本發(fā)明提供一種新型咪唑并[1,2-b]噠嗪酰胺化合物，或此類化合物藥學(xué)上可接受的鹽，其制備方法，其藥物組合物，以及其用于制備預(yù)防和/或治療與蛋白激酶活性異常相關(guān)疾病的藥物、特別是與bcr-abl蛋白激酶活性異常相關(guān)疾病的藥物的方法。

背景技術(shù)：

蛋白激酶是將atp上的磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到蛋白質(zhì)上特定的絲氨酸、蘇氨酸、或酪氨酸殘基上的酶。蛋白質(zhì)的磷酸化導(dǎo)致信號(hào)傳導(dǎo)途徑的激活，對(duì)體內(nèi)復(fù)雜的生物過程起了關(guān)鍵的作用，包括細(xì)胞生長(zhǎng)、代謝、分化和死亡。由不正?；虿贿m當(dāng)?shù)牡鞍准っ富钚砸鸬漠惓Ｐ盘?hào)已知與很多疾病有關(guān)，包括癌癥、炎癥、自身免疫性疾病、代謝性疾病、感染、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和心血管疾病等。因此，蛋白激酶是近年來藥物開發(fā)的熱門靶點(diǎn)(cohen,nat.rev.drugdiscovery2002,1,309)。

位于人體第9號(hào)染色體上的c-abl基因和第22號(hào)染色體長(zhǎng)臂遠(yuǎn)端的bcr基因相互易位，產(chǎn)生了兩個(gè)融合基因：位于22q-染色體上的bcr-abl基因和位于9q+染色體上abl-bcr基因。bcr-abl基因是費(fèi)城染色體，它表達(dá)210kd的蛋白質(zhì)(p210bcr-abl)。bcr-abl蛋白質(zhì)的abl部分含有abl的酪氨酸激酶，它在原型的c-abl中是受嚴(yán)密調(diào)節(jié)的，但在bcr-abl融合蛋白質(zhì)中被連續(xù)地激活，從而導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)的失控。bcr-abl存在95％的cml的患者中，以及10-25％急性淋巴細(xì)胞白血病(all)的患者中。伊馬替尼(imatinib)是一種bcr-abl酪氨酸激酶的抑制劑，并已臨床證明是一種治療cml的有效制劑(drukeretal.n.engl.j.med.2006,355,2408)。然而，盡管持續(xù)伊馬替尼治療，一些cml患者在晚期或爆炸危機(jī)階段會(huì)復(fù)發(fā)，原因是產(chǎn)生對(duì)藥物的抗藥性?？顾幮缘姆肿踊A(chǔ)是bcr-abl的激酶結(jié)構(gòu)區(qū)域出現(xiàn)對(duì)伊馬替尼抗性的變體。目前，第二代bcr-abl激酶抑制劑已經(jīng)上市，主要有達(dá)沙替尼(dasatinib)、尼洛替尼(nilotinib)、博舒替尼(bosutinib)和普納替尼(ponatinib)。雖然這些藥物在上市初期均能顯示出令人鼓舞的成效，但一些研究者報(bào)道它們使用后將在bcr-abl激酶區(qū)引發(fā)新的突變。因此，開發(fā)更新的針對(duì)突變體的bcr-abl激酶抑制劑顯得很有必要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種咪唑并[1,2-b]噠嗪酰胺類bcr-abl激酶抑制劑，其為具有如下通式i所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

上述通式i中：

(a)r1是獨(dú)立的氫，或者甲基；r2是任意取代的n元環(huán)烴基，其中n＝3-11，并且環(huán)上包括至多n-1個(gè)雜原子，這些雜原子獨(dú)立的選自氮、氧、硫和磷，或者

(b)r1和r2連接形成一個(gè)任意取代的m元氮雜環(huán)烴基，其中m＝3-11，并且環(huán)上包括至多m-2個(gè)另外的雜原子，這些雜原子獨(dú)立的選自氮、氧、硫和磷。

本發(fā)明提供如通式i中所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述的藥學(xué)上可接受的鹽包括但不限于鹽酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、醋酸鹽、三氟乙酸鹽、馬來酸鹽、苯磺酸鹽、甲基苯磺酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽等。

本發(fā)明提供一種藥用組合物，其包括單位劑量的如通式i所述的化合物、一種藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑，以及可選的其他bcr-abl激酶活化介導(dǎo)病癥治療劑。

本發(fā)明提供如通式i所述的化合物的前體藥物。

本發(fā)明提供如通式i所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備預(yù)防和/或治療由bcr-abl激酶活化介導(dǎo)的病癥藥物中的應(yīng)用。所述bcr-abl激酶活化介導(dǎo)病癥可為增殖性疾病。所述增殖性疾病具體可選自：實(shí)體瘤、肉瘤、cml、慢性粒細(xì)胞白血病、胃腸道間質(zhì)瘤(gist)、急性粒細(xì)胞白血病(all)、甲狀腺癌、胃癌、直腸癌、多發(fā)性骨髓瘤、瘤形成以及其他增生性或增殖性疾病、或其組合。

在具體的實(shí)施方案中：

本發(fā)明提供如通式i所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中(a)r1

是獨(dú)立的氫，或者甲基；r2是任意取代的n元環(huán)烴基，其中n＝3-11，并且環(huán)上包括至多n-1個(gè)雜原子，這些雜原子獨(dú)立的選自氮、氧、硫和磷。

