本發(fā)明屬于化學(xué)藥物領(lǐng)域，涉及一種Bola型三氮唑核苷化合物，還涉及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

核苷類(lèi)似物是一類(lèi)重要的抗病毒和抗癌藥物。它們具有與天然核苷類(lèi)似的結(jié)構(gòu)，并能夠模擬天然核苷，參與病毒和癌細(xì)胞的DNA/RNA合成，或與病毒和癌細(xì)胞中某些酶相互作用，從而達(dá)到抑制病毒復(fù)制和癌細(xì)胞生長(zhǎng)的目的。人們通過(guò)對(duì)核苷的核糖部分或者堿基部分進(jìn)行修飾，得到了各種具有抗病毒和抗癌活性的核苷藥物，如利巴韋林(ribavirin)、拉米夫定(Lamivudine)、吉西他濱(gemcitabine)、5-氟尿苷(floxuridine)和阿糖胞苷(cytarabine)等。其中利巴韋林作為核苷類(lèi)藥物的杰出代表，具有廣譜抗病毒性質(zhì)，對(duì)多種DNA病毒和RNA病毒都有很好的抑制作用，是目前治療丙型肝炎病毒感染(Hepatitis C Virus，HCV)的唯一小分子藥物，同時(shí)在近期也被證實(shí)可作為抗癌藥物治療急性骨髓性白血病。和常見(jiàn)的核苷類(lèi)似物不同，利巴韋林是以非天然的雜環(huán)－1,2,4-三氮唑取代了天然核苷的堿基部分，這種特殊結(jié)構(gòu)的優(yōu)勢(shì)在于不易被體內(nèi)的核苷/核酸代謝酶識(shí)別，因而該類(lèi)化合物在體內(nèi)有更好的代謝穩(wěn)定性，同時(shí)三氮唑作為一種通用的堿基，有著介于嘌呤和嘧啶堿之間的特殊幾何構(gòu)型以及廣泛的氫鍵結(jié)合能力。另外值得一提的是以利巴韋林為例，三氮唑核苷不僅具有抗病毒活性，同時(shí)也能調(diào)節(jié)生物體系的免疫反應(yīng)，這為我們發(fā)展出同時(shí)具有抗代謝和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的藥物先導(dǎo)用于抗癌和抗病毒治療提供了研究基礎(chǔ)。近年來(lái)，為了進(jìn)一步增加該類(lèi)分子的芳基結(jié)合平面，從而提高其與生物靶標(biāo)分子的結(jié)合能力，研究者們嘗試向三氮唑核苷的堿基上引入芳香基團(tuán)，得到新的芳基三氮唑核苷類(lèi)似物并將其作為藥物先導(dǎo)廣泛應(yīng)用于各種病毒和癌癥相關(guān)疾病的治療。但是和大多數(shù)核苷類(lèi)似物一樣，三氮唑核苷化合物也面臨水溶性差和起效劑量大的問(wèn)題，使得其進(jìn)入臨床研究的可能性受到影響，這也是目前發(fā)展該類(lèi)化合物作為藥物先導(dǎo)中一個(gè)待以解決的難題。另外，作為小分子藥物，在癌癥治療中對(duì)正常組織和腫瘤缺乏選擇性，難以真正作用于病變部位也是制約該類(lèi)藥物療效，并導(dǎo)致藥物毒副作用的根本原因。因此發(fā)展水溶性的新型三氮唑核苷衍生物，并基于其結(jié)構(gòu)通過(guò)小分子自組裝將其轉(zhuǎn)化為納米藥物是改善這類(lèi)化合物的物理化學(xué)性質(zhì)，并增強(qiáng)其靶向病灶組織的能力，從而減少對(duì)正常組織和細(xì)胞傷害的重要途徑。

Bola型的兩親分子是將兩個(gè)極性頭基用疏水鏈連接起來(lái)，這種特殊結(jié)構(gòu)賦予了Bola型分子獨(dú)特的性質(zhì)，如在質(zhì)膜中具有更好的穩(wěn)定性和兼容性等。目前Bola型兩親分子被廣泛應(yīng)用于表面活性劑，其自組裝形成的囊泡結(jié)構(gòu)也被作為一種理想的載體用于藥物傳遞。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種Bola型三氮唑核苷化合物及其制備方法和應(yīng)用。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種Bola型三氮唑核苷化合物，結(jié)構(gòu)如通式I所示：

