專利名稱：單克隆抗體介導(dǎo)的呋喃它酮?dú)埩魴z測方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物殘留檢測領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
硝基呋喃類藥物是人工合成的廣譜抗生素，它有非常好的抗菌作用和藥理動(dòng)力學(xué)特性，除了作為一種抗生素被應(yīng)用于獸醫(yī)醫(yī)療中外，它還曾作為豬、禽與水產(chǎn)品促生長的添加劑被廣泛應(yīng)用。但在長時(shí)間的實(shí)驗(yàn)室研究過程中發(fā)現(xiàn)，硝基呋喃類藥物及其代謝產(chǎn)物均可以使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生癌變和基因突變，鑒于此，歐盟分別于1993年(歐盟法令2901/93)與1995年(歐盟法令1442/95)立法禁止在動(dòng)物源性食品生產(chǎn)加工過程中使用呋喃它酮(Furaltadone)、呋喃西林(Nitrofurazone)、呋喃咀啶(Nitrofurantoin)與呋喃唑酮(Furazolidone)等四種藥物。其后，美國、加拿大、澳新與日本等國均全面禁止使用硝基呋喃類藥物。2002年3月我國也將硝基呋喃類藥物列為禁用獸藥。研究證明，硝基呋喃類藥物在動(dòng)物體內(nèi)若干小時(shí)就會(huì)迅速分解成硝基呋喃與各種代謝產(chǎn)物，這些代謝產(chǎn)物與組織內(nèi)蛋白質(zhì)形成較為穩(wěn)定的化合物，該化合物可以在組織中存留較長時(shí)間，所以分析此類藥物殘留時(shí)應(yīng)該對(duì)其代謝產(chǎn)物進(jìn)行檢測分析，歐盟等國就是以檢測代謝產(chǎn)物為手段達(dá)到檢測硝基呋喃殘留的目的。四種硝基呋喃類藥物的代謝產(chǎn)物分別對(duì)應(yīng)為呋喃它酮-3-氨基-5-嗎啉基-2-氧唑酮(AMOZ)；呋喃西林-氨基脲(SEM)；呋喃咀啶-1-氨基咀啶(AHD)；呋喃唑酮-3-氨基-2-氧唑酮(AOZ)。
隨著我國加入世貿(mào)組織一年多以來，歐美日等發(fā)達(dá)國家利用自身技術(shù)優(yōu)勢對(duì)我國出口食品及農(nóng)副產(chǎn)品不斷設(shè)置新的技術(shù)壁壘措施，以達(dá)到限制我國食品與農(nóng)副產(chǎn)品的出口，有關(guān)這方面的貿(mào)易糾紛接踵而來，歐盟早在2000年初就開始了一項(xiàng)長達(dá)42個(gè)月的FoodBRAND計(jì)劃(QLK1-1999-00142)，其主要目的是要求歐盟各認(rèn)可實(shí)驗(yàn)室對(duì)食品中硝基呋喃類殘留檢測方法(包括ELISA與LC-MS-MS方法)進(jìn)行攻關(guān)研究，以為其設(shè)置技術(shù)壁壘提供技術(shù)支持。目前，歐盟規(guī)定不得在食品中檢測出硝基呋喃類藥物四種代謝產(chǎn)物殘留，鑒于此，歐盟已研制出液質(zhì)聯(lián)用色譜儀檢測硝基呋喃類代謝產(chǎn)物的分析方法。而我國原有檢測方法僅是針對(duì)硝基呋喃類原藥的，而且檢測方法極為落后，已肯定不能滿足出口的需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個(gè)目的是為人們提供一種呋喃它酮?dú)埩艨焖贆z測方法。
本發(fā)明以抗呋喃它酮單克隆抗體為介導(dǎo)建立呋喃它酮?dú)埩鬍LISA快速檢測方法。
呋喃它酮?dú)埩舻目焖贆z測方法包括以下步驟