本發(fā)明提供如通式i所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中(a)r1是獨(dú)立的氫，或者甲基；r2是任意取代的n元環(huán)烷基，其中n＝3-11，并且環(huán)上包括至多n-1個(gè)雜原子，這些雜原子獨(dú)立的選自氮、氧、硫和磷。

本發(fā)明提供如通式i所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中(a)r1是獨(dú)立的氫，或者甲基；r2是任意取代的n元環(huán)烷基，其中n＝6-11，并且環(huán)上包括至少1個(gè)氮原子，和至多n-2個(gè)雜原子，這些雜原子獨(dú)立的選自氮、氧、硫和磷。

本發(fā)明提供如通式i所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中(a)r1是獨(dú)立的氫，或者甲基；r2是任意取代的n元氮雜環(huán)烷基，其中n＝6-11，并且環(huán)上取代基選自甲基，鹵素取代基，羥基和氨基。

本發(fā)明提供如通式i所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中(a)r1是獨(dú)立的氫，或者甲基；r2是甲基取代的n元氮雜環(huán)烷基，其中n＝6-11。

本發(fā)明提供如權(quán)利要求1所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中(a)r1是獨(dú)立的氫，或者甲基；r2選自下述基團(tuán)：

本發(fā)明提供如通式i所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中(b)r1和r2連接形成一個(gè)任意取代的m元氮雜環(huán)烴基，其中m＝3-11，并且環(huán)上包括至多m-2個(gè)另外的雜原子，這些雜原子獨(dú)立的選自氮、氧、硫和磷。

本發(fā)明提供如通式i所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中(b)r1和r2連接形成一個(gè)任意取代的m元氮雜環(huán)烷基，其中m＝3-11，并且環(huán)上包括至多m-2個(gè)另外的雜原子，這些雜原子獨(dú)立的選自氮、氧、硫和磷。

本發(fā)明提供如通式i所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中(b)r1和r2連接形成一個(gè)任意取代的m元氮雜環(huán)烷基，其中m＝5-7，并且環(huán)上包括至多m-2個(gè)另外的雜原子，這些雜原子獨(dú)立的選自氮、氧、硫和磷。

本發(fā)明提供如通式i所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中(b)r1和r2連接形成一個(gè)任意取代的m元氮雜環(huán)烷基，其中m＝5-7，并且環(huán)上包括0-1個(gè)另外的氮原子。

本發(fā)明提供如通式i所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中(b)r1和r2連接形成一個(gè)任意取代的m元氮雜環(huán)烷基，其中m＝5-7，環(huán)上包括0-1個(gè)另外的氮原子，并且取代基選自甲基、鹵素取代基、羥基和氨基。

本發(fā)明提供如通式i所示的化合物，其結(jié)構(gòu)式選自下表：

本發(fā)明提供如通式i所示的化合物，其結(jié)構(gòu)式如p16：

本發(fā)明提供如通式i所示的化合物，其結(jié)構(gòu)式如p17：

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明提供的咪唑并[1,2-b]噠嗪酰胺類bcr-abl激酶抑制劑，是新型的具有抗bcr-abl激酶活性的化合物，在體外對(duì)bcr-abl激酶具有良好的抑制活性。bcr-abl激酶在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要作用，它通過磷酸化和活化一系列下游底物，促使cml成熟粒細(xì)胞無限增殖。bcr-abl在正常細(xì)胞中不表達(dá)，是治療cml的理想靶標(biāo)。bcr-abl抑制劑通過抑制bcr-abl激酶活性可達(dá)到治療cml的目的。試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明所制備的咪唑并[1,2-b]噠嗪酰胺類bcr-abl激酶抑制劑能夠有效地抑制bcr-abl的活性并抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。說明此類咪唑并[1,2-b]噠嗪酰胺類bcr-abl激酶抑制劑可用于制備bcr-abl抑制劑藥物和抗腫瘤藥物。

本發(fā)明提供的咪唑并[1,2-b]噠嗪酰胺類bcr-abl激酶抑制劑的制備方法，具有原料易得，反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)過程操作簡(jiǎn)單，所用試劑便宜的優(yōu)點(diǎn)。

具體實(shí)施方式

下面將詳細(xì)描述本發(fā)明的示例性實(shí)施方案。然而，這些實(shí)施方案僅為說明目的，并不旨在限制本發(fā)明的范圍。

定義

本文使用的以下術(shù)語和表達(dá)具有指定的含義。

“藥學(xué)上可接受的鹽”是指把母體化合物中的堿性基團(tuán)轉(zhuǎn)換成鹽的形式。藥學(xué)上可接受的鹽包括，但不僅限于，堿性基團(tuán)例如胺(氨)基的無機(jī)或有機(jī)酸鹽類。本發(fā)明藥學(xué)上可接受的鹽可以由母體化合物合成，即母體化合物中的堿性基團(tuán)與1-4當(dāng)量的酸在一個(gè)溶劑系統(tǒng)中反應(yīng)。

本發(fā)明還包括所述化合物的前藥。前藥是一個(gè)藥理物質(zhì)(藥物)，由母體藥物衍生出來。一旦進(jìn)入體內(nèi)，前藥就被代謝轉(zhuǎn)變成母體藥物。前藥可通過對(duì)母體藥物的一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)進(jìn)行取代而制備，其取代基團(tuán)在體內(nèi)將被降解而釋放出母體化合物來。

