本發(fā)明涉及化合物及其制備方法，尤其涉及一種銀杏內(nèi)酯b氨基甲酸酯衍生物及其制備方法，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：銀杏內(nèi)酯是存在于銀杏葉及根莖中的一系列二萜類化合物，是血小板活化因子(platelet-activatingfactor，paf)的強拮抗物，paf是一個很強的生理調(diào)節(jié)器，在很多生理現(xiàn)象上扮演著重要角色，如過敏、發(fā)炎及哮喘等等，它直接參與血栓形成，可刺激冠狀動脈和腦動脈，因此尋找適當(dāng)?shù)膒af對抗物來作為醫(yī)療上的使用便是醫(yī)學(xué)界一個很重要的課題。銀杏內(nèi)酯b(ginkgolideb，gb)是從銀杏葉中提取的一種六環(huán)籠狀結(jié)構(gòu)的二萜化合物，是迄今發(fā)現(xiàn)的最強的血小板活化因子(paf)拮抗劑，銀杏內(nèi)酯b是一種六環(huán)籠狀結(jié)構(gòu)的二萜化合物，剛性結(jié)構(gòu)，不溶于水，增加了制成口服制劑和注射劑的難度，同時，銀杏內(nèi)酯b的內(nèi)酯結(jié)構(gòu)在生理環(huán)境中容易被破壞，從而影響其在腸道中的吸收，降低口服給藥的生物利用度。專利cn101323621b對銀杏內(nèi)酯b進行了結(jié)構(gòu)改造，將三級胺通過醚化接到銀杏內(nèi)酯b的10位羥基上，進一步制成甲磺酸鹽，大大改善了水溶性，同時改造后的衍生物抗paf活性保持，可制成甲磺酸胺銀杏內(nèi)酯b注射液。但其結(jié)構(gòu)是甲磺酸胺鹽，水溶性雖然好，但脂溶性低，在體內(nèi)無法通過血腦屏障，對于治療腦卒中等病癥，無法有效到達治療部位。專利cn1919848b將銀杏內(nèi)酯b在堿性溶劑中處理，主要得到c-3位羥基還原為雙鍵的產(chǎn)物，并定義其為銀杏內(nèi)酯k，可以成鹽改善水溶性，制成注射液，但其需與金屬成鹽，引入的金屬增加了質(zhì)量風(fēng)險，而且從活性成分分析，與銀杏內(nèi)酯b有所不同。因此，提高銀杏內(nèi)酯b的水溶性，是提高銀杏內(nèi)酯b臨床療效的關(guān)鍵，也是目前醫(yī)藥界關(guān)注的重點。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種水溶性銀杏內(nèi)酯b衍生物及其制備方法。本發(fā)明提供了一種化合物b，即為本發(fā)明化合物銀杏內(nèi)酯b氨基甲酸酯衍生物，其是在化合物a(即銀杏內(nèi)酯b)的10位碳上羥基酯化后得到的衍生物。其中，r是苯基、取代的苯基、1-8個碳的烷烴基、鹵素取代的1-8個碳烷烴基、1-8個碳的環(huán)烷烴基中的任一基團。其中，10-o-(間溴苯基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b，10-o-(環(huán)己基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b具有更好的藥理活性，臨床開發(fā)價值更大。另外，本發(fā)明還提供了一種化合物b的制備方法，其由銀杏內(nèi)酯b與異氰酸酯在有機溶劑中加熱反應(yīng)得到，優(yōu)選的反應(yīng)條件為使用甲苯作為溶劑，反應(yīng)12小時，產(chǎn)物通過柱層析分離純化。技術(shù)方案：銀杏內(nèi)酯b氨基甲酸酯衍生物的合成路線如下：其中，異氰酸酯選自對甲基異氰酸苯酯，或間溴異氰酸苯酯，或環(huán)己基異氰酸酯，或2-氯-乙基異氰酸酯中的一種；反應(yīng)中，銀杏內(nèi)酯b投料量為1摩爾當(dāng)量，異氰酸酯投料量為1-2摩爾當(dāng)量。在上述反應(yīng)中使用的溶劑為乙腈、四氫呋喃、甲苯、二氯乙烷、二甲苯、二甲基甲酰胺和n-甲基吡咯烷酮中的一種或其混合物，優(yōu)選甲苯。溫度太低，反應(yīng)速度很慢或不反應(yīng)，溫度過高則副反應(yīng)增加，故氨基甲酸酯化的反應(yīng)溫度為50-110℃；優(yōu)選80℃。氨基甲酸酯化的反應(yīng)時間為8-15小時；優(yōu)選反應(yīng)12小時。最后，柱層析分離得到銀杏內(nèi)酯b氨基甲酸酯。本發(fā)明取得如下有益效果：1、本發(fā)明提供了一類銀杏內(nèi)酯b氨基甲酸酯衍生物；相比銀杏內(nèi)酯b，銀杏內(nèi)酯b氨基甲酸酯衍生物具有更好的水溶性，其水溶性為5-80mg/ml，具備制備成口服制劑或注射劑的潛力；且由于化合物b的水溶性增加，其抗paf作用增強，通過斑馬魚模型的藥效實驗，證明了10-o-(間溴苯基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b，10-o-(環(huán)己基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b等銀杏內(nèi)酯b氨基甲酸酯衍生物在抗血栓活性上明顯優(yōu)于銀杏內(nèi)酯b。