一種番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于番茄組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，還涉及 一種番茄葉片誘導(dǎo)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 番茄是茄科番茄屬一年生或者多年生植物，在世界各地廣泛種植，同時(shí)也是一種 在餐桌上極受歡迎的食物。隨著基因工程的崛起，番茄產(chǎn)業(yè)迎來(lái)了巨大的機(jī)遇，然而基因工 程必須依賴(lài)于組織培養(yǎng)技術(shù)才能將其作用發(fā)揮到最大。
[0003] 現(xiàn)有的番茄組織培養(yǎng)中多采用幼嫩根尖或番茄種子作為外植體，采取根尖作為外 植體會(huì)對(duì)母株造成較大傷害，且取材不容易;采用種子作為外植體，其繁殖系數(shù)低。
[0004] 葉片作為植株的一部分，由于其分化程度高，全能性較低，較少用于植物組織培 養(yǎng)，但是其具有取材容易，不損傷母株的優(yōu)點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 基于上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基及培養(yǎng)方 法，其采用葉片作為外植體，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加有吲哚乙酸（IAA)、6-芐氨基腺 嘌呤(6-BA)、瓊脂粉、蔗糖和硝酸鐠，并對(duì)外植體進(jìn)行暗培養(yǎng)，具有取材容易，誘導(dǎo)率高，縮 短誘導(dǎo)時(shí)間的優(yōu)點(diǎn)。
[0006] -種番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加有吲哚乙酸（IAA)、 6_芐氨基腺嘌呤(6-BA)、瓊脂粉、蔗糖和硝酸鐠，培養(yǎng)基中添加了硝酸鐠，稀土元素鐠可以 促進(jìn)番茄內(nèi)源激素的合成和增加番茄激素的活性，促進(jìn)葉片細(xì)胞脫分化和再分化。
[0007] 所述的吲哚乙酸（IAA)的濃度為0.05-0.1511^/1，6-芐氨基腺嘌呤(6-84)的濃度為 5-15 mg/L，瓊脂粉的濃度為5-15g/L，蔗糖的濃度為25-35g/L，硝酸鐠的濃度為10-15 mg/ L0
[0008] 所述的吲哚乙酸（IAA)的濃度為0.08mg/L，6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)的濃度為9mg/ U瓊脂粉的濃度為10g/L，蔗糖的濃度為30g/L，硝酸鐠的濃度為13 mg/L。
[0009] 所述的培養(yǎng)基的pH值為5.5-6.0，微酸性環(huán)境有利于番茄葉片脫分化。
[0010] -種番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其包括以下步驟:外植體消毒，接種，暗培養(yǎng)和常規(guī) 培養(yǎng)； 外植體消毒，取長(zhǎng)度為2-3cm的番茄幼嫩葉片作為外植體，在無(wú)菌環(huán)境中用73%-76%的 酒精浸泡25-30秒，用無(wú)菌水沖洗干凈，用質(zhì)量濃度為0.08%-0.12%浸泡2-3分鐘，再用無(wú)菌 水沖洗干凈，采用葉片作為外植體，不僅僅取材方便，而且不會(huì)對(duì)母株造成損傷； 接種，在無(wú)菌環(huán)境中將距葉片邊緣〇.2cm的部分切去，使用打孔器將剩余部分打成直徑 為0.5cm圓形葉塊，將葉塊接種到上述番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)中，直徑為0.5cm大小的葉塊可以 滿(mǎn)足組織培養(yǎng)的要求，同時(shí)有不會(huì)浪費(fèi)葉片； 暗培養(yǎng)，將接種完畢的葉塊置于黑暗環(huán)境中培養(yǎng)4天，黑暗培養(yǎng)有助于激活葉片細(xì)胞內(nèi) 源激素； 常規(guī)培養(yǎng)，暗培養(yǎng)結(jié)束后將葉塊置于人工氣候箱中培養(yǎng)，光暗周期為16小時(shí)光照/8小 時(shí)黑暗，光照強(qiáng)度為1800-20001UX，培養(yǎng)溫度為23-25°C。
[0011] 所述的接種步驟中，葉塊形狀還可以是正多邊形。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 實(shí)施例一:番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制。
[0013] 根據(jù)表1、表2所不的配方分別稱(chēng)取MS培養(yǎng)基和本發(fā)明的番前葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基的成 份，置于三角瓶中，加入適量的蒸餾水，攪拌溶解，定容至IL并調(diào)節(jié)pH值為5.8,將其分裝于 組織培養(yǎng)瓶中，封口并置于高壓滅菌中，在121°C下滅菌20分鐘，冷卻，凝固后得到本發(fā)明番 茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
[0014] 表1MS培養(yǎng)基成份和濃度。
[0015] 表2番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基成份和濃度
實(shí)施例二:番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)方法。
[0016] 外植體消毒:取番茄長(zhǎng)度為2_3cm的幼嫩葉片作為外植體，在無(wú)菌環(huán)境中用75%的 酒精浸泡30秒，用無(wú)菌水沖洗干凈，用質(zhì)量濃度為0.1%浸泡2分鐘，再用無(wú)菌水沖洗干凈。 [0017]接種:在超凈工作臺(tái)中將距葉片邊緣0.2cm的部分切去，使用打孔器將剩余部分打 成直徑為0.5cm圓形葉塊，將葉塊接種到上述番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)中。
[0018] 暗培養(yǎng):將接種完畢的葉塊置于黑暗環(huán)境中培養(yǎng)4天。