具體地講，本發(fā)明所述的蛋白激酶還包括突變的激酶，如突變的abl和bcr-abl激酶。突變的abl和bcr-abl激酶包括，有一個(gè)或多個(gè)下列的突變體：g250e、e255v、t315i、f317l和m351t等。

“ic50”指特定的測(cè)試化合物在測(cè)試該效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生50％最大抑制效應(yīng)的數(shù)量、濃度或劑量。

制備方法

本發(fā)明的化合物可通過已知的化學(xué)反應(yīng)和步驟來制備。下面展示了一些合成本發(fā)明的化合物的代表性的方法。眾所周知，期望的目標(biāo)化合物所需的取代基的性質(zhì)往往決定了合成的優(yōu)選方法。

本發(fā)明的另一方面涉及通式i化合物的制備方法。本發(fā)明的化合物可以使用以下的步驟和方法制備。

總體步驟

制備本發(fā)明實(shí)施例中的化合物可以采用方案1或方案2兩種方案。較方案2相比，方案1需要用帶有保護(hù)基(pg)的中間體(sm4)參與反應(yīng)，在合成的最后一步脫除保護(hù)基即可得到目標(biāo)化合物。

方案1

方案二

本專利保護(hù)的化合物可以使用此合成路線合成。3-碘-4-甲基苯甲酸甲酯(sm1)與三甲基硅基乙炔在雙三苯基磷二氯化鈀催化下發(fā)生sonogashira偶聯(lián)反應(yīng)得到中間體1。對(duì)中間體1實(shí)施脫三甲基硅基保護(hù)基得到中間體2。咪唑并[1,2-b]噠嗪(sm2)與n-碘代丁二酰亞胺在dmf中加熱得到碘代中間體3。中間體2在dmf中與中間體3反應(yīng)，用鈀催化劑，如四(三苯基膦)鈀，從而得到中間體4。中間體4在甲醇和四氫呋喃混合溶劑中用堿如氫氧化鋰水解得到中間體5。2-氟-5-硝基三氟甲苯(sm3)與sm4或sm5在堿性條件下如碳酸鉀于一種溶劑體系如乙腈中反應(yīng)得到硝基化合物中間體6或8。將中間體6或8上的硝基在一種溶劑如甲醇中與氫氣反應(yīng)，用鈀碳做催化劑，得到中間體7或9。中間體5和中間體7或9在dmf中用一種縮合劑如edci發(fā)生縮合反應(yīng)，得到目標(biāo)化合物或進(jìn)一步在酸性條件下脫去保護(hù)基得到目標(biāo)化合物p1-p19。

實(shí)施例1

4-甲基-3-((三甲基硅基)乙炔基)苯甲酸甲酯

將3-碘-4-甲基苯甲酸甲酯(sm1)(30g,0.471mol)溶解在四氫呋喃(1200ml)中。加入三甲基硅基乙炔(92.3g,0.942mol)和二異丙基乙基胺(72.9g,0.565mol)。體系抽真空，然后充氮?dú)?。加入碘化亞銅(8.92g,0.047mol)和雙三苯基磷二氯化鈀(16.5g,0.024mol)。體系抽真空，然后充氮?dú)?。在氮?dú)夥諊掠?0℃攪拌4小時(shí)，冷卻至室溫后，該混合物用硅藻土過濾，硅藻土用乙酸乙酯徹底洗滌。濾液依次用水和飽和食鹽水洗滌，硫酸鈉干燥，過濾和濃縮至干。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(乙酸乙酯/石油醚＝1:50)，得到標(biāo)題化合物(95.1g，82.6％)為棕色固體。lc-ms(m/z)＝247.6[m+h]+。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.19(s,1h),7.86(d,j＝8.4hz,1h),7.30(d,j＝8.4hz,1h),3.41(s,3h),2.32(s,3h),0.11(s,9h)。

3-乙炔基4-甲基苯甲酸甲酯

將4-甲基-3-((三甲基硅基)乙炔基)苯甲酸甲酯(95g,0.386mol)和氟化鉀(67.2g,1.158mol)攪拌溶于1000ml甲醇，室溫?cái)嚢柽^夜。濃縮至干，粗品經(jīng)柱層析純化(乙酸乙酯/石油醚＝1:50)，得到標(biāo)題化合物(51g，76.1％)為黃色固體。lc-ms(m/z)＝175.2[m+h]+。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.29(s,1h),7.82(d,j＝8.4hz,1h),7.34(d,j＝8.4hz,1h),4.15(s,1h),3.85(s,3h),2.41(s,3h)。

3-碘咪唑并[1,2-b]噠嗪

將咪唑并[1,2-b]噠嗪(40g,0.336mol)，n-碘代丁二酰亞胺(90g,0.402mol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(500ml)，置換氮?dú)?次。將混合物80℃加熱3小時(shí)，加入另外一批n-碘代丁二酰亞胺(45g,0.201mol)，繼續(xù)在80℃加熱4小時(shí)。冷卻，將反應(yīng)混合物倒入水(250ml)中，并用二氯甲烷(2×150ml)萃取。收集有機(jī)相，na2so4干燥，過濾、濃縮至干。粗品經(jīng)柱層析純化(乙酸乙酯/石油醚＝1:10)，得標(biāo)題化合物(45g，54.9％)為棕色固體。lc-ms(m/z)＝246.1[m+h]+。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.46(d,j＝4.4hz,1h),7.92(d,j＝9.2hz,1h),7.85(s,1h),7.08(dd,j＝4.4,9.2hz,1h)。

