本發(fā)明主要涉及多西紫杉醇與胞壁酰二肽簡化物形成的共綴物及其合成方法，以及在治療癌癥方面的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。技術(shù)背景惡性腫瘤是當今危害人類生命健康的重要殺手，腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的本質(zhì)特征之一，也是腫瘤治療失敗的最根本原因，臨床腫瘤患者約有80％以上死于惡性腫瘤轉(zhuǎn)移，治療腫瘤的轉(zhuǎn)移是降低腫瘤死亡率的重要途徑，控制轉(zhuǎn)移是決定癌癥患者預(yù)后的關(guān)鍵因素，已引起世界范圍的重視，腫瘤轉(zhuǎn)移不僅是腫瘤復(fù)雜發(fā)病學(xué)上的一環(huán)，更是臨床醫(yī)藥工作者希望解決的治療難題，因此尋求抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物就尤為緊迫和關(guān)鍵。紫杉烷類藥物包括紫杉醇、多西紫杉醇，具有口服生物利用度較低的特點，主要原因在于其易被胃腸道上皮的p-糖蛋白外排泵出，易被細胞色素p450代謝，且水溶性差。由于紫杉烷類藥物目前依然是其治療領(lǐng)域的一線藥物，因此圍繞該類化合物的各種研究是藥物化學(xué)家的研究熱點。自提出將天然抗腫瘤藥物分子與免疫增強劑進行化學(xué)共綴以來，希望通過化學(xué)治療與免疫治療相結(jié)合，尋找具有抗腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物分子的研究不斷取得新的進展。已申請的早期專利保護了主要兩類共綴物，一類是通過將胞壁酰二肽連于紫杉醇的2′-位羥基形成的2'-o-mtc共綴物(見cn1712399a)，但遺憾的是，2'-o-mtc類共綴物未能夠在實驗小鼠體內(nèi)展示抗腫瘤轉(zhuǎn)移的實驗結(jié)果。另外一類是將紫杉醇/多西紫杉醇與胞壁酰二肽衍生物相連形成的mtc/mdc系列共綴物(見wo2011147330a1)，mtc/mdc系列共綴物在體外抑瘤和抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移實驗中表現(xiàn)一定相應(yīng)效果，但因其成藥性問題使進一步的藥物使用受到一定制約。雖然上述系列化合物對本領(lǐng)域做出了很大貢獻，但為改進抗癌藥物，尋求具有更好抗腫瘤轉(zhuǎn)移活性、成藥性更好的化合物，本領(lǐng)域仍在繼續(xù)進行研究。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種具有良好成藥性的抗腫瘤及抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的化合物，以滿足臨床應(yīng)用的需要。本發(fā)明要解決的另一個技術(shù)問題是提供這種化合物的制備方法。本發(fā)明要解決的再一個技術(shù)問題是提供這種化合物在制備抗腫瘤及抑制腫瘤轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用。為解決本發(fā)明的技術(shù)問題，采用如下技術(shù)方案：其中，m選自0-1的自然數(shù)，即m＝0或1；n選自2-10的自然數(shù)，即n＝2,3,4,5,6,7,8,9或10；優(yōu)選的n選自2-5的自然數(shù)，即n＝2,3,4或5。r1選自取代或非取代的五至十元芳基、取代或非取代的雜芳基和取代或非取代的亞甲氧基；所述取代的取代基選自羥基、巰基、鹵素、氨基、硝基、氰基、醛基、c1-c6的烷基、羧基、羥氨基、c2-c6的烯烴基、c1-c4的酰氨基和苯甲酰胺基；r2選自氫、取代或非取代的c1-c6的烷基、取代或非取代的c1-c6的烷氧基，所述取代的取代基選自鹵素；所述芳基優(yōu)選為五-十元芳基，所述雜芳基優(yōu)選為五-十元雜芳基。所述的五-十元芳基，優(yōu)選自五元芳基、六元芳基、十元稠環(huán)芳基；所述的五元芳基選自所述的六元芳基選自所述的十元稠環(huán)芳基選自所述的雜芳基表示一個或多個雜原子的芳族環(huán)系，優(yōu)選含有1-4個雜原子，優(yōu)選自含有n,o或s的雜原子的雜芳基；優(yōu)選的雜芳基選自含有1-4個選自n,o或s的雜原子的五-十元雜芳基；更為優(yōu)選的雜芳基選自含有1-4個選自n,o或s的雜原子的五元雜環(huán)基、含有1-4個選自n,o或s的雜原子的六元雜環(huán)基、含有1-4個選自n,o或s的雜原子的十元稠雜環(huán)基。所述的含有1-4個選自n,o或s的雜原子的五元雜環(huán)基選自：所述的含有1-4個選自n,o或s的雜原子的六元雜環(huán)基選自：所述的含有1-4個選自n,o或s的雜原子的十元稠雜環(huán)基選自：所述的c1-c6的烷基在本發(fā)明中表示具有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷烴基團，可選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、環(huán)丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、環(huán)丁基、正戊基、環(huán)戊基、正己基、環(huán)己基、二甲基丙基、2-甲基丁基、2，2-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基。所述的c1-c6烷氧基選自甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、異戊氧基、正己氧基、異己氧基、甲氧基乙氧基、乙氧基甲氧基、丙氧基甲氧基和丙氧基乙氧基。所述的鹵素選自氟、氯、溴或碘，所述的c1-c4酰胺基選自乙酰氨基、丙酰氨基、丁酰氨基或異丁酰氨基；c2-c6的烯烴基選自乙烯基、丙烯基、丁烯基、異丁烯基、2-丁烯基、戊烯基、異戊烯基、2-戊烯基、己烯基和異己烯基。所述r2為氫或者氫被金屬或非金屬陽離子所取代形成藥學(xué)上可接受的鹽，所述的金屬或非金屬陽離子選自na+，k+,ca2+,mg2+,zn2+，al3+，nh4+。所述式i所示的化合物包括但不限定于式ia所示的化合物：r1如上定義。所述的化合物選自如下群組：本發(fā)明提供了多西紫杉醇和胞壁酰二肽簡化物的共綴物的合成通用方法如下：1.液相合成多西紫杉醇2’-o-烷烴二酸單酯；2.固相合成胞壁酰二肽簡化物；3.液相合成多西紫杉醇和胞壁酰二肽簡化物的共綴物。通用合成步驟1：多西紫杉醇2’-o-烷烴二酸單酯的合成反應(yīng)試劑與條件：succinicanhydride，tea，thf，0℃-rt，4h操作步驟：將多西紫杉醇溶解到四氫呋喃中，冰浴下向上述反應(yīng)體系中先后滴加三乙胺和烷烴酸酐的四氫呋喃溶液。滴加完畢后在室溫反應(yīng)4小時，hplc監(jiān)控反應(yīng)完畢，冰浴下用1.0mhcl緩慢中和反應(yīng)體系中的三乙胺，并調(diào)節(jié)ph值至3～5，所得溶液在30℃下減壓濃縮至1/3體積，之后將濃縮液慢慢滴加到10倍體積的冰水中析晶，減壓過濾收集固體；所得固體在冰水中打漿、過濾；用水洗滌三次，30℃下真空干燥，得到目標產(chǎn)物白色固體。