本發(fā)明涉及醫(yī)藥原料領(lǐng)域，具體是涉及一種?；切苋パ跄懰岷铣煞椒ā?/p>

背景技術(shù)：

?；切苋パ跄懰嵩?991年由意大利貝思迪大藥廠研制，并首次在意大利上市，臨床主要用于治療膽囊膽固醇結(jié)石、原發(fā)硬化性膽管炎、原發(fā)膽汁性肝硬化和慢性丙型病毒性肝炎等。從分子結(jié)構(gòu)看，?；切苋パ跄懰崾怯尚苋パ跄懰岷团；撬醿刹糠滞ㄟ^酰胺鍵結(jié)合而成的，化學(xué)合成的關(guān)鍵步驟是兩種物質(zhì)中間形成酰胺鍵。

目前?；切苋パ跄懰岬暮铣煞椒ㄖ饕腥悾?1)以熊去氧膽酸為原料，先與氯乙酸乙酯形成混酐或活性酯，再與?；撬岱磻?yīng)合成?；切苋パ跄懰?；(2)熊去氧膽酸和牛磺酸在堿性條件下，使用縮合劑得到?；切苋パ跄懰?；(3)熊去氧膽酸和2,2’-二硫二苯并噻唑在三乙胺和三苯基膦作用下縮合，再與?；撬岱磻?yīng)獲得?；切苋パ跄懰幔蝗欢?，這三種方法均存在生產(chǎn)成本高、合成路線長和有關(guān)物質(zhì)復(fù)雜等問題，同時每種方法也不同程度地存在一定的局限性：如第(1)種方法中存在使用有毒試劑、試劑不穩(wěn)定等不足；第(2)種方法涉及使用價格昂貴的縮合劑；第(3)種方法放大工藝不穩(wěn)定。因此，尋找低成本、工藝優(yōu)良的?；切苋パ跄懰岷铣煞椒?，是目前這一領(lǐng)域急需解決的熱點問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種成本低廉、工藝簡單可控、目標(biāo)產(chǎn)物純度高、有關(guān)物質(zhì)可控及綠色環(huán)保的?；切苋パ跄懰岷铣煞椒?。

為解決上述的技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種?；切苋パ跄懰岷铣煞椒?，包括的步驟如下：

(1)以家禽膽汁或者膽膏為原料，先將其溶解在溶劑中，再經(jīng)溶解除雜、過濾、脫脂、除蛋白、酸化、過離子交換樹脂，得到純度大于95％的?；蛆Z去氧膽酸；

(2)將?；蛆Z去氧膽酸與選擇性氧化劑反應(yīng)得到3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-牛磺酸；

(3)將3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-?；撬崤c選擇性還原劑反應(yīng)得到3α,7β-二羥基膽烷酰-n-?；撬?。

優(yōu)選的，所述步驟(1)的溶解除雜為加入溶劑，所述溶劑為水或堿溶液，所述原料與溶劑的比例為1:5～15(w/v)。

優(yōu)選的，所述堿溶液的濃度為0.05～0.2m。

優(yōu)選的，所述步驟(1)的脫脂為加入脫脂溶劑，所述脫脂溶劑為乙酸乙酯或石油醚。

優(yōu)選的，所述步驟(1)的除蛋白為加入蛋白沉淀劑，所述蛋白沉淀劑為乙醇。

優(yōu)選的，所述步驟(1)的酸化的ph值為2～5。

所述步驟(2)中，將牛磺鵝去氧膽酸溶解在溶劑中，加入選擇性氧化劑，攪拌溶解，室溫反應(yīng)2～6h，反應(yīng)結(jié)束后，除去多余的選擇性氧化劑，去除有機(jī)相溶劑，得到3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-?；撬?。

