一種誘導(dǎo)獨(dú)一味增殖培養(yǎng)基及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種誘導(dǎo)獨(dú)一味增殖培養(yǎng)基及其制備方法，其特征在于：MS+白糖20～40g/L+卡拉膠6.5～11g/L+BA0.2～3mg/L+NAA0.1～1.5mg/L+IBA0.1～1.0mg/L+ZT0.1～4mg/L。該獨(dú)一味培養(yǎng)基通過采用特定含量MS培養(yǎng)基、BA、NAA、IBA及ZT的共同協(xié)同調(diào)節(jié)作用，不僅為獨(dú)一味的組培提供豐富的營養(yǎng)元素，大大降低了生產(chǎn)成本低，并且不受自然條件影響顯著提高其繁殖系數(shù)，從而大大提高獨(dú)一味的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
【專利說明】
-種誘導(dǎo)獨(dú)一味増殖培養(yǎng)基及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種組培增殖培養(yǎng)基及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 唇形科獨(dú)一味屬唯一物種，多年生草本，高2. 5-10厘米；根莖伸長，粗厚，徑達(dá)1厘 米。葉片常4枚，福狀兩兩相對(duì)，菱狀圓形、菱形、扇形、橫腎形W至Ξ角形，苦，微寒。有活 血桂疲，消腫止痛之功效。獨(dú)一味是青藏高原特有的一種重要藥用植物，廣泛分布于西藏， 而在青海、甘肅、四川和云南只有零星分布，常生于海拔3500-5100米的石質(zhì)高山草甸、河 灘地或強(qiáng)度風(fēng)化的碎石灘上?，F(xiàn)有組培技術(shù)中，對(duì)獨(dú)一味的培養(yǎng)報(bào)道很少，大多對(duì)外植體原 球莖進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖、分化、生化培養(yǎng)，得到小苗，獨(dú)一味對(duì)生境條件要求苛刻，難開低 海拔地區(qū)栽培，在人工仿野生栽培條件下，種子萌發(fā)率相當(dāng)?shù)颓乙吧Y源溯危滅絕；因此， 獨(dú)一味組培中增殖誘導(dǎo)培養(yǎng)對(duì)提高其繁殖系數(shù)及資源保護(hù)具有非常重要的意義；而現(xiàn)有的 應(yīng)用傳統(tǒng)種子繁殖雖可獲得一定的萌發(fā)率率，但萌發(fā)率低，成本高，抗性差，且易感染病害。
[0003] 并且，組培中通常情況下，培養(yǎng)基的制備過程中一般采用熱灌裝的方式，即白糖和 卡拉膠均經(jīng)加熱煮沸后倒入灌裝機(jī)中灌裝，該方法制備出的培養(yǎng)基營養(yǎng)元素及植物激素流 失嚴(yán)重，且由于罐裝時(shí)溫度逐漸降低卡拉膠呈現(xiàn)半凝膠狀攬拌不均勻?qū)е鹿扪b到組培瓶中 營養(yǎng)液不均勻，不利于接種、轉(zhuǎn)接和苗的生長。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種誘導(dǎo)獨(dú)一味增殖培養(yǎng)基及其制備方法，該培養(yǎng)基克服 現(xiàn)有傳統(tǒng)的栽培播種技術(shù)中獨(dú)一味的種子營養(yǎng)不良導(dǎo)致繁殖系數(shù)低的問題，誘導(dǎo)獨(dú)一味在 組培中增殖分化，提高獨(dú)一味的繁殖系數(shù)。 陽〇化]為了達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：提供一種誘導(dǎo)獨(dú)一味增殖 的培養(yǎng)基，其特征在于：包括MS+白糖20~40g/L+卡拉膠6. 5~llg/L+BAO. 2~3mg/ L+NAA0. 1~1. 5mg/L+IBA 0. 1~1. Omg/L+ZTO. 1~4mg/L。所述獨(dú)一味誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基 中，每升MS培養(yǎng)基中各組分的含量如下：饑挪〇3 165mg、KN03 1 900mg、CaClz · 2&0 440mg、 MgS〇4*7H2〇 370mg、KH2P〇4 170mg、KI 0.83mg、H3B〇3 6.2mg、MnS〇4*H2〇 16.9mg、ZnS〇4*7H2〇 8. 6mg、Na2Mo〇4 ·細(xì)2〇 〇· 25mg、CuS〇4 ·甜2〇 〇· 〇25mg、C0CI2 ·細(xì)2〇 〇· 〇25mg、FeS〇4 · 7馬0 27. 8mg、胞2-邸ΤΑ · 2&0 37. 3mg、肌醇lOOmg、煙酸0. 5mg、鹽酸化唉鋒0. 5mg、鹽酸硫胺素 0.1 mg、甘氨酸 2mg。
[0006] 本發(fā)明所述的獨(dú)一味誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基，其特征在于：包括MS+白糖30g/L+卡拉膠 6. 5g/L+BA 1. Omg/L+NAA 0. 2mg/L+IBA 0. 30mg/L+ZT0. 2mg/L〇
