本發(fā)明涉及一種 (S)-或（R）-2-氨基丁酰胺的合成方法，具體涉及一種用轉(zhuǎn)氨酶生物催化制備 (S)-或（R）-2-氨基丁酰胺的綠色合成方法。

背景技術(shù)：

左乙拉西坦是一種高效、毒副作用小的新型抗癲癇藥物，其與多數(shù)抗癲癇藥物相比表現(xiàn)出較強的抗致癲癇性能，并可有效的控制癲癇的發(fā)作，極具開發(fā)價值。S-2-氨基丁酰胺((S)-2-aminobutanamide) 是合成左乙拉西坦的關(guān)鍵手性中間體，目前關(guān)于S-2-氨基丁酰胺的合成制備已有較多的報道。例如，鄭仁朝等發(fā)表了名為“酰胺酶拆分制備左乙拉西坦手性中間體(S)-2-氨基丁酰胺的初步研究”的文章（發(fā)酵科技通訊,FAJIAO KEJI TONGXUN2015,44(3)），該文章涉及酰胺酶拆分制備左乙拉西坦手性中間體(S)-2-氨基丁酰胺的研究報道，篩選獲得了能夠立體選擇性拆分2-氨基丁酰胺合成(S)-2-氨基丁酰胺的重組酰胺酶Dt-Ami6，該重組酶可以將2-氨基丁酰胺拆分成(S)-2-氨基丁酰胺，轉(zhuǎn)化率為60.5%，底物e.e.值為93.6%。專利CN201210515170.4公開了一種S-2-氨基丁酰胺鹽酸鹽的合成方法，包括如下步驟：1）氨化：2-溴丁酸甲酯分別在甲醇氨溶液、無水異丙醇中氨化生成混旋2-氨基丁酰胺；2）拆分：混旋2-氨基丁酰胺通過與L-酒石酸結(jié)合成鹽析出，進行拆分純化；3）釋放成鹽：經(jīng)拆分純化后的粗品直接通氯化氫進行釋放并成鹽，得具光學(xué)活性的S-2-氨基丁酰胺鹽酸鹽，產(chǎn)品收率在45%左右。專利CN201010187180.0公開了一種用酶法制備(S)-2-氨基丁酰胺的方法，以2-氨基丁腈為起始原料，通過腈水合酶催化在緩沖溶液體系中一步制備(S)-2-氨基丁酰胺，該方法的轉(zhuǎn)化率在50%以下，ee值在85%以下。專利CN200610030420.X公開了一種手性藥物左乙拉西坦中間體(S)-(+)-2-氨基丁酰胺鹽酸鹽的合成、拆分與消旋方法，以2-溴丁酸為起始原料，經(jīng)胺化、酯化、氨解、拆分、環(huán)合等反應(yīng)制得目標(biāo)化合物。該方法首先制備混旋的游離堿(±)-2-氨基丁酰胺，再采用半量拆分的方法，與化學(xué)拆分劑結(jié)合成鹽析出，達到分離純化的目的，經(jīng)堿化去除拆分劑，進而得到光學(xué)活性的(S)-(+)-2-氨基丁酰胺鹽酸鹽。該方法混旋的游離堿(±)-2-氨基丁酰胺收率較高，但拆分后所得的(S)-(+)-2-氨基丁酰胺鹽酸鹽收率較低，在40%以下。

從上述現(xiàn)有技術(shù)可以看出，目前S-2-氨基丁酰胺的合成方法大部分都是先合成混旋的2-氨基丁酰胺，然后再采用化學(xué)或者生物的方法進行拆分，該合成思路步驟復(fù)雜、環(huán)境污染大、成本相對較高、拆分產(chǎn)率低，且所得S-2-氨基丁酰胺ee值低，在95%以下，很難達到藥物ee值制備要求。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)中 (S)-或（R）-2-氨基丁酰胺合成方法存在的不足，本發(fā)明提供了一種轉(zhuǎn)氨酶生物催化制備 (S)-或（R）-2-氨基丁酰胺的方法，該方法以轉(zhuǎn)氨酶為催化酶，一步直接合成 (S)-或（R）-2-氨基丁酰胺，無須拆分步驟，工藝簡單，綠色環(huán)保，所得產(chǎn)品產(chǎn)率高，ee值符合藥物制備要求。

