本發(fā)明涉及植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，進(jìn)一步涉及植物細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)條件設(shè)計(jì)，具體涉及一種用于肉蓯蓉細(xì)胞的合成培養(yǎng)基。

背景技術(shù)：

植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是以離體植物細(xì)胞或原生質(zhì)體為對(duì)象，以細(xì)胞量擴(kuò)增和目標(biāo)代謝產(chǎn)物累積為目的的培養(yǎng)工藝。對(duì)于以獲得特定代謝產(chǎn)物為目的的細(xì)胞培養(yǎng)而言，其主要工藝環(huán)節(jié)不僅在于細(xì)胞量的擴(kuò)增，同時(shí)，目標(biāo)代謝產(chǎn)物的誘導(dǎo)合成對(duì)培養(yǎng)效益更為重要。在植物細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)條件和營(yíng)養(yǎng)條件是影響產(chǎn)量的最重要因素，其中培養(yǎng)條件是指溫度、溶氧、光照、pH等環(huán)境條件的控制，而營(yíng)養(yǎng)條件主要指植物細(xì)胞的培養(yǎng)基。由于在封閉培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)基是植物細(xì)胞的唯一營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，因此培養(yǎng)基的成分對(duì)植物細(xì)胞的生長(zhǎng)水平、代謝產(chǎn)物類別具有極其重要的影響，尤其對(duì)于以獲得特定代謝產(chǎn)物為目的的細(xì)胞培養(yǎng)而言，培養(yǎng)基往往是影響培養(yǎng)效率的關(guān)鍵因素。

肉蓯蓉是一種生長(zhǎng)于鹽堿地和戈壁灘的名貴中藥材，具有滋腎壯陽(yáng)、清除自由基以及增強(qiáng)免疫力等功效，其主要的藥用成分是苯乙醇苷，包括松果菊苷、洋丁香苷、2’-乙酰洋丁香苷和肉蓯蓉苷A等。肉蓯蓉寄生在梭梭等植物的根上，由于亂采濫挖，造成資源短缺，植被破壞嚴(yán)重，加速了土地沙化。

現(xiàn)有技術(shù)中苯乙醇苷的提取多以天然的肉蓯蓉全草為原料，一方面植物全草生長(zhǎng)緩慢、產(chǎn)量較低，另一方面作為常規(guī)生長(zhǎng)狀態(tài)的植物全草，其代謝產(chǎn)物較為規(guī)律，難以對(duì)目標(biāo)代謝產(chǎn)物實(shí)現(xiàn)大量分泌。在這種情況下肉蓯蓉組織培養(yǎng)和細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，在相關(guān)培養(yǎng)技術(shù)中，培養(yǎng)基成分作為其唯一營(yíng)養(yǎng)來(lái)源對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)速度和代謝產(chǎn)物類別具有重要影響，現(xiàn)有技術(shù)中常規(guī)的培養(yǎng)基對(duì)肉蓯蓉細(xì)胞自身生長(zhǎng)以及苯乙醇苷分泌量的促進(jìn)作用均不夠理想。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供一種用于肉蓯蓉細(xì)胞的合成培養(yǎng)基，以解決現(xiàn)有技術(shù)中肉蓯蓉細(xì)胞培養(yǎng)效果不佳的技術(shù)問(wèn)題。

本發(fā)明要解決的另一技術(shù)問(wèn)題是現(xiàn)有技術(shù)的肉蓯蓉細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，目標(biāo)代謝產(chǎn)物苯乙醇苷的產(chǎn)量較低。

為實(shí)現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種用于肉蓯蓉細(xì)胞的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基還含有1％(g/mL)的酵母提取物。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基還含有5mg/L的殼聚糖。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基還含有1g/L的葫蘆茶壓榨汁。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基還含有1g/L的虎耳草壓榨汁。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基還含有1g/L的回回蒜壓榨汁。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基還含有1g/L的雞骨草壓榨汁。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素2.4-D0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，酵母提取物1％(g/mL)，殼聚糖5mg/L，葫蘆茶壓榨汁1g/L，虎耳草壓榨汁1g/L，回回蒜壓榨汁1g/L，雞骨草壓榨汁1g/L。

