的原理，采用程控降溫的方法，用降溫的金屬冰手指從溶液中富集抗凍蛋白，但該設(shè)備價格比較昂貴，操作也比較復雜。

因此，根據(jù)最近幾年針對抗凍蛋白作用機理的研究，抗凍蛋白采用氫鍵和疏水相互作用與冰晶結(jié)合，并能不可逆的吸附在冰晶上，根據(jù)此原理，同時針對目前抗凍蛋白分離鑒定困難，相關(guān)設(shè)備價格昂貴、不易操作的現(xiàn)狀，提供本本發(fā)明。經(jīng)文獻檢索，未見與本發(fā)明相同的公開報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的在于根據(jù)抗凍蛋白冰吸附的原理，克服現(xiàn)有儀器設(shè)備價格昂貴、操作不簡便的不足，而提供一種簡單、實用、快速的抗凍蛋白分離方法。

本發(fā)明方法為改進的冰吸附方法，具體步驟如下：

a.將漏斗(1)底部封閉，用液氮作為降溫材料倒入將封閉漏斗(1)的底部形成冰手指，并通過鐵架臺(2)固定且置于底部放有磁珠(5)的燒杯(3)中,固定高度以離燒杯(3)底部1厘米為宜；燒杯(3)放置在磁力攪拌器(4)上；

b.將要分離的組織勻漿溶液過濾后倒入200毫升燒杯(3)中，打開磁力攪拌器(4)，組織勻漿溶液在燒杯(3)中旋轉(zhuǎn)，在形成冰手指的漏斗管子(1)周圍結(jié)冰并吸附抗凍蛋白；經(jīng)過3-5分鐘的吸附，將漏斗(1)取出，放置在一容器中，使吸附在漏斗(1)周圍的抗凍蛋白融化；再重復吸附一次，經(jīng)兩輪吸附后富集出抗凍蛋白。

本發(fā)明所用儀器為市場購買和改進，所用液氮為市場購買。

本發(fā)明的優(yōu)點在于：

1、簡潔快速。本發(fā)明所涉及的操作步驟少、簡單、便于操作。

2、成本低。所需配件主要為磁力攪拌器、鐵架臺，消耗少量液氮，設(shè)備成本非常低。

3、效率高。經(jīng)過兩輪吸附，能夠從溶液中吸附到大量抗凍蛋白，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，能看到一條或以上單一的條帶。

4、適用范圍廣。本裝置對吸要附抗凍蛋白的來源沒有要求，根據(jù)抗凍蛋白結(jié)合冰晶的原理，抗凍蛋白均能吸附在液氮冷卻的冰手指上。

附圖說明：

圖1為本發(fā)明所使用裝置的主視結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實施方式：

本發(fā)明所用儀器為市場購買和改進，所用液氮為市場購買。

本發(fā)明方法為改進的冰吸附方法，具體步驟如下：

a.將漏斗1底部在酒精燈上灼燒并使其底部末端封閉，用液氮作為降溫材料倒入將封閉漏斗1中形成冰手指，并通過鐵架臺2固定且置于底部放有磁珠5的燒杯3中,固定高度以離燒杯3底部1厘米為宜；燒杯3放置在磁力攪拌器4上；

b.將要分離的組織勻漿溶液過濾后倒入200毫升燒杯3中，打開磁力攪拌器4，組織勻漿溶液在燒杯3中旋轉(zhuǎn)，在形成冰手指的漏斗1周圍結(jié)冰并吸附抗凍蛋白；經(jīng)過3分鐘或5分鐘的吸附，將漏斗1取出，放置在一容器中，使吸附在漏斗1周圍的抗凍蛋白融化；再重復吸附一次，經(jīng)兩輪吸附后富集出抗凍蛋白。

實際應(yīng)用表明，本發(fā)明不僅簡潔快速、成本低、效率高，而且適用范圍非常廣，對要分離抗凍蛋白的物種來源沒有要求。