1)將還原好的呋喃它酮與卵清蛋白重氮化法偶聯(lián)合成抗原AMOZ-OVA；2)將合成抗原AMOZ-OVA包被到酶標(biāo)板；3)以5％脫脂奶粉滿孔封閉；4)磷酸鹽緩沖液洗滌，拍干；5)將抗呋喃它酮單克隆抗體與AMOZ標(biāo)準(zhǔn)液在板外作用后加入到洗滌好的包被板上；6)磷酸鹽緩沖液洗滌，拍干；7)加入酶標(biāo)抗體，進(jìn)行孵育；8)磷酸鹽緩沖液洗滌，拍干；9)加入底物溶液；10)加入終止液，終止反應(yīng)；11)測定OD490nm值。
本發(fā)明利用免疫學(xué)原理制備針對(duì)呋喃它酮及其代謝產(chǎn)物呋喃它酮-3-氨基-5-嗎啉基-2-氧唑酮(AMOZ)特異的單克隆抗體，建立酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)以檢測呋喃它酮及其代謝產(chǎn)物呋喃它酮-3-氨基-5-嗎啉基-2-氧唑酮(AMOZ)，相對(duì)于液質(zhì)聯(lián)用色譜儀分析法，其對(duì)樣品的前處理要求較低，分析過程很簡單，檢測時(shí)間較短，而且檢測靈敏度也較高，使用成本低，為我國畜禽產(chǎn)品進(jìn)出口貿(mào)易中氨丙啉藥物殘留檢測提供一種高效、簡便的途徑。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是為上述單克隆抗體介導(dǎo)的呋喃它酮?dú)埩魴z測方法提供可方便操作的應(yīng)用途徑。
一種是用于制作呋喃它酮?dú)埩鬍LISA快速檢測試劑盒。
檢測呋喃它酮?dú)埩舻脑噭┖?，包?)包被有合成抗原AMOZ-OVA的聚苯乙烯酶標(biāo)板；2)濃縮稀釋液；3)濃縮洗液；4)抗呋喃它酮單克隆抗體；5)酶標(biāo)抗體；6)底物緩沖液；7)底物；8)終止液。
另一種是用于制作呋喃它酮?dú)埩鬍LISA快速檢測試紙條。
呋喃它酮?dú)埩鬍LISA快速檢測試紙條的制作方法是1)膠體金標(biāo)記抗體膠體金上標(biāo)記純化后的單克隆抗體；2)噴金將膠體金標(biāo)記的抗體噴到玻璃纖維上，制成膠體金墊；3)制作硝酸纖維素膜將試紙條中T線和C線噴到硝酸纖維素膜上；4)將樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸水紙組裝，然后切條。
試劑盒或試紙條分別是單克隆抗體介導(dǎo)的呋喃它酮?dú)埩魴z測方法的兩種應(yīng)用形式，可為人們快速檢測提供方便。
具體實(shí)施例方式(1)抗原合成首先，還原呋喃它酮將氨基取代呋喃它酮中的硝基，制成還原的呋喃它酮溶液。
抗原合成采用重氮化法進(jìn)行偶聯(lián)。取23mg亞硝酸鉀溶于1ml蒸餾水中，以冰水浴調(diào)溫度至0～5℃；還原好的呋喃它酮溶液，37℃水浴作用20分鐘，上清液冷卻至4℃左右，調(diào)PH值1-2，再緩慢加入亞硝酸鉀溶液并不斷攪拌，靜置反應(yīng)30min；將100mg的載體蛋白溶于4ml的磷酸鹽緩沖液中，冷卻至4℃左右，將重氮化藥物緩慢加入并不斷攪拌，為保持加入過程中PH的穩(wěn)定，同時(shí)加入0.2mol/L NaOH，調(diào)PH值至7.4，4℃過夜反應(yīng)；然后4℃PBS透析偶聯(lián)后的產(chǎn)物72-96h，每6h換液一次，直至透析液中檢測不出任何小分子物質(zhì)；偶聯(lián)后的產(chǎn)物以0.45μm濾膜過濾，-20℃分裝保存。
(2)動(dòng)物免疫用合成的免疫抗原腹腔注射免疫6～8周齡Balb/c雌鼠。免疫程序如下首免和二免按抗原50μg/只劑量，分別與弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑等體積混合(共0.3ml)免疫，免疫間隔期為10天，之后以100μg/只的劑量加強(qiáng)免疫，10天一次共免疫4次，融合前3天再追加免疫一次。