本發(fā)明(S)-或（R）-2-氨基丁酰胺的生物催化合成方法，以2-羰基丁酰胺和氨基供體為原料，在轉(zhuǎn)氨酶單酶體系中高效催化2-羰基丁酰胺即可得到高光學(xué)純度的(S)-或（R）-2-氨基丁酰胺。只要選擇合適的氨基供體，無需昂貴的輔酶和其他酶的參與，催化過程理論轉(zhuǎn)化率為100%，大大降低了生產(chǎn)成本，也達到了綠色化工制備要求。

本發(fā)明具體技術(shù)方案如下：

一種轉(zhuǎn)氨酶生物催化制備 (S)-或（R）-2-氨基丁酰胺的方法，該方法是：在氨基供體存在的情況下，以轉(zhuǎn)氨酶為生物催化劑，將2-羰基丁酰胺上的羰基催化為氨基，形成 (S)-或（R）-2-氨基丁酰胺。

下為本發(fā)明制備(S)-2-氨基丁酰胺的反應(yīng)方程式：

本發(fā)明采用生物酶催化高效制備(S)-或（R）-2-氨基丁酰胺，簡單快速，轉(zhuǎn)化率高。所用轉(zhuǎn)氨酶為Cv-ω-TA WT、Cv-ω-TA W60C、Vf- ω-TA、ATA-117和ATA S9 中的任一種。本發(fā)明所用轉(zhuǎn)氨酶均為現(xiàn)有酶，從NCBI（ National Center for Biotechnology Information）上可以得到酶的詳細信息，也可以購買得到相應(yīng)的酶。

進一步的，當(dāng)轉(zhuǎn)氨酶為Cv-ω-TA WT、Cv-ω-TA W60C、Vf- ω-TA和ATA S9 中的任一種時，所得產(chǎn)物為(S)-2-氨基丁酰胺；當(dāng)轉(zhuǎn)氨酶為ATA-117時，所得產(chǎn)物為(R)-2-氨基丁酰胺。

優(yōu)選的，當(dāng)轉(zhuǎn)氨酶為Cv-ω-TA WT、ATA S9 和Vf- ω-TA中的任一種時，催化效果更好。

進一步的，所述氨基供體為異丙胺、苯甲胺、b-苯乙胺、S-丙氨酸或a-苯乙胺。

進一步的，本發(fā)明具體方法包括以下步驟：將氨基供體和2-羰基丁酰胺加入到緩沖溶液中，然后加入轉(zhuǎn)氨酶，在25-40℃下反應(yīng)12-14h，得(S)-或（R）-2-氨基丁酰胺。

上述方法中，轉(zhuǎn)氨酶用量為1-10U。

上述方法中，氨基供體和2-羰基丁酰胺的摩爾比為 1：1~1：20。

上述方法中，所述溶劑為濃度為50 mM、pH=7.0-8.2的 HEPES緩沖溶液，其制備方法可以按現(xiàn)有方法制得。

上述方法中，2-羰基丁酰胺在HEPES緩沖溶液中的濃度為10-50mM。

本發(fā)明以2-羰基丁酰胺為原料，克服了現(xiàn)有技術(shù)中以2-溴丁酸甲酯、2-氨基丁腈、2-溴丁酸等為原料存在的不足，該2-羰基丁酰胺采用發(fā)明人自行研發(fā)的方法進行制備，方法如下：

一種2-羰基丁酰胺的制備方法，該方法以水為溶劑、二甲基亞砜為助溶劑，以碘或碘鹽為催化劑，在堿存在的情況使丁酮、氯化銨和氧化劑反應(yīng)直接生成2-羰基丁酰胺。