通用合成步驟2：胞壁酰二肽簡化物的合成本法利用各種羥基樹脂，如王樹酯(負載量0.83mmol/g)作為固相載體，通過多肽固相合成策略先后向樹脂引入fmoc-l-lys(boc)-cooh、fmoc-d-iso-gln-cooh、fmoc-l-ala-cooh和各種有機羧酸?？s合反應(yīng)完成后，經(jīng)充分洗滌樹脂、脫除fmoc保護基、裂解樹脂等步驟，得到各種胞壁酰二肽簡化物。反應(yīng)中各種?；^程為常規(guī)酰胺縮合反應(yīng)，通過加入過量的反應(yīng)試劑(氨基酸或有機羧酸)以及強效縮合劑(如dic、dcc、hatu、hbtu、bop、pybop等)，可以使各類縮合反應(yīng)完全。具體合成路線：反應(yīng)試劑與條件：(a)fmoc-lys(boc)-oh,hobt,dmap,dic,dcm,rt,12h；(b)ac2o,pyridine,dmap,dcm,rt,3h；(c)20％piperidine/dmf；rt,1h；(d)fmoc-d-iso-gln-oh,hobt,dic,dmfrt,12h；(e)fmoc-ala-oh,hobt,dic,dmf,rt,8h；(f)rcooh,hobt,dic,dmf,rt,8h；(g)90％tfa/h2o,rt,2h.操作步驟：(a)將王樹脂(負載量0.83mmol/g,1.0eq.)，fmoc-lys(boc)-oh(2.0eq.),hobt(2.0eq.)和dmap(0.05eq.)依次加入到固相反應(yīng)器，減壓抽真空1小時后，加入無水的二氯甲烷后攪拌0.5小時，之后加入活化劑dic(2.0eq.)，室溫反應(yīng)12小時，向樹脂引入fmoc-lys(boc)-oh。減壓抽干反應(yīng)液，先后用n,n-二甲基甲酰胺和二氯甲烷充分洗滌樹脂各3次，抽干，直接用于下一步；(b)向反應(yīng)器內(nèi)依次加入dcm，乙酸酐(5.0eq.)，吡啶(5.0eq.)和dmap(0.05eq.)；室溫封端3小時，減壓抽干反應(yīng)液，先后用n,n-二甲基甲酰胺和二氯甲烷(1.5l充分洗滌樹脂6次，抽干反應(yīng)液，先后用n,n-二甲基甲酰胺和二氯甲烷充分洗滌樹脂各3次，抽干，直接用于下一步；(c)加入20％體積份數(shù)的哌啶/n,n-二甲基甲酰胺溶液，脫除氨基酸的fmoc保護基，反應(yīng)1小時后，抽干反應(yīng)液，先后用n,n-二甲基甲酰胺和二氯甲烷充分洗滌樹脂6次，抽干，直接用于下一步；(d)向反應(yīng)器內(nèi)加入fmoc-d-iso-gln-oh(2.0eq.),hobt(2.0eq.)和n,n-二甲基甲酰胺，攪拌5min至體系均勻后再加入活化劑dic(2.0eq.)，室溫反應(yīng)向樹脂引入fmoc-d-iso-gln-oh，反應(yīng)12小時后，取少量樹脂進行茚三酮法檢測，樹脂未呈現(xiàn)藍色，陰性，說明反應(yīng)完全，抽干反應(yīng)液，先后用n,n-二甲基甲酰胺和二氯甲烷充分洗滌樹脂各3次，抽干，直接用于下一步；(e)向反應(yīng)器內(nèi)加入fmoc-ala-oh(2.0eq.),hobt(2.0eq.)和n,n-二甲基甲酰胺溶劑，攪拌5min至體系均勻后再加入活化劑dic(2.0eq.)，室溫反應(yīng)向樹脂引入fmoc-ala-oh，反應(yīng)8小時后，取少量樹脂進行茚三酮法檢測，樹脂未呈現(xiàn)藍色，陰性，說明反應(yīng)完全，抽干反應(yīng)液，先后用n,n-二甲基甲酰胺和二氯甲烷充分洗滌樹脂各3次，抽干，直接用于下一步；(f)向反應(yīng)器中依次加入有機酸rcooh(1.5eq.)和hobt(1.5eq.)和n,n-二甲基甲酰胺，攪拌均勻，之后加入dic(1.5eq.)，室溫反應(yīng)，向樹脂引入有機酸，反應(yīng)8小時后，取少量樹脂進行茚三酮法檢測，樹脂未呈現(xiàn)藍色，陰性，說明反應(yīng)完全，抽干反應(yīng)液，先后用n,n-二甲基甲酰胺和二氯甲烷洗滌樹脂各3次，抽干；(g)加入90％體積份數(shù)的三氟乙酸/水溶液，室溫裂解2小時，過濾，用二氯甲烷洗滌樹脂三次，濾液與裂解液合并，減壓蒸干。冰浴條件下，向殘余液中加入大量無水甲基叔丁基醚，攪拌、析出白色固體。過濾，將固體用無水甲基叔丁基醚洗滌3次，30℃下真空干燥，得到目標產(chǎn)物粗品。通用合成步驟3：多西紫杉醇與胞壁酰二肽簡化物的共綴物合成反應(yīng)試劑與條件：(a)hosu,edc·hcl,dmso,rt,12h；(b)nmm,dmso,rt,12h.操作步驟：(a)向反應(yīng)器中依次加入多西紫杉醇2’-o-烷基二酸單酯(1.0eq.)、hosu(1.1eq.)、edc·hcl(1.1eq.)和dmso，室溫攪拌反應(yīng)12h。hplc監(jiān)控，結(jié)果顯示多西紫杉醇純度小于5％視為反應(yīng)完全，直接用于下一步反應(yīng)。將胞壁酰二肽簡化物寡肽(1.0eq.)加入到另外一個反應(yīng)器中，加入dmso，室溫攪拌至溶解，然后加入n-甲基嗎啡林(5.0eq.)，室溫攪拌5min，而后將上述已經(jīng)制備好的n-羥基琥珀酰亞胺活性酯的反應(yīng)液緩慢滴加到此反應(yīng)體系中，室溫反應(yīng)12小時，hplc監(jiān)控，顯示n-羥基琥珀酰亞胺活性酯中間體純度小于5％視為反應(yīng)完全。將反應(yīng)體系冷卻至0-4℃，先用1m鹽酸水溶液中和反應(yīng)體系中的n-甲基嗎啡林，再用0.1m鹽酸水溶液微調(diào)反應(yīng)體系ph到3～5。然后將中和后的反應(yīng)液慢慢滴加到10倍體積的0-4℃冰水中析晶；減壓過濾得到目標粗產(chǎn)物；粗產(chǎn)物用冰水洗滌3次，30℃下真空干燥，得到目標粗品。粗產(chǎn)品經(jīng)hplc純化即得到目標多西紫杉醇與胞壁酰二肽簡化物的共綴物。本發(fā)明所述的烷烴二酸酐選自c4-c12烷烴二酸酐。本發(fā)明中的共綴物的制備方法條件比較溫和，反應(yīng)時間簡短，收率穩(wěn)定，有利于采用例如組合化學(xué)方法進行化合物庫的合成，這種采用組合化學(xué)方法合成化合物庫的方法亦屬于本發(fā)明的范圍。其中，各縮寫為如下定義，各試劑均可通過通過商業(yè)途徑獲得：fmoc9-芴甲氧羰基boc叔丁氧羰基rt室溫eq.當量succinicanhydride丁二酸酐tea三乙醇胺thf四氫呋喃dicn,n-二異丙基碳二亞胺dcc二環(huán)己基碳二亞胺hatu2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯hbtuo-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸鹽bop苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸鹽pybop六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷hobt,1-羥基苯并三唑dmap4-二甲氨基吡啶dcm二氯甲烷ac2o乙酸酐pyridine吡啶piperidine哌啶dmfn,n-二甲基甲酰胺tfa三氟乙酸hosun-羥基丁二酰亞胺edc1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽dmso二甲亞砜nmmn-甲基嗎啉本發(fā)明的另一目的在于涉及所述共綴物在治療和預(yù)防各種腫瘤、以及由其引起的各種癌癥的藥物(劑)或者預(yù)防(劑)中的應(yīng)用。