本發(fā)明涉及一種獲自功能型蘋果的MsLBD13蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：“醫(yī)食同源”是發(fā)展方向，“吃營養(yǎng)，吃健康”已經(jīng)成為人們的共識。蘋果耐貯性好，供應(yīng)周期長，是世界性果品，尤其果實含有較高比例的、人體比較容易吸收的游離多酚，具有很好的抗氧化、抗腫瘤、預(yù)防心腦血管疾病及保肝等作用，營養(yǎng)保健價值高，有“一天一蘋果，醫(yī)生遠(yuǎn)離我”(Anappleadaykeepsthedoctoraway！)的美譽，世界上相當(dāng)多的國家都將其列為主要消費果品而大力推薦。近幾年的調(diào)研結(jié)果表明，一方面，在過去幾十年國內(nèi)外育成的1000多個蘋果品種，80％是‘金帥’等品種的雜交、實生或芽選后代，這種“近親繁殖”往往帶來品種的遺傳基礎(chǔ)狹窄及抗逆性減退等問題；另一方面，特色、多抗和多樣性果品成為產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要方向。新疆野蘋果及其紅肉變型(Malussieversiif.neidzwetzkyana)是世界栽培蘋果的祖先種，不僅遺傳多樣性極為豐富，而且富含類黃酮等功能、保健成分，是進(jìn)行抗逆與品質(zhì)育種的珍貴基因庫。但因農(nóng)田開墾等原因，新疆野蘋果的遺傳多樣性正遭到嚴(yán)重破壞，瀕臨滅絕；我國是世界上最大的蘋果生產(chǎn)和消費國，其中2012年生產(chǎn)蘋果3950萬噸，主要用于鮮食，且近70％是類黃酮含量較低的富士品種。因此，圍繞“新疆野蘋果資源的科學(xué)保護(hù)與持續(xù)高效利用、栽培品種遺傳基礎(chǔ)拓展、蘋果產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)型升級與共給側(cè)結(jié)構(gòu)改革和農(nóng)民持續(xù)增收以及人類健康水平提升”，進(jìn)行聯(lián)合攻關(guān)與集成示范，本發(fā)明的發(fā)明人與美國康奈爾大學(xué)的教授合作，對新疆野蘋果及歐洲森林蘋果等世界范圍內(nèi)的97份蘋果資源進(jìn)行了基因組重測序與生物信息學(xué)分析，構(gòu)建了新疆紅肉蘋果與蘋果品種雜種一代及回交一、二代分離群體，研究明確了新疆野蘋果群體遺傳結(jié)構(gòu)與遺傳多樣性特征、核心種質(zhì)構(gòu)建的技術(shù)參數(shù)、類黃酮含量等性狀的遺傳變異特點及發(fā)育機理，提出了“功能型蘋果”的概念及“寬行高干、行間生草、給草施肥、肥田養(yǎng)根”的現(xiàn)代果園管理理念，創(chuàng)建了常規(guī)雜交與生物技術(shù)有機結(jié)合的蘋果高效育種技術(shù)體系，創(chuàng)制了一批新品種及優(yōu)異種質(zhì)，研發(fā)了蘋果新品種配套高效栽培技術(shù)體系。目前，已授權(quán)和申報發(fā)明專利10余項，定植雜種實生苗4萬余株，育成新品種(系)16個；發(fā)表相關(guān)研究論文120篇，其中SCI論文20余篇，這些研究成果總體處在國際同類研究的領(lǐng)先水平。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種獲自功能型蘋果的MsLBD13蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種蛋白質(zhì)，獲自蘋果，命名為MsLBD13蛋白，是如下(a1)或(a2)：(a1)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(a2)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物花青苷含量相關(guān)的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。為了使(a1)中的MsLBD13蛋白便于純化和檢測，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標(biāo)簽。表1標(biāo)簽的序列標(biāo)簽殘基序列Poly-Arg5-6(通常為5個)RRRRRPoly-His2-10(通常為6個)HHHHHHFLAG8DYKDDDDKStrep-tagII8WSHPQFEKc-myc10EQKLISEEDL上述(a2)中的MsLBD13蛋白可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進(jìn)行生物表達(dá)得到。