優(yōu)選的，所述?；蛆Z去氧膽酸與選擇性氧化劑的物料比為1：1～6(mol:mol)。

優(yōu)選的，所述選擇性氧化劑為n-溴代丁二酰亞胺，三氧化鉻吡啶鹽酸鹽或次氯酸鈉。

優(yōu)選的，當(dāng)所述選擇性氧化劑為n-溴代丁二酰亞胺時，所述?；蛆Z去氧膽酸與n-溴代丁二酰亞胺的物料比為1:3(mol:mol)；所述溶劑可以為丙酮、四氫呋喃、二氧六環(huán)、吡啶、二甲亞砜、n,n-二甲基甲酰胺及它們的水溶液中的任意一種；所述水溶液中水與溶劑的體積比為：1:1～5(mol:mol)。

優(yōu)選的，當(dāng)所述選擇性氧化劑為三氧化鉻吡啶鹽酸鹽時，所述?；蛆Z去氧膽酸與三氧化鉻吡啶鹽酸鹽的物料比為1：1.5～2(mol:mol)；所述溶劑為二氯甲烷、吡啶、二甲亞砜、n,n-二甲基甲酰胺。

優(yōu)選的，當(dāng)所述選擇性氧化劑為次氯酸鈉時，所述牛磺鵝去氧膽酸與次氯酸鈉的物料比為1:3；所述溶劑可以為水，丙酮、四氫呋喃、二氧六環(huán)、吡啶、二甲亞砜、n,n-二甲基甲酰胺及它們的水溶液中的任意一種。

所述步驟(3)中，將3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-牛磺酸溶解在溶劑中，加入選擇性還原劑，反應(yīng)結(jié)束后，調(diào)整溶劑水相的ph值至2～5，過濾生成的沉淀，去除溶劑，得到?；切苋パ跄懰岽制贰?/p>

優(yōu)選的，所述3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-牛磺酸與選擇性還原劑的物料比為1：5～30(mol:mol)。

所述3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-?；撬崤c選擇性還原劑的物料比最優(yōu)為1：5(mol:mol)。

優(yōu)選的，所述選擇性還原劑為金屬鈉、硼氫化鈉、硼氫化鉀、叔丁醇鉀、雷尼鎳中的一種或兩種以上。

優(yōu)選的，所述溶劑為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇中的任意一種。

所述選擇性還原劑最優(yōu)為金屬鈉，當(dāng)選擇性還原劑為金屬鈉時，所述最優(yōu)溶劑為丁醇。

優(yōu)選的，所述?；切苋パ跄懰岽制啡芙庠诒c水的混合溶劑中，水與丙酮的體積比為1:5～15，加熱至完全溶解，冷卻至-5～5℃，靜置析晶36h，過濾，濾餅用冰水洗滌，于60℃的條件下干燥，得到純度大于98％的牛磺熊去氧膽酸。

所述水與丙酮的最優(yōu)體積比為1：10～12。

本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的有益效果：以廉價的家禽膽汁或者膽膏為原料，通過兩步反應(yīng)制備得到高附加值的?；切苋パ跄懰?，化學(xué)合成路線短，產(chǎn)率高，目標(biāo)產(chǎn)物純度高，工藝簡單可控，雜質(zhì)少，且減少酸和堿的排放，綠色環(huán)保，有利于實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，在制藥領(lǐng)域具有很好的應(yīng)用前景。

具體實施例

為了更好地闡述本發(fā)明內(nèi)容，下面用若干較佳的具體實施例進(jìn)行說明。但這些具體實施例只是為了說明本發(fā)明的內(nèi)容，而不是對本發(fā)明內(nèi)容進(jìn)行限制。

原理說明

本發(fā)明以家禽膽汁(膽膏)為原料，先通過溶解除雜、脫脂、除蛋白、酸化、過離子交換樹脂等工藝步驟，獲得高純度?；蛆Z去氧膽酸；再通過牛磺鵝去氧膽酸的7-羥基選擇性氧化，獲得3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-?；撬幔煌ㄟ^將3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-?；撬岬?-酮基選擇性還原，獲得3α,7β-二羥基膽烷酰-n-?；撬?，最后通過重結(jié)晶提純，獲得高純度的?；切苋パ跄懰帷?/p>