3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酸甲酯

向100ml瓶中加入3-碘咪唑并[1,2-b]噠嗪(10g,0.041mol)，3-乙炔基4-甲基苯甲酸甲酯(7.14g,0.041mol)，四(三苯基膦)鈀(1.42g,0.0021mol)，碘化亞銅(0.778g,0.0041mol)，二異丙基乙基胺(6.35g,0.049mol)和n’n-二甲基甲酰胺(50ml)。將混合物置換氮?dú)馊魏蠹訜?0℃攪拌4小時(shí)，然后冷卻，將反應(yīng)混合物倒入水(150ml)中，并用乙酸乙酯(3×100ml)萃取。收集有機(jī)相，na2so4干燥，過濾和濃縮至干。粗品經(jīng)柱層析純化(乙酸乙酯/石油醚＝1:5)，得標(biāo)題化合物(10g，84.7％)為白色固體。lc-ms(m/z)＝292.6[m+h]+。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.76(d,j＝3.2hz,1h),8.29(s,1h),7.98(dd,j＝3.2hz,9.2hz,1h),7.90(d,j＝8.4hz,1h),7.85(s,1h),7.34(d,j＝8.4hz,1h),7.22(d,j＝9.2hz,1h),3.86(s,3h),2.35(s,3h)。

3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酸

將3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酸甲酯(10g,0.034mol)溶于四氫呋喃/甲醇/水(2:2:1,200ml)后加入氫氧化鋰(3.3g,0.137mol)。反應(yīng)體系在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)結(jié)束后，體系在減壓下除去有機(jī)溶劑，所得物用6n鹽酸溶液調(diào)至ph5～6。體系中生成的白色沉淀經(jīng)過濾，洗滌、干燥后得標(biāo)題化合物(9g,94.6％)為淡黃色固體。lc-ms(m/z)＝276.1[m-h]-。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ11.03(s,1h),8.76-8.75(d,j＝3.2hz,1h),8.45(s,1h),8.07-8.05(d,j＝8.4hz,1h),7.97-7.94(dd,j1＝3.2hz,j2＝9.2hz,1h),7.85(s,1h),7.44-7.42(d,j＝8.4hz,1h),7.23-7.20(d,j＝9.2hz,1h),2.47(s,3h)。

(r)-(1-(4-硝基-2-(三氟甲基)苯基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯

將1-氟-4-硝基-2-(三氟甲基)苯(2g,9.57mmol)，r)-3-叔丁氧羰基氨基吡咯烷(1.9g,10.5mmol)溶于乙腈(30ml)后加入碳酸鉀(2.9g,21.1mmol)。反應(yīng)體系在80℃下攪拌過夜，然后冷卻，將反應(yīng)混合物倒入水(20ml)中，并用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。收集有機(jī)相，na2so4干燥，過濾和濃縮至干。粗品經(jīng)柱層析純化(乙酸乙酯/石油醚＝1:5)，得標(biāo)題化合物(2.7g，74％)為白色固體。lc-ms(m/z)＝376.4[m+h]+。

(r)-(1-(4-氨基-2-(三氟甲基)苯基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯

將(r)-(1-(4-硝基-2-(三氟甲基)苯基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(2.0g,5.3mmol)溶于甲醇(40ml)后加入pd/c(10％，200mg)。體系抽真空，然后充氫氣。在氫氣球氛圍下于室溫?cái)嚢柽^夜，混合物用硅藻土過濾，硅藻土用甲醇徹底洗滌。濾液濃縮后所得粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(乙酸乙酯/石油醚＝1:1)，得到標(biāo)題化合物(1.7g，91％)為白色固體。lc-ms(m/z)＝346.4[m+h]+。

(r)-n-(4-(3-氨基吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺

向20ml單口瓶中加入3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酸(100mg,0.36mmol)，(r)-(1-(4-氨基-2-(三氟甲基)苯基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(125mg,0.36mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(104mg,0.54mmol)，4-二甲氨基吡啶(66mg,0.54mmol)，n’n-二甲基甲酰胺(5ml)。將混合物置換氮?dú)馊魏蠹訜?0℃攪拌3小時(shí)，然后冷卻，將反應(yīng)混合物倒入水(10ml)中，并用二氯甲烷(3×10ml)萃取。收集有機(jī)相，na2so4干燥，過濾和濃縮至干。粗品溶于三氟乙酸(0.5ml)的二氯甲烷(5ml)溶液，室溫反應(yīng)2小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮，用甲醇/二氯甲烷重結(jié)晶得標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(113mg，43％)為白色固體。lc-ms(m/z)＝505.6[m+h]+。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.42(s,1h),8.74(dd,j＝1.6,4.4hz,1h),8.28(dd,j＝1.6,9.2hz,1h),8.24(s,1h),8.21(d,j＝1.6hz,1h),8.13(d,j＝2.4hz,1h),8.00(dd,j＝2.4,9.2hz,1h),7.96(dd,j＝1.6,7.6hz,1h),7.56(d,j＝8.4hz,1h),7.42(q,j＝4.4hz,1h),7.29(d,j＝8.4hz,1h),3.51-3.45(m,2h),3.27-3.22(m,2h),3.15-3.11(m,1h),2.55(s,3h),2.51-2.33(m,2h)。