所述的腫瘤選自黑色素瘤、胃癌、肺癌、優(yōu)選非小細胞肺癌、乳腺癌、乳腺癌轉(zhuǎn)移、腎癌、肝癌、口腔表皮癌、宮頸癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移、腦癌、優(yōu)選膠質(zhì)細胞瘤引起的腦癌。本發(fā)明的再一目的在于提供一種藥物組合物，其特征在于，包含所述共綴物化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和一種以上藥學(xué)上可接受的載體。所述載體包括但不限于各種適合藥物制劑的賦形劑，可以通過胃腸道或者非胃腸道途徑給予哺乳動物，特別是癌癥患者。以胃腸道給藥為例，賦形劑包括各種可以片劑或者顆粒劑的填充劑，如微晶纖維素等。本發(fā)明化合物具有如下優(yōu)勢：1、本發(fā)明的化合物具有明顯更好的溶解性和親水性，可大大減少或避免藥物制劑研究中助溶輔料的使用，具有明顯更好的成藥性和藥物抗過敏性。2、本發(fā)明所述的化合物，對于治療基因表達異常而引起的疾病，如：腫瘤，有很好的療效。3、本發(fā)明所述的化合物在抑制腫瘤的同時，具有優(yōu)異的抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的功能。附圖說明圖1為本專利s-01、mdc-405及多西紫杉醇小鼠乳腺癌4t1肺轉(zhuǎn)移模型試驗對比結(jié)果，其中，1a為乳腺瘤重對比結(jié)果，1b為肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)對比結(jié)果，其中10mgs-01和10mgmdc-405，與5.7mg多西紫杉醇為等摩爾。圖2為本專利s-01、多西紫杉醇、多西紫杉醇+mda-1及多西紫杉醇+mda-1-linker小鼠乳腺癌4t1肺轉(zhuǎn)移模型試驗對比結(jié)果，其中，2a為乳腺瘤重對比結(jié)果，2b為肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)對比結(jié)果，其中10mgs-01與5.7mg多西紫杉醇為等摩爾。圖3：s-01、多西紫杉醇、多西紫杉醇+mda-1及多西紫杉醇+mda-1-linker對人乳腺癌mda-mb-231裸鼠異種移植瘤的抑制作用，其中，3a為瘤體積對比結(jié)果，3b為瘤重對比結(jié)果，其中dtx代表多西紫杉醇，5mgs-01與2.85mg多西紫杉醇為等摩爾。具體實施方式以下通過多西紫杉醇(docetaxel)與胞壁酰二肽(mdp)簡化物的共綴物合成和生物學(xué)的優(yōu)選實施例來具體說明本發(fā)明的各個方面和特征。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該理解，這些實施例只是用于說明目的，而不限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的保護范圍只受權(quán)利要求書的限制。在不背離權(quán)利要求書范圍的條件下，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對本發(fā)明的各個方面進行各種修改和改進，這些修改和改進也屬于本發(fā)明的保護范圍。另外，需要注意的是，除非特別指明，下面實施例中所用的各種材料和試劑都是本領(lǐng)域中常用的材料和試劑，可以通過常規(guī)的商業(yè)途徑獲得；所用的中間體可以通過常規(guī)的商業(yè)途徑獲得或通過公知的方法制備；所用方法均為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)方法?；瘜W(xué)實施例實施列1：固相合成胞壁酰二肽簡化物mda-1(通用步驟2)1h-nmr(500mhz,dmso-d6):12.59(1h,br.s),8.47(1h,d,j＝6.8hz),8.24(1h,d,j＝8.1hz),8.11(1h,d,j＝7.8hz),7.76(1h,dd,j＝8.8,6.2hz),7.73-7.63(3h,m),7.55(1h,dd,j＝8.8,2.6hz),7.37-7.27(2h,m),7.13(1h,s),6.78(1h,d,j＝15.7hz),4.42(1h,q,j＝6.9hz),4.15(2h,m),2.77(2h,m),2.16(2h,t,j＝8.0hz),1.97(1h,m),1.71(2h,m),1.60-1.45(3h,m),1.40-1.20(6h,m).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc23h32n5o6fcl[m-cf3coo]+528.2020；found528.2023.實施列2：固相合成胞壁酰二肽簡化物mda-2(通用步驟2)1h-nmr(500mhz,dmso-d6):12.58(1h,br.s),8.38(1h,d,j＝6.8hz),8.21(1h,d,j＝8.1hz),8.10(1h,d,j＝7.8hz),7.70(3h,s),7.59(2h,d,j＝8.3hz),7.48(2h,d,j＝8.3hz),7.40(1h,d,j＝15.8hz),7.31(1h,s),7.11(1h,s),6.77(1h,d,j＝15.8hz),4.40(1h,q,j＝6.7hz),4.15(2h,m),2.76(2h,m),2.16(2h,t,j＝8.0hz),1.96(1h,m),1.71(2h,m),1.60-1.45(3h,m),1.40-1.20(6h,m).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc23h33n5o6cl[m-cf3coo]+510.2114；found510.2116.實施列3：固相合成胞壁酰二肽簡化物mda-3(通用步驟2)1h-nmr(500mhz,dmso-d6):12.58(1h,br.s),8.54(1h,d,j＝6.1hz),8.25(1h,d,j＝7.7hz),8.12(1h,d,j＝7.3hz),7.96(1h,s),7.85-7.60(4h,m),7.53(1h,d,j＝10.5hz),7.44(1h,d,j＝15.9hz),7.40-7.30(2h,m),7.13(1h,s),6.87(1h,d,j＝15.9hz),4.40(1h,q,j＝6.7hz),4.15(2h,m),2.76(2h,m),2.16(2h,t,j＝8.0hz),1.96(1h,m),1.71(2h,m),1.60-1.45(3h,m),1.40-1.20(6h,m).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc23h32n5o6fcl[m-cf3coo]+528.2020；found528.1924.實施列4：固相合成胞壁酰二肽簡化物mda-4(通用步驟2)hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc24h36n5o6[m-cf3coo]+490.2660；found490.2666.實施列5：固相合成胞壁酰二肽簡化物mda-5(通用步驟2)hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc24h33n6o6[m-cf3coo]+501.2456；found501.2446.