式中：

R₁為其中R₅和R₆各自獨(dú)立為-H，-OH，-NH₂，-NHCH₃，-N(CH₃)₂或氨基酸其中的一種，R₇為-OH，-NH₂，-NHCH₃，-N(CH₃)₂或氨基酸其中的一種；

R₂為-H，-Cl，-Br，-I或-Ar；

R3為-CH₂-或-O-；

R₄為-CH₂-，-S-S-，

n獨(dú)立地表示等于2～10的整數(shù)。

如通式I化合物的納米顆粒，取通式I化合物加水，超聲溶解后用0.45μm濾膜過(guò)濾得Bola型三氮唑核苷化合物納米顆粒。

如通式I化合物的制備方法：按摩爾比為1：2～10分別取通式II化合物和通式III化合物反應(yīng)得到通式I所示Bola型三氮唑核苷化合物；

通式II所示化合物中X為-CH₂-，-S-S-，Y為炔基或羥基；n為2～10整數(shù)；

通式III所示化合物中R₁為其中R₅和R₆各自獨(dú)立為-H，-OH，-NH₂，-NHCH₃，-N(CH₃)₂或氨基酸其中的一種，R₇為-OH，-NH₂，-NHCH₃，-N(CH₃)₂或氨基酸其中的一種；R₂為-H，-Cl，-Br，-I或-Ar；R₈為-N₃或-Br。

進(jìn)一步，當(dāng)通式II中Y為炔基，通式III中R₈為疊氮基時(shí)，如通式1化合物制備方法為：按摩爾比為1：2～10分別取通式II化合物和通式III化合物混合后用體積比為1:1～5四氫呋喃和水的混合溶劑溶解，再加入抗壞血酸鈉溶液和五水硫酸銅溶液，80℃下反應(yīng)0.5～6小時(shí)，旋干溶劑，柱層析分離得通式I所示Bola型三氮唑核苷化合物。

進(jìn)一步，當(dāng)通式II中Y為炔基，通式III中R₈為-Br時(shí)，如通式1化合物制備方法為：按摩爾比為1：2～10分別取通式II化合物和通式III化合物混合后用體積比為1:1～5二氧六環(huán)和水的混合溶劑溶解，再加入四三苯基膦鈀、碘化亞銅和碳酸鋰，100℃微波反應(yīng)15～60分鐘，旋干溶劑后柱層析分離，分離產(chǎn)物在氫氣作用下還原得到通式I所示Bola型三氮唑核苷化合物，所述四三苯基膦鈀、碘化亞銅、碳酸鋰和通式III化合物的摩爾比為1:1:40:20。

進(jìn)一步，當(dāng)通式II中Y為羥基，通式III中R₈為-Br時(shí)，如通式I化合物制備方法為：按摩爾比為1：2～10分別取通式II化合物和通式III化合物混合后用二甲基甲酰胺作溶劑，再加入Cs2CO3，攪拌8～24小時(shí)，旋干溶劑柱層析得到通式I所示Bola型三氮唑核苷化合物，所述Cs₂CO₃和通式III化合物的摩爾比為3:1。

進(jìn)一步，所述通式II化合物碳鏈上的H原子可替換為F原子。

通式I所示Bola型三氮唑核苷化合物或通式I所示Bola型三氮唑核苷化合物納米顆粒在抑制細(xì)胞生長(zhǎng)藥物的應(yīng)用。

進(jìn)一步，所述細(xì)胞為癌細(xì)胞。

進(jìn)一步，所述癌細(xì)胞為前列腺癌細(xì)胞PC-3、肝癌細(xì)胞HepG2、宮頸癌細(xì)胞Hela、卵巢癌細(xì)胞SKOV3、胰腺癌細(xì)胞BxPC-3和Panc-1。