2、本發(fā)明提供了銀杏內(nèi)酯b氨基甲酸酯衍生物的制備方法，該制備方法采用銀杏內(nèi)酯b和異氰酸酯為原料，除溶劑外無需使用任何其他試劑，所用的溶劑均為常見有機溶劑(優(yōu)選甲苯)，反應(yīng)溫度較為溫和(優(yōu)選80℃)，反應(yīng)體系對設(shè)備無特殊要求，操作安全簡便，適合 工業(yè)化生產(chǎn)；另外，該制備方法反應(yīng)產(chǎn)率良好(65-85％)，產(chǎn)物純度高(＞98％)，副反應(yīng)少。具體實施方式以下通過若干具體實例所代表的實施方式對本發(fā)明的上述內(nèi)容做進一步的詳細說明，不應(yīng)理解為本發(fā)明的主題范圍僅局限于下述具體實施例。實施例110-o-(間溴苯基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b的制備4.24g(10mmol)銀杏內(nèi)酯b和間溴異氰酸苯酯2.37g(12mmol)溶于30ml甲苯中，80℃反應(yīng)12小時，蒸除溶劑，殘余物柱層析分離，得到4.79g10-o-(間溴苯基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b，收率77％。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)核磁氫譜、碳譜、高分辨質(zhì)譜確證無誤，純度＞98％。反應(yīng)路線：實施例210-o-(環(huán)己基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b的制備4.24g(10mmol)銀杏內(nèi)酯b和環(huán)己基異氰酸酯1.50g(12mmol)溶于30ml甲苯中，80℃反應(yīng)12小時，蒸除溶劑，殘余物柱層析分離，得到4.56g10-o-(環(huán)己基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b，收率83％。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)核磁氫譜、碳譜、高分辨質(zhì)譜確證無誤，純度＞98％。反應(yīng)路線：實施例3衍生物水溶性測定控制水溫25±0.5℃，將銀杏內(nèi)酯b及其氨基甲酸酯衍生物定量加于500ml純化水之中，超聲使化合物溶解完全，測定其溶解性。實驗結(jié)果見表1。表1.銀杏內(nèi)酯b及部分衍生物在25℃水中的溶解性化合物溶解度(mg/ml)銀杏內(nèi)酯b＜0.210-o-(間溴苯基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b30-3510-o-(環(huán)己基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b55-60實施例4應(yīng)用斑馬魚模型分別評價了銀杏內(nèi)酯b和兩種優(yōu)選的銀杏內(nèi)酯b氨基甲酸酯衍生物的抗血栓作用用花生四烯酸誘導(dǎo)斑馬魚血栓模型，銀杏內(nèi)酯b，10-o-(間溴苯基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b，10-o-(環(huán)己基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b選擇10um、30um和100um三個濃度，實驗選用albino品系斑馬魚，受試物處理結(jié)束后，用鄰聯(lián)茴香胺對斑馬魚進行染色，利用解剖顯微鏡拍照，定性評價斑馬魚尾靜脈血栓形成，并對斑馬魚的心臟紅細胞進行定量分析(實驗結(jié)果見表2)。實驗結(jié)果表明，gb在濃度10um和30um時，有良好的抗血栓作用，且有濃度依賴性，但在高濃度(100um)時抗血栓作用不明顯。10-o-(間溴苯基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b和10-o-(環(huán)己基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b在10um、30um和100um濃度均有抗血栓作用，且效果優(yōu)于gb。表2.斑馬魚模型銀杏內(nèi)酯b及部分衍生物抗血栓效率實施例5應(yīng)用斑馬魚模型分別評價了銀杏內(nèi)酯b和兩種優(yōu)選的銀杏內(nèi)酯b氨基甲酸酯衍生物的外周axon損傷的保護作用用乙醇誘導(dǎo)斑馬魚外周axon損傷模型，銀杏內(nèi)酯b，10-o-(間溴苯基氨基甲酸酯)銀 杏內(nèi)酯b，10-o-(環(huán)己基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b選擇10um、30um和100um三個濃度，采用免疫組化的方法，定量評價gb對外周axon損傷的保護作用(實驗結(jié)果見表3)。實驗結(jié)果表明，gb、10-o-(間溴苯基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b和10-o-(環(huán)己基氨基甲酸酯)銀杏內(nèi)酯b在100um濃度對斑馬魚外周axon損傷有保護作用，且兩個gb衍生物的效果優(yōu)于gb。表3.斑馬魚模型銀杏內(nèi)酯b及部分衍生物對外周axon損傷的保護效率當(dāng)前第1頁12