以下實(shí)施例2-10皆按照方案1和實(shí)施例1的方法制備。

實(shí)施例2

(s)-n-(4-(3-氨基吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺

lc-ms(m/z)＝505.1[m+h]+。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.42(s,1h),8.74(dd,j＝1.6,4.4hz,1h),8.28(dd,j＝1.6,9.2hz,1h),8.24(s,1h),8.21(d,j＝1.6hz,1h),8.13(d,j＝2.4hz,1h),8.00(dd,j＝2.4,9.2hz,1h),7.96(dd,j＝1.6,7.6hz,1h),7.56(d,j＝8.4hz,1h),7.42(q,j＝4.4hz,1h),7.29(d,j＝8.4hz,1h),3.70-3.77(m,2h),3.51-3.45(m,2h),3.27-3.22(m,2h),3.15(q,j＝4.8hz,1h),2.61(s,3h)。

實(shí)施例3

(r)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基-n-(4-(3-(甲胺基)吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

lc-ms(m/z)＝519.4[m+h]+。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.52(s,1h),9.24-9.16(m,1h),9.82(dd,j＝1.2,4.4hz,1h),8.37(s,1h),8.34(dd,j＝1.2,9.2hz,1h),8.22(d,j＝2.0hz,1h),8.17(d,j＝2.4hz,1h),8.03(dd,j＝2.4,8.8hz,1h),7.98(dd,j＝2.0,8.8hz,1h),7.56-7.50(m,1h),7.42(d,j＝9.2hz,1h),3.87-3.80(m,1h),3.51-3.46(m,1h),3.35-3.29(m,2h),3.23-3.17(m,1h),2.61(s,3h),2.60-2.57(m,3h),2.33-2.28(m,1h),2.12-2.03(m,1h)。

實(shí)施例4

n-(4-((3s,4s)-3-氨基-4-羥基吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺，和n-(4-((3r,4r)-3-氨基-4-羥基吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺混合物

lc-ms(m/z)＝521.6[m+h]+。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.61(dd,j＝1.6,4.4hz,1h),8.14(d,j＝2.0hz,1h),8.08(dd,j＝1.6,9.2hz,1h),8.05(s,2h),7.90-7.86(m,2h),7.46(s,1h),7.36-7.30(m,2h)，4.25-4.22(m，1h),3.68-3.58(m,3h)，3.35-3.33(m,1h),3.25-3.22(m,2h),3.20-3.10(m,1h),2.64(s,3h)。

實(shí)施例5

(r)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基-n-(4-(哌啶-3-基-氨基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

lc-ms(m/z)＝519.4[m+h]+。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.28(d,j＝1.2hz,2h),7.74-7.72(m,2h),7.62-7.60(m,2h),7.32(d,j＝8.0hz,2h),6.78(d,j＝8.8hz,2h),6.58(br,1h),3.53-3.51(m,1h),3.21(dd,j＝2.4,11.6hz,1h),2.91-2.86(m,1h),2.77-2.71(m,1h),2.64-2.59(m,1h),2.48(s,3h),1.94-1.92(m,1h),1.60-1.51(m,3h)。

實(shí)施例6

(r)-n-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺

lc-ms(m/z)＝519.4[m+h]+。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.59(s,1h),8.20-8.09(m,5h),7.96(d,j＝7.6hz,1h),7.57-7.53(m,2h),7.40-7.37(m,2h),3.16-3.13(m,2h),2.85-2.83(m,1h),2.72-2.70(m,2h),2.60(s,3h),2.04-2.01(m,1h),1.84-1.81(m,1h),1.64-1.56(m,1h),1.50-1.45(m,1h)。

實(shí)施例7

(s)-n-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺

lc-ms(m/z)＝519.5[m+h]+。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.57(s,1h),8.74(d,j＝7.6hz,1h),8.21-8.18(m,2h),8.12(dd,j＝1.6,8.8hz,1h),8.03(m,2h),7.96(dd,j＝1.6,7.6hz,1h),7.58(t,j＝8.8hz,2h),7.41(m,1h),3.23(m,1h),3.15-3.12(m,1h),2.86-2.83(m,1h),2.74-2.68(m,2h),2.60(s,3h),2.03-2.00(m,1h),1.85-1.82(m,1h),1.65-1.56(m,1h),1.48-1.41(m,1h)。

實(shí)施例8

(r)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基-n-(4-(3-(甲胺基)哌啶-1-基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

lc-ms(m/z)＝533.6[m+h]+。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.58(s,1h),8.75-8.71(m,3h),8.21-8.19(m,2h),8.12(d,j＝8.0hz,1h),7.96(d,j＝8.0hz,1h),7.59-7.54(m,2h),7.41(m,1h),3.24-3.19(m,2h),2.87-2.84(m,1h),2.73(q,j＝10.0hz,2h),2.61(s,6h),2.12-2.09(m,1h),1.88-1.84(m,1h),1.65-1.55(m,1h),1.49-1.44(m,1h),1.27-1.16(m,1h)。