(3)雜交瘤篩選方法的建立小鼠眼眶采血，分離血清后，將血清作1∶50和1∶100稀釋。包被原AMOZ-OVA按1∶50、1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1000稀釋，之后倍比稀釋至1∶64000。用方陣法建立非競爭性間接ELISA方法。ELISA反應(yīng)程序如下①AMOZ-OVA用包被緩沖液稀釋至適當(dāng)濃度，每孔100ul，4℃包被過夜，以PBST洗滌3次，每次3min。②用5％脫脂乳滿孔封閉，37℃孵育2h，洗滌同上。③將陽性血清稀釋后順序加入，每孔100ul，每一稀釋度的陽性血清同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照，37℃孵育1h，洗滌同上。④用稀釋液將酶標(biāo)二抗稀釋到適當(dāng)?shù)墓ぷ鳚舛?，每孔?00ul，37℃孵育1h，洗滌同上。⑤每孔加新鮮配制的底物使用液100ul，37℃孵育30min。⑥每孔加2N H2SO4的終止液50ul。⑦測定OD值，以空白孔調(diào)零，以測定孔OD值大于或等于陰性對(duì)照孔的2.1倍，判為陽性。
(4)細(xì)胞融合與篩選最后一次免疫后第3天，無菌操作取小鼠的脾細(xì)胞與處于對(duì)數(shù)生長期的SP2/0細(xì)胞融合。在45～60sec內(nèi)加入1ml50％的PEG 4000，隨即加入大量無血清的DMEM中止反應(yīng)，靜置離心后，用HAT培養(yǎng)液重懸，加入適量的飼養(yǎng)細(xì)胞，混勻后鋪種于5塊96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞長至孔底的1/10或培養(yǎng)上清變黃時(shí)，用已建立的ELISA方法篩選。陽性細(xì)胞迅速擴(kuò)大培養(yǎng)并采用有限稀釋法進(jìn)行亞克隆，并選擇優(yōu)良穩(wěn)定者建立細(xì)胞株。獲得能穩(wěn)定分泌抗AMOZ抗體的雜交瘤細(xì)胞株，代號(hào)為AMOZ-D4E10。
雜交瘤細(xì)胞株AMOZ-D4E10已于2006年8月30日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)CGMCC No1792。
(5)單克隆抗體(McAb)的腹水制備取10周齡BALB/C小鼠，腹腔注射滅菌石蠟油0.3ml/只，5-7天后腹腔注射陽性雜交瘤細(xì)胞106個(gè)/只，待其腹部明顯膨脹后抽取腹水，離心取上清凍存并測其效價(jià)。
(6)單抗效價(jià)測定試驗(yàn)用品及試劑ELISA板(包被抗原按1∶40稀釋包被)一抗①腹水進(jìn)行1∶500，1∶1000，1∶1 500，1∶2000，1∶2500，1∶3000，1∶3500，1∶4000，1∶4500，1∶5000稀釋②細(xì)胞上清 做如下倍比稀釋原液，1∶2，1∶4，…，1∶2048二抗羊抗鼠IgG陽性判定標(biāo)準(zhǔn)P≥2.1N檢測結(jié)果顯示腹水效價(jià)為1∶20000，細(xì)胞上清效價(jià)為1∶256(7)單抗和包被抗原理想濃度的確定以方陣滴定法測定，最后選擇OD490nm值等于1.0左右的包被抗原和單抗的稀釋倍數(shù)為理想工作濃度。經(jīng)測定，抗原最佳包被量為0.75ug/孔，單抗最佳稀釋倍數(shù)為1∶5000。
(8)按照呋喃它酮-3-氨基-5-嗎啉基-2-氧唑酮(AMOZ)單克隆抗體介導(dǎo)的AMOZ殘留檢測方法的建立進(jìn)行試劑盒的組裝。
采用重氮化法進(jìn)行偶聯(lián)合成抗原AMOZ-OVA還原呋喃它酮將氨基取代呋喃它酮中的硝基，制成還原的呋喃它酮溶液。