本發(fā)明的有益效果在于：基于三氮唑核苷利巴韋林進(jìn)行結(jié)構(gòu)優(yōu)化所制備的bola型三氮唑核苷化合物均具有抑制癌細(xì)胞增殖的活性。且在相同濃度下，這一類(lèi)化合物的抑制癌細(xì)胞增殖的活性均優(yōu)于利巴韋林，其中化合物I-1對(duì)所有癌細(xì)胞增殖的抑制效果都遠(yuǎn)優(yōu)于相應(yīng)的臨床用藥?；衔颕-2在相同濃度下與臨床用藥多西紫杉醇對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞的抑制效果相當(dāng)，比肝癌臨床用藥五氟尿嘧啶對(duì)HepG2細(xì)胞的抑制效果要好，比宮頸癌臨床用藥順鉑對(duì)Hela細(xì)胞的抑制效果要好，也比胰腺癌臨床用藥吉西他濱對(duì)BxPC-3和Panc-1細(xì)胞的抑制效果要好?；衔颕-3在相同濃度下與臨床用藥多西紫杉醇對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞的抑制效果相當(dāng)，比肝癌臨床用藥五氟尿嘧啶對(duì)HepG2細(xì)胞的抑制效果要好，也比胰腺癌臨床用藥吉西他濱對(duì)BxPC-3和Panc-1細(xì)胞的抑制效果要好。因此本發(fā)明提供一類(lèi)新型的抗腫瘤藥物先導(dǎo)。同時(shí)這類(lèi)化合物有在水溶液中自組裝形成納米尺度顆粒的能力，也使其能因?yàn)閷?shí)體瘤的高通透性和滯留效應(yīng)(Enhanced Permeability and Retention effect，EPR)更易聚集在腫瘤組織內(nèi)部實(shí)現(xiàn)靶向給藥，同時(shí)作為納米藥物載體還可以包封其他小分子藥物而達(dá)到聯(lián)合用藥的效果。

附圖說(shuō)明

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖進(jìn)行說(shuō)明：

圖1為動(dòng)態(tài)光散射表征本發(fā)明化合物I-1自組裝形成的納米尺度的顆粒；

圖2為本發(fā)明化合物I-1～I(xiàn)-3隨濃度升高對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖的抑制能力；

圖3為本發(fā)明化合物I-1～I(xiàn)-3隨濃度升高對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖的抑制能力；

圖4為本發(fā)明化合物I-1～I(xiàn)-3隨濃度升高對(duì)胰腺癌細(xì)胞Panc-1增殖的抑制能力；

圖5為本發(fā)明化合物I-1和I-2隨濃度升高對(duì)胰腺癌細(xì)胞BxPC-3增殖的抑制能力；

圖6為本發(fā)明化合物I-1和I-2隨濃度升高對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖的抑制能力；

圖7為本發(fā)明化合物I-1隨濃度升高對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖的抑制能力。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合附圖，對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。

實(shí)施例1

反應(yīng)中間體II-1的制備

將3.3mL II-1a(1,8-二溴辛烷)溶解在3mL二甲基甲酰胺中，滴加含1.6g乙炔鈉的二甲苯溶液，反應(yīng)24小時(shí)后過(guò)濾反應(yīng)液，旋干溶劑，減壓蒸餾，得產(chǎn)物II-1b。在圓底燒瓶中分別加入630mg化合物II-1b和660mg硫代乙酸鉀，加DMF作溶劑，室溫下反應(yīng)4小時(shí)后旋干溶劑，加入二氯甲烷和水后分離有機(jī)層，旋干溶劑后經(jīng)柱層析分離，得化合物II-1c。將100mg化合物A3溶解于DMF，室溫下滴加80μL水合肼，再滴加100μL乙酸，室溫下反應(yīng)30分鐘后加入水和乙酸乙酯萃取，有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑，得化合物II-1d。II-1d與2,6-二氟苯甲醛混合后加入二氯甲烷溶解，再在反應(yīng)體系中滴加三氟化硼的乙醚溶液，0℃下反應(yīng)1小時(shí)后，反應(yīng)液用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，旋干溶劑后分離得到化合物II-1。

II-1:¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.23-7.18(m,1H),6.89(t,J＝8Hz,2H),5.15(s,1H),2.63(t,J＝8Hz,4H),2.19-2.15(m,4H),1.94(s,2H),1.62-1.56(m,4H),1.54-1.47(m,4H),1.43-1.27(m,16H).

