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包含N?乙酰半胱氨酸的細胞培養(yǎng)方法和培養(yǎng)基與流程

文檔序號:12070545閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種細胞培養(yǎng)方法,該方法包括:

a.提供一種足以支持細胞生長的細胞培養(yǎng)基,其中該細胞培養(yǎng)基包含N-乙酰半胱氨酸;并且

在該細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞,其中該細胞是膽固醇營養(yǎng)缺陷型細胞、骨髓瘤細胞或雜交瘤細胞。

2.一種增加細胞活力的方法,該方法包括:

a.提供一種足以支持細胞生長的細胞培養(yǎng)基,其中該細胞培養(yǎng)基包含N-乙酰半胱氨酸;并且

b.在該細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞,其中該細胞是膽固醇營養(yǎng)缺陷型細胞、骨髓瘤細胞或雜交瘤細胞。

3.一種增加細胞生長率的方法,該方法包括:

a.提供一種足以支持細胞生長的細胞培養(yǎng)基,其中該細胞培養(yǎng)基包含N-乙酰半胱氨酸;并且

b.在該細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞,其中該細胞是膽固醇營養(yǎng)缺陷型細胞、骨髓瘤細胞或雜交瘤細胞。

4.一種減少細胞倍增時間的方法,該方法包括:

a.提供一種足以支持細胞生長的細胞培養(yǎng)基,其中該細胞培養(yǎng)基包含N-乙酰半胱氨酸;并且

b.在該細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞,其中該細胞是膽固醇營養(yǎng)缺陷型細胞、骨髓瘤細胞或雜交瘤細胞。

5.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法,其中這些細胞是由冷凍貯存物解凍的。

6.如權(quán)利要求1-5中任一項所述的方法,其中這些細胞是處于擴增階段。

7.如權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法,其中該細胞培養(yǎng)基是無血清且無動物蛋白的培養(yǎng)基。

8.如權(quán)利要求1-7中任一項所述的方法,其中該細胞培養(yǎng)基是化學(xué)限定培養(yǎng)基。

9.如權(quán)利要求1-8中任一項所述的方法,其中該培養(yǎng)基包含脂質(zhì)。

10.如權(quán)利要求1-9中任一項所述的方法,其中這些細胞是來源于哺乳動物。

11.如權(quán)利要求10所述的方法,其中這些哺乳動物細胞是鼠類的、倉鼠的、大鼠的、猴的、或人類的。

12.如權(quán)利要求10所述的方法,其中這些細胞是選自下組,該組由以下各項組成:NS0、NS1、U937、M19、SRD-12B、SRD-13A、CHO-215、X63Ag8、Sp2/0、J558L、U266、P3U1、XG-1、XG-2、XG-3、XG-4、XG-5、XG-6、XG-7、XG-8、XG-9、U266、RPM1-8226、LP1、L363、OPM1、OPM2、以及NCLH929細胞。

13.如權(quán)利要求12所述的方法,其中這些細胞是來源于NS0、NS1、U937、M19、SRD-12B、SRD-13A、CHO-215、X63Ag8、Sp2/0、J558L、U266、P3U1、XG-1、XG-2、XG-3、XG-4、XG-5、XG-6、XG-7、XG-8、XG-9、U266、RPM1-8226、LP1、L363、OPM1、OPM2、或NCLH929細胞。

14.如權(quán)利要求12所述的方法,其中這些細胞是NS0細胞。

15.如權(quán)利要求1-12中任一項所述的方法,其中這些細胞被工程化為膽固醇營養(yǎng)缺陷型細胞。

16.如權(quán)利要求1-15所述的方法,其中該細胞培養(yǎng)基包含:碳源、必需氨基酸和非必需氨基酸來源、維生素、無機鹽、微量金屬、pH緩沖劑、表面活性劑、抗氧化劑、脂質(zhì)、以及膽固醇。