本發(fā)明的?；切苋パ跄懰岷铣煞椒ㄍㄟ^7-羥基選擇性氧化及7-酮基選擇性還原，實現(xiàn)從家禽膽汁(膽膏)中直接提取?；蛆Z去氧膽酸，此方法還涉及?；蛆Z去氧膽酸的純化技術(shù)以及水溶性甾體化合物的選擇性氧化和選擇性還原技術(shù)的突破，同時省去傳統(tǒng)工藝中提取鵝去氧膽酸的皂化過程和后期縮合反應(yīng)的費用。

本發(fā)明一種牛磺熊去氧膽酸合成方法的合成路線如下：

實施例1

(1)取雞膽膏100g，加入500ml水，攪拌溶解，離心，過濾，濾液用乙酸乙酯洗滌三次(200ml*3)，收集下層溶液；濾液加入溶液量2～3倍乙醇，離心，過濾，濾液濃縮至干，再加入200ml乙醇，離心，過濾，濾液用鹽酸調(diào)ph值至2～5，濾液蒸干，濃縮物加入純水溶解完全，過強(qiáng)酸型離子交換樹脂，收集純度大于95％的?；蛆Z去氧膽酸組分，濃縮得?；蛆Z去氧膽酸約10.3g。

(2)將?；蛆Z去氧膽酸(10.0g,20.0mmol)用50ml的丙酮水溶液(丙酮(v)/水(v)＝4/1)溶解，待溶解完全后慢慢分批加入n-溴代丁二酰亞胺(5.6g,30mmol),室溫攪拌4h；取樣tlc點板，待原料點消失結(jié)束反應(yīng)，減壓蒸去丙酮，用乙酸乙酯萃取，分去有機(jī)層，水相濃縮干得3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-牛磺酸粗品8.2g。

(3)將3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-?；撬岽制?5.0g，12.8mmol)加入到250ml正丁醇中，攪拌升溫至110℃，分次加入金屬鈉(3.0g，130mmol)，攪拌1～2h，取樣tlc中控，待反應(yīng)完全后；反應(yīng)液降至室溫，用濃鹽酸調(diào)ph值至2～5，過濾出沉淀，慢慢加入少量水洗滌，正丁醇相用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓除去正丁醇，得目標(biāo)產(chǎn)物牛磺熊去氧膽酸粗品4.3g。?；切苋パ跄懰岽制酚盟?丙酮(1：12(v：v))混合溶劑重結(jié)晶，得純度大于98％的牛磺熊去氧膽酸。

所述重結(jié)晶過程為：所述牛磺熊去氧膽酸粗品溶解在丙酮與水的混合溶劑中，加熱至完全溶解，冷卻至-5～5℃，靜置析晶36h，過濾，濾餅用冰水洗滌，于60℃的條件下干燥。

實施例2

(1)取雞膽膏100g，加入0.1m的氫氧化鈉水溶液500ml，攪拌溶解，離心，過濾，濾液用乙酸乙酯洗滌三次(200ml*3)，收集下層溶液；濾液加入溶液量2～3倍量的乙醇，離心，過濾，濾液濃縮至干，再加入200ml乙醇，離心，過濾，濾液用鹽酸調(diào)ph值至2～5，濾液蒸干，濃縮物加入純水溶解完全，過強(qiáng)酸型離子交換樹脂，收集純度大于95％的?；蛆Z去氧膽酸組分，濃縮得?；蛆Z去氧膽酸約10.2g。

(2)步驟同實施例1的(2)步驟。

(3)步驟同實施例1的(3)步驟。

實施例3

(1)取雞膽膏100g，加入500ml水，攪拌溶解，離心，過濾，濾液用石油醚洗滌三次(200ml*3)，收集下層；濾液加入溶液量2～3倍的乙醇，離心，過濾，濾液濃縮至干，再加入200ml乙醇，離心，過濾，濾液用鹽酸調(diào)ph值至2～5，濾液蒸干，濃縮物加入純水溶解完全，過強(qiáng)酸型離子交換樹脂，收集純度大于95％的?；蛆Z去氧膽酸組分，濃縮得?；蛆Z去氧膽酸約9.8g。

