本發(fā)明涉及一種呋喃酮類化合物，尤其是涉及一種呋喃酮類化合物及其制備方法和該類化合物在制備抗真菌藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著抗生素的大量使用和不合理用藥以及微生物變異速度的加快，致病微生物的耐藥性逐漸增強，迫切需要尋找新型的抗生素。海洋真菌因其代謝途徑復(fù)雜、代謝產(chǎn)物種類豐富而日益受到研究者的重視。已報道的海洋真菌次級代謝產(chǎn)物的種類和數(shù)量呈快速上升的趨勢，其中許多代謝產(chǎn)物具有較強的抗菌、抗病毒、抗腫瘤和酶抑制等活性。本發(fā)明人研究得知，海洋真菌Aspergillus versicolor DJ013（保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為：CCTCC No. M2014089）固體發(fā)酵的乙酸乙酯提取物有較好的抗真菌活性，遂對其活性成分進(jìn)行了研究。目前尚未見該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及抗真菌活性的報道，因此市場上也尚未見有與此相關(guān)的藥物。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種具有抗真菌活性的呋喃酮類化合物及其制備方法和用途。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種呋喃酮類化合物，該呋喃酮類化合物的結(jié)構(gòu)式如Ⅰ所示：
（I）。
上述呋喃酮類化合物的制備方法，具體包括如下步驟：
（1）發(fā)酵生產(chǎn)
將保藏號為CCTCC No. M2014089的花斑曲霉（Aspergillus versicolor DJ013）劃線復(fù)活，接種到PDA固體斜面培養(yǎng)基上，在28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天后；將斜面培養(yǎng)獲得的菌落全部接種到固體培養(yǎng)基中，于28℃，靜置發(fā)酵培養(yǎng)40天，獲得發(fā)酵物；
（2）浸膏的獲得
將上述發(fā)酵物用4L甲醇浸泡3次，而后對甲醇浸提液濃縮蒸干，用1L的水復(fù)溶，再用1L乙酸乙酯萃取3次，合并三次萃取所得萃取液減壓濃縮除去乙酸乙酯，獲得粗浸膏；
（3）化合物的分離精制
將上述粗浸膏用二氯甲烷和甲醇混合溶劑溶解后，加200-300目硅膠拌樣，采用石油醚/乙酸乙酯以體積比5:1梯度為洗脫劑進(jìn)行洗脫，對粗浸膏進(jìn)行減壓硅膠柱層析，收集洗脫組分，再經(jīng)過半制備反相高效液相色譜分離純化得到呋喃酮類化合物，其結(jié)構(gòu)如式I所示：
（I）。
所述的固體培養(yǎng)基的配制方法如下：將80g大米溶于120ml海水，浸泡隔夜后，于121℃高壓滅菌20min即可。
所述的二氯甲烷和甲醇混合溶劑中二氯甲烷與甲醇的體積比為1：1。
所述的半制備反相高效液相色譜的洗脫液為乙腈與水按體積比35:65的比例混合。
所述的呋喃酮類化合物用于制備抗真菌藥物方面的用途。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：本發(fā)明一種呋喃酮類化合物及其制備方法和用途，通過微生物發(fā)酵培養(yǎng)來獲取含新呋喃酮類化合物的發(fā)酵物，然后將發(fā)酵物用甲醇浸泡、乙酸乙酯提取，得粗浸膏，將該粗浸膏經(jīng)減壓硅膠柱層析和反相半制備高效液相色譜分離純化得到，該呋喃酮類化合物具有抗真菌作用，可以作為抗真菌作用的新藥物成分或先導(dǎo)化合物。
上述花斑曲霉（Aspergillus versicolor DJ013），該菌為DJ013菌株，保藏編號為CCTCC No. M2014089，于2014年03月14日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為中國.武漢.武漢大學(xué)。
具體實施方式
以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
實施例1
一種呋喃酮類化合物結(jié)構(gòu)式如Ⅰ所示：
（I）。
實施例2
如I式所示的呋喃酮類化合物的制備方法，具體包括如下步驟：
（1）發(fā)酵生產(chǎn)
將保藏號為CCTCC No. M2014089的花斑曲霉（Aspergillus versicolor DJ013）劃線復(fù)活，接種到PDA固體斜面培養(yǎng)基上，在28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天后；將斜面培養(yǎng)獲得的菌落全部接種到固體培養(yǎng)基（將80g大米溶于120ml海水，浸泡隔夜后，于121℃高壓滅菌20min即可）中，于28℃，靜置發(fā)酵培養(yǎng)40天，獲得發(fā)酵物；
（2）浸膏的獲得
將上述發(fā)酵物用4L甲醇浸泡3次，而后對甲醇浸提液濃縮蒸干，用1L的水復(fù)溶，再用1L乙酸乙酯萃取3次，合并三次萃取所得萃取液減壓濃縮除去乙酸乙酯，獲得粗浸膏；
（3）化合物的分離精制
將上述粗浸膏用二氯甲烷和甲醇混合溶劑溶解后，加200-300目硅膠拌樣，采用石油醚/乙酸乙酯以體積比5:1梯度為洗脫劑進(jìn)行洗脫，對粗浸膏進(jìn)行減壓硅膠柱層析，收集洗脫組分，再經(jīng)過半制備反相高效液相色譜分離純化得到呋喃酮類化合物，其結(jié)構(gòu)如式I所示：
。
該化合物Ⅰ無色油狀，分子式C11H16O4，陽離子HRESIMS m/z：235.0945 [M + Na]+，1H和13C-NMR數(shù)據(jù)見表1。
表1化合物Ⅰ的1H和13C NMR數(shù)據(jù)（600和150MHz，in CDCl3）
實施例3
體外抗真菌活性的測試（96孔板抑菌法）
（1）實驗樣品
被測樣品溶液的配制：測試樣品為上述實施例1中分離純化的化合物Ⅰ純品，精密稱取適量樣品，用DMSO配制成所需濃度的溶液，供測活性。該實驗使用的指示菌為新生隱球菌和白色念珠菌。
（2）實驗方法
96孔板抗真菌測試方法：將待測化合物逐級稀釋在20％DMSO/鹽水中，并轉(zhuǎn)移10μL到96孔平底微孔板中。在需氧條件下，將兩菌指示菌株于30℃條件下在沙氏瓊脂培養(yǎng)基(SDA)培養(yǎng)16-20小時。加入一系列不同濃度的化合物置于RPMI1640培養(yǎng)基中，并接種真菌菌株，新生隱球菌在35℃培養(yǎng)70小時，白色念珠菌在35℃培養(yǎng)46小時。8μg/ml氟康唑用作陽性對照，DMSO溶液作為陰性對照。待測化合物的濃度分別為1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml。培養(yǎng)結(jié)束后，測定600nm下吸光值，根據(jù)如下公式計算抑制率。抑制率（%）=(ODR-OD)/(ODR-ODB)
ODR：菌液對照孔吸光值；ODB：空白吸光值；OD：樣品測定孔吸光值。
（3）實驗結(jié)果
在96孔板抗真菌測試中，不同濃度的化合物Ⅰ對新生隱球菌和白色念珠菌抑制結(jié)果分別見表2。
表2不同濃度的化合物Ⅰ對致病真菌的抑制率（%）
由上表可知化合物Ⅰ具有顯著的抗新生隱球菌和白色念珠菌的作用，可作為抗真菌藥物或先導(dǎo)化合物的研究。
上述說明并非對本發(fā)明的限制，本發(fā)明也并不限于上述舉例。本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的實質(zhì)范圍內(nèi)，作出的變化、改型、添加或替換，也應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。