實(shí)施例9

n-(4-(4-氨基哌啶-1-基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺

lc-ms(m/z)＝519.5[m+h]+。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.55(s,1h),8.74(d,j＝3.6hz,1h),8.20(s,1h),8.17(d,j＝1.6hz,1h),8.09-8.03(m,3h),7.95(d,j＝8.0hz,1h),7.57(t,j＝8.0hz,2h),7.40(m,1h),2.97-2.94(m,2h),2.85-2.76(m,3h),2.60(s,3h),1.99-1.97(m,2h),1.72-1.64(m,2h)。

實(shí)施例10

(r)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基-n-(4-(甲基(哌啶-3-基)氨基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

lc-ms(m/z)＝533.2[m+h]+。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.53(s,1h),8.74(dd,j＝1.6,4.4hz,1h),8.28(dd,j＝1.6,9.2hz,1h),8.21(d,j＝2.0hz,1h),8.17(d,j＝2.4hz,1h),8.09(dd,j＝2.4,8.8hz,1h),7.96(dd,j＝1.6,8.0hz,1h),7.63-7.57(m,2h),7.56(d,j＝8.0hz,1h),7.42(q,j＝4.4hz,1h),3.02(d,j＝11.6hz,1h),2.85-2.82(m,2h),2.61(s,3h),2.56(s,3h),2.36-2.31(m,2h),1.85-1.82(m,1h),1.63-1.59(m,1h),1.24(m,2h)。

實(shí)施例11

(r)-n,n-二甲基-1-(4-硝基-2-(三氟甲基)苯基)吡咯烷-3-胺

將1-氟-4-硝基-2-(三氟甲基)苯(300mg,1.4mmol)，(r)-(+)-3-二甲氨基吡咯烷雙鹽酸鹽(261mg,1.4mmol)溶于乙腈(20ml)后加入碳酸鉀(387mg,2.8mmol)。反應(yīng)體系在80℃下攪拌過夜，然后冷卻，將反應(yīng)混合物倒入水(10ml)中，并用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。收集有機(jī)相，na2so4干燥，過濾和濃縮至干。得粗品標(biāo)題化合物(320mg)為黃色固體直接用于下一步反應(yīng)。lc-ms(m/z)＝304.4[m+h]+。

(r)-1-(4-氨基-2-(三氟甲基)苯基)-n,n-二甲基吡咯烷-3-胺

將(r)-n,n-二甲基-1-(4-硝基-2-(三氟甲基)苯基)吡咯烷-3-胺(310mg,1mmol)溶于甲醇(15ml)后加入pd/c(10％，31mg)。體系抽真空，然后充氫氣。在氫氣球氛圍下于室溫?cái)嚢柽^夜，混合物用硅藻土過濾，硅藻土用甲醇徹底洗滌。濾液濃縮后所得粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(乙酸乙酯/石油醚＝1:1)，得到標(biāo)題化合物(265mg，97％)為黃色固體。lc-ms(m/z)＝274.2[m+h]+。

(r)-n-(4-(3-(二甲基胺)吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺

向20ml單口瓶中加入3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酸(100mg,0.36mmol)，(r)-1-(4-氨基-2-(三氟甲基)苯基)-n,n-二甲基吡咯烷-3-胺(96mg,0.36mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(140mg,0.72mmol)，4-二甲氨基吡啶(88mg,0.72mmol)，n’n-二甲基甲酰胺(10ml)。將混合物置換氮?dú)馊魏蠹訜?0℃攪拌3小時(shí)，然后冷卻，將反應(yīng)混合物倒入水(15ml)中，并用二氯甲烷(3×15ml)萃取。收集有機(jī)相，na2so4干燥，過濾和濃縮至干。粗品經(jīng)柱層析純化(甲醇/二氯甲烷＝1:20)，得到標(biāo)題化合物(35mg，13％)為黃色固體。lc-ms(m/z)＝533.6[m+h]+。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.41(s,1h),8.72(dd,j＝1.6,4.4hz,1h),8.47(s,1h),8.26(dd,j＝1.2,9.2hz,1h),8.24(d,j＝3.2hz,1h),8.21(d,j＝1.6hz,1h),8.18(d,j＝2.8hz,1h),7.95(dd,j＝1.6,8.0hz,1h),7.53(d,j＝5.6hz,1h),7.51(d,j＝6.4hz,1h),7.39(dd,j＝4.4,9.2hz,1h),4.02(s,1h),3.43-3.34(m,2h),3.28-3.23(m,1h),3.14-3.08(m,1h),2.83-2.81(d,j＝9.2hz,3h),2.60(s,3h),2.56-2.53(m,3h),2.37-2.30(m,1h),2.18-2.13(m,1h)。

以下實(shí)施例12-19皆按照方案2和實(shí)施例11的方法制備。

實(shí)施例12

n-(4-((3r,4r)-3-疊氮基-4-羥基吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苯

基)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺，和

n-(4-((3s,4s)-3-疊氮基-4-羥基吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺混合物

lc-ms(m/z)＝547.8[m+h]+。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.55(d,j＝2.0hz,1h),8.11(dd,j＝1.2,8.8hz,1h),8.07(s,1h),8.06(d,j＝2.0hz,1h),7.99(s,1h),7.89(dd,j＝2.0,8.8hz,1h),7.82(dd,j＝2.0,8.0hz,2h)，7.40(d,j＝8.0hz，1h),7.24-7.18(m,2h)，4.35-4.29(m,1h),4.05-4.02(m,1h),3.77(q,j＝4.4hz,1h),3.60(q,j＝4.4hz,1h),3.23-3.14(m,2h),2.65(s,3h),2.05(s,1h)。