實(shí)施例2

反應(yīng)中間體II-2的制備

將75mg化合物II-1b和9.5mg磷酸鉀溶解在5mL乙腈中，通入氧氣，室溫下反應(yīng)5h。旋干溶劑，柱層析分離，得化合物II-2，產(chǎn)率77.8％。

II-2：¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ2.68(t,J＝8Hz,4H),2.18(t,J＝4Hz,4H),1.94(s,2H),1.71-1.63(m,4H),1.56-1.50(m,4H),1.39-1.31(m,16H).

實(shí)施例3

反應(yīng)中間體II-3的制備

將5.1mL三甲基硅基乙炔溶解在45mL四氫呋喃中，在-78℃下滴加23.2mL丁基鋰。15分鐘后，加入28mL DMPU，在-78℃下攪拌1小時(shí)。隨后加入2.8g化合物II-3a的四氫呋喃溶液2mL，在室溫下反應(yīng)過(guò)夜。反應(yīng)液用1N的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1-2，并用乙酸乙酯萃取3次。合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑，柱層析分離得化合物II-3b。將1.6g化合物II-3b溶解在TBAF的四氫呋喃溶液中，在室溫下反應(yīng)3h。用氯化銨溶液淬滅反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑，柱層析分離得化合物II-3c。將1.0g化合物II-3c溶解在2mL四氫呋喃中，在0℃下滴加1.13g氫化鋰鋁的四氫呋喃懸浮液30mL，在室溫下反應(yīng)3h。用氯化銨溶液淬滅反應(yīng)，過(guò)濾，濃縮濾液，柱層析分離得化合物II-3d-1。另將將3.84g PCC和0.145g乙酸鈉溶解在15mL二氯甲烷中，在0℃下加入1.5g化合物II-3d-1，在室溫下反應(yīng)6小時(shí)。旋干溶劑，柱層析分離得化合物II-3e-1。將1.0g化合物II-3c溶解在8.6mL乙醇中，加入0.1mL濃硫酸，回流反應(yīng)6小時(shí)。反應(yīng)液用乙醚萃取3次，合并有機(jī)相，旋干溶劑，柱層析分離得化合物II-3d-2。將168mg化合物II-3d-2和1.1mmol水合肼溶解在50mL乙醇中，回流反應(yīng)6小時(shí)。冷卻至室溫，放置過(guò)夜，收集固體，用乙醇重結(jié)晶得化合物II-3e-2。將138mg化合物II-3e-1和184mg化合物II-3e-2溶解在5mL乙醇中，加入0.2mL乙酸，回流反應(yīng)2小時(shí)。柱層析分離得化合物II-3。

實(shí)施例4

反應(yīng)中間體III-1的制備

在圓底燒瓶中加入86mg化合物III-1a，360mg對(duì)甲苯磺酰氯，6mg 4-二甲氨基吡啶和0.3mL三乙胺，然后加入二氯甲烷使之溶解。室溫下反應(yīng)3小時(shí)，旋干溶劑后柱層析分離，得化合物III-1b。140mg化合物III-1b和360mg溴化鋰混合后，加入丙酮使之溶解?；亓鞣磻?yīng)3小時(shí)后，旋干溶劑，柱層析分離得化合物III-1c。100mg化合物III-1c和450mg二甲胺水溶液混合后，再加入DMF使之溶解。在室溫下反過(guò)夜，旋干溶劑后分離得到化合物III-1。III-1：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.71(s,1H),5.46(s,2H),3.58(t,J＝4Hz,2H),2.46(t,J＝4Hz,2H),2.18(s,6H).

