本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及噻吩吡啶類衍生物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
血栓疾病是由血栓引起的血管腔狹窄和閉塞并導(dǎo)致主要臟器發(fā)生缺血和梗塞而引發(fā)機能障礙的各種疾病。導(dǎo)致血栓形成的因素有血小板在損傷血管壁表面上的粘附和聚集、血流淤滯、凝血因子的激活促使凝血酶的形成和纖溶活性低下。臨床上用于血栓治療的藥物可分為3類：抗血小板藥、抗凝血藥和溶栓藥?？寡“逅幬锛婢咧委熀皖A(yù)防的作用，是抗血栓藥物中的主要品類。抗血小板藥物是指能抑制血小板的黏附、聚集和釋放功能，阻止血栓的形成，用于防治心腦缺血性疾病、外周血栓栓塞性疾病的藥物。目前將抗血小板藥物分為三代：阿司匹林為第一代，噻氯吡啶為第二代（噻吩吡啶類，以二磷酸腺苷受體為靶點的一類抗血小板藥物，目前臨床上應(yīng)用最為廣泛的抗血小板聚集、抗血栓藥物／非噻吩吡啶類），如氯吡格雷／普拉格雷，而血小板膜糖蛋iib／ⅲa受體拮抗劑為第三代。作為第二代噻吩吡啶類衍生物，p2y12-adp受體拮抗劑氯吡格雷(clopidogrel)比噻氯吡啶有較好的安全性，阿司匹林與氯毗格雷是目前抗血小板治療的標(biāo)準(zhǔn)組合，成為抗血栓藥物治療的標(biāo)準(zhǔn)。
氯吡格雷和普拉格雷均為選擇性較高的p2y12-adp受體拮抗劑。adp在血小板的激活中，通過血小板膜上的3個受體與血小板結(jié)合：p2xl受體，p2yl受體和p2y12受體，發(fā)揮重要作用。p2y12受體屬于gpcr家族的一員，adp與p2y12受體結(jié)合后，gi蛋白的兩個亞單位(alphagi,betagamma)暴露，alphagi亞單位通過抑制腺苷酸環(huán)化酶，使camp降低，導(dǎo)致血小板糖蛋白iib／ⅲa復(fù)合物活化，betagamma亞單位可激活磷脂酰肌醇3激酶通過一系列細(xì)胞內(nèi)信號傳遞，導(dǎo)致血小板聚集。p2y12-adp受體拮抗劑通過競爭性或非競爭性地與p2y12受體結(jié)合，減少adp的結(jié)合位點，減少血小板聚集，起到抗血栓的作用。
氯吡格雷的另一不足為日益受到關(guān)注的氯吡格雷抵抗。在臨床上，氯比格雷抵抗(clopidogrelresistance)是一種非常普遍的現(xiàn)象，這種現(xiàn)象的發(fā)生率為4%-30%，在白人中發(fā)生率較低，非洲黑人中其次，而在亞洲人中，氯比格雷抵抗的發(fā)生率最高，有可能高達55%。發(fā)生氯比格雷抵抗后，帶來的后杲非常嚴(yán)重，心血管事件和死亡率大幅度上升。治療過程中氯吡格雷抵抗的患者更易于發(fā)生急性和亞急性支架內(nèi)血栓，血栓事件發(fā)生者的死亡率高達15%-45%，再次心肌梗死率高達60%-70%。
發(fā)生氯吡格雷抵抗的機制很復(fù)雜，其中比較為大家認(rèn)可的機理為cytochromep450酶的活性。研究表明，口服氯吡格雷后首先由腸胃道吸收進入血液。在血液中，85%的氯吡格雷直接由酯酶代謝成為無活性的代謝產(chǎn)物而排出體外，其中只有15%的氯吡格雷由cytochromep450酶所代謝，參與這一代謝的酶包括cyp3a4，cyp3a5，cyp2c9，cypia2，cyp2b6和cyp2c19，形成硫內(nèi)酯，然后再由cyp3a4酶代謝為具有抗凝血活性的代謝產(chǎn)物，而發(fā)揮抗凝血藥效。越來越多的研究表明，發(fā)生氯吡格雷抵抗的患者cyp2c19酶的功能較弱或缺失，從而造成氯吡格雷進入體內(nèi)后無法代謝為硫內(nèi)酯，再進一步代謝為活性代謝產(chǎn)物而發(fā)揮藥效。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的在于通過對噻吩吡啶類化合物的結(jié)構(gòu)進行改造，合成了一系列噻吩吡啶類衍生物新化合物，主要包括和枸櫞酸成酯的衍生物；化合物進入體內(nèi)后迅速代謝為有效代謝產(chǎn)物，成功避開了cyp2c19酶的代謝，可直接代謝為活性化合物而發(fā)揮藥效，從而解決了氯吡格雷抵抗問題。