實施列6：固相合成胞壁酰二肽簡化物mda-6(通用步驟2)hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc21h32n5o6s[m-cf3coo]+482.2068；found482.2053.實施例7：s-01的合成(通用合成步驟3)1h-nmr(500mhz,dmso-d6):12.49(1h,br.s),8.45(1h,d,j＝6.7hz),8.25(1h,d,j＝8.0hz),8.09(1h,d,j＝7.5hz),7.99(2h,d,j＝7.5hz),7.90-7.80(2h,m),7.80-7.70(2h,m),7.70-7.60(3h,m),7.54(1h,dd,j＝2.2,8.7hz),7.45-7.30(6h,m),7.18(1h,t,j＝6.7hz),7.11(1h,s),6.79(1h,d,j＝15.7hz),5.79(1h,t,j＝8.2hz),5.41(1h,d,j＝6.9hz),5.15-4.85(6h,m),4.50-4.38(2h,m),4.20-4.10(2h,m),4.10-3.95(3h,m),3.64(1h,d,j＝6.5hz),3.02(2h,m),2.70-2.55(2h,m),2.38(2h,t,j＝6.9hz),2.30-2.05(6h,m),1.98(1h,m),1.85(1h,m),1.78-1.60(6h,m),1.60-1.47(5h,m),1.45-1.20(16h,m),0.99(6h,s).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc70h86n6o22fclna[m+na]+1439.5365；found1439.5358.實施例8：s-01-na鈉鹽的合成將s-01(283mg,0.2mmol)，溶于50ml乙腈/水＝1/1(v/v)的混合溶劑中，之后將反應(yīng)瓶放入-10℃的低溫反應(yīng)器中，攪拌5min，向上述溶液中滴加0.002mmol/ml的naoh水溶液100ml,滴加完畢后快速將所得溶液于-20℃反應(yīng)4小時；凍干，得到白色粉末固體290mg。1h-nmr(500mhz,dmso-d6):8.45(1h,d,j＝6.7hz),8.25(1h,d,j＝8.0hz),8.09(1h,d,j＝7.5hz),7.99(2h,d,j＝7.5hz),7.90-7.80(2h,m),7.80-7.70(2h,m),7.70-7.60(3h,m),7.54(1h,dd,j＝2.2,8.7hz),7.45-7.30(6h,m),7.18(1h,t,j＝6.7hz),7.11(1h,s),6.79(1h,d,j＝15.7hz),5.79(1h,t,j＝8.2hz),5.41(1h,d,j＝6.9hz),5.15-4.85(6h,m),4.50-4.38(2h,m),4.20-4.10(2h,m),4.10-3.95(3h,m),3.64(1h,d,j＝6.5hz),3.02(2h,m),2.70-2.55(2h,m),2.38(2h,t,j＝6.9hz),2.30-2.05(6h,m),1.98(1h,m),1.85(1h,m),1.78-1.60(6h,m),1.60-1.47(5h,m),1.45-1.20(16h,m),0.99(6h,s).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc70h85n6o22fcl[m-na]-1415.5395；found1415.5380.實施例9：s-01-ca鈣鹽的合成將s-01(283mg,0.2mmol)，溶于20ml乙腈/水＝1/1(v/v)的混合溶劑中，之后將反應(yīng)瓶放入0℃的低溫反應(yīng)器中，攪拌5min，向上述溶液中滴加0.01mmol/ml的ca(oh)2水溶液20ml，滴加完畢后快速將所得溶液倒入到80ml冰水中，降溫至-20℃反應(yīng)4小時；凍干，得到白色粉末固體260mg。1h-nmr(500mhz,dmso-d6):8.45(1h,d,j＝6.7hz),8.25(1h,d,j＝8.0hz),8.09(1h,d,j＝7.5hz),7.99(2h,d,j＝7.5hz),7.90-7.80(2h,m),7.80-7.70(2h,m),7.70-7.60(3h,m),7.54(1h,dd,j＝2.2,8.7hz),7.45-7.30(6h,m),7.18(1h,t,j＝6.7hz),7.11(1h,s),6.79(1h,d,j＝15.7hz),5.79(1h,t,j＝8.2hz),5.41(1h,d,j＝6.9hz),5.15-4.85(6h,m),4.50-4.38(2h,m),4.20-4.10(2h,m),4.10-3.95(3h,m),3.64(1h,d,j＝6.5hz),3.02(2h,m),2.70-2.55(2h,m),2.38(2h,t,j＝6.9hz),2.30-2.05(6h,m),1.98(1h,m),1.85(1h,m),1.78-1.60(6h,m),1.60-1.47(5h,m),1.45-1.20(16h,m),0.99(6h,s).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc70h85n6o22fcl[m-1/2ca]-1415.5395；found1415.5386.實施例10：s-01-me甲酯的合成反應(yīng)試劑與條件：(a)socl2,meoh,0℃-rt,12h；(b)hosu,edc·hcl,dmso,rt,12h；(c)nmm,dmso,rt,12h.反應(yīng)操作：(a)冰浴下，將mda-1(6.0g,9.4mmol)溶于80ml甲醇中，之攪拌5min，向上述反應(yīng)器中緩慢滴加二氯亞砜(0.75ml,10.37mmol)，滴加完畢，反應(yīng)體系升至室溫，反應(yīng)12小時。則于30℃減壓蒸干溶劑，用dcm溶解后再于30℃下減壓蒸干dcm，所得固體產(chǎn)物在室溫下用真空干燥24小時，直接用與下一步反應(yīng)。(b)和(c)步驟參見通用合成步驟3，最后制備得到s-01-me的純品4.5g，產(chǎn)率34％(三步收率)。1h-nmr(500mhz,dmso-d6):8.42(1h,d,j＝6.8hz),8.20(2h,t,j＝7.8hz),7.98(2h,d,j＝7.5hz),7.90-7.60(7h,m),7.53(1h,dd,j＝2.6,8.8hz),7.45-7.25(6h,m),7.18(1h,t,j＝6.8hz),7.09(1h,s),6.78(1h,d,j＝15.7hz),5.79(1h,t,j＝8.3hz),5.40(1h,d,j＝7.1hz),5.09(3h,s),4.98(1h,d,j＝7.1hz),4.90(2h,d,j＝10.4hz),4.50-4.35(2h,m),4.25-4.10(2h,m),4.10-3.95(3h,m),3.64(1h,d,j＝7.0hz),3.61(3h,s),3.01(2h,q,j＝5.9hz),2.70-2.55(2h,m),2.38(2h,t,j＝7.1hz),2.35-2.20(4h,m),2.17(2h,t,j＝8.0hz),1.98(1h,m),1.85(1h,m),1.78-1.60(6h,m),1.60-1.55(2h,m),1.52(3h,s),1.45-1.20(16h,m),0.99(6h,s).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc71h87n6o22fcl[m-h]-1429.5551；found1429.5549.