實(shí)施例5

反應(yīng)中間體III-2的制備

將600mg化合物III-2a溶解在4mL含有216mg NaOH的水溶液中，加入0.3mL液溴，緩慢升溫至100℃，保溫反應(yīng)20小時(shí)。冷卻至室溫，用飽和NaHSO₃溶液淬滅，用乙醚萃取后合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥。旋干溶劑，得877mg化合物III-2b。在圓底燒瓶中分別加入190mg化合物III-2b，440mg乙?；Ｗo(hù)的2-(羥基甲氧基)乙醇，2mg水合對(duì)甲苯磺酸，140℃下反應(yīng)1h。柱層析分離，得化合物III-2c。在980mg的化合物III-2c中加入25mL飽和氨的甲醇溶液，室溫下反應(yīng)48小時(shí)。旋干溶劑，柱層析分離，得化合物化合物III-2。

III-2:1H NMR(400MHz,CDCl₃):δ5.48(s,2H),3.75(t,J＝4Hz,2H),3.73(t,J＝4Hz,2H).

實(shí)施例6

反應(yīng)中間體III-3的制備

將200mg化合物III-1溶解在5mL甲醇中，在鈀碳/氫氣的條件下，攪拌2小時(shí)，過(guò)濾，旋干溶劑，得到化合物III-3a。將100mg化合物III-3a溶解在5mL的20％硫酸溶液中，在0℃下滴加含有37mg NaNO₂的水溶液0.4mL，0℃下反應(yīng)30分鐘后，再滴加含有80mg CuBr的水溶液，室溫下反應(yīng)2小時(shí)。然后用乙酸乙酯萃取并合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥以后，旋干溶劑，柱層析分離得化合物III-3。

實(shí)施例7

化合物I-1的制備

65mg化合物II-1和60mg化合物III-1混合后用體積比為1:2的四氫呋喃和水的混合溶劑溶解，再加入抗壞血酸鈉溶液0.2mL和五水硫酸銅溶液0.2mL，80℃下反應(yīng)2小時(shí)。旋干溶劑，柱層析分離，得化合物82mg化合物I-1。

I-1：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.94(s,2H),8.43(s,2H),7.42-7.35(m,1H),7.10(t,J＝8Hz,2H),5.61(s,4H),5.17(s,1H),3.63(t,J＝4Hz,4H),3.69(t,J＝8Hz,4H),2.65-2.55(m,4H),2.50(s,12H),2.39(t,J＝4Hz,4H),1.67-1.60(m,4H),1.54-1.47(m,4H),1.29-1.24(m,16H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO):δ155.60,148.17,147.14,130.43,121.48,118.11,112.56,112.35,78.69,67.77,58.31,45.83,42.15,33.19,29.09,29.03,28.98,28.86,28.81,28.40,25.10；MS(ESI)m/z:887.64[M+H].

實(shí)施例8

化合物I-2的制備

120mg化合物II-1和136mg化合物III-2混合后用體積比為1:2的四氫呋喃和水的混合溶劑溶解，再加入抗壞血酸鈉溶液0.2mL和五水硫酸銅溶液0.2mL，80℃下反應(yīng)2小時(shí)。旋干溶劑，柱層析分離得146mg化合物I-2。

I-2：¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.99(s,2H),7.23-7.17(m,1H),6.89(t,J＝8Hz,2H),5.65(s,4H),5.15(s,1H),4.74(t,J＝4Hz,2H),3.82-3.79(m,8H),2.79(t,J＝8Hz,4H),2.63(t,J＝8Hz,4H),2.07(s,2H),1.74-1.66(m,4H),1.61-1.55(m,4H),1.37-1.29(m,16H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO):δ155.32,148.36,132.14,130.44,121.48,118.11,112.56,112.36,79.10,71.88,60.25,42.16,33.20,29.09,29.03,28.98,28.84,28.81,28.41,25.08；MS(ESI):m/z 989.36[M+H].

