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一種酶菌聯(lián)合降解羽毛的方法與流程

文檔序號:12743878閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種酶菌聯(lián)合降解羽毛的方法,其特征在于,所述方法步驟如下:

S1. 配置發(fā)酵緩沖液,將羽毛加入到發(fā)酵緩沖液,得到含羽毛的發(fā)酵緩沖液;

S2. 將菌種活化培養(yǎng),得到活化后的菌液;

S3.將S2中活化后的菌液加入到S1中含羽毛的發(fā)酵緩沖液中進行一次發(fā)酵;

S4.待S3中發(fā)酵反應(yīng)16~48h后,加入角蛋白酶進行二次發(fā)酵培養(yǎng)24~56h;

S5.將S4中二次發(fā)酵后的液體離心后,取上清液得發(fā)酵液;

S1中,羽毛質(zhì)量占發(fā)酵緩沖液質(zhì)量的1~10%,所述發(fā)酵緩沖液的pH值為6~10;

S2中,菌種為蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus )YSQ08,于2012 年09 月03 日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心,菌種保藏編號為CCTCC No. M2012322;

S3中,將S2中活化后的菌液按2~6%的加入量加入含羽毛的發(fā)酵緩沖液;

S4中,以S3中一次發(fā)酵后物質(zhì)量計,角蛋白酶的添加量為1000~5000U/g;所述角蛋白酶的酶活為105~106U/g。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,S3中,將S2中活化后的菌液按3%加入含羽毛的發(fā)酵緩沖液;S4中,以S3中一次發(fā)酵后物質(zhì)量計,角蛋白酶的添加量為2000U/g,S1中,羽毛質(zhì)量占發(fā)酵緩沖液質(zhì)量的2.5%。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,S4中,待S3中發(fā)酵反應(yīng)24h后,加入角蛋白酶進行二次發(fā)酵培養(yǎng)48h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述羽毛為雞毛,發(fā)酵緩沖液的pH值為9。

5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述發(fā)酵緩沖液組成為:0.1~1.0g/L氯化鈉,0.01~1.0g/L氯化鈣,0.1 ~1.0g /L氯化鎂,1.0~5.0g/L磷酸氫二鉀,0.1~2.0g/L磷酸二氫鉀。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,S3和S4中發(fā)酵溫度為36~42℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,S2中,菌種活化培養(yǎng)步驟如下:

S21.采用平板劃線培養(yǎng)的方法,將蠟樣芽孢桿菌YSQ08(Bacillus cereus)進行活化,挑取單菌落,置于LB肉湯培養(yǎng)基中,搖床37℃,200r/min培養(yǎng)24h;

S22.將S21中所得液體以2%的菌液加入量加入到S1中含羽毛的發(fā)酵緩沖液中,72h后,劃線倒置培養(yǎng)14h,挑取單菌落進行液體培養(yǎng),搖床37℃,200r/min培養(yǎng)14h;

S23. 將S22中誘導(dǎo)好的液體以2%的添加量加入到LB肉湯培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)3~5次。

8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于,LB肉湯培養(yǎng)基的制備為:將胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 5g混合,加蒸餾水定容至1000mL,pH為7.0,121℃高壓滅菌20min。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于,S21中,所述蠟樣芽孢桿菌YSQ08菌株的種齡為8~20h。

10.一種權(quán)利要求1至9所述的方法制備得到的發(fā)酵液。

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