實施例11：s-02的合成(通用合成步驟3)1h-nmr(500mhz,dmso-d6):12.42(1h,br.s),8.48(1h,d,j＝5.2hz),8.21(1h,d,j＝7.3hz),8.06(1h,d,j＝6.7hz),7.96(2h,d,j＝6.6hz),7.90-7.75(2h,m),7.75-7.55(4h,m),7.51(1h,d,j＝10.3hz),7.45-7.20(6h,m),7.20-7.00(2h,m),6.83(1h,d,j＝16.0hz),5.76(1h,m),5.37(1h,d,j＝6.0hz),5.15-4.80(6h,m),4.50-4.30(2h,m),4.20-3.90(5h,m),3.61(1h,m),2.98(2h,m),2.70-2.55(2h,m),2.40-2.30(2h,m),2.30-2.05(6h,m),1.94(1h,m),1.80(1h,m),1.75-1.57(6h,m),1.57-1.43(5h,m),1.42-1.15(16h,m),0.95(6h,s).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc70h86n6o22fclna[m+na]+1439.5365；found1439.5360.實施例12：s-03的合成(通用合成步驟3)1h-nmr(500mhz,dmso-d6):12.45(1h,br.s),8.28(1h,d,j＝6.6hz),8.18(1h,d,j＝7.8hz),8.06(1h,d,j＝7.6hz),7.96(2h,d,j＝7.5hz),7.90-7.75(2h,m),7.70(1h,t,j＝7.1hz),7.63(2h,t,j＝7.3hz),7.45-7.25(8h,m),7.20(2h,d,j＝7.6hz),7.16(1h,t,j＝6.6hz),7.08(1h,s),6.67(1h,d,j＝15.7hz),5.76(1h,t,j＝8.1hz),5.38(1h,d,j＝6.8hz),5.06(3h,s),4.99(1h,d,j＝6.8hz),4.95-4.80(2h,m),4.45-4.30(2h,m),4.20-4.05(2h,m),4.05-3.90(3h,m),3.62(1h,d,j＝6.3hz),2.98(2h,m),2.70-2.55(2h,m),2.36(2h,t,j＝6.7hz),2.30(3h,s),2.26-2.05(6h,m),1.94(1h,m),1.82(1h,m),1.75-1.57(6h,m),1.57-1.43(5h,m),1.42-1.15(16h,m),0.95(6h,s).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc71h91n6o22[m+h]+1379.6186；found1379.6180.實施例13：s-04的合成(通用合成步驟3)1h-nmr(500mhz,dmso-d6):12.54(1h,br.s),8.99(1h,d,j＝5.2hz),8.64(1h,d,j＝6.9hz),8.45(1h,d,j＝5.2hz),8.30-8.10(4h,m),8.03(2h,d,j＝5.2hz),7.98-7.85(3h,m),7.85-7.65(4h,m),5.84(1h,m),5.46(1h,d,j＝6.0hz),5.25-4.90(6h,m),4.70(1h,m),4.50(1h,s),4.30-4.00(5h,m),3.69(1h,d,j＝6.8hz),3.07(2h,m),2.80-2.65(2h,m),2.50-2.35(2h,m),2.35-2.15(6h,m),2.03(1h,m),1.90(1h,m),1.75-1.57(6h,m),1.57-1.43(5h,m),1.42-1.15(16h,m),1.03(6h,s).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc71h87n7o22na[m+na]+1412.5802；found1412.5794.實施例14：s-05的合成(通用合成步驟3)1h-nmr(500mhz,dmso-d6):12.47(1h,br.s),8.35(1h,d,j＝5.1hz),8.19(1h,d,j＝7.1hz),8.07(1h,d,j＝6.8hz),7.99(2h,d,j＝6.6hz),7.90-7.80(1h,m),7.78-7.50(5h,m),7.50-7.33(5h,m),7.30(1h,s),7.20-7.05(3h,m),6.50(1h,d,j＝15.6hz),5.79(1h,t,j＝8.1hz),5.40(1h,d,j＝6.8hz),5.06(3h,s),4.99(1h,d,j＝6.8hz),4.95-4.80(2h,m),4.50-4.30(2h,m),4.20-4.10(2h,m),4.10-3.90(3h,m),3.63(1h,d,j＝6.3hz),3.01(2h,s),2.70-2.55(2h,m),2.38(2h,t,j＝6.7hz),2.30-2.05(6h,m),1.96(1h,m),1.84(1h,m),1.75-1.57(6h,m),1.57-1.43(5h,m),1.42-1.15(16h,m),0.98(6h,s).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc68h85n6o22s[m-h]-1369.5443；found1369.5445.實施例15：s-06的合成(通用合成步驟3)1h-nmr(500mhz,dmso-d6):12.48(1h,br.s),8.98(1h,d,j＝7.0hz),8.25-8.15(2h,m),8.10(1h,d,j＝7.4hz),7.98(2h,d,j＝7.3hz),7.93-7.80(3h,m),7.75-7.60(4h,m),7.45-7.30(4h,m),7.27(1h,s),7.18(1h,t,j＝4.8hz),7.11(1h,s),5.78(1h,t,j＝8.1hz),5.40(1h,d,j＝7.0hz),5.08(3h,s),5.01(1h,d,j＝6.4hz),4.95-4.80(2h,m),4.50-4.30(2h,m),4.19(1h,q,j＝5.4hz),4.11(1h,q,j＝5.4hz),4.08-3.95(3h,m),3.63(1h,d,j＝6.6hz),3.01(2h,s),2.70-2.55(2h,m),2.38(2h,t,j＝6.8hz),2.30-2.05(6h,m),1.95(1h,m),1.83(1h,m),1.78-1.60(6h,m),1.60-1.43(5h,m),1.42-1.15(16h,m),0.98(6h,s).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc68h83cln7o24[m-h]-1416.5183；found1416.5167.