17.如權(quán)利要求1-16中任一項所述的方法,其中該細胞培養(yǎng)基包含濃度為從約0.25mM至約3mM的N-乙酰半胱氨酸。

18.如權(quán)利要求1-17中任一項所述的方法,其中該細胞培養(yǎng)基包含濃度為從約0.5至約2.5mM的N-乙酰半胱氨酸。

19.如權(quán)利要求1-18中任一項所述的方法,其中該細胞培養(yǎng)基包含濃度為從約1.0至約1.5mM的N-乙酰半胱氨酸。

20.如權(quán)利要求1-19中任一項所述的方法,其中該細胞培養(yǎng)基包含濃度約1mM或約1.5mM的N-乙酰半胱氨酸。

21.如權(quán)利要求1-20中任一項所述的方法,其中該細胞培養(yǎng)基包含酵母提取液。

22.如權(quán)利要求21所述的方法,其中該細胞培養(yǎng)基包含1g/L的酵母提取液。

23.如權(quán)利要求1-22中任一項所述的方法,其中該平均倍增時間比在使用排除N-乙酰半胱氨酸的對照培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)中更短。

24.如權(quán)利要求23所述的方法,其中該平均倍增時間與無N-乙酰半胱氨酸的細胞培養(yǎng)基相比減少了至少約10%。

25.如權(quán)利要求23所述的方法,其中該平均倍增時間與無N-乙酰半胱氨酸的細胞培養(yǎng)基相比減少了至少15%。

26.如權(quán)利要求23所述的方法,其中該平均倍增時間與無N-乙酰半胱氨酸的細胞培養(yǎng)基相比減少了至少20%。

27.如權(quán)利要求23所述的方法,其中該平均倍增時間與無N-乙酰半胱氨酸的細胞培養(yǎng)基相比減少了至少25%。

28.如權(quán)利要求23所述的方法,其中該平均倍增時間與無N-乙酰半胱氨酸的細胞培養(yǎng)基相比減少了至少50%。

29.如權(quán)利要求23所述的方法,其中該平均細胞倍增時間是60小時或更少時間。

30.如權(quán)利要求23所述的方法,其中該平均倍增時間是42小時或更少時間。

31.如權(quán)利要求23所述的方法,其中該平均倍增時間是34小時或更少時間。

32.如權(quán)利要求23所述的方法,其中該平均倍增時間是30小時或更少時間。

33.如權(quán)利要求23所述的方法,其中該平均倍增時間是約29小時或更少時間。

34.如權(quán)利要求1-33中任一項所述的方法,其中該細胞活力相對于使用排除N-乙酰半胱氨酸的對照培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)有所增加。