在以上技術(shù)方案中，所述MS培養(yǎng)基可以依據(jù)本領(lǐng)域的一般技術(shù)常識(shí)進(jìn)行配制，當(dāng)然也可以采用以下具體配方的MS培養(yǎng)基：NH₄NO₃ 1650mg/L，KNO₃ 1900mg/L，CaCl₂·2H₂O 440mg/L，MgSO₄·7H₂O 370mg/L，KH₂PO₄ 170mg/L，KI 0.83mg/L，H₃BO₃ 6.2mg/L，MnSO₄·4H₂O 22.3mg/L，ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 27.8mg/L，Na₂-EDTA·2H₂O 37.3mg/L，肌醇100mg/L，煙酸0.5mg/L，維生素B6 0.5mg/L，維生素B1 0.1mg/L，甘氨酸2mg/L，水余量。

在以上技術(shù)方案中，葫蘆茶、虎耳草、回回蒜、雞骨草分別指其新鮮全草。本發(fā)明中所述的壓榨汁，是指利用物理方法獲取的各原料的新鮮汁液，包括但不限于壓榨、粉碎離心等常規(guī)方法。

本發(fā)明通過(guò)實(shí)驗(yàn)手段廣泛篩選了作為肉蓯蓉細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，依據(jù)肉蓯蓉細(xì)胞自身代謝特性和實(shí)際使用效果確定了本發(fā)明配方。該配方以硝酸銨、硝酸鉀作為氮源，以磷酸二氫鉀為磷源，在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)成分下，以改善代謝產(chǎn)物為目的添加了2.4-D、6-BA、NAA等植物激素，同時(shí)添加了酵母提取物和殼聚糖等誘導(dǎo)物，通過(guò)上述改良極大的提高了肉蓯蓉細(xì)胞的生長(zhǎng)速率以及苯乙醇苷的分泌量。在此基礎(chǔ)上本發(fā)明意外的發(fā)現(xiàn)通過(guò)添加特定種類及成分的中藥材有助于提升細(xì)胞培養(yǎng)密度?；谝陨嫌幸娴陌l(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過(guò)實(shí)驗(yàn)手段優(yōu)選了葫蘆茶、虎耳草、回回蒜、雞骨草等原本用于人類疾病治療的中藥材成分，所得培養(yǎng)基意外獲得了突出的培養(yǎng)效果，使得肉蓯蓉細(xì)胞培養(yǎng)密度顯著提升，同時(shí)其生長(zhǎng)速度更快。本發(fā)明以創(chuàng)新性的技術(shù)手段獲得優(yōu)越的技術(shù)效果，同時(shí)成本較低、易于實(shí)現(xiàn)，因此具有良好的應(yīng)用前景。

具體實(shí)施方式

以下將對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)描述。為了避免過(guò)多不必要的細(xì)節(jié)，在以下實(shí)施例中對(duì)屬于公知的結(jié)構(gòu)或功能將不進(jìn)行詳細(xì)描述。除有定義外，以下實(shí)施例中所用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的相同含義。

實(shí)施例1

一種用于肉蓯蓉細(xì)胞的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L。

實(shí)施例2

一種用于肉蓯蓉細(xì)胞的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，酵母提取物1％(g/mL)。

實(shí)施例3

一種用于肉蓯蓉細(xì)胞的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，殼聚糖5mg/L。

實(shí)施例4

一種用于肉蓯蓉細(xì)胞的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，葫蘆茶壓榨汁1g/L。

實(shí)施例5

一種用于肉蓯蓉細(xì)胞的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，虎耳草壓榨汁1g/L。

實(shí)施例6

一種用于肉蓯蓉細(xì)胞的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，回回蒜壓榨汁1g/L。

實(shí)施例7

一種用于肉蓯蓉細(xì)胞的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，雞骨草壓榨汁1g/L。

實(shí)施例8

一種用于肉蓯蓉細(xì)胞的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，酵母提取物1％(g/mL)，殼聚糖5mg/L，葫蘆茶壓榨汁1g/L，虎耳草壓榨汁1g/L，回回蒜壓榨汁1g/L，雞骨草壓榨汁1g/L。

實(shí)施例9

本實(shí)施例用于評(píng)價(jià)以上實(shí)施例1～8所提供的培養(yǎng)基作為合成培養(yǎng)基時(shí)對(duì)肉蓯蓉細(xì)胞的苯乙醇苷產(chǎn)量的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。

表1不同培養(yǎng)基作為合成培養(yǎng)基時(shí)對(duì)肉蓯蓉細(xì)胞的苯乙醇苷產(chǎn)量的影響

由此可見，利用本發(fā)明所提供的培養(yǎng)基作為合成培養(yǎng)基培養(yǎng)肉蓯蓉細(xì)胞時(shí)，對(duì)其苯乙醇苷產(chǎn)量具有確切的促進(jìn)作用。

以上對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)說(shuō)明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明。凡在本發(fā)明的申請(qǐng)范圍內(nèi)所做的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。