實施例16：s-07的合成(通用合成步驟3)1h-nmr(500mhz,dmso-d6):12.49(1h,br.s),8.48(1h,d,j＝6.7hz),8.24(1h,d,j＝8.1hz),8.09(1h,d,j＝7.6hz),7.99(2h,d,j＝7.4hz),7.93-7.80(2h,m),7.77-7.60(4h,m),7.50-7.30(7h,m),7.18(2h,t,j＝7.2hz),7.12(1h,s),6.82(1h,d,j＝16.0hz),5.78(1h,t,j＝8.6hz),5.40(1h,d,j＝7.0hz),5.15-4.80(6h,m),4.50-4.35(2h,m),4.20-3.95(5h,m),3.63(1h,d,j＝6.7hz),3.01(2h,m),2.70-2.55(2h,m),2.38(2h,t,j＝7.0hz),2.30-2.05(6h,m),1.98(1h,m),1.84(1h,m),1.78-1.60(6h,m),1.60-1.45(5h,m),1.40-1.20(16h,m),0.98(6h,s).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc70h85n6o22f2[m-h]-1399.5690；found1399.5688.實施例17：s-08的合成(通用合成步驟3)1h-nmr(500mhz,dmso-d6):12.49(1h,br.s),8.34(1h,d,j＝6.8hz),8.23(1h,d,j＝8.1hz),8.09(1h,d,j＝7.5hz),7.98(2h,d,j＝7.4hz),7.91-7.80(2h,m),7.75-7.60(4h,m),7.55-7.28(8h,m),7.18(1h,t,j＝7.1hz),7.11(1h,s),6.75(1h,d,j＝15.8hz),5.78(1h,t,j＝8.6hz),5.40(1h,d,j＝7.1hz),5.15-4.85(6h,m),4.50-4.35(2h,m),4.20-3.95(5h,m),3.63(1h,d,j＝7.0hz),3.00(2h,m),2.70-2.55(2h,m),2.37(2h,t,j＝7.0hz),2.30-2.05(6h,m),1.98(1h,m),1.83(1h,m),1.78-1.60(6h,m),1.60-1.45(5h,m),1.40-1.20(16h,m),0.98(6h,s).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc70h85n6o22f2[m-h]-1399.5690；found1399.5692.實施例18：s-09的合成(通用合成步驟3)1h-nmr(500mhz,dmso-d6):12.49(1h,br.s),8.35(1h,d,j＝6.8hz),8.24(1h,d,j＝8.0hz),8.10-7.95(3h,m),7.90-7.80(2h,m),7.78-7.60(4h,m),7.60-7.30(9h,m),7.17(1h,t,j＝7.1hz),7.10(1h,s),6.83(1h,d,j＝15.9hz),5.78(1h,t,j＝8.6hz),5.40(1h,d,j＝7.0hz),5.15-4.85(6h,m),4.50-4.35(2h,m),4.20-3.95(5h,m),3.63(1h,d,j＝7.0hz),3.00(2h,m),2.70-2.55(2h,m),2.38(2h,t,j＝7.1hz),2.30-2.05(6h,m),1.98(1h,m),1.82(1h,m),1.78-1.60(6h,m),1.60-1.45(5h,m),1.40-1.20(16h,m),0.98(6h,s).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc70h87n6o22fk[m+k]+1421.5495；found1421.5627.實施例19：s-10的合成(通用合成步驟3)1h-nmr(500mhz,dmso-d6):12.48(1h,br.s),9.85(1h,s),8.20(2h,dd,j＝11.3,7.6hz),8.08(1h,d,j＝7.8hz),7.98(2h,d,j＝7.4hz),7.90-7.80(2h,m),7.72(1h,t,j＝7.2hz),7.65(2h,t,j＝7.4hz),7.45-7.25(8h,m),7.18(1h,t,j＝7.0hz),7.10(1h,s),6.79(2h,d,j＝8.5hz),6.52(1h,d,j＝15.8hz),5.78(1h,t,j＝8.6hz),5.40(1h,d,j＝7.1hz),5.15-4.85(6h,m),4.50-4.35(2h,m),4.20-3.95(5h,m),3.63(1h,d,j＝6.8hz),3.01(2h,m),2.70-2.55(2h,m),2.37(2h,t,j＝7.1hz),2.30-2.05(6h,m),1.99(1h,m),1.82(1h,m),1.78-1.60(6h,m),1.60-1.45(5h,m),1.40-1.20(16h,m),0.98(6h,s).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc70h88n6o23na[m+na]+1403.5799；found1403.5795.實施例20：s-11的合成(通用合成步驟3)1h-nmr(500mhz,dmso-d6):12.49(1h,br.s),8.75(1h,s),8.56(1h,d,j＝4.1hz),8.42(1h,d,j＝6.8hz),8.25(1h,d,j＝8.0hz),8.09(1h,d,j＝6.9hz),7.98(3h,d,j＝7.7hz),7.93-7.80(2h,m),7.80-7.60(3h,m),7.50-7.30(7h,m),7.18(1h,d,j＝6.6hz),7.12(1h,s),6.87(1h,d,j＝16.0hz),5.78(1h,t,j＝8.6hz),5.40(1h,d,j＝6.9hz),5.15-4.85(6h,m),4.50-4.35(2h,m),4.20-3.95(5h,m),3.63(1h,d,j＝6.8hz),3.01(2h,m),2.70-2.55(2h,m),2.37(2h,t,j＝6.8hz),2.30-2.05(6h,m),1.96(1h,m),1.81(1h,m),1.78-1.60(6h,m),1.60-1.45(5h,m),1.40-1.20(16h,m),0.98(6h,s).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc69h86n7o22[m-h]-1364.5831；found1364.5820.實施例21：s-12的合成(通用合成步驟3)1h-nmr(300mhz,dmso-d6):12.44(1h,br.s),8.62(1h,d,j＝4.0hz),8.57(1h,d,j＝6.7hz),8.21(1h,d,j＝8.2hz),8.09(1h,d,j＝7.7hz),7.99(2h,d,j＝7.1hz),7.93-7.80(3h,m),7.78-7.62(3h,m),7.58(1h,d,j＝7.8hz),7.50-7.28(7h,m),7.16(3h,m),5.78(1h,t,j＝8.5hz),5.40(1h,d,j＝7.1hz),5.15-4.85(6h,m),4.50-4.35(2h,m),4.20-3.95(5h,m),3.63(1h,d,j＝7.1hz),3.01(2h,m),2.70-2.55(2h,m),2.38(2h,t,j＝7.0hz),2.30-2.05(6h,m),1.98(1h,m),1.82(1h,m),1.78-1.60(6h,m),1.60-1.45(5h,m),1.40-1.20(16h,m),0.98(6h,s).hr-ms(esi-tof)m/z:calcdforc69h86n7o22[m-h]-1364.5831；found1364.5826.