35.如權(quán)利要求34所述的方法,其中該細胞活力與無N-乙酰半胱氨酸的細胞培養(yǎng)基相比增加了至少約5%。

36.如權(quán)利要求34所述的方法,其中該細胞活力與無N-乙酰半胱氨酸的細胞培養(yǎng)基相比增加了至少7%。

37.如權(quán)利要求34所述的方法,其中該細胞活力與無N-乙酰半胱氨酸的細胞培養(yǎng)基相比增加了至少10%。

38.如權(quán)利要求34所述的方法,其中該細胞活力是至少約90%。

39.如權(quán)利要求34所述的方法,其中該細胞活力是至少92%。

40.如權(quán)利要求34所述的方法,其中該細胞活力是至少93%。

41.如權(quán)利要求1-40中任一項所述的方法,其中這些細胞并不表達一種異源蛋白質(zhì)。

42.如權(quán)利要求1-40中任一項所述的方法,其中這些細胞表達一種異源蛋白質(zhì)。

43.如權(quán)利要求1-40和42中任一項所述的方法,其中用異源核酸對這些細胞進行轉(zhuǎn)化。

44.如權(quán)利要求43所述的方法,其中該異源核酸是cDNA、載體、質(zhì)粒、可操作地連接至啟動子的核酸、和/或結(jié)合到基因組中的核酸。

45.如權(quán)利要求42所述的方法,其中該異源蛋白質(zhì)是瞬時表達的。

46.如權(quán)利要求42所述的方法,其中該異源蛋白質(zhì)是穩(wěn)定表達的。

47.如權(quán)利要求42、45或46中任一項所述的方法,其中該異源蛋白質(zhì)是抗體或其抗原結(jié)合片段。

48.如權(quán)利要求47所述的方法,其中該抗體或其抗原結(jié)合片段是IL-13抗體。

49.如權(quán)利要求48所述的方法,其中該抗體是BAK502G9或其抗原結(jié)合片段。

50.如權(quán)利要求48所述的方法,其中該抗體或抗原結(jié)合片段具有一個包含與SEQ ID NO:1、9、17或25中任一種至少約80%相同的序列的重鏈可變區(qū)和一個包含與SEQ ID NO:2、10、18或26中任一種至少約80%相同的序列的輕鏈可變區(qū)。

51.如權(quán)利要求48所述的方法,其中該抗體或抗原結(jié)合片段包含:

a.一個重鏈可變區(qū),其包含:

i.與選自SEQ ID NO:3、11、19或27的序列相比具有一個突變的HC CDR1;

ii.與選自SEQ ID NO:4、12、20和28的序列相比具有一個或兩個突變的HC CDR2;以及

iii.與選自SEQ ID NO:5、13、21和29的序列相比具有一個或兩個突變的HC CDR3;以及

b.一個輕鏈可變區(qū),其包含:

i.與選自SEQ ID NO:6、14、22和30的序列相比具有一個突變的LC CDR1;

ii.與選自SEQ ID NO:7、15、23和31的序列相比具有一個或兩個突變的LC CDR2;以及

iii.與選自SEQ ID NO:8、16、24和32的序列相比具有一個或兩個突變的LC CDR3。

52.如權(quán)利要求1-52中任一項所述的方法,其中該細胞是膽固醇營養(yǎng)缺陷型細胞。

53.如權(quán)利要求1-53中任一項所述的方法,其中該細胞是骨髓瘤細胞。

54.如權(quán)利要求1-53中任一項所述的方法,其中該細胞是雜交瘤細胞。

55.一種細胞培養(yǎng)基,該細胞培養(yǎng)基包含N-乙酰半胱氨酸、碳水化合物來源、氨基酸來源、以及膽固醇來源。

56.如權(quán)利要求55所述的細胞培養(yǎng)基,其中該碳水化合物來源和該氨基酸來源是不同的。

57.如權(quán)利要求55-56中任一項所述的細胞培養(yǎng)基,其中該細胞培養(yǎng)基是無血清且無動物蛋白的培養(yǎng)基。

58.如權(quán)利要求55-57中任一項所述的細胞培養(yǎng)基,其中該細胞培養(yǎng)基是化學(xué)限定培養(yǎng)基。

59.如權(quán)利要求55-58中任一項所述的細胞培養(yǎng)基,其中該培養(yǎng)基進一步包含脂質(zhì)。

60.如權(quán)利要求55-59中任一項所述的細胞培養(yǎng)基,其中該細胞培養(yǎng)基包含濃度為從約0.25mM至約3mM的N-乙酰半胱氨酸。

61.如權(quán)利要求55-59中任一項所述的細胞培養(yǎng)基,其中該細胞培養(yǎng)基包含濃度為從約0.5至約2.5mM的N-乙酰半胱氨酸。

62.如權(quán)利要求55-59中任一項所述的細胞培養(yǎng)基,其中該細胞培養(yǎng)基包含濃度為從約1.0至約1.5mM的N-乙酰半胱氨酸。

63.如權(quán)利要求55-59中任一項所述的細胞培養(yǎng)基,其中該細胞培養(yǎng)基包含濃度為約1mM或約1.5mM的N-乙酰半胱氨酸。

64.如權(quán)利要求55-63中任一項所述的細胞培養(yǎng)基,其中該細胞培養(yǎng)基進一步包含酵母提取液。

65.如權(quán)利要求64所述的細胞培養(yǎng)基,其中該細胞培養(yǎng)基包含1g/L的酵母提取液。

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