亚洲成年人黄色一级片,日本香港三级亚洲三级,黄色成人小视频,国产青草视频,国产一区二区久久精品,91在线免费公开视频,成年轻人网站色直接看

芒果精氨酸脫羧酶基因MiADC的克隆方法與流程

文檔序號(hào):12577468閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種芒果精氨酸脫羧酶基因MiADC的克隆方法,其特征在于包括以下步驟:

1)以芒果為供試材料,稱取其葉片研磨后,提取其總RNA,并冷凍保存?zhèn)溆茫?/p>

2)以步驟1)的總RNA為模板,進(jìn)行cDNA第一鏈的合成及3'和5'RACE ready cDNA的準(zhǔn)備;

3)以步驟2)中獲得的cDNA為模板,進(jìn)行MiADC基因保守區(qū)序列的擴(kuò)增,并進(jìn)行克隆測(cè)序;

4)以步驟2)中獲得的3'/5'RACE ready cDNA為模板,以步驟3)獲得的保守區(qū)序列設(shè)計(jì)特異性引物擴(kuò)增MiADC基因,并進(jìn)行克隆測(cè)序。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芒果精氨酸脫羧酶MiADC基因的克隆及序列分析方法,其特征在于:步驟1)中采集芒果幼嫩葉片,通過(guò)改良CTAB法抽提芒果總RNA。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芒果精氨酸脫羧酶MiADC基因的克隆方法,其特征在于:步驟2)中采用第一鏈cDNA合成試劑盒和cDNA末端快速擴(kuò)增試劑盒。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芒果精氨酸脫羧酶MiADC基因的克隆方法,其特征在于:步驟3)中利用NCBI搜索不同物種中MiADC基因編碼的氨基酸序列,進(jìn)行多序列比對(duì)后,在保守區(qū)域設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物,引物信息為:

ADC-sense:5'-CACCCTGCCCCACcargarathga-3'

ADC-antisense:5'-GCCGGAGGTGGAGccraartgncc-3'。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芒果精氨酸脫羧酶MiADC基因的克隆方法,其特征在于:步驟4)中獲得MiADC基因的保守區(qū)序列后,采用primer premier 5.0軟件設(shè)計(jì)MiADC基因的特異引物,并通過(guò)RACE法進(jìn)行MiADC基因克隆;

引物信息為:

ADCGsp1-1:5'-GAGCAAAACTGAGAACTAAACATTCGGGACA-3'

ADCGsp1-2:5'-CGTGTGGTGAGGAAACTTGAACAGGCT-3'

ADCGsp2-1:5'-GCCAGCCTGTTCAAGTTTCCTCACCA-3'。

當(dāng)前第2頁(yè)1 2 3 
網(wǎng)友詢問(wèn)留言 已有0條留言
  • 還沒(méi)有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
1