實(shí)施例9

化合物I-3的制備

在圓底燒瓶中分別加入20mg II-1和15.8mg的III-4，隨后用體積比為1:2的四氫呋喃和水的混合溶劑溶解。再加入新制的抗壞血酸鈉溶液0.1mL和五水硫酸銅溶液0.1mL，80℃下反應(yīng)2小時(shí)。旋干溶劑，柱層析分離，得25mg化合物I-3。

I-3：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.94(s,2H),8.43(s,2H),7.42-7.35(m,1H),7.11(t,J＝8Hz,2H),5.63(s,4H),5.17(s,1H),4.72(t,J＝4Hz,2H),3.59(t,J＝4Hz,4H),3.51(t,J＝8Hz,4H),2.69(t,J＝8Hz,4H),2.64-2.55(m,4H),1.67-1.62(m,4H),1.54-1.47(m,4H),1.29-1.24(m,16H).實(shí)施例10

化合物I-4的制備

在圓底燒瓶中分別加入76mg化合物III-1，58mg化合物II-2，隨后加入體積比為1:2的四氫呋喃和水的混合溶劑使之溶解。加入新制的抗壞血酸鈉溶液0.2mL和五水硫酸銅溶液0.2mL，80℃下反應(yīng)2小時(shí)。旋干溶劑，柱層析分離，得76.5mg化合物I-4。

I-4：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.94(s,2H),8.43(s,2H),5.61(s,4H),3.63(t,J＝4Hz,4H),2.72-2.66(m,8H),2.39(t,J＝4Hz,4H),2.11(s,12H),1.67-1.57(m,8H),1.30-1.24(m,16H).

實(shí)施例11

化合物I-5的制備

在圓底燒瓶中分別加入37mg化合物III-1，60mg化合物II-3，隨后加入體積比為1:2的四氫呋喃和水的混合溶劑使之溶解。加入新制的抗壞血酸鈉溶液0.2mL和五水硫酸銅溶液0.2mL，80℃下反應(yīng)2小時(shí)。旋干溶劑，柱層析分離，得68mg化合物I-5。

實(shí)施例12

化合物I-6的制備

取1,9-癸二炔60mg，化合物III-5 200mg加入微波反應(yīng)瓶用體積比為3:1的二氧六環(huán)和水的混合溶劑溶解，再加入四三苯基膦鈀51.6mg，氮化亞銅8.6mg及碳酸鋰197mg，100℃下微波反應(yīng)1小時(shí)后，旋干溶劑，柱色譜層析分離得到104mg產(chǎn)物I-6a。60mg化合物I-6a在氫氣/鈀碳條件下，還原得到化合物I-6 54.8mg.

實(shí)施例13

化合物I-7的制備

取1,9-壬二醇50mg，加入碳酸銫610mg以及化合物III-3 156mg，以二甲基甲酰胺作溶劑，室溫下攪拌反應(yīng)16小時(shí)，除去溶劑后柱層析得到57mg化合物I-6。

實(shí)施例14

化合物I-8的制備

在圓底燒瓶中分別加入42mg化合物III-2，40mg化合物II-1c，隨后加入體積比為1:2的四氫呋喃和水的混合溶劑使之溶解。再加入新制的抗壞血酸鈉溶液0.2mL和五水硫酸銅溶液0.2mL以后，80℃下反應(yīng)2小時(shí)。旋干溶劑，柱層析分離，得到57mg化合物I-8。

I-8：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):8.49(s,1H),5.62(s,2H),4.75(t,J＝4Hz,1H),3.62(t,J＝4Hz,2H),3.51(t,J＝4Hz,2H),2.81(t,J＝4Hz,2H),2.70(t,J＝8Hz,2H),2.31(s,3H),1.67-1.63(m,2H),1.50-1.47(m,2H),1.28-1.23(m,8H).

實(shí)施例15

化合物I-1通過(guò)自組裝形成納米顆粒。

實(shí)施方法：取2mg化合物1加水10ml，超聲溶解后用0.45μM濾膜過(guò)濾后，在水溶液中觀察到丁達(dá)爾現(xiàn)象，用動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)量本發(fā)明化合物I-1自組裝形成的納米尺度的顆粒結(jié)果如圖1所示，結(jié)果顯示該化合物在水溶液自組裝形成的顆粒的平均粒徑是46nm。

實(shí)施例16

本發(fā)明化合物I-1用于抗癌活性實(shí)驗(yàn)