取23mg亞硝酸鉀溶于1ml蒸餾水中，以冰水浴調(diào)溫度至0～5℃；將還原好的呋喃它酮溶液置于37℃水浴作用20分鐘，上清液冷卻至4℃左右，調(diào)PH值1-2，再緩慢加入亞硝酸鉀溶液并不斷攪拌，靜置反應(yīng)30min；將100mg的卵清白蛋白(OVA)溶于4ml的磷酸鹽緩沖液中，冷卻至4℃左右，將重氮化藥物緩慢加入并不斷攪拌，為保持加入過程中PH的穩(wěn)定，同時(shí)加入0.2mol/L NaOH，調(diào)PH值至7.4，4℃過夜反應(yīng)；然后4℃PBS透析偶聯(lián)后的產(chǎn)物72-96h，每6h換液一次，直至透析液中檢測不出任何小分子物質(zhì)；偶聯(lián)后的產(chǎn)物，即合成抗原AMOZ-OVA以0.45μm濾膜過濾，-20℃分裝保存。
以合成抗原(AMOZ-OVA)加入(包被)96孔酶標(biāo)板，組裝AMOZ-Kit。其主要組成為8×12孔酶標(biāo)板；10×濃縮稀釋液(0.1M PBS-T，PH 7.2，含0.05％Tween-80，A號(hào)瓶)；10×濃縮洗滌液(0.1M PBS-T，PH 7.2，含0.05％Tween-80，B號(hào)瓶)；單抗(抗AMOZ單克隆抗體，C號(hào)指形管)；HRP標(biāo)記兔抗鼠IgG(全分子)(D號(hào)指形管)；底物溶液(4.86mL 0.1M的檸檬酸溶液和5.14mL 0.2M的磷酸氫二鈉溶液的混合液，E號(hào)瓶)；雙氧水(30％的H2O2，G號(hào)瓶)；鄰苯二胺(OPD片劑，F(xiàn)號(hào)指形管)；終止液(2N H2SO4，H號(hào)瓶)；標(biāo)準(zhǔn)液(蒸餾水溶解稀釋的AMOZ標(biāo)準(zhǔn)品，N號(hào)指形管)；封板膜；使用說明書。
試劑盒中各組分的制備①包被有AMOZ-OVA的聚苯乙烯酶標(biāo)板用22mM的碳酸鹽溶液將抗原作1∶5000倍稀釋，包被96孔聚苯乙烯酶標(biāo)板，每孔100μL，置4℃冰箱過夜；用洗液(PBST)洗滌3次，用封閉液(5％的脫脂奶粉)37℃濕盒封閉60分鐘，洗液洗3次，干燥后即為反應(yīng)板。
②濃縮稀釋液(10×)0.1M pH 7.2含0.5％Tween-80的磷酸鹽緩沖液(PBST)。按常規(guī)法配制，4℃分裝保存。
③濃縮洗液(10×)0.1M pH 7.2含0.5％Tween-80的磷酸鹽緩沖液(PBST)。按常規(guī)法配制，4℃分裝保存。
④抗體由本室制備，工作濃度為1∶2000，-70℃保存。
⑤酶標(biāo)抗體購自Sigma公司。工作濃度為1∶30000，-20℃保存。
⑥底物緩沖液磷酸氫二鈉14.2g，檸檬酸10.5g，加去離子水定容至500mL，分裝4℃保存。
⑦底物溶液在底物緩沖液中加入0.15％的30％的H2O2。
⑧終止液0.2M硫酸溶液。
⑨底物片劑鄰苯二胺片劑。底物片劑在4℃避光保存1年以上應(yīng)穩(wěn)定、不變色，放入底物緩沖液中應(yīng)在2-3分鐘溶解。
(9)試紙條的組成及其成份制備B、按照呋喃它酮-3-氨基-5-嗎啉基-2-氧唑酮(AMOZ)單克隆抗體介導(dǎo)的AMOZ殘留檢測方法的建立進(jìn)行試紙條的組裝。
①膠體金標(biāo)記抗體將單克隆抗體純化后按常規(guī)方法進(jìn)行。具體方法a、取522nm膠體金溶液20ml恢復(fù)至室溫，用1％碳酸鉀調(diào)至PH8.2；b、取抗呋喃它酮單克隆抗體12000rpm離心5min，按每毫升膠體金加1微克抗呋喃它酮單克隆抗體的比例，取總量為20微克的抗呋喃它酮單克隆抗體，用PB稀釋到1ml體積；c、將稀釋后的抗呋喃它酮單克隆抗體緩慢地逐滴加入到磁力攪拌狀態(tài)下的膠體金溶液中，室溫下攪拌30min；d、逐滴加入1ml10％BSA至終濃度為0.5％，磁力攪拌30min；e、置4℃冰箱內(nèi)2小時(shí)，然后8800rpm離心min，盡可能小心吸棄上清，用含0.5％BSA和0.2％PEG20000的磷酸鹽緩沖液懸浮收集沉淀物，至最后體積為1ml，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br> ②噴金將膠體金標(biāo)記的抗體噴到玻璃纖維上，制成膠體金墊；③噴膜將試紙條中T線和C線噴到硝酸纖維素膜上；④將樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸水紙按常規(guī)方法進(jìn)行組裝，然后切條。