[0007] 上述獨(dú)一味誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的制備方法包括W下步驟：
[000引曰、首先將白糖和卡拉膠進(jìn)行預(yù)處理：分別將白糖和卡拉膠按照比例稱量再加入 15倍質(zhì)量的蒸饋水溶解，靜置3~4小時(shí)；
[0009] b、MS培養(yǎng)基母液的配制，包括母液1、母液2、母液3、母液4、母液5母液6、母液7 和母液8的配制，其中
[0010] 母液1的配制：稱取170g KH2PO4置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙?，定容?10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[00川母液2的配制：稱取1900g KN03置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙猓ㄈ葜?10000ml，保存到棟色磨合瓶中； 陽01引母液3的配制：稱取1650g NH4NO3置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙猓ㄈ葜?10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0013] 母液4的配制：370g Μ拆〇4· 7&0置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙?，定容?10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0014] 母液5的配制：稱取440g化C12 · 2&0置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙?，定容?10000ml，保存到棟色磨合瓶中； 陽01 引 母液 6 的配審ij :分另U 稱量 1. 66g ΚΙ、12. 4g &6〇3、33. 8g MnS〇4 · &0、 17. 2拉nS〇4 · 7&0、0. 5g Na2Mo〇4 · 2&0、0. 05g CuS〇4 · 5&0 和 0. 05g C0CI2 · 6&0,加入燒杯 中溶解，定容至10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0016] 母液7的配制：分別稱量200g肌醇、Ig煙酸、Ig鹽酸化唉鋒、0. 2g鹽酸硫胺素和 4g甘氨酸，加入燒杯中溶解，定容至10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0017] 母液 8 的配制：稱量 55. 6g FeS〇4 · 7&0、74. 6g Naz-EDTA · 2&0 分別加入 3000ml 蒸饋水溶解，然后將兩種溶液混合，加熱煮沸15分鐘，并不斷攬拌，充分馨合，再定容至 10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0018] C、將預(yù)處理的白糖和卡拉膠水溶液、lOml/L母液1、lOml/L母液2、lOml/L母液3、 lOml/L母液4、lOml/L母液5。5ml/L母液6、5ml/L母液7、5ml/L母液8分別倒入灌裝機(jī) 中，再加入84、酷4、184、21'。加水定容，并攬拌15111111，調(diào)節(jié)抑值至5.8，后灌裝，在121°(：、 0. 16MPa的條件下滅菌23分鐘，冷凝后制得。
[0019] 所述灌裝時(shí)間為3s，間歇時(shí)間為0. 7s。
[0020] 本發(fā)明獨(dú)一味誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基通過采用特定含量的MS培養(yǎng)基、該獨(dú)一味培養(yǎng)基 通過采用特定含量MS培養(yǎng)基、BA、NAA、IBA及ZT的共同協(xié)同調(diào)節(jié)作用，不僅為獨(dú)一味的組 培提供豐富的營養(yǎng)元素，大大降低了生產(chǎn)成本低，并且不受自然條件影響顯著提高其繁殖 系數(shù)，從而大大提高獨(dú)一味的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本發(fā)明提供的獨(dú)一味誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的制備方法 通過將卡拉膠及白糖進(jìn)行預(yù)處理及采用冷灌裝方式，可大大減小微量元素、維生素及植物 激素等營養(yǎng)元素在制備培養(yǎng)基過程中的損失，并且制備的培養(yǎng)基硬度適中，顏色白中透亮， 為獨(dú)一味誘導(dǎo)增殖提供了關(guān)鍵的培養(yǎng)基條件；經(jīng)該誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)后的獨(dú)一味的繁殖 率提高到90 %，且植株變異率低，植株結(jié)構(gòu)完整健壯度好。
【具體實(shí)施方式】 陽OW 實(shí)施例1