上述(a2)中的MsLBD13蛋白的編碼基因可通過將序列表中序列2所示的DNA序列中缺失一個或幾個氨基酸殘基的密碼子，和/或進(jìn)行一個或幾個堿基對的錯義突變，和/或在其5′端和/或3′端連上表1所示的標(biāo)簽的編碼序列得到。編碼MsLBD13蛋白的基因(命名為MsLBD13基因)也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。MsLBD13基因為如下(1)或(2)或(3)：(1)編碼區(qū)序列表中序列2所示的DNA分子；(2)在嚴(yán)格條件下與(1)限定的DNA序列雜交且編碼與植物花青苷含量相關(guān)的蛋白質(zhì)的DNA分子；(3)與(1)限定的DNA序列具有90％以上同源性且編碼與植物花青苷含量相關(guān)的蛋白質(zhì)的DNA分子。上述嚴(yán)格條件可為用0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液，在DNA或者RNA雜交實驗中65℃下雜交并洗膜。含有MsLBD13基因的重組表達(dá)載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系、轉(zhuǎn)基因植物組織或重組菌均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍?？捎矛F(xiàn)有的植物表達(dá)載體構(gòu)建含有MsLBD13基因的重組表達(dá)載體。所述植物表達(dá)載體包括雙元農(nóng)桿菌載體和可用于植物微彈轟擊的載體等。使用MsLBD13基因構(gòu)建重組表達(dá)載體時，可在其轉(zhuǎn)錄起始核苷酸前加上任何一種增強型、組成型、組織特異型或誘導(dǎo)型啟動子，它們可單獨使用或與其它的植物啟動子結(jié)合使用；此外，使用MsLBD13基因構(gòu)建重組表達(dá)載體時，還可使用增強子，包括翻譯增強子或轉(zhuǎn)錄增強子，這些增強子區(qū)域可以是ATG起始密碼子或鄰接區(qū)域起始密碼子等，但必需與編碼序列的閱讀框相同，以保證整個序列的正確翻譯。所述翻譯控制信號和起始密碼子的來源是廣泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻譯起始區(qū)域可以來自轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域或結(jié)構(gòu)基因。為了便于對轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞或植物進(jìn)行鑒定及篩選，可對所用植物表達(dá)載體進(jìn)行加工，如加入在植物中表達(dá)可產(chǎn)生顏色變化的酶或發(fā)光化合物的基因、具有抗性的抗生素標(biāo)記物或是抗化學(xué)試劑標(biāo)記基因等。從轉(zhuǎn)基因植物的安全性考慮，可不加任何選擇性標(biāo)記基因，直接以表型篩選轉(zhuǎn)化植株。所述重組表達(dá)載體的出發(fā)載體可為pRI101載體。所述重組表達(dá)載體具體可為在pRI101載體的NdeI和BamHI酶切位點之間插入序列表的序列2所示的雙鏈DNA分子得到的重組質(zhì)粒。所述植物組織具體可為植物愈傷組織，更具體可為植物幼葉愈傷組織。所述植物可為單子葉植物或雙子葉植物。所述雙子葉植物具體可為薔薇科植物。所述薔薇科植物具體可為蘋果屬植物。所述蘋果屬植物具體可為蘋果，更具體可為蘋果‘紫紅1號’。本發(fā)明還保護(hù)MsLBD13蛋白的應(yīng)用，為如下(b1)或(b2)：(b1)調(diào)控植物的花青苷含量；(b2)降低植物的花青苷含量。所述植物可為單子葉植物或雙子葉植物。所述雙子葉植物具體可為薔薇科植物。所述薔薇科植物具體可為蘋果屬植物。所述蘋果屬植物具體可為蘋果，更具體可為蘋果‘紫紅1號’。本發(fā)明還保護(hù)MsLBD13基因在培育花青苷含量降低的轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用。所述植物可為單子葉植物或雙子葉植物。所述雙子葉植物具體可為薔薇科植物。所述薔薇科植物具體可為蘋果屬植物。所述蘋果屬植物具體可為蘋果，更具體可為蘋果‘紫紅1號’。本發(fā)明還保護(hù)一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，包括如下步驟：將MsLBD13基因?qū)氤霭l(fā)植物，得到花青苷含量低于所述出發(fā)植物的轉(zhuǎn)基因植物。所述出發(fā)植物可為單子葉植物或雙子葉植物。所述雙子葉植物具體可為薔薇科植物。所述薔薇科植物具體可為蘋果屬植物。