前列腺癌細(xì)胞PC-3用含10％FBS的F12K培養(yǎng)基培養(yǎng)，肝癌細(xì)胞HepG2和宮頸癌細(xì)胞Hela用含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，卵巢癌細(xì)胞SKOV3用含10％FBS的McCoy's 5A培養(yǎng)基培養(yǎng)，胰腺癌細(xì)胞BxPC-3和Panc-1用含10％FBS的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，然后在96孔觀察板上均以10000每孔的密度種植上述細(xì)胞。細(xì)胞經(jīng)過(guò)24h增殖后，加入不同濃度的待測(cè)化合物，以未加任何藥物為負(fù)對(duì)照，利巴韋林為以上所有細(xì)胞的正對(duì)照，同時(shí)PC-3選取多西紫杉醇作為正對(duì)照，HepG2選取五氟尿嘧啶為正對(duì)照，Hela和SKOV3選取順鉑為正對(duì)照，BxPC-3和Panc-1選取吉西他濱為正對(duì)照。在37℃以及5％CO₂條件下經(jīng)過(guò)48小時(shí)培養(yǎng)后，用比色法測(cè)定存活的細(xì)胞數(shù)目(染色劑為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT，又稱噻唑藍(lán))?；衔颕-1及上述正對(duì)照藥物在同樣濃度(5μM)下對(duì)各種癌細(xì)胞的抑制率如表1所示，化合物I-1隨濃度升高對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖的抑制能力如圖2所示；化合物I-1隨濃度升高對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖的抑制能力如圖3所示；化合物I-1隨濃度升高對(duì)胰腺癌細(xì)胞Panc-1增殖的抑制能力如圖4所示；化合物I-1隨濃度升高對(duì)胰腺癌細(xì)胞BxPC-3增殖的抑制能力如圖5所示；化合物I-1隨濃度升高對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖的抑制能力如圖6所示；化合物I-1隨濃度升高對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖的抑制能力如圖7所示。

表1化合物I-1及各種抗癌臨床用藥的濃度一致條件下對(duì)不同癌細(xì)胞的抑制率

NA：no activity

實(shí)施例17

實(shí)驗(yàn)例2本發(fā)明化合物I-2用于抗癌活性實(shí)驗(yàn)

前列腺癌細(xì)胞PC-3用含10％FBS的F12K培養(yǎng)基培養(yǎng)，肝癌細(xì)胞HepG2和宮頸癌細(xì)胞Hela用含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，胰腺癌細(xì)胞BxPC-3和Panc-1用含10％FB S的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，然后在96孔觀察板上均以10000每孔的密度種植上述細(xì)胞。細(xì)胞經(jīng)過(guò)24h增殖后，加入不同濃度的待測(cè)化合物，以未加任何藥物為負(fù)對(duì)照，利巴韋林為以上所有細(xì)胞的正對(duì)照，同時(shí)PC-3選取多西紫杉醇作為正對(duì)照，HepG2選取五氟尿嘧啶為正對(duì)照，Hela選取順鉑為正對(duì)照，BxPC-3和Panc-1選取吉西他濱為正對(duì)照。在37℃以及5％CO₂條件下經(jīng)過(guò)48小時(shí)培養(yǎng)后，用比色法測(cè)定存活的細(xì)胞數(shù)目(染色劑為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT，又稱噻唑藍(lán))?；衔颕-2及上述正對(duì)照藥物在同樣濃度下(25μM)對(duì)各種癌細(xì)胞的抑制率如表2所示，化合物I-2隨濃度升高對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖的抑制能力如圖2所示；化合物I-2隨濃度升高對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖的抑制能力如圖3所示；化合物I-2隨濃度升高對(duì)胰腺癌細(xì)胞Panc-1增殖的抑制能力如圖4所示；化合物I-2隨濃度升高對(duì)胰腺癌細(xì)胞BxPC-3增殖的抑制能力如圖5所示；化合物I-2隨濃度升高對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖的抑制能力如圖6所示。

表2化合物I-2及各種抗癌臨床用藥的濃度一致條件下對(duì)不同癌細(xì)胞的抑制率

實(shí)施例18

實(shí)驗(yàn)例3本發(fā)明化合物I-3用于抗癌活性實(shí)驗(yàn)