[0022] 該獨(dú)一味誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的配方為：MS+白糖30g/L+卡拉膠6. 5g/L+BAl. Omg/ L+NAA 0. 2mg/L+IBA 0. 30mg/L+ZT0. 2mg/L。其中，MS基本培養(yǎng)基的配方為：每升培養(yǎng)基中 組分的含量如下： 陽OU] NH4NO3 165mg、KN〇3 1900mg、CaCl2 *2&0 440mg、M拆O4.7&0 370mg、KH2P〇4 170mg、 ΚΙ 0· 83mg、H3BO3 6· 2mg、MnS〇4 ·馬0 16. 9mg、ZnS〇4 · 7馬08· 6mg、Na2Mo〇4 ·細(xì)2〇 〇· 25mg、 CuS〇4 · 5馬0 0· 025mg、C0CI2 · 6H2O 0· 025mg、FeS〇4 · 7馬0 27. 8mg、Na2_EDTA · 2馬0 37. 3mg、 肌醇lOOmg、煙酸0. 5mg、鹽酸化唉醇0. 5mg、鹽酸硫胺素 0.1 mg、甘氨酸2mg。
[0024] 上述獨(dú)一味誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的配制過程為： 陽0巧](1)MS基本培養(yǎng)基母液的配制：包括母液1、母液2、母液3、母液4、母液5、母液6、 母液7和母液8的配制，其中
[0026] 母液1的配制：稱取170g KH2PO4置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙?，定容?10000ml，保存到棟色磨合瓶中； W27] 母液2的配制：稱取1900g KN03置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙猓ㄈ葜?10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0028] 母液3的配制：稱取1650g NH4NO3置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙猓ㄈ葜?10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0029] 母液4的配制：370g MgS〇4 · 7&0置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙猓ㄈ葜?10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0030] 母液5的配制：稱取440g化C12 · 2&0置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙猓ㄈ葜?10000ml，保存到棟色磨合瓶中； 陽的1]母液 6 的配審IJ :分別稱量 1. 66g ΚΙ、12. 4g &6〇3、33. 8g MnS〇4 · &0、17. 2g ZnS〇4 · 7&0、0. 5g 化2Mo〇4 · 2&0、0. 05g CuS〇4 · 5&0 和 0. 05g C0CI2 · 6&0,加入燒杯中溶 解，定容至10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0032] 母液7的配制：分別稱量200g肌醇、Ig煙酸、Ig鹽酸化唉鋒、0.2g鹽酸硫胺素和 4g甘氨酸，加入燒杯中溶解，定容至10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0033] 母液 8 的配制：稱量 55. 6g FeS〇4 · 7&0、74. 6g Naz-EDTA · 2&0 分別加入 3000ml 蒸饋水溶解，然后將兩種溶液混合，加熱煮沸15分鐘，并不斷攬拌，充分馨合，再定容至 10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0034] (2)白糖和卡拉膠進(jìn)行預(yù)處理：分別將白糖和卡拉膠按照比例稱量再加入15倍質(zhì) 量的蒸饋水溶解，靜置4小時(shí)；
[0035] (3)將預(yù)處理的白糖和卡拉膠水溶液、lOml/L母液1、lOml/L母液2、lOml/L母液 3、510ml/L母液4、lOml/L母液5。5ml/L母液6、5ml/L母液7、5ml/L母液8分別倒入灌裝機(jī) 中，再加入 BA l.Omg/LNAA 0. 2mg/L、IBA0. 30mg/L、ZT0. 2mg/L。加水定容，并攬拌 15min， 調(diào)節(jié)抑值至5. 8,后灌裝，在12rC、0. 16MPa的條件下滅菌23分鐘，冷凝后制得；其中，灌 裝時(shí)間為3s，間歇時(shí)間為0.7s。
[0036] 實(shí)施例2
[0037] 該獨(dú)一味增殖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：MS+白糖20g/L+卡拉膠8g/L+BA3. Omg/L+NAA 0. 5mg/L+IBA 0. 50mg/L+ZT0. 8mg/L。其中，MS基本培養(yǎng)基的配方為：每升培養(yǎng)基中組分的 含量如下：