上述2-羰基丁酰胺制備方法中，丁酮和氯化銨的物質(zhì)的量之比為1：1.2-1：4.0。其中，氯化銨優(yōu)選過量加入，以增加收率。

上述2-羰基丁酰胺制備方法中，所述催化劑為I₂、CuI、四丁基碘化銨、碘化鉀中的一種或多種，優(yōu)選為四丁基碘化銨。催化劑的用量一般為丁酮的物質(zhì)的量的2-4%。

上述2-羰基丁酰胺制備方法中，所述堿為Na₂CO₃、K₂CO₃、NaHCO₃、CaCO₃、SeCO₃、NaOH、三乙胺或DBU。堿的作用是為反應(yīng)提供堿性環(huán)境，各種堿性能類似，優(yōu)選采用成本較低的Na₂CO₃、NaHCO₃。堿的用量一般為氯化銨的物質(zhì)的量的1.0-1.5倍。

上述2-羰基丁酰胺制備方法中，所述氧化劑為空氣、O₂、H₂O₂和TBHP（過氧化叔丁醇）中的一種或幾種，優(yōu)選為H₂O₂。

上述2-羰基丁酰胺制備方法中，水為主溶劑，二甲基亞砜為助溶劑，加入稍許助溶劑可以促進丁酮的溶解，使反應(yīng)在均相體系下進行。水和二甲基亞砜的體積比為7-10:1，水的用量滿足各物料能夠充分的反應(yīng)，助溶劑的用量滿足丁酮能夠充分的溶解，水和丁酮的用量可以根據(jù)實際需要進行選擇。

上述2-羰基丁酰胺制備方法中，通過對原料和催化劑、堿、溶劑的選擇，可以在較低溫度下進行反應(yīng)，反應(yīng)溫度為25-70℃即可，例如25℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃下均可進行反應(yīng)。反應(yīng)過程中控制反應(yīng)溫度波動幅度為±5℃。溫度過高或過低均會影響產(chǎn)品收率。

上述2-羰基丁酰胺制備方法中，具體包括以下步驟：

（1）將丁酮加入水和二甲基亞砜的混合液中，攪拌均勻；

（2）在步驟（1）的混合物中加入氯化銨、堿和催化劑，先反應(yīng)30-40min，然后加入氧化劑繼續(xù)反應(yīng)，直至丁酮消失，反應(yīng)后萃取反應(yīng)液，得2-羰基丁酰胺。

上述步驟（2）中，加入氯化銨、堿和催化劑后，控制溫度為25-70℃進行反應(yīng)，控制反應(yīng)溫度波動幅度為±5℃。

上述步驟（2）中，氧化劑為空氣或氧氣時，在反應(yīng)過程中持續(xù)向體系中通入空氣或氧氣，直至反應(yīng)完全；氧化劑為H₂O₂時，以過氧化氫水溶液的形式滴加到體系中，滴加時間為30-120min，H₂O₂與丁酮的物質(zhì)的量之比為1.25-5:1；氧化劑為TBHP時，直接一次性加入體系中，TBHP與丁酮的物質(zhì)的量之比為1.25-5:1。

上述步驟（2）中，反應(yīng)后，反應(yīng)液用萃取劑進行萃取，萃取后減壓回收萃取劑，得2-羰基丁酰胺；所述萃取劑為乙醚、甲苯、氯苯、乙酸乙酯、異丙醚、正己烷、甲酸乙酯或環(huán)己烷。回收的萃取劑經(jīng)簡單處理后可以重復(fù)套用。