所述蘋果屬植物具體可為蘋果，更具體可為蘋果‘紫紅1號’。所述MsLBD13基因具體可通過以上任一所述重組表達(dá)載體導(dǎo)入所述出發(fā)植物。所述方法中，具體可將所述MsLBD13基因?qū)氤霭l(fā)植物的愈傷組織，然后將愈傷組織培育為植株。所述愈傷組織具體可為幼葉愈傷組織。攜帶有所述MsLBD13基因的重組表達(dá)載體可通過Ti質(zhì)粒、Ri質(zhì)粒、植物病毒載體、直接DNA轉(zhuǎn)化、顯微注射、電導(dǎo)、農(nóng)桿菌介導(dǎo)等常規(guī)生物學(xué)方法轉(zhuǎn)化到植物細(xì)胞或組織中。本發(fā)明還保護(hù)一種培育轉(zhuǎn)基因植物組織的方法，包括如下步驟：將MsLBD13基因?qū)氤霭l(fā)植物組織，得到花青苷含量低于所述出發(fā)植物組織的轉(zhuǎn)基因植物組織。所述出發(fā)植物可為單子葉植物或雙子葉植物。所述雙子葉植物具體可為薔薇科植物。所述薔薇科植物具體可為蘋果屬植物。所述蘋果屬植物具體可為蘋果，更具體可為蘋果‘紫紅1號’。所述MsLBD13基因具體可通過以上任一所述重組表達(dá)載體導(dǎo)入所述出發(fā)植物組織。所述植物組織具體可為植物愈傷組織。所述愈傷組織具體可為幼葉愈傷組織。本發(fā)明還保護(hù)一種植物育種方法，包括如下步驟：提高目的植物中MsLBD13蛋白的含量和/或活性，從而降低目的植物中花青苷的含量。所述出發(fā)植物可為單子葉植物或雙子葉植物。所述雙子葉植物具體可為薔薇科植物。所述薔薇科植物具體可為蘋果屬植物。所述蘋果屬植物具體可為蘋果，更具體可為蘋果‘紫紅1號’。本發(fā)明還保護(hù)MsLBD13蛋白或MsLBD13基因或以上任一所述方法，在植物育種中的應(yīng)用。所述植物育種的目的為培育花青苷含量降低的植物。所述植物可為單子葉植物或雙子葉植物。所述雙子葉植物具體可為薔薇科植物。所述薔薇科植物具體可為蘋果屬植物。所述蘋果屬植物具體可為蘋果，更具體可為蘋果‘紫紅1號’。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了MsLBD13蛋白及其功能，可用于培育花青苷含量改變的轉(zhuǎn)基因植物，在植物育種中具有重大應(yīng)用前景。附圖說明圖1為表型鑒定的結(jié)果。具體實施方式以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平均值。pRI101載體(又稱“pRI101-ANDNA”)：Takala公司，CodeNo.3262。農(nóng)桿菌LBA4404：Tiangen公司，產(chǎn)品目錄號：CC2901。蘋果‘紫紅1號’(又稱‘紫紅1號’紅肉蘋果)：參考文獻(xiàn)：《‘紫紅1號’紅肉蘋果果肉抗氧化性及花色苷分析》。1％鹽酸甲醇溶液：97.2ml甲醇與2.8ml濃鹽酸混合。濃鹽酸即市售12mol/L鹽酸。KCl緩沖液(pH＝1、0.025M)：1.86gKCl用980ml蒸餾水溶解，用濃鹽酸調(diào)pH為1.0，轉(zhuǎn)移到1L容量瓶中，用蒸餾水定容。NaAC緩沖液(pH＝4.5、0.4M)：54.43gNaAC用960ml蒸餾水溶解，用濃鹽酸調(diào)pH為4.5，轉(zhuǎn)移到1L容量瓶中，用蒸餾水定容。制備幼葉愈傷組織的方法具體參見文獻(xiàn)：JiXH,ZhangR,WangN,YangL&ChenXS.Transcriptomeprofilingrevealsauxinsuppressedanthocyaninbiosynthesisinred-fleshedapplecallus(Malussieversiif.niedzwetzkyana).PlantCellTissOrganCult,2015,123:389–404.。實施例1、MsLBD13蛋白及其編碼基因的發(fā)現(xiàn)從‘紫紅1號’蘋果愈傷組織中發(fā)現(xiàn)了一個新蛋白，如序列表的序列1所示，將其命名為MsLBD13蛋白。將編碼MsLBD13蛋白的基因命名為MsLBD13基因，其開放閱讀框如序列表的序列2所示。將序列表的序列3所示的蛋白質(zhì)命名為對照蛋白(GENBANKACCESSIONNO.XP_008340959.1)。將對照蛋白的編碼基因命名為對照基因，如序列表的序列4所示。實施例2、MsLBD13蛋白的功能鑒定一、構(gòu)建重組質(zhì)粒1、構(gòu)建重組質(zhì)粒pRI101-MsLBD13(1)人工合成序列表的序列2所示的雙鏈DNA分子。(2)以步驟(1)得到的DNA分子為模板，采用F1和R1組成的引物對進(jìn)行PCR擴增，得到PCR擴增產(chǎn)物。F1：5’-CCCATATGATGAGTTGCAACGGCTGT-3’；R1：5’-CGGGATCCTCAGGGGAACAAGTTGAGAAGCT-3’。