實(shí)施例13

n-(4-((3s,4r)-3-羥基-4-甲基吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺，和n-(4-((3r,4s)-3-羥基-4-甲基吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺混合物

lc-ms(m/z)＝520.4[m+h]+。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.32(s,1h),8.72(dd,j＝1.6,4.4hz,1h),8.26(dd,j＝1.6,9.2hz,1h),8.23(s,1h),8.19(d,j＝2.0hz,1h),8.08(d,j＝2.4hz,1h),7.94(dd,j＝2.0,8.0hz,1h),7.89(dd,j＝2.4,9.2hz,1h),7.53(d,j＝8.0hz,1h),7.39(dd,j＝4.4,9.2hz,1h),7.11(d,j＝9.2hz,1h),5.07(d,j＝4.4hz,1h),3.86-3.84(m,1h),3.51-3.44(m,2h),3.11(dd,j＝4.8,9.6hz,1h),2.94(dd,j＝6.4,9.2hz,1h),2.60(s,3h),2.10-2.06(m,1h),1.01(d,j＝6.8hz,3h)。

實(shí)施例14

(r)-n-(4-(3-(二甲胺基)哌啶-1-基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酰胺

lc-ms(m/z)＝547.6[m+h]+。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.58(s,1h),10.12(s,1h),8.73(d,j＝3.2hz,1h),8.28-8.19(m,3h),8.11(d,j＝8.8hz,1h),7.96(d,j＝8hz,1h),7.57(d,j＝8.8hz,1h),7.55(d,j＝8hz,1h),7.40(m,1h),3.29-3.27(m,2h),2.89-2.70(m,8h),2.61(s,3h),2.16-2.13(m,1h),1.90-1.87(m,1h),1.63-1.53(m,2h),

1.24-1.21(m,1h)。

實(shí)施例15

3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基-n-(4-((1-甲基哌啶-4-基)氨基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

lc-ms(m/z)＝533.7[m+h]+。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.02(d,j＝4.0hz,1h),8.54(s,1h),8.46(d,j＝9.2hz,2h),8.15(d,j＝2.0hz,1h),7.91(dd,j＝2.0,8.0hz,1h),7.90-7.86(m,2h),7.74(dd,j＝2.4,8.0hz,1h)，7.46(d,j＝8.0hz，1h),7.01(d,j＝9.2hz,1h)，3.60(d,j＝13.2hz,2h),3.26-3.20(m,2h),2.92(d,j＝7.6hz,3h),2.63(s,3h),2.31(d,j＝14.0hz,2h),2.16-2.14(m,1h),1.86-1.76(m,2h)。

實(shí)施例16

3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基-n-(4-(甲基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

lc-ms(m/z)＝547.2[m+h]+。1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.63(dd,j＝1.6,4.4hz,1h),8.17(d,j＝1.6hz,1h),8.10(dd,j＝1.6,4.4hz,2h),8.07(s,1h),7.97(dd,j＝2.8,8.4hz,1h),7.89(dd,j＝2.0,8.0hz,1h),7.54(d,j＝8.8hz,1h)，7.48(d,j＝8.0hz，1h),7.36(q,j＝8.8hz,1h)，3.03(d,j＝8.4hz,2h),2.72(s,3h),2.65(s,3h),2.41(s,3h),2.34-2.28(m,3h),1.91-1.87(m,2h),1.66-1.58(m,2h)。

實(shí)施例17

3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基-n-(4-(4-甲基-1-高哌嗪

基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

lc-ms(m/z)＝533.4[m+h]+。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.84(s,1h),8.73(dd,j＝1.6,4.4hz,1h),8.26(dd,j＝1.6,9.2hz,1h),8.24(s,1h),8.21(d,j＝1.6hz,1h),8.18(d,j＝2.4hz,1h),8.11(dd,j＝2.4,8.4hz,1h),7.96(dd,j＝2.0,8.0hz,1h),7.62(d,j＝8.4hz,1h),7.53(d,j＝8.4hz,1h),7.40(dd,j＝4.4,9.2hz,1h),3.50-3.43(m,3h),3.45-3.28(m,2h),3.20-3.09(m,3h),3.05-3.03(m,1h),2.84(s,3h),2.60(s,3h),2.14-2.09(m,1h)。

實(shí)施例18

3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基-n-(4-(((3ar,5r,6as)-2-甲基八氫環(huán)戊烷[c]吡咯-5-基)氨基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

lc-ms(m/z)＝559.3[m+h]+。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.27(s,1h),10.04(s,1h),8.73(d,j＝4.4hz,1h),8.28-8.26(m,2h),8.18(d,j＝1.6hz,1h),7.97-7.96(m,1h),7.93(dd,j＝1.6,8.0hz,1h),7.85(d,j＝9.2hz,1h),7.52(d,j＝8.0hz,1h),7.40(dd,j＝4.4,9.2hz,1h),7.01-6.98(m,1h),4.41(s,1h),3.83-3.75(m,2h),3.14-3.07(m,2h),2.86(s,3h),2.60(s,3h),2.44-2.39(m,2h),2.30-2.27(m,1h),1.60-1.53(m,1h),1.42-1.34(m,2h)。