另外，枸櫞酸具有收縮、增固毛細(xì)血管并降低其通透性的作用,還能提高凝血功能及血小板數(shù)量,縮短凝血時間和出血時間,具有一定的止血作用。新化合物進入體內(nèi)迅速代謝為硫內(nèi)脂，硫內(nèi)脂進一步代謝為活性代謝產(chǎn)物。枸櫞酸在體內(nèi)與有效代謝產(chǎn)物發(fā)生協(xié)同作用，有效提高了化合物抗血栓活性，而對出血風(fēng)險無顯著影響。同時這類化合物對肝腎具較理想的保護作用，對其他心血管疾病亦具有潛在的治療意義。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一系列如下通式i所示的噻吩吡啶類衍生物，同時還提供了一系列通式i的化合物在藥學(xué)上可接受的鹽或水合物。
其中r1為含1-8個碳的烷基、r3nr4（其中r3、r4為氫或1-10碳的烷基）或甲氧基；
r2為f、cl、br或i。
所述通式i所示化合物包括左旋對映體、右旋對映體、消旋體。
所述通式i所示化合物中具有代表性的化合物如下：
化合物1：
化合物2：
化合物3：
化合物4：
化合物5：
化合物6：
化合物7：
化合物8：
化合物9：
化合物10：
化合物11：
化合物12：
化合物13：
化合物14：
化合物15：
化合物16：
化合物17：
本發(fā)明第二個目的提供通式i所示化合物可按以下方法制備：
在酸性條件下，關(guān)鍵中間體：
以上兩個反應(yīng)式中涉及的r1、r2同前文中對通式i中r1、r2的限定。
本發(fā)明第三個方面，提供了一種藥物組合物，包括根據(jù)本發(fā)明的提供通式i所示化合物。該組合物進一步包括一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
該組合物可用于口服或非腸胃給藥，口服給藥的組合物包括普通片劑、分散片、緩釋片、控釋片、膠囊。非腸胃給藥的組合物包括無菌溶液或注射用無菌粉末形式、或適合用于制備非腸胃給藥的無菌溶液或注射用無菌粉末形式的組合物。該組合物是包括含根據(jù)本發(fā)明的通式i所示化合物的單位劑量，其量為1mg到500mg。
本發(fā)明的第四個方面，通式i所示化合物在防治心肌梗死，缺血性腦血栓，閉塞性脈管炎和動脈粥樣硬化及血栓栓塞引起的并發(fā)癥。應(yīng)用于有過近期發(fā)生的中風(fēng)、心肌梗死或確診外周動脈疾病的患者，治療后可減少動脈粥樣硬化事件的發(fā)生（心肌梗死、中風(fēng)和血管性死亡）。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明技術(shù)方案的優(yōu)點和有益效果在于：
l、本發(fā)明公布了一系列噻吩吡啶類衍生物的制備，主要包括和枸櫞酸成酯的衍生物；
2、本發(fā)明的化合物進入體內(nèi)后迅速代謝為有效代謝產(chǎn)物，成功避開了cyp2c19酶的代謝，可直接代謝為活性化合物而發(fā)揮藥效，從而解決了噻吩吡啶類化合物抵抗問題；
3、利用枸櫞酸具有抗凝血活性，使其抗血小板聚集效果更好，生物利用度更高。
具體實施方式
下面申請人將結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明做進一步的詳細(xì)說明，目的在于使得本領(lǐng)域技術(shù)人員更清楚地了解本發(fā)明，但以下內(nèi)容不應(yīng)以任何方式被理解為對本發(fā)明的權(quán)利要求書請求保護的范圍的限制。
若未特別指明，實施例中所用的技術(shù)手段均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。
實施例1：化合物1的制備方法，其合成線路如下：
將中間體1消旋體(10mmol)和枸櫞酸(11mmol)溶于20ml無水乙腈，再加入濃硫酸（5mmol），加完后溫度控制在60℃左右繼續(xù)攪拌10個小時。將反應(yīng)液蒸干，殘余物用水洗滌中性，在經(jīng)過快速柱層析獲得目標(biāo)產(chǎn)物化合物1。
實施例2：化合物2的制備方法如下：
按實施例1的方法制備，不同的是將中間體1消旋體替換為中間體1左旋體。
實施例3：化合物3的制備方法如下：