(2)步驟同實施例1的(2)步驟。

(3)步驟同實施例1的(3)步驟。

實施例4

(1)取雞膽膏100g，加入0.1m的氫氧化鈉水溶液500ml，攪拌溶解，離心，過濾，濾液用石油醚洗滌三次(200ml*3)，收集下層；濾液加入溶液量2～3倍的乙醇，離心，過濾，濾液濃縮至干，再加入200ml乙醇，離心，過濾，濾液用鹽酸調(diào)ph值至2～5，濾液蒸干，濃縮物加入純水溶解完全，過強(qiáng)酸型離子交換樹脂，收集純度大于95％的牛磺鵝去氧膽酸組分，濃縮得牛磺鵝去氧膽酸約9.6g。

(2)步驟同實施例1的(2)步驟。

(3)步驟同實施例1的(3)步驟。

實施例5

(1)同實施例1的(1)步驟。

(2)將?；蛆Z去氧膽酸(10.0g,20.0mmol)用50ml的丙酮水溶液(丙酮(v)/水(v)＝4/1)溶解，待溶解完全后慢慢分批加入n-溴代丁二酰亞胺(11.2g,60mmol),室溫攪拌4h；取樣tlc點板，待原料點消失結(jié)束反應(yīng)，減壓蒸去丙酮，用乙酸乙酯萃取(20ml*2)，分去有機(jī)層，水相濃縮干得3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-?；撬岽制?.6g。

(3)同實施例1的(3)步驟。

實施例6

(1)同實施例1的(1)步驟。

(2)將?；蛆Z去氧膽酸(10.0g,20.0mmol)用50ml的丙酮水溶液(丙酮(v)/水(v)＝4/1)溶解，待溶解完全后慢慢分批加入n-溴代丁二酰亞胺(18.7g,100mmol),室溫攪拌2h；取樣tlc點板，待原料點消失結(jié)束反應(yīng)，減壓蒸去丙酮，用乙酸乙酯萃取，分去有機(jī)層，水相濃縮干得3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-?；撬岽制?.5g。

(3)同實施例1的(3)步驟。

實施例7

(1)同實施例1的(1)步驟。

(2)將?；蛆Z去氧膽酸(10.0g,20.0mmol)用25ml的吡啶溶解，待溶解完全后慢慢分批加入三氧化鉻吡啶鹽酸鹽(12.9g,60mmol),室溫攪拌2h；取樣tlc點板，待原料點消失結(jié)束反應(yīng)，過濾，除去吡啶，濃縮物加乙醇溶解，過濾掉沉淀，粘稠物用水/丙酮(1:12(v：v))混合溶劑重結(jié)晶，得3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-?；撬岽制?.2g。

(3)同實施例1的(3)步驟。

實施例8

(1)同實施例1的(1)步驟。

(2)將?；蛆Z去氧膽酸(10.0g,20.0mmol)用25ml的水溶解，待溶解完全后慢慢分批加入次氯酸鈉(4.5g,60mmol),室溫攪拌4h；取樣tlc點板，待原料點消失結(jié)束反應(yīng)，調(diào)ph＝2-5,濃縮，濃縮物加乙醇溶解，過濾掉沉淀，粘稠物用水/丙酮(1:12(v：v))混合溶劑重結(jié)晶，得3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-牛磺酸粗品7.3g。

(3)同實施例1的(3)步驟。

實施例9

(1)同實施例1的(1)步驟。

(2)同實施例1的(2)步驟。

(3)將3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-?；撬岽制?5.0g，12.8mmol)加入到250ml正丁醇中，攪拌升溫至110℃，分次加入金屬鈉(4.5g，196mmol)，加完之后攪拌，取樣tlc中控，待反應(yīng)完全后；反應(yīng)液降至室溫，用濃鹽酸調(diào)ph值至2～5，過濾出沉淀，慢慢加入少量水洗滌，正丁醇相用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓除去正丁醇，得目標(biāo)產(chǎn)物牛磺熊去氧膽酸粗品4.3g。牛磺熊去氧膽酸粗品用水/丙酮(1:12(v：v))混合溶劑重結(jié)晶，得純度大于98％的牛磺熊去氧膽酸。