(3)用限制性內(nèi)切酶NdeI和BamHI雙酶切步驟(2)得到的PCR擴增產(chǎn)物，回收酶切產(chǎn)物。(4)用限制性內(nèi)切酶NdeI和BamHI雙酶切pRI101載體，回收約10kb的載體骨架。(5)將步驟(3)的酶切產(chǎn)物與步驟(4)的載體骨架連接，得到重組質(zhì)粒pRI101-MsLBD13。根據(jù)測序結(jié)果，對重組質(zhì)粒pRI101-MsLBD13進(jìn)行結(jié)構(gòu)描述如下：在pRI101載體的NdeI和BamHI酶切位點之間插入了序列表的序列2所示的雙鏈DNA分子。2、構(gòu)建對照質(zhì)粒將人工合成的序列表的序列4所示的雙鏈DNA分子插入pRI101載體的NdeI和BamHI酶切位點之間，得到對照質(zhì)粒。二、轉(zhuǎn)MsLBD13基因愈傷組織的獲得1、將重組質(zhì)粒pRI101-MsLBD13導(dǎo)入農(nóng)桿菌LBA4404，得到重組農(nóng)桿菌。2、將步驟1得到的重組農(nóng)桿菌接種至30ml含50μg/ml卡那霉素和50μg/ml利福平的液體YEP培養(yǎng)基，28℃振蕩培養(yǎng)至OD600nm＝0.6，12000rpm離心收集菌體，用30mlddH2O懸浮，加入乙酰丁香酮并使其濃度為100μM，得到侵染液。3、取蘋果‘紫紅1號’的幼葉愈傷組織，浸沒到步驟2得到的侵染液中，室溫振蕩30min。4、完成步驟3后，取愈傷組織，置于含1mg/L6-BA和0.3mg/LNAA的固體MS培養(yǎng)基上，28℃暗培養(yǎng)2天，然后轉(zhuǎn)移到含1mg/L6-BA、0.3mg/LNAA、50mg/L卡那霉素和50mg/L利福平的固體MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)30天(24℃，16h光照/8h黑暗)。5、完成步驟4后，取愈傷組織，提取基因組DNA，采用F2和R2組成的引物對進(jìn)行PCR鑒定，PCR鑒定為陽性的即為轉(zhuǎn)MsLBD13基因愈傷組織。F2：5’-GACGCACAATCCCACTATCC-3’；R2：5’-GGGGAACAAGTTGAGAAGCT-3’。F2對應(yīng)載體骨架上的35S啟動子部分序列，R2對應(yīng)MsLBD13基因上的部分序列，靶序列長度約為950bp。6、完成步驟5后，取轉(zhuǎn)MsLBD13基因愈傷組織，置于含1mg/L6-BA、0.3mg/LNAA、50mg/L卡那霉素和50mg/L利福平的固體MS培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)。三、對照愈傷組織的獲得將對照質(zhì)粒代替重組質(zhì)粒pRI101-MsLBD13進(jìn)行步驟二，得到轉(zhuǎn)對照基因愈傷組織。將pRI101載體代替重組質(zhì)粒pRI101-MsLBD13進(jìn)行步驟二，得到轉(zhuǎn)空載體愈傷組織。四、表型鑒定各個愈傷組織的照片見圖1。圖1中分別為步驟二的6中培養(yǎng)30天后的轉(zhuǎn)MsLBD13基因愈傷組織、步驟三的6中培養(yǎng)30天后的轉(zhuǎn)對照基因愈傷組織、步驟三的6中培養(yǎng)30天后的轉(zhuǎn)空載體愈傷組織和處于同一時期的蘋果‘紫紅1號’幼葉愈傷組織(用WT表示)。‘紫紅1號’蘋果的愈傷組織顯示為深紫色，花青苷含量較高。轉(zhuǎn)MsLBD13基因愈傷組織顏色發(fā)黃，花青苷含量較低。轉(zhuǎn)空載體愈傷組織與‘紫紅1號’蘋果的愈傷組織的顏色基本一致。轉(zhuǎn)對照基因愈傷組織顯示為紫黃相間的顏色，花青苷含量高于轉(zhuǎn)MsLBD13基因愈傷組織且低于‘紫紅1號’蘋果的愈傷組織。五、花青苷定量鑒定待測愈傷組織分別為：24℃培養(yǎng)15天的轉(zhuǎn)MsLBD13基因愈傷組織、24℃培養(yǎng)15天的轉(zhuǎn)對照基因愈傷組織、24℃培養(yǎng)15天的轉(zhuǎn)空載體愈傷組織、24℃培養(yǎng)15天的‘紫紅1號’幼葉愈傷組織。愈傷組織的培養(yǎng)均采用含1mg/L6-BA、0.3mg/LNAA、50mg/L卡那霉素和50mg/L利福平的固體MS培養(yǎng)基。按照如下步驟進(jìn)行操作：準(zhǔn)確稱取0.5g待測愈傷組織(0.5g待測待測愈傷組織在液氮中研磨成粉末)，加入5ml預(yù)冷的1％鹽酸甲醇溶液。4℃避光浸提24h。取2份提取液(每份1ml)，1份提取液加入4mlKCl緩沖液(pH＝1.0)混勻靜置4℃避光浸提15min，另1份提取液加入NaAc緩沖液(pH＝4.5)混勻靜置4℃避光浸提15min。