[0038] NH4NO3 165mg、KN〇3 1900mg、CaCl2 *2&0 440mg、M拆〇4.7&0 370mg、KH2P〇4 170mg、 ΚΙ 0· 83mg、H3BO3 6· 2mg、MnS〇4 ·馬0 16. 9mg、ZnS〇4 · 7馬08· 6mg、Na2Mo〇4 ·細(xì)2〇 〇· 25mg、 CuS〇4 · 5馬0 0· 025mg、C0CI2 · 6H2O 0· 025mg、FeS〇4 · 7馬0 27. 8mg、Na2_EDTA · 2馬0 37. 3mg、 肌醇lOOmg、煙酸0. 5mg、鹽酸化唉醇0. 5mg、鹽酸硫胺素 0.1 mg、甘氨酸2mg。
[0039] 上述獨(dú)一味誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的配制過程為：
[0040] (1)MS基本培養(yǎng)基母液的配制：包括母液1、母液2、母液3、母液4、母液5、母液6、 母液7和母液8的配制，其中
[OOW 母液1的配制：稱取170g KH2PO4置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙?，定容?10000ml，保存到棟色磨合瓶中； W42] 母液2的配制：稱取1900g KN03置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙?，定容?10000ml，保存到棟色磨合瓶中； 陽0創(chuàng)母液3的配制：稱取1650g NH4NO3置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙?，定容?10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0044] 母液4的配制：370g Μ拆〇4 · 7&0置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙?，定容?10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0045] 母液5的配制：稱取440g化C12 · 2&0置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙?，定容?10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0046] 母液 6 的配審ij :分另U 稱量 1. 66g ΚΙ、12. 4g &6〇3、33. 8g MnS〇4 · &0、 17. 2拉nS〇4 · 7&0、0. 5g Na2Mo〇4 · 2&0、0. 05g CuS〇4 · 5&0 和 0. 05g C0CI2 · 6&0,加入燒杯 中溶解，定容至10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0047] 母液7的配制：分別稱量200g肌醇、Ig煙酸、Ig鹽酸化唉鋒、0. 2g鹽酸硫胺素和 4g甘氨酸，加入燒杯中溶解，定容至10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0048] 母液 8 的配制：稱量 55. 6g FeS〇4 · 7&0、74. 6g Naz-EDTA · 2&0 分別加入 3000ml 蒸饋水溶解，然后將兩種溶液混合，加熱煮沸15分鐘，并不斷攬拌，充分馨合，再定容至 10000ml，保存到棟色磨合瓶中； W例 似白糖和卡拉膠進(jìn)行預(yù)處理：分別將白糖和卡拉膠按照比例稱量再加入15倍質(zhì) 量的蒸饋水溶解，靜置4小時(shí)；
[0050] (3)將預(yù)處理的白糖和卡拉膠水溶液、lOml/L母液1、lOml/L母液2、lOml/L母液 3、lOml/L母液4、lOml/L母液5。5ml/L母液6、5ml/L母液7、5ml/L母液8分別倒入灌裝機(jī) 中，再加入 BA 3. Omg/l、NAA 0. 5mg/L、IBA0. 50mg/L、ZT0. 8mg/L。加水定容，并攬拌 15min， 調(diào)節(jié)抑值至5. 8,后灌裝，在12rC、0. 16MPa的條件下滅菌23分鐘，冷凝后制得；其中，灌 裝時(shí)間為3s，間歇時(shí)間為0.7s。 陽0川實(shí)施例3
[0052] 該鐵皮石解開花誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：1/2MS+白糖40g/L+卡拉膠lOg/L+BA 2. Omg/L+NAA 1. 5mg/L+IBA 0. 80mg/L+ZT0. 4mg/L。其中，1/2MS 基本培養(yǎng)基的配方為：每升 培養(yǎng)基中組分的含量如下：
[0053] NH4NO3 82. 5mg、KN03 9 50mg、CaC!2 · 2&0 220mg、MgS〇4 · 7&0 185mg、KH2PO4 85mg、 KI 0. 415mg、H3BO3 3. Img、MnS〇4 · &0 8. 45mg、ZnS〇4 · 7&04. 3mg、NazMoO* · 2&0 0. 125mg、 QiS〇4*5H2〇 0. 0125mg、CoCl2*6H2〇0. 0125mg、FeS〇4*7H2〇 13. 9mg、Na2-EDTA*2H2〇 18. 65mg、 肌醇50mg、煙酸0. 25mg、鹽酸R比唉醇0. 25mg、鹽酸硫胺素0. 05mg、甘氨酸Img。