上述步驟（2）中，采用TLC硅膠板跟蹤監(jiān)測反應(yīng)進度或采用高效液相色譜監(jiān)測反應(yīng)進度，當(dāng)丁酮消失后反應(yīng)到達終點。一般，加入氧化劑后反應(yīng)8-24h即可達到反應(yīng)終點。以TLC硅膠板（TLC薄層層析法）跟蹤監(jiān)測反應(yīng)進度時，展開劑是乙酸乙酯與正己烷體積比為1~2：5的混合試劑，通過監(jiān)測反應(yīng)中新產(chǎn)生的點的濃度和剩下的點的濃度來判斷反應(yīng)終點。以高效液相色譜監(jiān)測反應(yīng)進度時，通過監(jiān)測液相色譜中2-羰基丁酰胺的形成和丁酮的消失來判斷反應(yīng)終點。

本發(fā)明提供了一種使用轉(zhuǎn)氨酶生物催化制備(S)-或者(R)-2-氨基丁酰胺的方法，該方法以氨基供體和2-羰基丁酰胺為原料，在轉(zhuǎn)氨酶的特異性催化作用下，氨基供體上的氨基轉(zhuǎn)移到2-羰基丁酰胺的羰基上，使2-羰基丁酰胺催化轉(zhuǎn)化為(S)-或者(R)-2-氨基丁酰胺。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

1、本發(fā)明以2-羰基丁酰胺為原料，以生物催化的方法制備(S)-或者(R)-2-氨基丁酰胺。本發(fā)明首次將轉(zhuǎn)氨酶用于羰基酰胺類物質(zhì)的催化，并成功篩選出高效、高選擇性的轉(zhuǎn)氨酶，反應(yīng)選擇性高，產(chǎn)物收率達到85%以上，產(chǎn)物ee值達到>99.5%以上，徹底解決了現(xiàn)有技術(shù)產(chǎn)物產(chǎn)率較低、ee值不高的難題。

2、 本發(fā)明通過生物催化直接將2-羰基丁酰胺轉(zhuǎn)化為(S)-或者(R)-2-氨基丁酰胺，無須先制備2-氨基丁酰胺再通過拆分的方法得到(S)-或者(R)-2-氨基丁酰胺，大大簡化了工藝步驟，具有操作簡單、條件溫和、環(huán)境友好、成本低、反應(yīng)收率高等優(yōu)勢，解決了現(xiàn)有技術(shù)成本高、步驟復(fù)雜、環(huán)境污染大的難題，具有較大的產(chǎn)業(yè)化前景和社會、經(jīng)濟效益。

3、本發(fā)明在轉(zhuǎn)氨酶單酶體系催化下合成(S)-或者(R)-2-氨基丁酰胺，無須昂貴的輔酶和其他酶的參與，只需要選擇合適的氨基供體即可消除反應(yīng)中存在的反應(yīng)平衡，成功合成(S)-或者(R)-2-氨基丁酰胺，大大降低了生產(chǎn)成本。

4、本發(fā)明2-羰基丁酰胺可以在水溶液中由價廉易得的正丁酮制得，成本低、污染小，達到了綠色化工制備要求。

附圖說明

圖1 S-2-氨基丁酰胺的核磁共振氫譜圖。

圖2 S-2-氨基丁酰胺的核磁共振碳譜圖。

具體實施方式

下面，通過具體實施例對本發(fā)明進行進一步說明，應(yīng)該明白的是，下述說明僅是示例性的，并不對其內(nèi)容進行限制。

本發(fā)明所用的轉(zhuǎn)氨酶Cv-ω-TA WT、Cv-ω-TA W60C、Vf- ω-TA、ATA-117、ATA S9 可以從NCBI得到，也可以購自某些商家，例如:ATA-117可以購自Codexis公司。

下述實施例中，所用HEPES緩沖溶液采用現(xiàn)有技術(shù)中公開的方法配制而成，例如，可以使用HEPES和氫氧化鈉配制而成，也可以使用HEPES、NaCl、Na₂HPO₄和氫氧化鈉配制而成。