按實施例1的方法制備，不同的是將中間體1消旋體替換為中間體1右旋體。
實施例4：化合物4的制備方法，其合成線路如下：
將中間體2右旋體(10mmol)和枸櫞酸(11mmol)溶于20ml無水乙醇，再加入濃硫酸（5mmol），加完后溫度控制在60℃左右繼續(xù)攪拌10個小時。將反應(yīng)液蒸干，殘余物用水洗滌中性，在經(jīng)過快速柱層析獲得目標(biāo)產(chǎn)物化合物4。
實施例5：化合物5的制備方法如下：
按實施例4的方法制備，不同的是將中間體2右旋體替換為中間體2消旋體。
實施例6：化合物6的制備方法如下：
按實施例4的方法制備，不同的是將中間體2右旋體替換為中間體2左旋體。
實施例7：化合物7的制備方法，其合成線路如下：
將中間體3消旋體(10mmol)和枸櫞酸(11mmol)溶于20ml無水甲醇，再加入濃硫酸（5mmol），加完后溫度控制在60℃左右繼續(xù)攪拌10個小時。將反應(yīng)液蒸干，殘余物用水洗滌中性，在經(jīng)過快速柱層析獲得目標(biāo)產(chǎn)物化合物7。
實施例8：化合物8的制備方法如下：
按實施例7的方法制備，不同的是將中間體3消旋體替換為中間體3左旋體。
實施例9：化合物9的制備方法如下：
按實施例7的方法制備，不同的是將中間體3消旋體替換為中間體3右旋體。
實施例10：化合物10的制備方法，其合成線路如下：
將中間體4左旋體(10mmol)和枸櫞酸(11mmol)溶于20ml無水丙酮，再加入濃硫酸（5mmol），加完后溫度控制在60℃左右繼續(xù)攪拌24個小時。將反應(yīng)液蒸干，殘余物用水洗滌中性，在經(jīng)過快速柱層析獲得目標(biāo)產(chǎn)物化合物10。
實施例11：化合物11的制備方法，其合成線路如下：
將中間體5消旋體(10mmol)和枸櫞酸(11mmol)溶于20ml無水乙醇，再加入濃硫酸（5mmol），加完后溫度控制在60℃左右繼續(xù)攪拌15個小時。將反應(yīng)液蒸干，殘余物用水洗滌中性，在經(jīng)過快速柱層析獲得目標(biāo)產(chǎn)物化合物11。
實施例12：化合物12的制備方法，其合成線路如下：
將中間體6消旋體(10mmol)和枸櫞酸(11mmol)溶于20ml無水乙醇，再加入濃硫酸（5mmol），加完后溫度控制在60℃左右繼續(xù)攪拌15個小時。將反應(yīng)液蒸干，殘余物用水洗滌中性，在經(jīng)過快速柱層析獲得目標(biāo)產(chǎn)物化合物12。
實施例13：化合物13的制備方法，其合成線路如下：
將中間體7左旋體(10mmol)和枸櫞酸(11mmol)溶于20ml無水乙醇，再加入濃硫酸（5mmol），加完后溫度控制在60℃左右繼續(xù)攪拌15個小時。將反應(yīng)液蒸干，殘余物用水洗滌中性，在經(jīng)過快速柱層析獲得目標(biāo)產(chǎn)物化合物13。
實施例14：化合物14的制備方法，其合成線路如下：
將中間體8左旋體(10mmol)和枸櫞酸(11mmol)溶于20ml無水乙醇，再加入濃硫酸（5mmol），加完后溫度控制在60℃左右繼續(xù)攪拌15個小時。將反應(yīng)液蒸干，殘余物用水洗滌中性，在經(jīng)過快速柱層析獲得目標(biāo)產(chǎn)物化合物14。
實施例15：化合物15的制備方法，其合成線路如下：
將中間體9左旋體(10mmol)和枸櫞酸(11mmol)溶于20ml無水乙醇，再加入濃硫酸（5mmol），加完后溫度控制在60℃左右繼續(xù)攪拌15個小時。將反應(yīng)液蒸干，殘余物用水洗滌中性，在經(jīng)過快速柱層析獲得目標(biāo)產(chǎn)物化合物15。
實施例16：化合物16的制備方法，其合成線路如下：
將中間體10左旋體(10mmol)和枸櫞酸(11mmol)溶于20ml無水乙醇，再加入濃硫酸（5mmol），加完后溫度控制在60℃左右繼續(xù)攪拌15個小時。將反應(yīng)液蒸干，殘余物用水洗滌中性，在經(jīng)過快速柱層析獲得目標(biāo)產(chǎn)物化合物16。
實施例17：化合物17的制備方法，其合成線路如下：
將中間體11左旋體(10mmol)和枸櫞酸(11mmol)溶于20ml無水乙醇，再加入濃硫酸（5mmol），加完后溫度控制在60℃左右繼續(xù)攪拌15個小時。將反應(yīng)液蒸干，殘余物用水洗滌中性，在經(jīng)過快速柱層析獲得目標(biāo)產(chǎn)物化合物17。