[0019] 常規(guī)培養(yǎng):暗培養(yǎng)結(jié)束后將葉塊置于人工氣候箱中培養(yǎng)，光暗周期為16小時(shí)光照/ 8小時(shí)黑暗，光照強(qiáng)度為1800-20001ux，培養(yǎng)溫度為23-25°C，培養(yǎng)30天，得到愈傷組織。
[0020] 實(shí)施例三:番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基測(cè)試。
[0021] 按照實(shí)施例一所示的方法，根據(jù)表3所示的番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基濃度及成份配制 培養(yǎng)基，分別將番茄葉片接種于培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)培養(yǎng)30天，記錄誘導(dǎo)時(shí)間和誘導(dǎo)率。
[0022] 表3番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基
表4番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)結(jié)果
注：綜合評(píng)分y=〇 · 3*a+0 · 7*b。
[0023] 對(duì)照組1完全沒(méi)有萌發(fā)，接種2周后所有葉塊褐化死亡；由對(duì)照組2、3和4與對(duì)照組I 相比較，可以看出添加吲哚乙酸、6-芐氨基腺嘌呤、硝酸鐠可以成功誘導(dǎo)番茄葉片脫分化， 植物激素和稀土元素鐠對(duì)番茄葉片誘導(dǎo)脫分化至關(guān)重要；由試驗(yàn)組和對(duì)照組對(duì)比可以看 出，同時(shí)添加吲哚乙酸、6-芐氨基腺嘌呤、硝酸鐠可以大大提高番茄葉片誘導(dǎo)率和縮短誘導(dǎo) 時(shí)間，其中試驗(yàn)組5為本發(fā)明中的番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其效果最好，平均誘導(dǎo)時(shí)間為15.73 天，誘導(dǎo)率更高達(dá)97.32%，明顯高于其他試驗(yàn)組。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加有吲哚乙 酸(IAA)、6_芐氨基腺嘌呤(6-BA)、瓊脂粉、蔗糖和硝酸鐠。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，所述的吲哚乙酸（IAA)的 濃度為0.05-0.1511^/1，6-芐氨基腺嘌呤（6-84)的濃度為5-15 11^/1，瓊脂粉的濃度為5-15g/L，蔗糖的濃度為25-35g/L，硝酸鐠的濃度為10-15mg/L。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，所述的吲哚乙酸（IAA)的 濃度為〇.〇8mg/L，6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)的濃度為9mg/L，瓊脂粉的濃度為10g/L，蔗糖的濃 度為30g/L，硝酸鐠的濃度為13mg/L。4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，培養(yǎng)基的pH值為5.5-6.0〇5. -種番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于，其包括以下步驟:外植體消毒，接種，暗培 養(yǎng)和常規(guī)培養(yǎng)； 外植體消毒，取長(zhǎng)度為2-3cm的番茄幼嫩葉片作為外植體，在無(wú)菌環(huán)境中用73%-76%的 酒精浸泡25-30秒，用無(wú)菌水沖洗干凈，用質(zhì)量濃度為0.08%-0.12%浸泡2-3分鐘，再用無(wú)菌 水沖洗干凈； 接種，在無(wú)菌環(huán)境中將距葉片邊緣〇.2cm的部分切去，使用打孔器將剩余部分打成直徑 為0.5cm圓形葉塊，將葉塊接種到上述番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)中； 暗培養(yǎng)，將接種完畢的葉塊置于黑暗環(huán)境中培養(yǎng)4天； 常規(guī)培養(yǎng)，暗培養(yǎng)結(jié)束后將葉塊置于人工氣候箱中培養(yǎng)，光暗周期為16小時(shí)光照/8小 時(shí)黑暗，光照強(qiáng)度為1800-20001UX，培養(yǎng)溫度為23-25°C。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的接種步驟中，葉 塊形狀還可以是正多邊形。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種番茄葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，屬于番茄組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，其采用葉片作為外植體，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加有吲哚乙酸（IAA）、6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）、瓊脂粉、蔗糖和硝酸鐠，并對(duì)外植體進(jìn)行暗培養(yǎng)，本發(fā)明的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法具有取材容易，誘導(dǎo)率高，誘導(dǎo)時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類(lèi)】A01H4/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105432467
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510827042
【發(fā)明人】何志鏗
【申請(qǐng)人】廣東粵三胖農(nóng)業(yè)科技有限責(zé)任公司
【公開(kāi)日】2016年3月30日
【申請(qǐng)日】2015年11月24日