[0054] 上述獨(dú)一味誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的配制過程為： 陽化日](1)MS基本培養(yǎng)基母液的配制：包括母液1、母液2、母液3、母液4、母液5、母液6、 母液7和母液8的配制，其中
[0056] 母液1的配制：稱取170g KH2PO4置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙?，定容?10000ml，保存到棟色磨合瓶中； W57] 母液2的配制：稱取1900g KN03置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙?，定容?10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0058] 母液3的配制：稱取1650g NH4NO3置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙猓ㄈ葜?10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0059] 母液4的配制：370g Μ拆〇4 · 7&0置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙?，定容?10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0060] 母液5的配制：稱取440g化C12 · 2&0置于燒杯中，加入蒸饋水?dāng)埌枞芙?，定容?10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0061] 母液 6 的配審IJ :分另U 稱量 1.66g ΚΙ、12. 4g &6〇3、33. 8g MnS〇4.H2〇、 17. 2拉nS〇4 · 7&0、0. 5g Na2Mo〇4 · 2&0、0. 05g CuS〇4 · 5&0 和 0. 05g C0CI2 · 6&0,加入燒杯 中溶解，定容至10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0062] 母液7的配制：分別稱量200g肌醇、Ig煙酸、Ig鹽酸化唉鋒、0.2g鹽酸硫胺素和 4g甘氨酸，加入燒杯中溶解，定容至10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0063] 母液 8 的配制：稱量 55. 6g FeS〇4 · 7&0、74. 6g Naz-EDTA · 2&0 分別加入 3000ml 蒸饋水溶解，然后將兩種溶液混合，加熱煮沸15分鐘，并不斷攬拌，充分馨合，再定容至 10000ml，保存到棟色磨合瓶中；
[0064] (2)白糖和卡拉膠進(jìn)行預(yù)處理：分別將白糖和卡拉膠按照比例稱量再加入15倍質(zhì) 量的蒸饋水溶解，靜置4小時(shí)； 陽0化](3)將預(yù)處理的白糖和卡拉膠水溶液、5ml/L母液l、5ml/L母液2、5ml/L母液3、 5ml/L母液4、5ml/L母液5。2. 5ml/L母液6、2. 5ml/L母液7、2. 5ml/L母液8分別倒入灌裝 機(jī)中，再加入 BA2. 0mg/X、NAA 1. 5mg/X、IBA 0. 80mg/X、ZT0. 4mg/L 加水定容，并攬拌 15min， 調(diào)節(jié)抑值至5. 8,后灌裝，在12rC、0. 16MPa的條件下滅菌23分鐘，冷凝后制得；其中，灌 裝時(shí)間為3s，間歇時(shí)間為0.7s。
[0066] 試驗(yàn)例
[0067] 選取四川阿巧州野生獨(dú)一味的植物葉片作為外植體培養(yǎng)誘導(dǎo)愈傷組織，經(jīng)誘導(dǎo) 培養(yǎng)及增殖培養(yǎng)后，得到叢生芽，將該叢生芽接種于本發(fā)明實(shí)施例1制備的獨(dú)一味誘導(dǎo)增 殖培養(yǎng)基中，采用28瓦巧白識(shí)燈燈管作為光源，光照強(qiáng)度為30001X，在日溫為24°C夜溫 22°C，培養(yǎng)室空氣濕度為55%，光照時(shí)間13小時(shí)/天的條件下，培養(yǎng)50天，進(jìn)行誘導(dǎo)增殖； 其中，表1為采用誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)與采用簡單培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的植株生長狀態(tài)的 對(duì)照：
[0068] 表 1
[0069]
[0070] 從上表可W看出，采用誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)后叢生芽的繁殖系數(shù)比例得到大大提 局。