本發(fā)明所公布的化合物s-01及文獻報道的mdc-405按照藥典溶解度標準操作，試驗結(jié)果表明：隨著緩沖液的ph值的增大，其溶解度逐漸增加，當達到ph值6.5以上，s-01的溶解度達到溶解級別，表現(xiàn)出更好的親水性，從而表現(xiàn)出明顯優(yōu)異的成藥性。試驗結(jié)果參見附表一。備注：極易溶解：1g溶質(zhì)在不到1ml溶劑中溶解；易溶：1g溶質(zhì)在1～10ml溶劑中溶解；溶解：1g溶質(zhì)在10～30ml溶劑中溶解；略溶：1g溶質(zhì)在30～100ml溶劑中溶解；微溶：1g溶質(zhì)在100～1000ml溶劑中溶解；極微溶解：1g溶質(zhì)在1000～10000ml溶劑中溶解；幾乎不溶或不溶指1g溶質(zhì)在10000ml溶劑中不能完全溶解。生物學(xué)實施例體外活性測試部分實施例22：一、實驗細胞：nci-h460，人大細胞肺癌細胞；a549，人非小細胞肺癌細胞二、實驗材料2.1細胞培養(yǎng)相關(guān)材料及試劑2.296孔板2.3分液器2.4srb試劑盒2.4.1三羥甲基氨基甲烷(trizmabase):v900483-500g，lot#wxbb4482v，pcode:1014219132.4.2三氯乙酸t(yī)richloroaceticacid(tca):t9159-500g，lot#bcbl5964v，pcode:101466472.4.3磺酰羅丹明bsulforhodamineb(srb):341738-1g，lot#20223eav，pcode:10018905672.5吸水紙2.6排槍及槍頭2.7滅菌水2.8二甲亞砜dimethylsulphoxide(dmso):d2438，lotrnbd1974，exp:04/20162.9乙酸aceticacid:338826-500ml，lot#shbd0354v，pcode:1001616171三、實驗方法3.1細胞復(fù)蘇①水浴鍋升溫至37℃，10％fbs及1％青霉素-鏈霉素的rpmi-1640培養(yǎng)基37℃預(yù)熱；開啟離心機，使溫度降至4℃；②在安全柜內(nèi)取約5ml10％fbs及1％青霉素-鏈霉素的rpmi-1640培養(yǎng)基至15ml離心管中，待用；③從液氮罐內(nèi)取出凍存細胞至盛有37℃水的量杯中，37℃水浴鍋內(nèi)振搖凍存管，至約90％-95％凍存液溶化；④將含細胞的凍存液移至②的離心管中，1000rpm/min，離心5min；⑤棄上清，加入約1ml10％fbs及1％青霉素-鏈霉素的rpmi-1640培養(yǎng)基重懸混勻細胞，移至含4ml10％fbs及1％青霉素-鏈霉素的rpmi-1640培養(yǎng)基的25cm2培養(yǎng)瓶中；⑥置于37℃，5％co2，相對濕度100％的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3.2細胞傳代①開啟離心機，使溫度降至4℃；安全柜內(nèi)棄去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，pbs沖洗培養(yǎng)瓶1-2次；②加入0.25％胰酶-edta1ml，37℃消化；③消化至可見少部分細胞脫落，約2.5min，加入10ml10％fbs及1％青霉素-鏈霉素的rpmi-1640培養(yǎng)基終止消化，吹散細胞，移至15ml離心管中；④1000rpm/min，4℃，離心5min；⑤棄上清，加入1ml10％fbs及1％青霉素-鏈霉素的rpmi-1640培養(yǎng)基重懸，按1：3傳代至75cm2中；⑥置于37℃，5％co2，相對濕度100％的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3.3srb試劑盒及試劑的準備10mmtrisbase配制(ddh2o)：精密稱取0.1211g三羥甲基氨基甲烷，加入ddh2o定容至100ml。0.4％srb的配制(1％醋酸):精密稱取0.4gsrb，加入1％醋酸定容至100ml。1％醋酸：精密量取5ml冰醋酸，加入ddh2o定容至500ml。tca(50％)(ddh2o)：精密稱取50gtca，加入ddh2o定容至100ml。3.4細胞接種(收集細胞，鋪板)h460細胞或a549培養(yǎng)于含10％fbs及1％青霉素-鏈霉素的rpmi-1640培養(yǎng)基中。取對數(shù)生長期細胞，用5％-1640完全培養(yǎng)基重懸，將細胞密度調(diào)整為7.5*104個/ml，100μl/孔，接種于96孔板，將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。3.5藥物(化合物)的配制3.5.1待測化合物貯存液的配制方法3.5.2待測化合物貯存液的配制方法：將20mm貯存液進行十倍稀釋，得2*10-3m稀釋液，同理，依次稀釋得2*10-4m，2*10-5m，2*10-6m，2*10-7m，2*10-8m，2*10-9m稀釋液，避光，4℃保存3.6平行對照組細胞固定3.6.150％tca4℃放置1h3.6.2向平行對照組板內(nèi)加入25μl/welltca，4℃放置1h3.6.3去離子水洗板5次，自然晾干3.7細胞給藥3.7.1溶媒對照組：取dmso4μl，加入796μl的5％-1640培養(yǎng)基，100μl/孔/板3.7.2受試給藥組：取各濃度貯存液2μl加398μl5％-1640完全培養(yǎng)基，即得10-4m，10-5m，10-6m，10-7m，10-8m，10-9m，10-10m，10-11m，100μl/孔/板，按布局加樣37℃，5％co2，相對濕度100％的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h3.8給藥組細胞固定(藥物處理48h后)3.8.150％tca4℃放置1h3.8.2向受試藥組板內(nèi)加入50μl/welltca，4℃放置1h3.8.3去離子水洗板5次，自然晾干3.9細胞染色3.9.1向板內(nèi)加入100μl/well0.4％srb，室溫靜置10min3.9.21％醋酸洗板5次，自然晾干(去掉未結(jié)合的srb)3.10檢測向板內(nèi)加入150μl/well10mmtris堿液，震蕩5min，與515nm處檢測od值3.11數(shù)據(jù)處理方法將平行對照組od值記為tz，溶媒對照組od值記為c，受試給藥組od值記為ti：1)若ti≥tz，說明細胞加藥后仍然生長生長率％(percentagegrowth)＝[(ti-tz)/(c-tz)]×1002)若ti<tz，說明加藥后細胞被殺死生長率％(percentagegrowth)＝[(ti-tz)/tz]×100用軟件graphpad擬合曲線，并計算gi50。本發(fā)明的公布的優(yōu)選化合物，針對a549和h460人源腫瘤細胞株的實驗結(jié)果表明，該類型共綴物的生長抑制50％值(gi50值)與相對于mdc-405有更小的gi50值，預(yù)測有更好的抗腫瘤效果，實驗結(jié)果參見附表二。表二：gi50體外試驗結(jié)果注：e表示×10n，例如5.06e-08表示5.06×10-8。體內(nèi)活性測試部分實施例23，采用小鼠乳腺癌4t1肺轉(zhuǎn)移模型：(1)細胞培養(yǎng)與腫瘤接種：4t1細胞培養(yǎng)在含有10％胎牛血清(hyclonecorp，usa)、1％谷氨酰胺與1％青-鏈霉素的1640培養(yǎng)基(gibco)中。