前列腺癌細(xì)胞PC-3用含10％FBS的F12K培養(yǎng)基培養(yǎng)，肝癌細(xì)胞HepG2用含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，胰腺癌細(xì)胞BxPC-3和Panc-1用含10％FBS的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，然后在96孔觀察板上均以10000每孔的密度種植上述細(xì)胞。細(xì)胞經(jīng)過(guò)24h增殖后，加入不同濃度的待測(cè)化合物，以未加任何藥物為負(fù)對(duì)照，利巴韋林為以上所有細(xì)胞的正對(duì)照，同時(shí)PC-3選取多西紫杉醇作為正對(duì)照，HepG2選取五氟尿嘧啶為正對(duì)照，BxPC-3和Panc-1選取吉西他濱為正對(duì)照。在37℃以及5％CO₂條件下經(jīng)過(guò)48小時(shí)培養(yǎng)后，用比色法測(cè)定存活的細(xì)胞數(shù)目(染色劑為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT，又稱噻唑藍(lán))?；衔颕-3及上述正對(duì)照藥物在同樣濃度下(50μM)對(duì)各種癌細(xì)胞的抑制率如表3所示，化合物I-3隨濃度升高對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖的抑制能力如圖2所示；化合物I-3隨濃度升高對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖的抑制能力如圖3所示；化合物I-3隨濃度升高對(duì)胰腺癌細(xì)胞Panc-1增殖的抑制能力如圖4所示。

表3化合物I-3及各種抗癌臨床用藥的濃度一致條件下對(duì)不同癌細(xì)胞的抑制率

實(shí)施例19

實(shí)驗(yàn)例4本發(fā)明化合物I-8用于抗癌活性實(shí)驗(yàn)

前列腺癌細(xì)胞PC-3用含10％FBS的F12K培養(yǎng)基培養(yǎng)，肝癌細(xì)胞HepG2用含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，卵巢癌細(xì)胞SKOV3用含10％FBS的McCoy's 5A培養(yǎng)基培養(yǎng)，胰腺癌細(xì)胞BxPC-3和Panc-1用含10％FBS的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，然后在96孔觀察板上均以10000每孔的密度種植上述細(xì)胞。細(xì)胞經(jīng)過(guò)24h增殖后，加入不同濃度的待測(cè)化合物，以未加任何藥物為負(fù)對(duì)照，利巴韋林為以上所有細(xì)胞的正對(duì)照，同時(shí)PC-3選取多西紫杉醇作為正對(duì)照，HepG2選取五氟尿嘧啶為正對(duì)照，SKOV3選取順鉑為正對(duì)照，BxPC-3和Panc-1選取吉西他濱為正對(duì)照。在37℃以及5％CO₂條件下經(jīng)過(guò)48小時(shí)培養(yǎng)后，用比色法測(cè)定存活的細(xì)胞數(shù)目(染色劑為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT，又稱噻唑藍(lán))?；衔颕-8及上述正對(duì)照藥物在同樣濃度下(50μM)對(duì)各種癌細(xì)胞的抑制率如表4所示。

表4化合物I-8及各種抗癌臨床用藥的濃度一致條件下對(duì)不同癌細(xì)胞的抑制率

NA：no activity

綜上，從表1-4的結(jié)果可以看出，本發(fā)明所制備的bola型三氮唑核苷化合物I-1～I(xiàn)-3均具有明顯的抗癌細(xì)胞增殖的活性，在同樣濃度條件下，對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制效果要優(yōu)于利巴韋林，同時(shí)也比部分抗癌臨床用藥的活性要好，因此是一類(lèi)極有潛力的抗腫瘤藥物先導(dǎo)。而非bola型的化合物I-8除了在BxPC-3上有一定的抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的活性，在其他的細(xì)胞系上均無(wú)明顯的抑制活性，進(jìn)一步說(shuō)明了Bola型結(jié)構(gòu)對(duì)提高該類(lèi)化合物生物活性的重要性。

最后說(shuō)明的是，以上優(yōu)選實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過(guò)上述優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作出各種各樣的改變，而不偏離本發(fā)明權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。