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一種無血清軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基及其制備方法與流程

文檔序號:12644550閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種無血清軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基,其特征在于,包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加在所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的添加劑,所述添加劑的成分以終濃度計,包括:細(xì)胞因子24-32ng/mL,聚賴氨酸7-10mg/mL,花生四烯酸2-5μM,維生素C10-15μg/mL,銀膠菊內(nèi)酯5-8μg/mL,丁二胺5-9μM,胰島素7-9μg/mL,亞麻酸3-6μM,黃酮14-18μg/mL,轉(zhuǎn)鐵蛋白12-16μg/mL,聚乙烯吡咯烷酮20-26μg/mL,胰高血糖素8-13μg/mL和纖黏連蛋白20-32ng/mL。

2.如權(quán)利要求1所述的無血清軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基,其特征在于,包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加在所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的添加劑,所述添加劑的成分以終濃度計,包括:細(xì)胞因子28ng/mL,聚賴氨酸9mg/mL,花生四烯酸3μM,維生素C12μg/mL,銀膠菊內(nèi)酯6μg/mL,丁二胺7μM,胰島素8μg/mL,亞麻酸5μM,黃酮16μg/mL,轉(zhuǎn)鐵蛋白14μg/mL,聚乙烯吡咯烷酮22μg/mL,胰高血糖素11μg/mL和纖黏連蛋白25ng/mL。

3.如權(quán)利要求1或2所述的無血清軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基,其特征在于,所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為RMPI 1640或IMEM培養(yǎng)基。

4.如權(quán)利要求1或2所述的無血清軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基,其特征在于,所述細(xì)胞因子由血清鋪展因子、轉(zhuǎn)化生長因子和表皮生長因子按重量比8-10∶3-7∶1-3組成。

5.如權(quán)利要求4所述的無血清軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基,其特征在于,所述細(xì)胞因子由血清鋪展因子、轉(zhuǎn)化生長因子和表皮生長因子按重量比9∶5∶2組成。

6.如權(quán)利要求1-5任一所述的無血清軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

S1向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入細(xì)胞因子、聚賴氨酸、花生四烯酸、維生素C、銀膠菊內(nèi)酯、丁二胺、胰島素、亞麻酸、黃酮、轉(zhuǎn)鐵蛋白和纖黏連蛋白,攪拌20-40分鐘,加入聚乙烯吡咯烷酮和胰高血糖素,繼續(xù)攪拌18-25分鐘,得混合物;

S2向步驟S1所得混合物中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4-7%的氫氧化鈉溶液,調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH至7.0-7.3,滅菌溫度為117-122℃,滅菌時間為18-23分鐘,即得。

7.如權(quán)利要求6所述的無血清軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法,其特征在于,所述步驟S2向步驟S1所得混合物中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%的氫氧化鈉溶液。

8.如權(quán)利要求6所述的無血清軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法,其特征在于,所述步驟S2調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH至7.1。

9.如權(quán)利要求6所述的無血清軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法,其特征在于,所述步驟S2滅菌溫度為120℃。

10.如權(quán)利要求6所述的無血清軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法,其特征在于,所述步驟S2滅菌時間為20分鐘。

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