實施例18：化合物1的一水合物制備
取化合物110.0g，用90%異丙醇水溶液100ml加熱至60℃溶解，加入1%（w/v）活性炭，保溫攪拌20min，過濾，冷凍析晶12小時，過濾，得化合物1的一水合物。
實施例19：化合物5的三水合物制備
取化合物510.0g，用90%丙酮水溶液80ml加熱至60℃溶解，加入1%（w/v）活性炭，保溫攪拌20min，過濾，冷凍析晶12小時，過濾，得化合物5的三水合物。
實施例20：化合物8的五水合物制備
取化合物810.0g，用80%甲醇水溶液100ml加熱至60℃溶解，加入1%（w/v）活性炭，保溫攪拌20min，過濾，冷凍析晶12小時，過濾，得化合物8的五水合物。
實施例21：化合物1的鹽酸鹽制備
取化合物150.0g，用乙醇500ml加熱至60℃溶解，加入濃鹽酸調(diào)節(jié)ph至3，保溫攪拌20min，過濾，冷凍析晶12小時，過濾，得化合物1的鹽酸鹽。
實施例22：化合物6的丁二酸鹽制備
取化合物610.0g，用乙腈100ml加熱至60℃溶解，加入丁二酸5g，保溫攪拌20min，過濾，冷凍析晶24小時，過濾，得化合物6的丁二酸鹽。
實施例23：化合物8的硫酸鹽制備
取化合物810.0g，用四氫呋喃80ml加熱至60℃溶解，加入濃硫酸5ml，保溫攪拌20min，過濾，冷凍析晶24小時，過濾，得化合物8的硫酸鹽。
實施例24：化合物15的富馬酸鹽制備
取化合物810.0g，用乙醇80ml加熱至60℃溶解，加入富馬酸5g，保溫攪拌20min，過濾，冷凍析晶24小時，過濾，得化合物15的富馬酸鹽。
本發(fā)明的通式ⅰ化合物(實施例中制得的產(chǎn)物)的藥理藥效研究
1．口服噻吩吡啶衍生物對大鼠血小板聚集抑制作用
雄性wistar大鼠（由江蘇省藥物安全評價中心提供），體重，200-250g，隨機分成5組，陰性對照組(0.5%cmc-na，1.oml/kg，p．o．)、陽性對照組（普拉格雷，由濟南立德醫(yī)藥科技有限公司提供，配制在0.5%cmc-na申，30mg/kg，p.o.)，化合物低，中，高三個劑量組（配制在0.5%cmc-na中，1.oml/kg，p.o.），每組8-10只動物。動物口服0.5%cmc-na，陽性藥物或受試藥物，分別于給藥前和給藥后0.5，l，2，4，8h，尾部取血。制備富血小板血漿。將血小板的計數(shù)調(diào)整到2×105μl，以貧血小板血漿作為空白對照。以adp為誘導(dǎo)劑，將adp加入制備好的血小板懸液，終濃度為5μl。向96孔板中分別加入150μl血小板懸液和不同濃度的試驗藥物0.5μl，37℃，孵育5min后每孔加入20μmadp，采用比濁法，應(yīng)用lby-nj四通道血小板聚集儀測定血小板聚集百分?jǐn)?shù)。計算血小板聚集抑制百分率。
表1．口服實施例制備的噻吩吡啶衍生物對大鼠血小板聚集的抑制作用
結(jié)論：測試化合物對大鼠血小板聚集均具有不同程度的抑制作用，其中化合物7、化合物12、化合物15對大鼠血小板聚集抑常與普拉格雷相當(dāng)，化合物2、化合物5、化合物10相比普拉格雷對血小板聚集抑制效果更優(yōu)。
2．口服實施例1-12制備的噻吩吡啶衍生物對大鼠出血時間的影響
雄性wistar大鼠（由江蘇省藥品安全評價中心提供），體重，200-250g，隨機分成5組，陰性對照組(0.5%cmc-na，1.oml/kg，p．o．)、陽性對照組（普拉格雷，由濟南立德醫(yī)藥科技有限公司提供，配制在0.5%cmc-na中，30mglkg，p.o.），化合物低、中、高三個劑量組（配制在0.5%cmc-na中，1.oml/kg，p.o.），每組8-10只動物。
動物口服0.5%cmc-na，普拉格雷或受試藥物l小時后，距尾尖2mm處用刀片割斷鼠尾，每隔15s用濾紙吸血至1min內(nèi)無血跡，記錄出血時間。
表2?？诜茉嚮衔飳Υ笫蟪鲅獣r間的影響
結(jié)論：與陰性對照組相比，wistar大鼠口服受試化合物后，出血時間均有不同程度的延長，其中服用化合物2、化合物5、化合物7、化合物10、化合物12、化合物15的大鼠出血時間較普拉格雷更短，表明該類化合物具有較小的出血風(fēng)險。