重結(jié)晶過程同實施例1的(3)步驟。

實施例10

(1)同實施例1的(1)步驟。

(2)同實施例1的(2)步驟。

(3)將3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-?；撬岽制?5.0g，12.8mmol)加入到250ml正丁醇中，攪拌升溫至110℃，分次加入金屬鈉(6.0g，260mmol)，加完之后攪拌，取樣tlc中控，待反應(yīng)完全后；反應(yīng)液降至室溫，用濃鹽酸調(diào)ph值至2～5，過濾出沉淀，慢慢加入少量水洗滌，正丁醇相用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓除去正丁醇，得目標(biāo)產(chǎn)物?；切苋パ跄懰岽制?.2g。?；切苋パ跄懰岽制酚盟?丙酮(1:12(v：v))混合溶劑重結(jié)晶，得純度大于98％的?；切苋パ跄懰?。

重結(jié)晶過程同實施例1的(3)步驟。

實施例11

(1)同實施例1的(1)步驟。

(2)同實施例1的(2)步驟。

(3)將3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-?；撬岽制?5.0g，12.8mmol)加入到250ml正丁醇中，加入硼氫化鉀(1.1g，20mmol)、叔丁醇鉀(1.7g,16mmol)及雷尼鎳(0.6g,10mmol)，攪拌，通氮氣保護(hù)，在40℃條件下攪拌反應(yīng)，取樣tlc中控，待反應(yīng)完全后；反應(yīng)液降至室溫，用濃鹽酸調(diào)ph值至2～5，過濾出沉淀，慢慢加入少量水洗滌，正丁醇相用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓除去正丁醇，得目標(biāo)產(chǎn)物牛磺熊去氧膽酸粗品干燥，得3.5g牛磺熊去氧膽酸粗品，?；切苋パ跄懰岽制酚盟?丙酮(1:12(v：v))混合溶劑重結(jié)晶，得純度大于98％的?；切苋パ跄懰帷?/p>

重結(jié)晶過程同實施例1的(3)步驟。

實施例12

(1)同實施例1的(1)步驟。

(2)同實施例1的(2)步驟。

(3)將3α-羥基-7-酮基-膽烷酰-n-牛磺酸粗品(5.0g，12.8mmol)加入到250ml正丁醇中，攪拌，分次加入硼氫化鈉(4.8g，128mmol)，加完之后攪拌，取樣tlc中控，待反應(yīng)完全后；反應(yīng)液降至室溫，用濃鹽酸調(diào)ph值至2～5，過濾出沉淀，慢慢加入少量水洗滌，正丁醇相用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓除去正丁醇，得目標(biāo)產(chǎn)物?；切苋パ跄懰岽制?.6g。?；切苋パ跄懰岽制酚盟?丙酮(1:12(v：v))混合溶劑重結(jié)晶，得純度大于98％的牛磺熊去氧膽酸。

重結(jié)晶過程同實施例1(3)。。

經(jīng)檢測，上述實施例得到的?；切苋パ跄懰岬慕Y(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)如下：1hnmr(dmso-d6)δ:0.58(s，3h，24-ch3)，0.85(s，6h，18，19-ch3)，2.60-2.63(t，j＝7.2，2h，3,7-ch)，3.25-3.30(m，4h，ch2ch2so3h)。ir(kbr,ν/cm^-1):3612,3547,3275,2973,2936,2861,1656,1633,1364,1051。ms(apci⁺)m/z:463.5[m-2h2o]⁺。比旋光度：+44.6°(c＝2.0,etoh)。

上述實施例中，也可以是雞膽汁，得到的產(chǎn)品也是一樣的。另外上述實施例中的原料也可是鴨、鵝等家禽或者飛鳥的膽汁或者膽膏，其處理步驟與上述實施例相同，得到的效果也是一樣的。

值得注意的是，本發(fā)明使用的原料和試劑的來源均為市售，本發(fā)明未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件進(jìn)行，或廠商建議的條件進(jìn)行。

上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。