羰基丁酰胺的制備

實施例1

在25ml的三口圓底燒瓶內(nèi)，加入1.5ml的水，再加入0.2ml的DMSO，之后量取0.5mmol的丁酮加入到圓底燒瓶內(nèi)，攪拌均勻，然后加入2mmol的氯化銨、2mmol的NaHCO₃，再加入0.01mmol的四丁基碘化銨，在50℃下冷凝回流反應(yīng)半個小時。然后向三口圓底燒瓶內(nèi)逐滴滴入雙氧水溶液（含2.5mmol的H₂O₂、1ml水），在2小時滴加完成。滴完后再在50℃下冷凝回流反應(yīng)16小時，期間TLC硅膠板或高效液相色譜監(jiān)測反應(yīng)進度。反應(yīng)完畢后，加入20 mL乙酸乙酯萃取，然后將乙酸乙酯減壓除去，得到黃色固體。對所得黃色固體進行純化，然后進行結(jié)構(gòu)鑒定，其核磁數(shù)據(jù)如下：

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 0.64（t, J = 7.2 Hz, 3H）, 2.44 (d, J = 4.0Hz, 2H), 16.17 (s, 2H), ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃): δ 7.9, 24.9, 165.5, 199.2.

從核磁數(shù)據(jù)可以確定，所得產(chǎn)物即為2-羰基丁酰胺。以丁酮計，2-羰基丁酰胺收率為82%，HPLC測試產(chǎn)品純度為99%。

實施例2

在25ml的三口圓底燒瓶內(nèi)，加入1.5ml的水，再加入0.2ml的DMSO，之后量取0.5mmol的丁酮加入到圓底燒瓶內(nèi)，攪拌均勻，然后加入2mmol的氯化銨、2mmol的NaHCO₃，再加入0.01mmol的四丁基碘化銨，在70℃下冷凝回流反應(yīng)半個小時。然后向三口圓底燒瓶內(nèi)逐滴滴入雙氧水溶液（含2.5mmol的H₂O₂、1ml水），在2小時滴加完成。滴完后再在70℃下冷凝回流反應(yīng)16小時，期間TLC硅膠板或高效液相色譜監(jiān)測反應(yīng)進度。反應(yīng)完畢后，加入20 mL乙酸乙酯萃取，然后將乙酸乙酯減壓除去，得到黃色固體，即為2-羰基丁酰胺。以丁酮計，2-羰基丁酰胺收率為80%，HPLC測試產(chǎn)品純度為99%。

實施例3

在25ml的三口圓底燒瓶內(nèi)，加入1.5ml的水，再加入0.2ml的DMSO，之后量取0.5mmol的丁酮加入到圓底燒瓶內(nèi)，攪拌均勻，然后加入2mmol的氯化銨、2mmol的K₂CO₃，再加入0.01mmol的CuI，在70℃下冷凝回流反應(yīng)半個小時。然后向三口圓底燒瓶內(nèi)逐滴滴入雙氧水溶液（含2.5mmol的H₂O₂、1ml水），在2小時滴加完成。滴完后再在70℃下冷凝回流反應(yīng)14小時。期間TLC硅膠板或高效液相色譜監(jiān)測反應(yīng)進度。反應(yīng)完畢后，加入20 mL乙酸乙酯萃取，然后將乙酸乙酯減壓除去，得到黃色固體，即為2-羰基丁酰胺。以丁酮計，2-羰基丁酰胺收率為73%，HPLC測試產(chǎn)品純度為97%。

實施例4

在25ml的三口圓底燒瓶內(nèi)，加入1.5ml的水，再加入0.2ml的DMSO，之后量取0.5mmol的丁酮加入到圓底燒瓶內(nèi)，攪拌均勻，然后加入2mmol的氯化銨、2mmol的NaHCO₃，再加入0.01mmol的I₂，在70℃下冷凝回流反應(yīng)半個小時。然后向三口圓底燒瓶內(nèi)逐滴滴入雙氧水溶液（含2.5mmol的H₂O₂、1ml水），在2小時滴加完成。滴完后再在70℃下冷凝回流反應(yīng)16小時。期間TLC硅膠板或高效液相色譜監(jiān)測反應(yīng)進度。反應(yīng)完畢后，加入20 mL乙酸乙酯萃取，然后將乙酸乙酯減壓除去，得到黃色固體，即為2-羰基丁酰胺。以丁酮計，2-羰基丁酰胺收率為76%，HPLC測試產(chǎn)品純度為98%。