收集對數(shù)生長期的4t1細胞，調(diào)節(jié)細胞濃度為1.5×106/ml。取雌性balb/c小鼠，于第4乳腺脂肪墊內(nèi)接種4t1細胞，接種體積為0.1ml，即1.5×105/只。分組與給藥：balb/c小鼠乳腺脂肪墊內(nèi)接種4t1乳腺癌細胞，設(shè)接種當天為d0，接種后第4天分組給藥，試驗設(shè)四組：①溶媒對照組(空白對照組)，②s-0110mg/kg組，③dtx(多西紫杉醇)5.7mg/kg組，④mdc-40510mg/kg組。③和④為陽性對照組。每組10只動物。小鼠每周一次尾靜脈注射給藥，連續(xù)4周。給藥過程中監(jiān)測動物體重及瘤體積。每2-3天稱量動物體重，游標卡尺測量乳腺腫瘤的長、短徑，以公式：(1/2)×長徑×(短徑)2計算腫瘤大小。接瘤后第28天(d28)結(jié)束實驗，眼球采血后頸椎脫臼法處死小鼠，稱乳腺瘤重、肺重，計數(shù)肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)。瘤重實驗結(jié)果如圖1a所示，肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)實驗結(jié)果如圖1b所示。如圖1a和1b所示，s-01、mdc-405及多西紫杉醇相對于空白對照組顯著抑制乳腺瘤重和肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)，更為重要的是，s-01相對于陽性對照組多西紫杉醇的抑制具有顯著差異，而mdc-405相對于多西紫杉醇的抑制未表現(xiàn)顯著差異，由此可見s-01相對于mdc-405及多西紫杉醇均具有更好的抑制瘤和癌轉(zhuǎn)移作用。(2)細胞培養(yǎng)與腫瘤接種：4t1細胞培養(yǎng)在含有10％胎牛血清(hyclonecorp，usa)、1％谷氨酰胺與1％青-鏈霉素的1640培養(yǎng)基(gibco)中。收集對數(shù)生長期的4t1細胞，調(diào)節(jié)細胞濃度為1.5×106/ml。取雌性balb/c小鼠，于第4乳腺脂肪墊內(nèi)接種4t1細胞，接種體積為0.1ml，即1.5×105/只。分組與給藥：balb/c小鼠乳腺脂肪墊內(nèi)接種4t1乳腺癌細胞，設(shè)接種當天為d0，接種后第4天分組給藥，試驗設(shè)五組：①溶媒對照組(空白對照組)，②s-0110mg/kg組，③dtx(多西紫杉醇)5.7mg/kg組，④dtx(5.7mg/kg)+mda-1(4.53mg/kg)組，⑤dtx(5.7mg/kg)+mda-1-linker(4.43mg/kg)組。③、④和⑤為陽性對照組。每組10只動物。小鼠每周一次尾靜脈注射給藥，連續(xù)4周。給藥過程中監(jiān)測動物體重及瘤體積。每2-3天稱量動物體重，游標卡尺測量乳腺腫瘤的長、短徑，以公式：(1/2)×長徑×(短徑)2計算腫瘤大小。接瘤后第28天(d28)結(jié)束實驗，眼球采血后頸椎脫臼法處死小鼠，稱乳腺瘤重、肺重，計數(shù)肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)。瘤重實驗結(jié)果如圖2a所示，肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)實驗結(jié)果如圖2b所示。如圖2a所示，s-01、多西紫杉醇、多西紫杉醇+mda-1及多西紫杉醇+mda-1-linker相對于空白對照組顯著抑制乳腺瘤重增加，更為重要的是，s-01相對于陽性對照組多西紫杉醇、多西紫杉醇+mda-1及多西紫杉醇+mda-1-linker的抑制均具有顯著差異，說明s-01相對于陽性對照組均具有更好的抑瘤作用。如圖2b所示，s-01、多西紫杉醇、多西紫杉醇+mda-1及多西紫杉醇+mda-1-linker相對于空白對照組顯著抑制肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)增加，更為重要的是，s-01相對于陽性對照組多西紫杉醇的抑制具有顯著差異，相對于多西紫杉醇+mda-1及多西紫杉醇+mda-1-linker抑制效果分別增加了27.9％和18.6％，說明s-01相對于陽性對照組均具有更好的抑制癌轉(zhuǎn)移作用。(3)細胞培養(yǎng)與腫瘤接種：balb/c(nu/nu)小鼠，雌性，spf級，4～5周齡，購自廣東實驗動物中心，合格證編號：no.44007200013511，小鼠飼養(yǎng)于深圳信立泰藥業(yè)股份有限公司技術(shù)中心創(chuàng)新藥物研究中心spf級動物實驗室。試驗所用瘤株由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院劉剛教授饋贈，該瘤株為mda-mb-231乳腺癌，在本實驗室復(fù)蘇傳代后的第三代。分組與給藥：選擇腫瘤生長及全身狀況良好的荷瘤動物，頸椎脫臼處死。無菌條件下取出瘤塊，用手術(shù)刀切割成直徑為2-3mm的瘤塊，套管針接種于裸小鼠腋后皮下。腫瘤自然生長，待瘤體積長至100mm3后隨機分組。設(shè)分組給藥日為d0。試驗共設(shè)六組，分別為：①溶媒對照組，②sal-01015mg/kg組,③sal-010110mg/kg組，④dtx2.85mg/kg組，⑤dtx(2.85mg/kg)+mda-1(2.26mg/kg)組，⑥dtx(2.85mg/kg)+mda-1-linker(2.21mg/kg)組。每組8只動物，即日起分別按動物體重開始給藥。各組動物每周靜脈注射給藥1次，共3次。給藥過程中每2-3天測量動物腫瘤長、短徑及體重，以公式：(1/2)×長徑×(短徑)2計算腫瘤體積，分組后第18天(d18)結(jié)束試驗。實驗結(jié)束時將動物頸椎脫臼處死，剝離腫瘤，稱瘤重，計算藥物對腫瘤生長抑制率。計算腫瘤體積(tv)及相對腫瘤體積(rtv)。用t檢驗法比較各組動物腫瘤重量、腫瘤體積、rtv等指標差別的統(tǒng)計學(xué)意義。計算公式如下：腫瘤體積(tv)＝(長×寬2)/2。相對腫瘤體積(rtv)＝vt/vo(其中vo為分籠給藥時測量所得tv，vt為以后每次測量時的tv。)抗腫瘤活性的評價指標為相對腫瘤增殖率t/c(％)，療效評價標準：t/c(％)>40為無效；t/c(％)≤40，并經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理p<0.05為有效。瘤體積實驗結(jié)果如圖3a所示，瘤重實驗結(jié)果如圖3b所示。如圖3a和3b所示，s-01、多西紫杉醇、多西紫杉醇+mda-1及多西紫杉醇+mda-1-linker相對于空白對照組顯著抑制瘤體積和瘤重增加，更為重要的是，s-01相對于陽性對照組多西紫杉醇、多西紫杉醇+mda-1及多西紫杉醇+mda-1-linker的抑制均具有顯著差異，說明s-01相對于陽性對照組均具有更好的抑制瘤作用。通過同樣的實驗發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明其他優(yōu)選的化合物具有s-01類似的抑瘤效果和抑瘤轉(zhuǎn)移效果，但以s-01最為優(yōu)異，從而可以推論，本發(fā)明優(yōu)選的化合物均相對于mdc-405及多西紫杉醇、有更好的抑瘤效果和抑瘤轉(zhuǎn)移效果。注，上述實驗中，mda-1-linker的結(jié)構(gòu)如下：當前第1頁12