本發(fā)明屬于流腦A群細(xì)菌發(fā)酵領(lǐng)域，具體地，涉及一種降低流腦A群細(xì)菌發(fā)酵液中雜質(zhì)含量的工藝。
背景技術(shù)：
腦膜炎奈瑟菌（N. meningitidis）簡稱為腦膜炎球菌（meningococcus），是流行性腦脊髓膜炎（簡稱流腦）的病原菌。一百多年來，流腦一直在世界各地流行或散在發(fā)生，是人類的主要急性呼吸道傳染病之一。很多國家經(jīng)過長期的流行病學(xué)監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)此病具有周期性流行的特點(diǎn)。意大利發(fā)現(xiàn)1915-1934年在其國內(nèi)發(fā)生了三次流行。我國也出現(xiàn)過五次全國性大流行，在1938、1949、1959、1967及1977年，約每8-10年出現(xiàn)一次流行高峰。據(jù)WHO報告，近十余年來發(fā)病率平均為2.5/10萬。當(dāng)今世界各大洲發(fā)病率在1/10萬-10/10萬，國內(nèi)1967年的大流行，全國發(fā)病率及病死率均較高。發(fā)病數(shù)占傳染數(shù)的第四位，而死亡數(shù)占全部傳染病死亡數(shù)的60%，嚴(yán)重危害人民健康及影響計劃生育。其主要的特點(diǎn)為：易感人群主要是為兒童，以爆發(fā)型病死率最高，可達(dá)40%-60%。
流腦的預(yù)防，主要采取以疫苗接種為主的預(yù)防措施。1980年，我國正式生產(chǎn)A群NM多糖疫苗，推廣應(yīng)用取得了很好的效果。但多糖疫苗對2歲以下的嬰幼兒預(yù)防效果較差，結(jié)合疫苗的研制成功解決了疫苗在嬰幼兒中無效的問題。結(jié)合疫苗比以往的疫苗具有更強(qiáng)的免疫原性和更好的免疫效果。
制備流腦A群結(jié)合疫苗首先要獲得流腦A群莢膜多糖，目前傳統(tǒng)的生產(chǎn)方式生產(chǎn)流腦A群莢膜多糖需要將流腦A群菌種經(jīng)過培養(yǎng)、發(fā)酵后得到的上清液再經(jīng)過純化處理，而采用該傳統(tǒng)方式生產(chǎn)的流腦A群發(fā)酵液中含有較多的核酸及蛋白等雜質(zhì)成分，增加了后續(xù)純化的難度。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種降低流腦A群細(xì)菌發(fā)酵液中雜質(zhì)含量的工藝，尤其是控制流腦A群細(xì)菌發(fā)酵液中的核酸及蛋白等雜質(zhì)成分的含量處于較低水平。
本發(fā)明解決上述問題所采用的技術(shù)方案是：
降低流腦A群細(xì)菌發(fā)酵液中雜質(zhì)含量的工藝，包括以下步驟：
1）開啟菌種及傳代：
開啟流腦A群菌種傳代至氯化血紅素流腦半綜合培養(yǎng)基上，放入二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱中，36.5℃，8%CO2培養(yǎng)，二代采用半綜合固體培養(yǎng)基培養(yǎng)，三代采用流腦半綜合液體培養(yǎng)基在恒溫振蕩搖床中培養(yǎng)；
2）接種到種子罐培養(yǎng)：
將上述步驟1）培養(yǎng)得到的流腦A群種子接種到種子罐，恒溫攪拌通氣培養(yǎng)，培養(yǎng)至第五代；
3）發(fā)酵罐發(fā)酵：
將上述步驟2）培養(yǎng)得到的流腦A群五代種子接種入發(fā)酵罐后，恒溫35℃，深層通氣300rpm攪拌培養(yǎng)，中途補(bǔ)加葡萄糖溶液為流腦A群細(xì)菌生產(chǎn)莢膜多糖提供原料，培養(yǎng)流腦A群細(xì)菌至對數(shù)生長期后期或靜止期前期，此時菌濃度達(dá)到100-200億/mL，甲醛殺菌后去除菌體，收集發(fā)酵液上清液。
綜上，本發(fā)明的有益效果是：
本申請通過對發(fā)酵罐攪拌及深層通氣等工藝過程中的工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，控制發(fā)酵后的清液中的核酸及蛋白等雜質(zhì)成分的含量較低，具體地，采用本工藝得到的發(fā)酵液中的核酸含量約為1mg/g，蛋白含量低于1mg/g，雜質(zhì)含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于標(biāo)準(zhǔn)要求。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
實(shí)施例1
降低流腦A群細(xì)菌發(fā)酵液中雜質(zhì)含量的工藝，包括以下步驟：
1）開啟菌種及傳代：
開啟流腦A群菌種傳代至氯化血紅素流腦半綜合培養(yǎng)基上，放入二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱中，36.5℃，8%CO2培養(yǎng)，二代采用半綜合固體培養(yǎng)基培養(yǎng)，三代采用流腦半綜合液體培養(yǎng)基在恒溫振蕩搖床中培養(yǎng)；
2）接種到種子罐培養(yǎng)：
將上述步驟1）培養(yǎng)得到的流腦A群種子接種到種子罐，恒溫攪拌通氣培養(yǎng)，培養(yǎng)至第五代。