實施例5

在25ml的三口圓底燒瓶內(nèi)，加入1.5ml的水，再加入0.2ml的DMSO，之后量取0.5mmol的丁酮加入到圓底燒瓶內(nèi)，攪拌均勻，然后加入2mmol的氯化銨、2mmol的CaCO₃，再加入0.01mmol的四丁基碘化銨，在25℃下冷凝回流反應(yīng)半個小時。然后向三口圓底燒瓶內(nèi)逐滴滴入雙氧水溶液（含2.5mmol的H₂O₂、1ml水），在2小時滴加完成。滴完后再在25℃下冷凝回流反應(yīng)24小時。期間TLC硅膠板或高效液相色譜監(jiān)測反應(yīng)進度。反應(yīng)完畢后，加入20 mL乙酸乙酯萃取，然后將乙酸乙酯減壓除去，得到黃色固體，即為2-羰基丁酰胺。以丁酮計，2-羰基丁酰胺收率為75%，HPLC測試產(chǎn)品純度為98%。

采用實施例1的2-羰基丁酰胺制備2-氨基丁酰胺，實施例如下：

實施例6

將20 mL HEPES緩沖溶液（50 mM, Ph = 8.2）加入到100mL的錐形瓶中，然后將0.02克2-羰基丁酰胺加入到錐形瓶中，形成的底物濃度為10mM。然后加入氨基供體異丙胺，使其濃度為30mM，再加入2U的轉(zhuǎn)氨酶Cv-ω-TA WT, 加入完畢，密封，將溫度固定在30℃，搖床中反應(yīng)12小時。期間TLC硅膠板監(jiān)測或高效液相色譜監(jiān)測。反應(yīng)完畢后，進行濃縮、乙酸乙酯萃取、脫除乙酸乙酯的后處理操作，得到產(chǎn)物0.017g。所得產(chǎn)物的核磁譜圖如圖1和2所示，從圖中可以確定，所得產(chǎn)物為S-2-氨基丁酰胺。

按照HPLC檢測產(chǎn)物面積方式計算，得到S-2-氨基丁酰胺的收率為84%，以HPLC方式檢測其純度為98%，按照HPLC方式檢測，e.e.值為99.5%。

實施例 7

將20 mL HEPES緩沖溶液（50 mM, Ph = 8.2）加入到100mL的錐形瓶中，然后將0.04克2-羰基丁酰胺加入到錐形瓶中，形成的底物濃度為20mM。然后加入氨基供體異丙胺，使其濃度為60mM，再加入5U的轉(zhuǎn)氨酶ATA S9, 加入完畢，密封，將溫度固定在30℃，搖床中反應(yīng)12小時。期間TLC硅膠板監(jiān)測或高效液相色譜監(jiān)測。反應(yīng)完畢后，進行濃縮、乙酸乙酯萃取、脫除乙酸乙酯的后處理操作，即可得到目標(biāo)產(chǎn)物S-2-氨基丁酰胺，0.036g。

按照HPLC檢測產(chǎn)物面積方式計算，得到S-2-氨基丁酰胺的收率為90%，以HPLC方式檢測其純度為99%，按照HPLC方式檢測，e.e.值為99.5%。

實施例8

將20 mL HEPES緩沖溶液（50 mM, Ph = 8.2）加入到100mL的錐形瓶中，然后將0.08克2-羰基丁酰胺加入到錐形瓶中，形成的底物濃度為40mM。然后加入氨基供體異丙胺，使其濃度為150mM，再加入5U的轉(zhuǎn)氨酶ATA S9, 加入完畢，密封，將溫度固定在25℃，搖床中反應(yīng)12小時。期間TLC硅膠板監(jiān)測或高效液相色譜監(jiān)測。反應(yīng)完畢后，進行濃縮、乙酸乙酯萃取、脫除乙酸乙酯的后處理操作，即可得到目標(biāo)產(chǎn)物S-2-氨基丁酰胺，0.067g。