(10)靈敏度實(shí)驗(yàn)將AMOZ用超純水溶解、稀釋，與等體積的單抗同時(shí)加入ELISA板中。
1.將包被抗原以稀釋液稀釋成一定濃度，100μl/孔，4℃過夜；2.磷酸鹽緩沖液(PBST)洗滌1遍；3.以5％脫脂奶粉滿孔封閉，并盡量排除孔中可能產(chǎn)生的貼壁氣泡，37℃水浴作用1h或4℃過夜。
4.PBST洗滌3遍，每次3～5分鐘，洗后于吸水紙上拍干；5.將AMOZ標(biāo)準(zhǔn)品與單抗等體積混合后加入板中，37℃水浴作用1h；6.PBST洗滌3遍，每次3～5分鐘，洗后于吸水紙上拍干；7.加入HRP標(biāo)記羊抗鼠IgG(1∶5000，in PBS)，100μl/孔，37℃水浴作用1h；8.PBST洗滌4遍，每次3～5分鐘，洗后于吸水紙上拍干；9.加入新鮮配置的鄰苯二胺(OPD)底物溶液，100μl/孔，37℃水浴作用30min；10.加入2M濃硫酸終止顯色反應(yīng)；
11.用酶聯(lián)免疫閱讀儀測定OD490nm值。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本試劑盒靈敏度10μg/kg以下，且較穩(wěn)定。
(11)臨床樣品檢測①檢測樣品的處理采集肝、腎、肌肉、蛋黃、牛脂肪等組織，按一定比例加水進(jìn)行研磨、離心處理。
②測定方法A、呋喃它酮?dú)埩艨焖贆z測試劑盒的操作方法及結(jié)果分析使用前取B瓶液(濃縮洗滌液)按1∶10用蒸餾水稀釋至工作濃度為洗滌液；C管液100μL用A液1∶100稀釋待用；D管液100μL用A液1∶100稀釋待用；N管液用A液作系列梯度稀釋待用。按下表格式，先將樣品與單抗在板外37℃水浴作用1hr，再整體移到ELISA板上，37℃水浴45min(A1、A2孔只加入稀釋液100μL，不加單抗)。棄去孔內(nèi)液體，每孔加入洗滌液至滿孔，棄去洗滌液，于吸水紙上拍干，重復(fù)洗滌5遍。洗滌后立即在每孔中加入稀釋好的D液100μL，置37℃水浴1hr。棄去孔內(nèi)液體，每孔加入洗滌液至滿孔，放置2min，棄去洗滌液，于吸水紙上拍干，重復(fù)洗滌5遍。將F管中片劑(2片)溶于10mL底物緩沖液(E液)，完全溶解后，加入30ul G液混勻后每孔加入100μL，37℃避光顯色30min。顯色結(jié)束，每孔加50μL的H液；以A1孔為調(diào)零孔，用酶標(biāo)儀測定樣品的OD490值。
結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)加入H液后各孔顏色由黃色變?yōu)槌燃t色，用酶標(biāo)儀測定在490nm波長處每孔的光吸收值(OD值)，分別計(jì)算出每份被檢樣品孔、標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值，利用下列公式求出OD比值。
若OD比值小于15％，判定為“-”；OD比值在16-20％，判定為“±”；OD比值介于21-40％，判定為“+”；OD比值介于41-60％，判定為“++”；OD比值大于60％，判定為“+++”。
若需要，可以各標(biāo)準(zhǔn)品孔的濃度為橫坐標(biāo)，以各自的吸光值為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。求出回歸方程，將各樣品的吸光值帶入方程即可求出殘留量。