8000r/min離心10min，測定510nm和700nm下的吸光值。花青苷含量(mg/g)＝△A*5*0.005*1000*449.2/(26900*0.5)。△A＝(A510nm-A700nm)(pH＝1.0)-(A510nm-A700nm)(pH＝4.5)。進(jìn)行五次重復(fù)試驗，每次重復(fù)試驗中取10份待測愈傷組織的平均值。轉(zhuǎn)MsLBD13基因愈傷組織的花青苷類化合物含量為27.658mg/kg。轉(zhuǎn)對照基因愈傷組織的花青苷類化合物含量為38.623mg/kg。轉(zhuǎn)空載體愈傷組織的花青苷類化合物含量為57.883mg/kg。‘紫紅1號’幼葉愈傷組織的花青苷類化合物含量為62.784mg/kg。本段中的“kg”指的均為愈傷組織鮮重。SEQUENCELISTING<110>山東農(nóng)業(yè)大學(xué)<120>獲自功能型蘋果的MsLBD13蛋白及其編碼基因和應(yīng)用<130>GNCYX170830<160>4<170>PatentInversion3.5<210>1<211>279<212>PRT<213>蘋果<400>1MetSerCysAsnGlyCysArgValLeuArgLysGlyCysSerGluSer151015CysMetLeuArgProCysLeuGlnTrpIleGluThrProGluAlaGln202530GlyHisAlaThrValPheValAlaLysPhePheGlyArgAlaGlyLeu354045MetSerPheIleSerAlaValProAspSerGlnArgProGlySerLeu505560PhePheArgLeuTyrProSerPheSerArgLeuArgPheProMetPhe65707580SerPheLeuIlePheValArgLeuPheSerValLeuPheGlnSerLeu859095LeuPheGluAlaCysGlyArgThrValAsnProValAsnGlyAlaVal100105110GlyLeuLeuTrpThrGlyAsnTrpHisValCysGlnAlaAlaValGlu115120125ThrValLeuLeuGlyGlyThrLeuArgProIleProGluLeuLeuGly130135140GlyAlaSerThrProAspGluAlaSerGluAlaAspValGlyGlyVal145150155160IleAsnCysThrAspMetTrpArgLeuArgAspProSerHisAsnSer165170175GlySerSerSerArgPheProSerSerArgSerAlaArgAlaSerSer180185190ProLysArgLysArgSerThrAlaAspAspGluSerSerThrLysLeu195200205LeuGlnLeuGlnHisHisAlaAspLeuAspLeuArgLeuThrProThr210215220MetSerPheLysProLysProLysProGluThrArgArgProGlyThr225230235240ProSerMetAsnSerGluGluSerGlyValThrThrCysPheGluSer245250255GlyPheAlaAspHisHisArgSerSerTyrSerValGlyProGluArg260265270LysLeuLeuAsnLeuPhePro275<210>2<211>840<212>DNA<213>蘋果<400>2atgagttgcaacggctgtcgagttctccgaaagggctgcagcgagtcatgcatgctccgc60ccctgcctccagtggatcgaaacccccgaagcccaaggccacgccaccgtcttcgtcgcc120aagttcttcggccgcgccggcctcatgtccttcatctccgccgtccccgattcccaacga180cccggttcgttatttttccgattatacccttcgttttcacgactccgtttccccatgttt240tcgtttctgatttttgttcgtttgttttcagttctgtttcagtccttgttgtttgaagcc300tgcggccgtacggtcaatccggtcaacggagcggttgggctgctctggaccggcaactgg360cacgtctgccaggccgccgtcgaaaccgtcctcctcggcggcacgctccggccgattccc420gagctcctcggcggagcgtccactcccgacgaggcctccgaggccgacgtcggcggcgtc480atcaactgtacggacatgtggaggctccgagatccgagtcacaactccggttcctcctcc540cggttccccagctcccggtccgccagggcctcctcgccgaaacgcaagcggtccacagcc600gatgacgagtcgtccaccaagttactccagctccagcaccacgcggatctggatctccgg660ctgaccccaaccatgtctttcaaacccaagcccaaacccgagacccgacgacccggaacc720ccgtccatgaactcggaggagtccggcgtcacaacgtgcttcgagagcggcttcgcggat780caccatcggtcctcttactccgtgggaccggagagaaagcttctcaacttgttcccctga840<210>3<211>250<212>PRT<213>蘋果<400>3MetSerCysAsnGlyCysArgValLeuArgLysGlyCysSerGluSer151015CysMetLeuArgProCysLeuGlnTrpIleGluThrProGluAlaGln202530GlyHisAlaThrValPheValAlaLysPhePheGlyArgAlaGlyLeu354045MetSerPheIleSerAlaValProAspSerGlnArgProValLeuPhe505560GlnSerLeuLeuPheGluAlaCysGlyArgThrValAsnProValAsn65707580GlyAlaValGlyLeuLeuTrpThrGlyAsnTrpHisValCysGlnAla859095AlaValGluThrValLeuLeuGlyGlyThrLeuArgProIleProGlu100105110LeuLeuGlyGlyAlaSerThrProAspGluAlaSerGluAlaAspVal115120125GlyGlyValIleAsnCysThrAspMetTrpArgLeuArgAspProSer130135140HisAsnSerGlySerSerSerArgPheProSerSerArgSerAlaArg145150155160AlaSerSerProLysArgLysArgSerThrAlaAspAspGluSerSer165170175ThrLysLeuLeuGlnLeuGlnHisHisAlaAspLeuAspLeuArgLeu180185190ThrProThrMetSerPheLysProLysProLysProGluThrArgArg195200205ProGlyThrProSerMetAsnSerGluGluSerGlyValThrThrCys210215220PheGluSerGlyPheAlaAspHisHisArgSerSerTyrSerValGly225230235240ProGluArgLysLeuLeuAsnLeuPhePro245250<210>4<211>753<212>DNA<213>蘋果<400>4atgagttgcaacggctgtcgagttctccgaaagggctgcagcgagtcatgcatgctccgc60ccctgcctccagtggatcgaaacccccgaagcccaaggccacgccaccgtcttcgtcgcc120aagttcttcggccgcgccggcctcatgtccttcatctccgccgtccccgattcccaacga180cccgttctgtttcagtccttgttgtttgaagcctgcggccgtacggtcaatccggtcaac240ggagcggttgggctgctctggaccggcaactggcacgtctgccaggccgccgtcgaaacc300gtcctcctcggcggcacgctccggccgattcccgagctcctcggcggagcgtccactccc360gacgaggcctccgaggccgacgtcggcggcgtcatcaactgtacggacatgtggaggctc420cgagatccgagtcacaactccggttcctcctcccggttccccagctcccggtccgccagg480gcctcctcgccgaaacgcaagcggtccacagccgatgacgagtcgtccaccaagttactc540cagctccagcaccacgcggatctggatctccggctgaccccaaccatgtctttcaaaccc600aagcccaaacccgagacccgacgacccggaaccccgtccatgaactcggaggagtccggc660gtcacaacgtgcttcgagagcggcttcgcggatcaccatcggtcctcttactccgtggga720ccggagagaaagcttctcaacttgttcccctga753當(dāng)前第1頁1 2 3