按照HPLC檢測產(chǎn)物面積方式計算，得到S-2-氨基丁酰胺的收率為83%，以HPLC方式檢測其純度為99%，按照HPLC方式檢測，e.e.值為99.5%。

實施例9

將20 mL HEPES緩沖溶液（50 mM, Ph = 7.5）加入到100mL的錐形瓶中，然后將0.02克2-羰基丁酰胺加入到錐形瓶中，形成的底物濃度為10mM。然后加入氨基供體苯甲胺，使其濃度為200mM，再加入10U的轉(zhuǎn)氨酶ATA S9, 加入完畢，密封，將溫度固定在25℃，搖床中反應(yīng)12小時。期間TLC硅膠板監(jiān)測或高效液相色譜監(jiān)測。反應(yīng)完畢后，進行濃縮、乙酸乙酯萃取、脫除乙酸乙酯的后處理操作，即可得到目標(biāo)產(chǎn)物S-2-氨基丁酰胺，0.018g。

按照HPLC檢測產(chǎn)物面積方式計算，得到S-2-氨基丁酰胺的收率為90%，以HPLC方式檢測其純度為99%，按照HPLC方式檢測，e.e.值為99.5%。

實施例10

將20 mL HEPES緩沖溶液（50 mM, Ph = 8.2）加入到100mL的錐形瓶中，然后將0.04克2-羰基丁酰胺加入到錐形瓶中，形成的底物濃度為20mM。然后加入氨基供體a-苯乙胺，使其濃度為60mM，再加入5U的轉(zhuǎn)氨酶ATA-117, 加入完畢，密封，將溫度固定在25℃，搖床中反應(yīng)12小時。期間TLC硅膠板監(jiān)測或高效液相色譜監(jiān)測。反應(yīng)完畢后，進行濃縮、乙酸乙酯萃取、脫除乙酸乙酯的后處理操作，即可得到目標(biāo)產(chǎn)物R-2-氨基丁酰胺，0.035g。

按照HPLC檢測產(chǎn)物面積方式計算，得到R-2-氨基丁酰胺的收率為87%，以HPLC方式檢測其純度為99%，按照HPLC方式檢測，e.e.值為99.5%。

實施例11

按照實施例7的方法制備S-2-氨基丁酰胺，不同的是：所用氨基供體為S-丙氨酸，所用轉(zhuǎn)氨酶為Vf-ω-TA。按照HPLC檢測產(chǎn)物面積方式計算，得到S-2-氨基丁酰胺的收率為89%，以HPLC方式檢測其純度為99%，按照HPLC方式檢測，e.e.值為99.5%。

實施例12

按照實施例7的方法制備S-2-氨基丁酰胺，不同的是：所用轉(zhuǎn)氨酶為Cv-ω-TA W60C。按照HPLC檢測產(chǎn)物面積方式計算，得到S-2-氨基丁酰胺的收率為85%，以HPLC方式檢測其純度為99%，按照HPLC方式檢測，e.e.值為98.5%。

對比例1

按照實施例6的方法制備S-2-氨基丁酰胺，不同的是：所用轉(zhuǎn)氨酶為ATA 113（購自sigma或Codexis公司）。所得目標(biāo)產(chǎn)物S-2-氨基丁酰胺的克數(shù)為0.015g。按照HPLC檢測產(chǎn)物面積方式計算，得到S-2-氨基丁酰胺的收率為75%，以HPLC方式檢測其純度為99%，按照HPLC方式檢測，e.e.值為93%。

對比例2

按照實施例7的方法制備S-2-氨基丁酰胺，不同的是：2-羰基丁酰胺替換為丙酮酸。經(jīng)HPLC檢測顯示，丙酮酸僅轉(zhuǎn)化10.2%。