[0071] 雖然結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行了詳細(xì)地描述，但并非是對(duì)本 專利保護(hù)范圍的限定。在權(quán)利要求書所限定的范圍內(nèi)，本領(lǐng)域的技術(shù)人員不經(jīng)創(chuàng)造性勞動(dòng) 即可做出的各種修改或調(diào)整仍受本專利的保護(hù)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種誘導(dǎo)獨(dú)一味增殖培養(yǎng)基，其特征在于：MS+白糖20~40g/L+卡拉膠6. 5~ llg/L+BA 0· 2 ~3mg/L+NAA0. 1 ~I. 5mg/L+IBA 0· 1 ~I. 0mg/L+ZT0· 1 ~4mg/L。所述獨(dú) 一味誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基中，每升13培養(yǎng)基中各組分的含量如下：順4勵(lì) 316511^、謂03 1 90〇11^、 CaCl2 · 2H20 440mg、MgSO4 · 7H20 370mg、KH2P04170mg、KI 0· 83mg、Η3Β036· 2mg、MnSO4 · H2O 16. 9mg、ZnSO4 · 7H20 8. 6mg、Na2MoO4 · 2H20 0· 25mg、CuSO4 · 5H20 0· 025mg、CoCl2 · 6H20 0· 025mg、FeSO4 · 7H20 27. 8mg、Na2-EDTA · 2H20 37. 3mg、肌醇 lOOmg、煙酸 0· 5mg、鹽酸吡哆 鋅0. 5mg、鹽酸硫胺素0. lmg、甘氨酸2mg。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的獨(dú)一味組培培養(yǎng)基，其特征在于：包括MS+白糖30g/L+卡拉 膠 6. 5g/L+BA 1.0 mg/L+NAA 0· 2mg/L+IBA 0· 30mg/L+ZT0. 2mg/L。3. -種權(quán)利要求1所述的獨(dú)一味誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，包括： a、 首先將白糖和卡拉膠進(jìn)行預(yù)處理：分別將白糖和卡拉膠按照比例稱量再加入15倍 質(zhì)量的蒸餾水溶解，靜置3~4小時(shí)； b、 MS培養(yǎng)基母液的配制，包括母液1、母液2、母液3、母液4、母液5母液6、母液7和母 液8的配制，其中 母液1的配制：稱取170g KH2PO4置于燒杯中，加入蒸餾水?dāng)嚢枞芙?，定容?0000ml， 保存到棕色磨合瓶中； 母液2的配制：稱取1900g KNO3置于燒杯中，加入蒸餾水?dāng)嚢枞芙?，定容?0000ml，保 存到棕色磨合瓶中； 母液3的配制：稱取1650g NH4NO3置于燒杯中，加入蒸餾水?dāng)嚢枞芙?，定容?0000ml， 保存到棕色磨合瓶中； 母液4的配制：370g MgSO4 · 7H20置于燒杯中，加入蒸餾水?dāng)嚢枞芙?，定容?0000ml， 保存到棕色磨合瓶中； 母液5的配制：稱取440g CaCl2 · 2H20置于燒杯中，加入蒸餾水?dāng)嚢枞芙?，定容?10000ml，保存到棕色磨合瓶中； 母液 6 的配制：分別稱量 I. 66g KI、12. 4g Η3Β03、33· 8g MnSO4 ·Η20、17· 2gZnS04 ·7Η20、 0· 5g Na2MoO4 · 2Η20、0· 05g CuSO4 · 5Η20 和 0· 05g CoCl2 · 6Η20,加入燒杯中溶解，定容至 10000ml，保存到棕色磨合瓶中； 母液7的配制：分別稱量200g肌醇、Ig煙酸、Ig鹽酸吡哆鋅、0. 2g鹽酸硫胺素和4g甘 氨酸，加入燒杯中溶解，定容至10000ml，保存到棕色磨合瓶中； 母液8的配制：稱量55. 6g FeSO4 ·7Η20、74.68 Na2-EDTAdH2O分別加入3000ml蒸餾水 溶解，然后將兩種溶液混合，加熱煮沸15分鐘，并不斷攪拌，充分螯合，再定容至10000ml， 保存到棕色磨合瓶中； c、 將預(yù)處理的白糖和卡拉膠水溶液、10ml/L母液I、10ml/L母液2、10ml/L母液3、 10ml/L母液4、10ml/L母液5。5ml/L母液6、5ml/L母液7、5ml/L母液8分別倒入灌裝機(jī) 中，再加入84、熟4、18六、21'。加水定容，并攪拌151^11，調(diào)節(jié)？!1值至5.8，后灌裝，在121°(：、 0. 16MPa的條件下滅菌23分鐘，冷凝后制得。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的獨(dú)一味誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于：所述灌裝 時(shí)間為3s，間歇時(shí)間為0. 7s。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK105875405SQ201410615972
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2014年10月29日
【發(fā)明人】林忠全
【申請人】四川深達(dá)生物科技有限公司