實(shí)施例19

3-(咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基-n-(4-(甲基((3ar,5r,6as)-2-甲基八氫環(huán)戊烷[c]吡咯-5-基)氨基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

lc-ms(m/z)＝573.6[m+h]+。

本發(fā)明的化合物對(duì)bcr-abl蛋白激酶活性和細(xì)胞增殖的抑制是使用以下描述的程序進(jìn)行測(cè)試的。

實(shí)施例a：bcr-abl蛋白激酶酶活性的測(cè)試

激酶abl購(gòu)自carna公司，底物atp購(gòu)自sigma公司，底物tksubstrate-biotin和檢測(cè)試劑盒htrfkinease-tkkit購(gòu)自cisbio公司，選用htrf(homogeneoustimeresolvedfluorescence，均相時(shí)間分辨熒光)方法檢測(cè)目標(biāo)化合物的抑酶活性，操作方法按照試劑盒說明進(jìn)行。將atp(10mm)和tksubstrate-biotin(500μm)用緩沖液(hepes50mmph7.2,mgcl210mm,egta5mm,edta2mm,mncl22mm,cisbioseb50nm,na3vo40.1mm,bsa0.1mg/ml,dtt1mm)稀釋配制成atp(13.2μm)-tksubstrate-biotin(2.2μm)的底物混合溶液(2.2×)；abl激酶用上述緩沖液稀釋配制成abl(wt1.8nm,t315i1.1nm,e255k0.66nm)的2.2×酶工作溶液備用；

將目標(biāo)化合物(p1-p19)和陽性對(duì)照藥(ponatinib)用上述緩沖液分別配制成1.0×10-4mol/l，3.3×10-5mol/l，1.1×10-5mol/l，3.7×10-6mol/l，1.2×10-6mol/l，4.1×10-7mol/l,1.4×10-7mol/l,4.6×10-8mol/l,1.5×10-8mol/l,5.1×10-9mol/l濃度梯度的樣品溶液(dmso濃度為11％)，于384孔板上每孔依次加入5μl酶溶液和1μl樣品溶液；空白孔加5μl緩沖液和1μl11％的dmso溶液；26℃孵育15分鐘，再加入5μlatp-tksubstratebiotin底物混合溶液起始反應(yīng)；26℃下孵育60分鐘；加入htrf檢測(cè)試劑10μl，在26℃下孵育60分鐘。采用perkinelmer多功能酶標(biāo)儀的tr-fret模塊測(cè)定每孔的熒光值，計(jì)算本發(fā)明咪唑并[1,2-b]噠嗪酰胺類bcr-abl抑制劑對(duì)abl的抑制率和ic50。

實(shí)施例b：k562細(xì)胞活性測(cè)試

采用celltiter-glo法檢驗(yàn)本發(fā)明咪唑并[1,2-b]噠嗪酰胺類bcr-abl抑制劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制活性：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞(k562細(xì)胞)，用添加10％fbs的rpmi1640培養(yǎng)基稀釋成3×104個(gè)/ml的細(xì)胞溶液，平行接種于96孔培養(yǎng)板中(3000個(gè)/孔)，每孔接種體積為100μl，37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜；每孔加入不同濃度的待測(cè)化合物5μl，使孔中化合物的終濃度為1×10-7mol/l，3.3×10-8mol/l，1.1×10-8mol/l，3.7×10-9mol/l，1.2×10-9mol/l，4.1×10-10mol/l，1.4×10-10mol/l，4.5×10-11mol/l，1.5×10-11mol/l，5.1×10-12mol/l，每個(gè)濃度設(shè)2個(gè)復(fù)孔，陰性對(duì)照加細(xì)胞不加化合物，設(shè)10個(gè)復(fù)孔，ponatinib為陽性對(duì)照，繼續(xù)培養(yǎng)72h；每孔加入celltiter-glo50μl，振蕩10分鐘，采用perkinelmer多功能酶標(biāo)儀的化學(xué)發(fā)光模塊測(cè)定每孔化學(xué)發(fā)光值，然后計(jì)算細(xì)胞抑制率，并根據(jù)抑制率求出ic50值。

本發(fā)明提供的咪唑并[1,2-b]噠嗪酰胺類bcr-abl激酶抑制劑對(duì)bcr-abl激酶和k562細(xì)胞的抑制活性結(jié)果，如表1所示：

表1抑制劑對(duì)bcr-abl激酶抑制活性結(jié)果(ic50)

nd：未檢測(cè)

結(jié)果顯示本發(fā)明的化合物咪唑并[1,2-b]噠嗪酰胺類bcr-abl激酶抑制劑對(duì)bcr-abl激酶和k562細(xì)胞生長(zhǎng)具有較強(qiáng)的抑制活性。bcr-abl激酶在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮很重要的作用，它通過磷酸化和活化一系列下游底物，促使cml成熟粒細(xì)胞無限增生。bcr-abl在正常細(xì)胞中不表達(dá)，是治療cml的理想靶標(biāo)。上述咪唑并[1,2-b]噠嗪酰胺類bcr-abl激酶抑制劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制效果良好，可用作抗腫瘤藥物。