B、呋喃它酮?dú)埩裟z體金快速診斷試紙條應(yīng)用與判定將樣品處理液與試紙條樣品墊充分浸透，樣品液向膜的方向進(jìn)行擴(kuò)散，如果T線和C線同時(shí)出現(xiàn)，則待檢樣品判為陰性，如果僅出現(xiàn)T線，則待檢樣品判為陽性。
權(quán)利要求
1.單克隆抗體介導(dǎo)的呋喃它酮?dú)埩魴z測方法，其特征在于以抗呋喃它酮單克隆抗體為介導(dǎo)建立呋喃它酮?dú)埩鬍LISA快速檢測方法。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述單克隆抗體介導(dǎo)的呋喃它酮?dú)埩魴z測方法，其特征在于包括以下步驟1)將還原好的呋喃它酮與卵清蛋白重氮化法偶聯(lián)合成抗原AMOZ-OVA；2)將合成抗原AMOZ-OVA包被到酶標(biāo)板；3)以5％脫脂奶粉滿孔封閉；4)磷酸鹽緩沖液洗滌，拍干；5)將抗呋喃它酮單克隆抗體與AMOZ標(biāo)準(zhǔn)液在板外作用后加入到洗滌好的包被板上；6)磷酸鹽緩沖液洗滌，拍干；7)加入酶標(biāo)抗體，進(jìn)行孵育；8)磷酸鹽緩沖液洗滌，拍干；9)加入底物溶液；10)加入終止液，終止反應(yīng)；11)測定OD490nm值。
3.如權(quán)利要求1所述單克隆抗體介導(dǎo)的呋喃它酮?dú)埩魴z測方法的應(yīng)用，其特征在于用于制作呋喃它酮?dú)埩鬍LISA快速檢測試劑盒。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述單克隆抗體介導(dǎo)的呋喃它酮?dú)埩魴z測方法的應(yīng)用，其特征在于呋喃它酮?dú)埩鬍LISA快速檢測試劑盒包括1)包被有合成抗原AMOZ-OVA的聚苯乙烯酶標(biāo)板；2)濃縮稀釋液；3)濃縮洗液；4)抗呋喃它酮單克隆抗體；5)酶標(biāo)抗體；6)底物緩沖液；7)底物；8)終止液。
5.如權(quán)利要求1所述單克隆抗體介導(dǎo)的呋喃它酮?dú)埩魴z測方法的應(yīng)用，其特征在于用于制作呋喃它酮?dú)埩鬍LISA快速檢測試紙條。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述單克隆抗體介導(dǎo)的呋喃它酮?dú)埩魴z測方法的應(yīng)用，其特征在于呋喃它酮?dú)埩鬍LISA快速檢測試紙條的制作方法是1)膠體金標(biāo)記抗體膠體金上標(biāo)記純化后的單克隆抗體；2)噴金將膠體金標(biāo)記的抗體噴到玻璃纖維上，制成膠體金墊；3)制作硝酸纖維素膜將試紙條中T線和C線噴到硝酸纖維素膜上；4)將樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸水紙組裝，然后切條。
全文摘要
單克隆抗體介導(dǎo)的呋喃它酮?dú)埩魴z測方法及其應(yīng)用，屬于藥物殘留檢測領(lǐng)域。本發(fā)明以抗呋喃它酮單克隆抗體為介導(dǎo)建立呋喃它酮?dú)埩鬍LISA快速檢測方法，可用于制作檢測試劑盒和檢測試紙條，可方便地對(duì)呋喃它酮?dú)埩袅窟M(jìn)行ELISA快速。該方法相對(duì)于液質(zhì)聯(lián)用色譜儀分析法，對(duì)樣品的前處理要求較低，分析過程很簡單，檢測時(shí)間較短，而且檢測靈敏度也較高，使用成本低。
文檔編號(hào)G01N33/544GK1916637SQ20061012711
公開日2007年2月21日 申請(qǐng)日期2006年9月7日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月7日
發(fā)明者金文杰, 秦愛建, 蔡寶亮, 余兵, 王倩倩, 陶宏錦, 邰紅霞, 劉岳龍 申請(qǐng)人:揚(yáng)州大學(xué)